張雁儒, 楊 越, 徐景超, 李 昊, 李潔潔, 余進偉

新型稀土鎂合金螺釘體內(nèi)促骨修復(fù)及體外生物相容性研究

張雁儒1,2, 楊 越1, 徐景超1, 李 昊3, 李潔潔3, 余進偉4

（1.河南理工大學(xué) 骨科研究所, 河南 焦作 454001; 2.寧波大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 浙江 寧波 315211; 3.河南理工大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 河南 焦作 454001; 4.河南理工大學(xué)第一附屬醫(yī)院 骨科, 河南 焦作 454002）

為測試新型稀土鎂合金的生物相容性及降解產(chǎn)物致敏性; 評價新型稀土鎂合金螺釘對骨傷模型的治療效果, 基于NZ30K鎂合金添加Mn元素制成新型稀土鎂合金, 并通過后期加工制成不同規(guī)格的螺釘. 將稀土鎂合金螺釘浸入磷酸鹽緩沖液中制作浸提液, 于大鼠后肢背部皮下注射, 觀察浸提液皮下致敏性. 將螺釘打磨制成圓片植入到大鼠皮下, 觀察皮下降解產(chǎn)氣情況, 以可吸收骨蠟作為對照同位置皮下植入. 建立兔骨損傷模型, 將稀土鎂合金植入, 定期拍攝X光檢查螺釘降解情況, 按照時間順序分別于8周、12周、16周處死實驗兔制作肝腎切片、骨切片, 評價肝腎毒性及體內(nèi)降解情況; 同期以ZA75鎂合金為基礎(chǔ)添加0.3% Mn元素制成新鎂合金, 作為對照組對比稀土鎂合金對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化效果. 將浸提液過濾稀釋后添加至細胞培養(yǎng)板中, 加入成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng), Westernblot蛋白電泳實驗測定骨保護蛋白(OPG)表達情況. 新型稀土鎂合金浸提液未表現(xiàn)出致敏性, 皮下降解結(jié)果顯示植入初中期有氣腔產(chǎn)生, 中后期氣腔消失, 鎂合金完全降解; 組織切片顯示, 兔股骨螺釘植入在前中期有一定肝腎毒性, 植入中期促骨生長效果相較于前期更為明顯, 植入后期未見明顯肝腎毒性, 螺釘降解完全, 植入部位骨質(zhì)增強; 兔股骨植入降解結(jié)果顯示植入前期未觀察到明顯的促進骨生長效果, 螺釘與骨質(zhì)嵌合緊密, 植入中期促骨生長修復(fù)效果呈現(xiàn), 局部骨組織出現(xiàn)膨隆包裹住螺釘降解產(chǎn)物, 植入后期螺釘完全降解, 植入位置有一小孔未閉合, 股骨近端明顯膨隆; 蛋白電泳實驗顯示, 新型稀土鎂合金浸提液可增加OPG表達, 具有良好的生物相容性. 基于NZ30K開發(fā)的新型稀土鎂合金在動物實驗及細胞實驗階段表現(xiàn)出良好的生物相容性, 可為臨床應(yīng)用提供一定參考.

稀土鎂合金; 骨修復(fù); 體外生物相容性; 骨保護蛋白

在過去的研究中, 鎂及其合金具有相似的彈性模量、無毒性和可降解性, 被認為是最有前途的體內(nèi)生物醫(yī)學(xué)植入材料, 在臨床治療心血管堵塞及骨科、口腔領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[1-3], 在實驗階段同時展現(xiàn)出更加多元的物理特性[4-6]. 而鎂作為人體常量元素, 主要儲存在骨組織中, 參與諸多代謝過程及其他生物功能. 而二價鎂離子作為鎂合金腐蝕產(chǎn)物可通過尿液代謝, 避免二次手術(shù)取出植入物. 鎂基生物醫(yī)學(xué)材料在人體內(nèi)需要滿足基本力學(xué)性能及適當(dāng)?shù)母g行為[7]. 但鎂合金的抗腐蝕性能較差, 力學(xué)性能不足, 制約了鎂合金在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用, 通過新的方法獲得性能優(yōu)良的合金以滿足使用的需求尤為重要[4].

在現(xiàn)有研究成果的基礎(chǔ)上, 加入合金元素是提高鎂合金力學(xué)性能最有效的途徑之一, 學(xué)者們研究并開發(fā)了一系列合金體系, 如Mg-Zn系、Mg- Ca系、Mg-Si系、Mg-Re (Re指稀土)系鎂合金[8-10]. 將稀土元素添加到鎂合金中可提高鎂合金力學(xué)性能、耐腐蝕性能、摩擦磨損性能、疲勞性能, 此外對鎂合金溶體可起到很好的凈化作用[11-12].

本研究基于NZ30K鎂合金, 添加0.2% Mn元素, Mg-Nd-Zn-Zr-Mn (平衡-3-0.2-0.4-0.2%)基, 制成新型稀土鎂合金, 并加工成骨科內(nèi)植入物, 包括不同規(guī)格的螺釘、接骨板. 通過動物體內(nèi)實驗及蛋白電泳實驗評價新型鎂合金生物相容性、實際植入降解情況, 為后續(xù)研究提供參考.

1 材料及方法

1.1 材料

新型稀土鎂合金由焦作新港醫(yī)療設(shè)備有限公司提供, 合金成分配比為: 平衡-3-0.2-0.4-0.2%, Mg-3Nd-0.2Zn-0.4Zr-0.2Mn, 制成8.0mm×2.5mm (長度×螺體直徑)的螺釘, 用于實驗兔股骨植入. ZA75鎂合金添加0.3% Mn, 配比為Mg-7Zn-5Al- 0.3Mn, 制得后加工成相同規(guī)格螺釘. 將螺釘剪去螺頭, 打磨螺紋制成直徑2mm、厚度1mm的圓片, 植入前同手術(shù)器械消毒滅菌. 將螺釘消毒滅菌后置于磷酸鹽緩沖液(PBS)中靜置48h, 超凈臺上過濾掉腐蝕殘渣, 浸提液置于4℃冰箱留存?zhèn)溆? 同期, 將螺釘消毒滅菌后置于完全培養(yǎng)基中, 放置在培養(yǎng)箱中48h, 過濾后稀釋6～10倍4℃冰箱留存?zhèn)溆? 準備常規(guī)病理切片耗材及病理切片機、漂烘儀及番紅固綠染色液、蘇木精-伊紅染色液等耗材試劑. 提取大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs), 全骨髓培養(yǎng)后傳代種板繼續(xù)培養(yǎng). Western blot蛋白電泳相關(guān)儀器試劑, 化學(xué)發(fā)光儀及顯影液, 一抗及二抗等. 實驗動物由河南理工大學(xué)骨科研究所提供.

1.2 方法

1.2.1 皮下致敏及植入實驗

實驗取SD大鼠麻醉后俯臥位放置于兔臺上, 剔除背部及后肢毛發(fā), 抽取0.5mL浸提液于皮下推注, 3個位置間隔約1cm; 另取一只大鼠以0.5mL生理鹽水皮下推注作為對照, 觀察水腫消除時間及局部反應(yīng); 空白組推注0.5mL空氣. 大鼠麻醉后于后肢剃毛備皮, 消毒后于股骨部位皮下開口, 塞入滅菌的鎂合金圓片, 作為實驗組, 對照組植入相同大小的骨蠟, 空白組注射生理鹽水, 定期觀察記錄.

1.2.2 骨植入實驗

建立兔股骨缺損模型, 植入螺釘定期觀察檢測. 首先, 準備手術(shù)器械, 試驗品及抗生素麻醉劑, 實驗兔術(shù)前禁食水24h, 麻醉后固定于兔臺. 在兔股骨大轉(zhuǎn)子下劃開表皮, 分離筋膜肌肉暴露股骨, 利用手持鉆及克氏針制造2mm左右缺損, 植入樣品螺釘后沖洗手術(shù)區(qū)域并逐層縫合, 肌內(nèi)注射抗生素. 分別于8、12、16周拍攝X光, 對實驗兔實行安樂死后取出股骨觀察.

1.2.3 形態(tài)學(xué)觀察

實驗兔處死后取出肝腎組織, 制作肝腎病理切片并進行HE染色; 取出股骨制作脫鈣骨切片并進行HE染色、番紅固綠染色. 按照常規(guī)石蠟切片制作流程, 取材后迅速放置于10%甲醛溶液中固定, 根據(jù)取材大小決定固定時間; 取出后流水沖洗10min (骨切片放置在脫鈣液中脫鈣完全), 梯度乙醇脫水, 50%→60%→70%→80%→90%→無水乙醇Ⅰ→無水乙醇Ⅱ; 放置于二甲苯+無水乙醇混合液中透明30min, 二甲苯溶液中透明30min; 浸蠟, 放置于二甲苯石蠟混合溶液→液態(tài)石蠟Ⅰ→液態(tài)石蠟Ⅱ; 包埋, 快速將組織放置于包埋盒中, 將液態(tài)石蠟倒入澆灌成型, 同時保證無氣泡侵入包埋塊中; 切片, 將冷卻凝固成型的包埋塊固定在切片機上, 調(diào)整好切片厚度及角度進行切片; 選擇完整的切片放置于溫水中自然展開, 用載玻片撈起烘片, 放烘箱中烤片固定組織, 防止脫落; 脫蠟至水, 短暫放置于二甲苯溶液后轉(zhuǎn)移到梯度乙醇中, 無水乙醇→90%→80%→70%→60%乙醇; 選擇相應(yīng)染色液進行染色; 奧林巴斯顯微鏡下觀察.

1.2.4 蛋白實驗

BMSCs以1×104mL-1接種于24孔板, 培養(yǎng)48h細胞狀態(tài)良好, 實驗組加入1mL浸提液及1mL成骨誘導(dǎo)液, 對照組加入1mL完全培養(yǎng)基及1mL成骨誘導(dǎo)液, 空白組加入2mL完全培養(yǎng)基, 而后每48h換液. 培養(yǎng)至細胞數(shù)目約為80%后收集細胞, 加入裂解液冰上裂解而后離心取上清留存?zhèn)溆? 加入30μL 5X上樣緩沖液、120μL蛋白樣品于200μL離心管中, 水浴鍋煮沸5min后冰浴5min留存. 使用10% SDS-PAGE蛋白凝膠, 加入蛋白marker及樣品. 觀察到樣品跑到分離膠底部約2cm時停止電泳, 將凝膠切成合適大小, 取PVDF膜進行轉(zhuǎn)膜2h. 取出PVDF膜用麗春紅染色5min, 觀察蛋白印跡, 切割出合適條帶, 5%脫脂牛奶封閉2h, 4℃一抗稀釋液中孵育過夜. 清洗條帶回收一抗后二抗孵育2h, 回收二抗并洗膜. 化學(xué)發(fā)光顯影觀察記錄.

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理可視化采用Graphpad Prism處理, 數(shù)據(jù)分析采用均值±標(biāo)準差, 組間分析采用單因素方差,<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 皮下實驗

圖1所示為皮下致敏實驗與合金降解實驗.

致敏實驗中, 實驗組未見紅腫潰瘍等不良反應(yīng), 未見組織液滲出, 約20min后皮下水腫消失, 大鼠蘇醒后生命體征正常; 對照組未見紅腫潰瘍等不良反應(yīng), 未見組織液滲出, 約10min水腫消失, 大鼠蘇醒后生命體征正常.

皮下合金圓片降解實驗中, 初期未見植入部位有腫脹情況, 大鼠術(shù)后2d完全恢復(fù)活動能力, 精神狀態(tài)良好, 進食水正常; 中期手術(shù)部位有不明顯皮下氣腫, 并且夾雜有少量灰黑色物質(zhì), 應(yīng)為圓片降解產(chǎn)物, 大鼠生命活動均正常; 后期植入部位完全愈合, 縫線脫落并有毛發(fā)覆蓋, 未見皮下腫脹, 大鼠生命體征平穩(wěn)正常. 對照組為可吸收骨蠟于相同位置皮下植入, 前、中、后期均未觀察到皮下氣腫, 前期可觸及植入骨蠟, 中期觸感不明顯, 到后期則完全吸收.

2.2 X光檢查及股骨觀察

兔股骨螺釘降解X光檢測及觀察如圖2所示.

圖2 兔股骨螺釘降解X光檢測及觀察(植入螺釘位于股骨近端)

8周時X光可觀察到螺釘尾形狀規(guī)則圓滑, 手術(shù)區(qū)有陰影, 應(yīng)為降解產(chǎn)生的氣體, 有較為明顯的降解痕跡; 取骨觀察到植入部位新生骨與螺紋呈嵌合生長, 同時表現(xiàn)出輕微膨隆, 周圍骨質(zhì)呈亮白色.

12周時X光可觀察到缺損處有新生骨質(zhì)并呈現(xiàn)粘連且趨于完整, 螺釘降解明顯, 螺尾位置產(chǎn)生變化, 手術(shù)區(qū)域氣體減少; 取骨觀察發(fā)現(xiàn)植入部位出現(xiàn)較明顯膨隆, 有肌肉粘連在新生骨質(zhì)區(qū)域, 螺釘降解產(chǎn)物融合附著在植入部位, 呈灰黑色.

16周時X光可觀察到螺釘降解完全, 無氣腔, 植入部位出現(xiàn)明顯粗大膨隆, 對比對側(cè)股骨植入鎂合金后從大轉(zhuǎn)子至股骨頭骨質(zhì)呈現(xiàn)連接, 股骨腔內(nèi)出現(xiàn)新生骨; 取骨觀察可見植入部位余留有一小孔未完全閉合, 新生骨表面較粗糙, 同時呈現(xiàn)少許棕灰色, 股骨頭下方有一孔洞直徑約1mm.

此外, 在后期解剖取骨觀察時直接植入股骨的螺釘在螺體中段與骨接觸位置發(fā)生銹蝕, 斷裂成兩段.

2.3 病理切片觀察

從切片分析(圖3), 植入初期有一定肝腎毒性, 肝臟細胞有少量炎性浸潤, 少量肝細胞脂肪變, 未見肝細胞壞死, 而植入部位骨細胞排列較為整齊, 胞質(zhì)胞核較為清晰, 可觀察到潮線; 植入中期有少量肝臟細胞出現(xiàn)空泡, 腎臟細胞少量炎癥細胞浸潤, 植入部位骨細胞排列較為凌亂, 新生軟骨呈現(xiàn)紅色, 成骨細胞呈綠色; 植入后期未見明顯肝腎毒性, 骨細胞形態(tài)完整清晰, 骨痂區(qū)域新生骨質(zhì)較豐富, 軟骨細胞增多.

圖3 8、12、16周肝腎組織及骨植入部位病理切片

骨保護蛋白(Osteoprotegerin, OPG)表達如圖4所示. 結(jié)果顯示: 實驗組OPG表達量顯著增加, 高于對照組及空白組, 具有統(tǒng)計學(xué)差異, 表明新型稀土鎂合金相較于Mg-Zn-Al系合金更有利于BMSCs成骨化.

注: ***表示P<0.01, **表示P<0.05.

3 討論

近年來, Mg-Re系列合金因其優(yōu)異的耐蝕性和力學(xué)性能而備受關(guān)注, 同時, 提高鎂合金耐蝕性的方法也受到了廣泛探討. 目前提高腐蝕性能最有效的方法是對鎂合金進行合金化、熱處理和擠壓變形等綜合處理. 然而, 熱處理和擠壓都會改變合金的微觀組織和i相形貌, 從而導(dǎo)致腐蝕機制改變[4]. 表面保護技術(shù)、激光熔覆技術(shù)和電化學(xué)鍍膜技術(shù)都是克服合金基體腐蝕問題的有效手段[13]. 保護涂層廣泛應(yīng)用于金屬基板防腐, 是經(jīng)濟高效的方法, 在Zhang等[14]研究中, 涂層材料在鎂基體表面分布不均勻, PEO層僅為金屬基體提供被動腐蝕保護, 而添加Ce元素后PEO-Ce-LDH-P涂層和磷酸鹽通過協(xié)同效應(yīng), 以致密的不溶性沉淀覆蓋腐蝕坑, 具有自我修復(fù)能力. 制備鎂基復(fù)合材料是鎂合金的另一種防腐措施, 但成本高、加工技術(shù)復(fù)雜限制了其應(yīng)用[15]. 與上述方法相比, 許多研究表明, 添加合金元素是提高鎂合金耐蝕性能的一種更直接、更有效的方法, 特別是稀土元素, 添加后與雜質(zhì)形成的金屬化合物凈化熔體被稱為鎂合金中的“凈化元素”, 此外可形成致密的Res氧化膜提高合金耐腐蝕性[16-17].

目前研究表明軟骨細胞在適宜的鎂離子濃度中增值分化得到增強, 但較高劑量會抑制軟骨生長[18]. 于曉明等[19]在鈦合金表面附著一層純鎂薄膜, 發(fā)現(xiàn)制得樣品浸提液稀釋程度越大, 細胞增值率越大, 同時擁有良好的滅殺金黃色葡萄球菌效果. Witte等[20]研究發(fā)現(xiàn), 由鎂合金制成的金屬植入物在體內(nèi)降解情況取決于其合金元素的組成. 所有鎂合金的腐蝕層在降解過程中都與周圍骨直接接觸, 并表現(xiàn)出生物磷酸鈣的積累. 此外, 與聚合物對照組相比, 測試鎂棒周圍的骨量得到了提升. 這表明在動物股骨植入試驗中, 成骨細胞對降解的鎂合金有反應(yīng), 鎂合金特別是稀土鎂合金更適于作為骨科內(nèi)植入材料. Li等[21]研究發(fā)現(xiàn)基于人體中存在的元素開發(fā)出新型鎂合金成為研究熱點. 鍶(Sr)元素與Mg、Ca具有相似的化學(xué)、生物及冶金特性, 且Sr作為人體微量元素儲存在骨骼中[22], 有研究表明Sr能改善骨組織生長, 抑制骨吸收[23], 通過細胞活性實驗證實了稀土鎂合金有更好的細胞相融性及更低的毒性. 有學(xué)者將MgNd2合金添加涂層作為前鼻竇導(dǎo)管支架植入到豬鼻中, 用來評估MgNd2在準鼻竇復(fù)雜條件下的降解、生物相容性和功能特性[24]. 結(jié)果表明, MgNd2合金與鼻黏膜接觸表現(xiàn)出良好的生物相容性, 在整個植入周期中, MgNd2合金前期會引起局部黏膜水腫, 中后期降解層減緩了初始降解速度并提供一定程度的耐腐蝕性. Song等[25]選擇Mg-2Znn-0.5Nd (ZN20)合金作為胃腸道吻合釘材料, 收集患者腹腔積液作為溶液介質(zhì)模擬吻合釘腐蝕微環(huán)境. 研究結(jié)果證實, 在體外實驗中, 吻合釘6d完全降解, 在體內(nèi)腐蝕條件下則需要8周完全降解, 這種差異可能由體內(nèi)外微環(huán)境差異引起. 同時, 通過血液生化檢查及組織病理學(xué)實驗證實ZN20合金是一種理想的新型胃腸道吻合釘材料, 在臨床領(lǐng)域有著巨大的潛力.

OPG主要由骨髓基質(zhì)細胞和成骨細胞表達, 是TNFR家族非典型成員缺乏跨膜結(jié)構(gòu)域的可溶性誘餌受體[26]. 研究發(fā)現(xiàn), OPG與RANKL結(jié)合的親和力大約是RANK的500倍[27]. 因此, OPG能阻止RANKL與其受體RANK結(jié)合, 抑制破骨細胞生成, 保護骨免受破骨細胞過度介導(dǎo)的骨吸收[28-29]. 有研究表明, OPG基因缺陷會導(dǎo)致骨吸收過度, 不僅會增加小鼠骨折率, 還會導(dǎo)致聽骨吸收變薄從而表現(xiàn)出進行性聽力損失[30]. 此外, OPG也在正常牙齒發(fā)育中起到重要作用[31]. Wei等[32]通過膠原蛋白海綿搭載OPG/BMP-2 (骨形態(tài)遺傳蛋白-2)植入到兔骨骺中, 結(jié)果顯示愈合初期肌腱與骨界面充滿肉芽組織, 而后演變成膠原纖維、纖維軟骨以及鈣化纖維軟骨, 顯示出OPG在BMP-2協(xié)同下促進成骨分化及新骨形成, 同時促進肌腱與骨之間的愈合.

4 結(jié)論

本研究中稀土鎂合金在動物及細胞實驗中表現(xiàn)出良好的生物相容性. 合金浸提液無明顯致敏性, 皮下降解速率相對穩(wěn)定平緩, 雖然在動物體內(nèi)植入初期表現(xiàn)出一定的肝腎毒性, 但在中后期逐漸減少, 并且有助于成骨分化以及新骨形成. 從分子生物學(xué)角度可以了解到, 新型稀土鎂合金可增強OPG表達, 從而起到促進骨質(zhì)生長的作用. 在后續(xù)研究中, 將側(cè)重于從分子生物學(xué)角度探究新型稀土鎂合金促骨生長過程的具體機制以及參與修復(fù)重建的蛋白通路, 為構(gòu)建合金載藥平臺提供參考方向.

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Study on bone promoting repair and biocompatibility of new rare earth magnesium alloy screws

ZHANG Yanru1,2, YANG Yue1, XU Jingchao1, LI Hao3, LI Jiejie3, YU Jinwei4

( 1.Institute of Orthopedics, Henan Polytechnic University, Jiaozuo 454001, China; 2.School of Medicine, Ningbo University, Ningbo 315211, China; 3.School of Medicine, Henan Polytechnic University, Jiaozuo 454001, China; 4.Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital ofHenan Polytechnic University, Jiaozuo 454002, China )

To test the biocompatibility and sensitization of degradation products of new rare earth magnesium alloys and evaluate the therapeutic effect of new rare earth magnesium alloy screw on bone injury model, new rare earth magnesium alloy was made based on NZ30K magnesium alloy by adding Mn element, and screws of different specifications were made through post-processing. The extract was prepared by immersing rare earth magnesium alloy screws into phosphate buffer and injected subcutaneously into the back of hind limbs of rats to observe the subcutaneous sensitization of the extract. The screws were polished into discs and implanted into the subcutaneous skin of rats, and the gas production was observed under the subcutaneous degradation. The absorbable bone wax was used as the control to implant the discs at the same position. The rabbit bone injury model was established, the rare earth magnesium alloy was implanted, and the screw degradation was examined by X-ray taking regularly. The experimental rabbits were sacrificed at 8 weeks, 12 weeks and 16 weeks for liver and kidney sections and bone sections, respectively, to evaluate the liver and kidney toxicity anddegradation. At the same time, ZA75 magnesium alloy was added 0.3% manganese to prepare new magnesium alloy, and the effect of rare earth magnesium alloy on osteogenic differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells was compared as the control group. The extract was filtered and diluted, then added to the cell culture plate, cultured with osteogenic induction solution. The expression of osteoprotegerin (OPG) was determined by Western blot. The new rare earth magnesium alloy extract did not show sensitization, and the subcutaneous degradation results showed that there were air cavities in the early and middle stage of implantation, and the air cavities disappeared in the late stage, and the magnesium alloy was completely degraded. Tissue sections showed that femoral screw implantation had certain hepatorenal toxicity in the early and middle stages, and the effect of promoting bone growth in the middle stage was more obvious than that in the early stage. There was no obvious hepatorenal toxicity in the late stage, during which screw degradation was complete and the bone was enhanced at the implantation site. Rabbit femoral implant degradation observation results show that the implantation at early stage did not significantly promote bone growth effect, and screws and bone chimeric interlocked closely; while at medium-term stage, the repair effects on promoting bone growth were obvious, and local bone tissue wrapped in occurrence of screw degradation products. At late stage, the implanted screws were fully biodegraded, and there was a small hole in the implanation that is not closed, with proximal femur expanding obviously. Protein electrophoresis experiments showed that the new rare earth magnesium alloy extract could increase OPG expression and had good biocompatibility. It can be concluded that the new rare earth magnesium alloy developed based on NZ30K shows good biocompatibility in animal and cell experiments, which can provide some reference for clinical application.

rare earth magnesium alloy; bone repair;biocompatibility; OPG

R608

A

1001-5132（2022）01-0011-07

2021?10?28.

寧波大學(xué)學(xué)報（理工版）網(wǎng)址: http://journallg.nbu.edu.cn/

河南省科技攻關(guān)重點項目（201402003）.

張雁儒（1970－）, 男, 河南西華人, 教授, 主要研究方向: 創(chuàng)傷骨科. E-mail: zyr@hpu.edu.cn

（責(zé)任編輯 韓 超）