Keanpen劉繼根趙易藝溫華鑫羅 昌

（1道勤生物科學(xué) （美國(guó)）；2長(zhǎng)沙道勤生物科技有限公司，湖南長(zhǎng)沙 410125）

替米考星是一種新型的半合成大環(huán)內(nèi)酯類廣譜抗菌藥，對(duì)巴氏桿菌屬、支原體和各種革蘭氏陽(yáng)性菌具有活性[1]。因其在體內(nèi)分布廣、半衰期長(zhǎng)、肺部高蓄積等特點(diǎn)，主要用于牛、山羊、豬、雞等動(dòng)物呼吸系統(tǒng)疾病的臨床治療[2]，在豬的生產(chǎn)應(yīng)用中，替米考星對(duì)胸膜肺炎以及乳腺炎具有良好的治療效果[3,4]，并能有效預(yù)防和治療呼吸道疾病[5-7]。替米考星預(yù)混劑已被開(kāi)發(fā)為一種藥物飼料添加劑，用于控制由放線桿菌引起的細(xì)菌性肺炎[8]。但替米考星不耐酸，而且本身味道苦，適口性差，不僅對(duì)胃機(jī)能有損傷，在胃液作用下其藥效也大大降低[9,10]。為了改善傳統(tǒng)劑型的不足，本試驗(yàn)探究“星月工藝（通過(guò)特殊輔料和載體進(jìn)行包被，使替米考星在胃內(nèi)環(huán)境表面成膜，保護(hù)胃壁的同時(shí)防止藥效被胃酸破壞，在腸道內(nèi)相對(duì)堿性條件及酶的作用下釋放吸收發(fā)揮作用）”包被的替米考星與普通不水溶產(chǎn)品、普通水溶產(chǎn)品、普通包被替米考星在豬體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性，通過(guò)觀察豬的采食情況以及豬血液中替米考星的濃度變化，探討不同加工工藝替米考星預(yù)混劑對(duì)豬只消化道吸收利用率的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：SHIMADZU LC-16，紫外檢測(cè)器：SHIMADZU SPD-16，均購(gòu)自島津儀器（上海）有限公司；C18色譜柱：ETA-16C（4.6 mm×250 mm，5 μm）；高速冷凍離心機(jī)：TGL-16，長(zhǎng)沙湘儀儀器有限公司；酸度計(jì)：PHS-3C，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；組織勻漿機(jī)HM 6300，萊普（北京）科技有限公司；水浴氮吹儀：UGC-24M，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司；電子天平：SHIMADZU AUW120D，島津儀器（日本）有限公司；渦旋混合器：XW-30S，上海儀昕科學(xué)儀器有限公司；可調(diào)微量移液槍：Eppendorf。

1.2 藥品和試劑

1.2.1 主要藥品標(biāo)準(zhǔn)品

替米考星標(biāo)準(zhǔn)品（CAS：k0311805，規(guī)格100 mg，含量93.9%）購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.2 供試樣品

替米考星預(yù)混劑（“星月制劑”產(chǎn)品） （A組）、替米考星預(yù)混劑1（普通不水溶產(chǎn)品） （B組）、替米考星預(yù)混劑2（普通水溶產(chǎn)品） （C組）、替米考星預(yù)混劑3（普通包被產(chǎn)品） （D組）均購(gòu)自市面上在售產(chǎn)品。

1.2.3 試驗(yàn)試劑

二正丁胺（分析級(jí)），磷酸（分析級(jí)），乙酸銨（分析級(jí)）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜級(jí)），甲醇（色譜級(jí)），四氫呋喃（色譜級(jí)），購(gòu)自天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司。

1.3 溶液配制

替米考星儲(chǔ)備液（1 mg/mL）：稱取50 mg替米考星對(duì)照品于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，4℃避光保存。使用時(shí)配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

二丁胺磷酸緩沖液（1 mol/L）：取10%磷酸溶液700 mL加到168 mL二丁胺中，邊加邊攪拌，待溶液冷卻至室溫后用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5，加水定容至1000mL，過(guò)濾備用。

流動(dòng)相：將700 mL水加入1 000 mL容量瓶中，分別量取真空脫氣后的乙腈130 mL、四氫呋喃55 mL、1 mol/L二丁胺磷酸緩沖液25 mL加入水中，定容至1 000 mL，用0.2 μm濾膜過(guò)濾。使用時(shí)注意密封。

2 分析方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)與管理

選擇健康、體重相近的三元雜商品豬20頭（40.0±1.5 kg），公母各半，隨機(jī)分成5組，每組4頭，分別為空白對(duì)照組、“星月技術(shù)”替米考星A組、替米考星普通不水溶產(chǎn)品B組、替米考星普通水溶產(chǎn)品C組、替米考星包被產(chǎn)品D組。試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上分別添加為20 mg/kg（以替米考星計(jì)）的不同制劑的替米考星預(yù)混劑。試驗(yàn)豬在給藥前3 d飼喂不含任何藥物的基礎(chǔ)日糧，自由飲水。在飼喂替米考星預(yù)混劑之前10～12 h禁止飼喂。

試驗(yàn)開(kāi)始后，觀察豬只的采食情況，記錄給料量，收集剩料并稱重，比較不同替米考星組豬的采食量。服藥后分別于15 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h 等時(shí)間點(diǎn)對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行前腔靜脈采血，每次采血5 mL置于采血管中，4 000 r/min離心10 min，吸取上清血漿，－20℃凍存待測(cè)。

2.2 樣品處理

取血漿樣品0.5mL置于2mL離心管中，添入1mL乙腈，渦旋混合2 min，12 000 r/min離心15 min后將上清液移至試管中，將其用氮吹儀40℃吹至干燥，取出試管，加入0.5 mL流動(dòng)相使其溶解，渦旋混合2 min后倒入離心管中12 000 r/min離心15 min，0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾供HPLC分析，進(jìn)樣量為20 μL。

2.3 儀器條件

2.3.1 色譜條件

流動(dòng)相：水∶乙腈∶磷酸二丁胺∶四氫呋喃體積比為790∶130∶25∶55；檢測(cè)波長(zhǎng)：290 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

用流動(dòng)相將儲(chǔ)備液稀釋成0.025 μg/mL、0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照樣品處理方法處理，取20 μL進(jìn)行HPLC測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同工藝對(duì)豬采食量的影響

由圖1可看出，替米考星預(yù)混劑A、D處理組與空白飼料組采食量較高，且3組之間差異不顯著（P＞0.05）；替米考星預(yù)混劑B、C組與空白飼料組比較，采食量分別下降了16.86%和14.70%。通過(guò)日常觀察，替米考星預(yù)混劑B、C組相比于替米考星預(yù)混劑A、D組以及對(duì)照組，采食速度明顯較慢，說(shuō)明替米考星可溶性和不可溶性預(yù)混劑對(duì)豬的適口性有影響。

圖1 不同工藝對(duì)豬采食量的影響

3.2 血漿中的藥物濃度

豬服用不同工藝的替米考星預(yù)混劑后，不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度見(jiàn)表1，替米考星預(yù)混劑A組在豬的血液中隨著給藥時(shí)間緩慢釋放，在給藥3 h血藥濃度達(dá)到峰值，且有顯著高于替米考星預(yù)混劑B、C、D組（P＜0.05）；而替米考星預(yù)混劑C、D組的血藥峰值在給藥后1.5 h，但峰值的數(shù)值為0.84～0.86 μg/mL之間，也顯著低于替米考星預(yù)混劑A組的1.19 μg/mL的峰值（P＜0.05）。4種替米考星預(yù)混劑在豬體內(nèi)的血藥濃度均在給藥72 h后降至0。健康豬采食不同工藝替米考星預(yù)混劑后，替米考星在健康豬體內(nèi)的血藥濃度—時(shí)間曲線圖分別見(jiàn)圖2，替米考星預(yù)混劑A組在豬體內(nèi)的血藥濃度峰值顯著高于其他組。

表1 口服替米考星預(yù)混劑后的替米考星在豬體內(nèi)的平均血藥濃度 （μg/mL）

圖2 不同工藝替米考星預(yù)混劑在豬體內(nèi)的血藥濃度—時(shí)間曲線圖

3.3 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

選用winnonlin 5.2.1藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件處理分析不同工藝替米考星預(yù)混劑在豬體內(nèi)的血藥濃度數(shù)據(jù)，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。非房室模型分析發(fā)現(xiàn)替米考星A組預(yù)混劑藥物濃度達(dá)峰實(shí)測(cè)值Tmax為3.95h，Cmax為1.22 μg/mL，相比較其他3個(gè)處理，達(dá)峰時(shí)間最晚；其藥物平均駐留時(shí)間為22.15±2.96 h，藥物消除半衰期 t1/2為 15.66±0.93 h，均大于其他3種工藝替米考星預(yù)混劑產(chǎn)品，說(shuō)明替米考星A組預(yù)混劑的制劑工藝使藥物具有緩釋作用，替米考星A組預(yù)混劑在豬體內(nèi)的藥物半衰期長(zhǎng)，血中藥物濃度高，維持時(shí)間長(zhǎng)，吸收稍慢但相對(duì)充分，相對(duì)生物利用度高。

表2 不同工藝替米考星在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

4 總結(jié)

飼喂替米考星A組預(yù)混劑產(chǎn)品后豬表現(xiàn)為采食量正常，說(shuō)明A組預(yù)混劑的制劑工藝其掩蓋了藥物本身的苦味，改善了藥品的適口性；并且具有較好的緩釋吸收效果，減輕了藥物對(duì)胃的刺激和胃酸對(duì)藥效的影響，替米考星A組預(yù)混劑相較于B組、C組、D組產(chǎn)品，其血藥濃度較高，說(shuō)明該工藝有效地提高了藥物生物利用度，在臨床使用中具有很強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，對(duì)降低成本、提高藥效、避免耐藥性具有長(zhǎng)遠(yuǎn)的意義。