呂學(xué)寧，葉必成，王昌成

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是目前全球癌癥死亡的第2大主要原因[1]，具有較高的病死率[2]，大多數(shù)肝癌病人診斷時(shí)間較晚，總體治療效果相對(duì)較差[3-4]，其5年生存率約為18%[5]。 肝細(xì)胞癌遺傳異質(zhì)性較強(qiáng)，疾病的發(fā)生發(fā)展中涉及眾多基因的改變及相互作用，因此極易復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。雖然針對(duì)癌基因突變的不同靶點(diǎn)，進(jìn)行靶向干預(yù)治療，為肝細(xì)胞癌治療開辟了新的思路，但目前對(duì)肝細(xì)胞癌的確切分子機(jī)制仍尚不清楚[6]，有必要繼續(xù)積極探索HCC分子機(jī)制以及起關(guān)鍵作用的致癌基因?yàn)楦渭?xì)胞癌的診治提供參考。

ATP1B3（ATPase Na+/K+Transporting Subunit Beta 3）是Na+/K+-ATP酶編碼的β3亞基，是ATP酶的一個(gè)分子調(diào)節(jié)亞基，定位于Chr 3號(hào)染色體q22-23區(qū)域[7]，Na+/K+-ATP酶廣泛分布在原核和真核細(xì)胞中，參與多種細(xì)胞活動(dòng)：維持跨膜細(xì)胞離子平衡、在細(xì)胞質(zhì)中建立高K+低Na+調(diào)節(jié)跨膜電位、維持細(xì)胞環(huán)境穩(wěn)定等。Na+/K+-ATP酶不僅參與正常的細(xì)胞活動(dòng)，而且在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用，是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)[8]。相關(guān)研究表明，ATP1B3可上調(diào)淋巴細(xì)胞活性，促進(jìn) IFN-t、IL-2、IL-4和 IL-10的產(chǎn)生[9-10]，以及作用于細(xì)胞周期抑制癌細(xì)胞的凋亡[11]等來促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，本研究自2020年5―8月通過不同數(shù)據(jù)庫(kù)探討ATP1B3基因在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的潛在價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 ATP1B3在不同人類腫瘤中的表達(dá)水平通過 Oncomine（https：//www.oncomine.org/）及 TIMER（https：//cistrome.shinyapps.io/timer/）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行ATP1B3 mRNA表達(dá)水平的分析，探索ATP1B3在不同腫瘤中的表達(dá)差異性（以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。

1.2 ATP1B3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)情況利用Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)及HCCDB數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//lifeome.net/database/hccdb/home.html），通過多個(gè)肝癌數(shù)據(jù)集檢測(cè)ATP1B3 mRNA在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平。采用R軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間ATP1B3的表達(dá)數(shù)據(jù)，采用成組t檢驗(yàn)，臨界值設(shè)定條件（P<0.05）。

1.3 臨床病理特征分析在TCGA（https：//portal.gdc.cancer.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)下載LIHC的FPKM數(shù)據(jù)，使用R軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及數(shù)據(jù)可視化，分析ATP1B3 mRNA表達(dá)量與各個(gè)臨床病理特征之間的關(guān)系，包括：腫瘤分級(jí)、分期、性別、年齡、BMI、家族史、血管浸潤(rùn)及癌組織周圍炎癥等。各個(gè)基因表達(dá)量為log2（FPKM+1），并排除了臨床信息不完整的樣本。組間比較分別采用成組t檢驗(yàn)，多組間（≥3）采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.4 生存分析通過Kaplan-Meier plotter（KMPLOT）（http：//kmplot.com/analysis/）在線工具對(duì)ATP1B3在肝細(xì)胞癌中的預(yù)后進(jìn)行生存分析評(píng)估，包括：總生存期（overall survival，OS）、無復(fù)發(fā)生存期（recurrence free survival，RFS）、無進(jìn)展生存期（progression free survival，PFS）和疾病特異性生存期（disease free survival，DSS）。并對(duì)肝細(xì)胞癌病人進(jìn)行了亞組生存分析，包括：性別、分期、分級(jí)、人種、有無飲酒史及有無肝炎病毒感染。此外，排除臨床信息不完整的樣本，利用R軟件構(gòu)建多因素Cox回歸模型評(píng)估影響肝細(xì)胞癌病人總體生存期的危險(xiǎn)因素。生存分析采用Kaplan-Meier法及l(fā)og-rank檢驗(yàn)，計(jì)算95%置信區(qū)間（95%CI）和風(fēng)險(xiǎn)比（HR），P<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 GSEA富集分析使用基因富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）探討ATP1B3可能通過哪些生物過程參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。利用R軟件通過Spearman檢驗(yàn)將肝細(xì)胞癌的FPKM數(shù)據(jù)分成ATP1B3的正相關(guān)組（cor>0）和負(fù)相關(guān)組（cor<0），按照相關(guān)系數(shù)大小進(jìn)行基因排序，并通過使用R軟件的clusterProfiler包對(duì)兩組進(jìn)行富集分析，其中錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.6 免疫浸潤(rùn)相關(guān)性分析通過TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)，評(píng)估ATP1B3表達(dá)與免疫浸潤(rùn)水平的相關(guān)性，包括腫瘤純度、B細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)水平（cor<0為負(fù)相關(guān)，cor>0為正相關(guān)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。此外，通過GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析了正常肝組織及肝細(xì)胞癌中的不同免疫細(xì)胞的免疫標(biāo)記集與ATP1B3的相關(guān)性（cor<0為負(fù)相關(guān)，cor>0為正相關(guān)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。

1.7 ATP1B3靶向藥物富集分析利用GeneMANIA（https：//genemania.org/）建立以ATP1B3為核心的基因網(wǎng)絡(luò)，并且通過使用WebGestalt（http：//www.webgestalt.org/）對(duì)以ATP1B3為核心的基因網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了靶向藥物的富集分析，預(yù)測(cè)通過該基因網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)通路作用于ATP1B3的靶向藥物。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用R軟件對(duì)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。差異分析中對(duì)于兩組ATP1B3 mRNA的表達(dá)數(shù)據(jù)，采用成組t檢驗(yàn)，對(duì)于兩組以上的數(shù)據(jù)，采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存分析采用Kaplan-Meier法及l(fā)og-rank檢驗(yàn)，包括多因素Cox回歸模型評(píng)估影響肝細(xì)胞癌病人總體生存期的危險(xiǎn)因素，計(jì)算95%置信區(qū)間（95%CI）和風(fēng)險(xiǎn)比（HR），其中P<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。富集分析，以錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫浸潤(rùn)相關(guān)性分析，以cor<0為負(fù)相關(guān)，cor>0為正相關(guān)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ATP1B3在不同人類腫瘤中的表達(dá)差異性為了確定ATP1B3在不同腫瘤和正常組織中的表達(dá)差異，我們使用Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)分析了不同腫瘤組織和正常組織中ATP1B3 mRNA的表達(dá)水平。該分析顯示，與正常組織相比，ATP1B3在大腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤（brain and CNS cancer）、食管癌（esophageal cancer）、胃癌（gastric cancer）、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（head and neck cancer）、腎癌（kidney cancer）、白血病（leukemia）、肝癌（liver cancer）、淋巴瘤（lymphoma）及肉瘤（sarcoma）等腫瘤中的表達(dá)升高；此外，還有部分?jǐn)?shù)據(jù)顯示ATP1B3在結(jié)直腸癌（colorectal cancer）、肺癌（lung cancer）和前列腺癌（prostate cancer）中表達(dá)降低。

為了進(jìn)一步評(píng)估ATP1B3在不同腫瘤中的表達(dá)情況，我們利用TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)中多個(gè)惡性腫瘤的數(shù)據(jù)檢測(cè)ATP1B3的表達(dá)。分析顯示：在乳腺癌（breast cancer，BRCA）、膽管癌（cholangiocarcinoma，CHOL）、食管癌（esophageal carcinoma，ESCA）、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma，HNSC）、肝細(xì)胞癌（liver heaptocellular carcinoma，LIHC）、肺鱗癌（lung squamous cell carcinoma，LUSC）、胃癌（stomach adenocarcinoma，STAD）、甲狀腺癌（thyroid carcinoma，THCA）和子宮內(nèi)膜癌（uterine corpus endometrial carcinoma，UCEC）中，ATP1B3 mRNA表達(dá)量顯著高于正常組織；在結(jié)腸癌（colon adenocarcinoma，COAD）、腎嫌色細(xì)胞癌（kidney chromophobe，KICH）、腎透明細(xì)胞癌（kidney renal clear cell carcinoma，KIRC）、腎乳頭狀細(xì)胞癌（kidney renal papillary cell carcinoma，KIRP）、肺腺癌（lung adenocarcinoma，LUAD）、前列腺癌（prostate adenocarcinoma，PRAD）及直腸腺癌（rectum adenocarcinoma，READ）中ATP1B3 mRNA表達(dá)量顯著低于正常組織。這些結(jié)果表明ATP1B3在許多腫瘤中均具有顯著差異性表達(dá)，可能是部分腫瘤的潛在癌基因，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的價(jià)值。

2.2 ATP1B3 mRNA在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)在HCCDB數(shù)據(jù)庫(kù)中分析了9個(gè)肝細(xì)胞癌的基因集：BCCDB4（P<0.001）、BCCDB6（P<0.001）、HCCDB12（P<0.001）、HCCDB13（P<0.001）、HCCDB15（P<0.001）、HCCDB16（P<0.001）、HCCDB17（P<0.001）、HCCDB18（P<0.001），研究發(fā)現(xiàn)與鄰近的正常組織相比，HCC中ATP1B3 mRNA表達(dá)升高。Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)中的三個(gè)基因集的ATP1B3 mRNA表達(dá)也得出相似的結(jié)果：Mas Liver（P<0.001）、Chen Liver（P<0.001）、Rossler Liver（P<0.001）。此外，肝硬化中ATP1B3 mRNA水平顯著高于正常組織（P<0.001）。因此，這些結(jié)果表明ATP1B3可能是肝細(xì)胞癌中潛在的生物學(xué)標(biāo)志物，甚至可能是肝硬化發(fā)展為肝細(xì)胞癌的始動(dòng)因素。

2.3 ATP1B3的表達(dá)在不同臨床病理特征中的差異分析在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載肝細(xì)胞癌的FPKM數(shù)據(jù)，分析ATP1B3的表達(dá)與各個(gè)臨床病理特征之間的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌的分化程度越低，ATP1B3的表達(dá)越高，組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.513，P<0.001）；且肝細(xì)胞癌分期越高，ATP1B3的表達(dá)越高，組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.341，P=0.015），這一結(jié)果提示ATP1B3可能通過某種途徑來影響肝細(xì)胞癌的進(jìn)展。此外，ATP1B3在不同性別（t=?1.406，P=0.162）、不同年齡（F=1.315，P=0.272）、有無家族史（t=?0.076，P=0.939）、BMI（F=0.985，P=0.376）、有無血管浸潤(rùn)（t=1.429，P=0.155）、及癌組織周圍有無炎癥（t=0.996，P=0.321）中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上，這些結(jié)果證明ATP1B3可能是肝細(xì)胞癌診斷的標(biāo)志物。

2.4 ATP1B3高表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌病人預(yù)后的影響為了進(jìn)一步評(píng)估ATP1B3基因在肝細(xì)胞癌中的預(yù)后價(jià)值，我們使用了KMPLOT這一在線工具對(duì)TCGA數(shù)據(jù)的370例肝細(xì)胞病人進(jìn)行生存分析。這些結(jié)果表明，在ATP1B3高表達(dá)組中，肝細(xì)胞癌病人的OS（總生存期）[HR=1.89（1.15～3.11），P=0.011]和DSS（疾病特異性生存期）[HR=1.97（1.11～3.48），P=0.018]相對(duì)于ATP1B3低表達(dá)組顯著減少；PFS（無進(jìn)展生存期）[HR=1.49（0.91～2.43），P=0.110]和RFS（無復(fù)發(fā)存期）[HR=1.54（0.92～2.58），P=0.100]差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，我們對(duì)371例肝細(xì)胞癌病人進(jìn)行了亞組生存分析，分析發(fā)現(xiàn)（表1）：所有女性病人中的ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS和PFS；所有男性病人中的ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS；1期肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的 OS和 PFS，1+2期、3期、3+4期病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS；2級(jí)肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS和PFS，3級(jí)肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS；白種人群的肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的PFS，亞洲人群的肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS和PFS；無飲酒史的肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組具有較差的OS；感染及未感染肝炎病毒的肝細(xì)胞癌病人中ATP1B3高表達(dá)組均具有較差的OS。因此ATP1B3高表達(dá)的肝細(xì)胞癌病人具有相對(duì)較差的預(yù)后。而多因素COX回歸分析提示ATP1B3高表達(dá)是影響肝細(xì)胞癌病人總體生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P=0.005）。這些結(jié)果都顯著表明ATP1B3是肝細(xì)胞癌病人的潛在預(yù)后指標(biāo)。

表1 在不同臨床特征的肝細(xì)胞癌中ATP1B3高表達(dá)的預(yù)后分析

2.5 ATP1B3表達(dá)的生物學(xué)功能分析為了進(jìn)一步探索ATP1B3在肝細(xì)胞癌的潛在生物學(xué)功能，我們對(duì)ATP1B3基因正負(fù)相關(guān)的兩組進(jìn)行富集分析。正相關(guān)組主要富集核糖體、剪接體、趨化因子信號(hào)通路、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、Rap1信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路及Ras信號(hào)通路等，這一結(jié)果表明ATP1B3的高表達(dá)可能激活這些通路，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。此外，負(fù)相關(guān)組富集于酮體的合成與降解等的代謝，這一結(jié)果表明ATP1B3的高表達(dá)可能抑制這一通路。

2.6 肝細(xì)胞癌中ATP1B3的表達(dá)與免疫浸潤(rùn)水平相關(guān)性分析通過TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)，我們?cè)u(píng)估了ATP1B3表達(dá)與免疫浸潤(rùn)水平的相關(guān)性，研究發(fā)現(xiàn)：ATP1B3表達(dá)與肝細(xì)胞癌的腫瘤純度呈負(fù)相關(guān)（cor=?0.29，P<0.001）；與 B 細(xì)胞（cor=0.34，P<0.001）、CD8+T細(xì)胞（cor=0.30，P<0.001）、CD4+T細(xì)胞（cor=0.32，P<0.001）、巨噬細(xì)胞（cor=0.49，P<0.001）、中性粒細(xì)胞（cor=0.44，P<0.001）及樹突狀細(xì)胞（cor=0.44，P<0.001）浸潤(rùn)水平呈正相關(guān)。

為了進(jìn)一步研究不同免疫浸潤(rùn)細(xì)胞與ATP1B3的關(guān)系，本文還研究了GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)中正常肝組織和肝細(xì)胞癌中的不同免疫細(xì)胞的免疫標(biāo)記集與ATP1B3的關(guān)系，結(jié)果顯示，與正常肝組織相比，在肝細(xì)胞癌中，ATP1B3表達(dá)水平與部分免疫細(xì)胞的免疫標(biāo)記集顯著相關(guān)（cor>0，P<0.05），這些結(jié)果提示ATP1B3表達(dá)可能與腫瘤的部分免疫細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)，通過免疫浸潤(rùn)進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。

2.7 ATP1B3的基因網(wǎng)絡(luò)分析通過GeneMAINA在線數(shù)據(jù)庫(kù)以ATP1B3為核心的基因網(wǎng)絡(luò)，通過WebGestalt數(shù)據(jù)庫(kù)分析這一基因網(wǎng)絡(luò)，我們發(fā)現(xiàn)強(qiáng)心苷類藥物可能通過該網(wǎng)絡(luò)的潛在通路作用于ATP1B3，是抗肝細(xì)胞癌ATP1B3的基因靶向藥物。

3 討論

肝細(xì)胞癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，隨診醫(yī)療技術(shù)水平的不斷發(fā)展，腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入，肝細(xì)胞癌的靶向治療正在快速發(fā)展，已發(fā)現(xiàn)的常見突變基因包括 TERT、MLL4、CCNE1[12]、TP53和CTNNB1等[13-14]。盡管有許多潛在的治療靶點(diǎn)，但肝細(xì)胞癌病人發(fā)病率和病死率仍在升高[15]，總體生存率仍然不理想，因此繼續(xù)探究肝細(xì)胞癌的潛在分子機(jī)制及癌變基因?yàn)楦渭?xì)胞癌的診治提供新思路至關(guān)重要。本研究通過生物信息學(xué)公開數(shù)據(jù)分析，首次探討了ATP1B3在肝細(xì)胞癌中的作用，進(jìn)一步了解了ATP1B3在肝細(xì)胞癌中的潛在價(jià)值。

Na+/K+-ATP酶是一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，主要調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外Na+、K+的平衡，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和存活起到至關(guān)重要的作用[16]，Na+/K+-ATP酶不僅參與正常的細(xì)胞活動(dòng)，而且在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，目前已有研究將其作為治療乳腺癌的靶點(diǎn)[17]。而Na+/K+-ATP酶由3個(gè)亞基組成：α、β和FXYD家族的成員[18]，α亞基是催化亞基，而β亞基和FXYD是調(diào)節(jié)亞基，每個(gè)亞基的已知亞型包括：α1-α4，β1-β3，以及 FXYD1-FXYD7[19]，其中β亞基的三個(gè)亞型β1、β2和β3，參與全酶的結(jié)構(gòu)和功能成熟[20-22]。相關(guān)研究指出Na+/K+-ATP 酶亞基在胃癌[23]、膀胱癌[24]和乳腺癌[25]中表達(dá)均升高。Mijatovic研究指出Na+/K+-ATP酶α1亞基的下調(diào)降低了非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞的遷移和增殖[26]。Li等[11]相關(guān)研究結(jié)果指出，ATP1B3在胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲中發(fā)揮重要作用，ATP1B3高表達(dá)在胃組織中具有致癌作用。但是劉戰(zhàn)培研究表明增加ATP1B3在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，甚至使其變性死亡[27]。此外，ATP1B3還在免疫應(yīng)答中具有調(diào)節(jié)作用[10]，研究表明Na+/K+-ATP酶的α或β亞基參與 HIV-1[28]、腸病毒 71[29]、冠狀病毒[30]、IAV/IBV[31]和 HCMV 感染[32]。Baisong Zheng等[33]研究指出過表達(dá)ATP1B3降低了乙型病毒性肝炎中HBsAg和HBeAg的數(shù)量，因此ATP1B3在抗病毒免疫應(yīng)答中也起到重要作用。

本研究利用不同數(shù)據(jù)庫(kù)分析了ATP1B3在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)，研究得出ATP1B3在肝細(xì)胞癌中具有顯著的表達(dá)差異性，且可能參與腫瘤的浸潤(rùn)發(fā)展，而與性別、年齡、家族史、BMI、血管浸潤(rùn)及癌組織周圍炎癥均無明顯關(guān)系，因此表明ATP1B3可以作為肝細(xì)胞癌診斷的潛在標(biāo)志物。并且ATP1B3的過表達(dá)導(dǎo)致肝細(xì)胞癌病人預(yù)后較差，是預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌病人總生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這一結(jié)果表明ATP1B3是肝細(xì)胞癌病人的潛在預(yù)后指標(biāo)。

此外，本研究通過富集分析富集出ATP1B3基因高表達(dá)的樣本存在于核糖體、剪接體、趨化因子信號(hào)通路、RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、Rap1信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路及PI3K/AKT通路等生物過程從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。大量研究表明Rap1在多種癌癥中激活，包括白血病和實(shí)體瘤，如：前列腺癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌及人類口腔癌等等[34]。Ras蛋白在許多腫瘤的發(fā)生和維持中發(fā)揮關(guān)鍵作用，Ras是肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等癌癥疾病常見的致癌基因[34]，在肝細(xì)胞癌中ATP1B3可能通過某些機(jī)制作用于Rap1、Ras信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。異常的MAPK信號(hào)在人類癌癥的發(fā)展和進(jìn)展中起著關(guān)鍵的作用，也決定了對(duì)癌癥治療的反應(yīng)，應(yīng)激激活的MAPKs（包括JNK和p38）與多種惡性腫瘤有關(guān)，包括濾泡性淋巴瘤、肺、甲狀腺和乳腺癌、膠質(zhì)瘤和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等等[35]。并且MAPK信號(hào)通路還與腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移相關(guān)，劉紅兵[36]相關(guān)文獻(xiàn)指出MAPK通路在胃癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程中具有重要的作用，本文得出ATP1B3可能通過AMPK信號(hào)通路作用于肝細(xì)胞癌，并且浸潤(rùn)相關(guān)分析得出ATP1B3參與肝細(xì)胞癌的免疫浸潤(rùn)，通常免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)豐度越高，提示免疫基因的異常表達(dá)越高，腫瘤免疫微環(huán)境越紊亂，進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的進(jìn)程。此外相關(guān)文獻(xiàn)還指出ATP1B3可上調(diào)淋巴細(xì)胞活性，促進(jìn) IFN-t、IL-2、IL-4和 IL-10的產(chǎn)生[9-10]，因此，ATP1B3可能通過AMPK 信號(hào)通路、上調(diào)淋巴細(xì)胞活性及免疫浸潤(rùn)等過程共同促進(jìn)肝細(xì)胞癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

本研究還通過GeneMAINA在線數(shù)據(jù)庫(kù)以ATP1B3為核心的基因網(wǎng)絡(luò)，通過WebGestalt數(shù)據(jù)庫(kù)分析這一基因網(wǎng)絡(luò)，我們發(fā)現(xiàn)強(qiáng)心苷類藥物可能通過該網(wǎng)絡(luò)的潛在通路作用于ATP1B3，是抗肝細(xì)胞癌ATP1B3基因的靶向藥物。既往研究表明強(qiáng)心苷類藥物，包括地高辛、蛙巴因、阿諾布費(fèi)金和蟾毒靈等，是Na+/K+-ATP酶抑制劑，通過特異性地結(jié)合Na+/K+-ATP酶的α亞基，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)不同信號(hào)通路，如激活NF-κB，激活Ras/Raf/MEK/ERK蛋白級(jí)聯(lián)反映，增加P53及減少Cyclin D表達(dá)等，最終對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用[37-38]。還有研究表明強(qiáng)心苷在非小細(xì)胞肺癌[39]、肝癌[40]、胰腺癌[41]、乳腺癌[42]、白血病[43]、食管癌[44]等腫瘤中均被證實(shí)可以抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。本研究結(jié)果表明強(qiáng)心苷類藥物可能通過抑制ATP1B3的表達(dá)來抑制肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展，但其分子機(jī)制尚不清楚，有待基礎(chǔ)及臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究運(yùn)用相關(guān)生物信息學(xué)方法揭示了ATP1B3可能是肝細(xì)胞癌潛在的致癌基因，其表達(dá)上調(diào)在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程發(fā)揮重要作用，并可能成為判斷肝細(xì)胞癌病人預(yù)后的重要的生物學(xué)指標(biāo)，為肝細(xì)胞癌的診斷及治療提供參考。