宋 朋，張保建，王 建，賈玉珠，趙廣義，楊光鑫，石凱威

(1.山東威瑞信試驗檢測有限公司，山東 濟南 250119；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

1 前言

烯效唑英文名稱：Uniconazole，CAS號：83657-22-1，分子式：C15H18CIN3O，化學(xué)名稱：(E)-(RS)-1-(4-氯苯基)-4，4-二甲基-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)戊-1-烯-3-醇。烯效唑是一種廣譜性唑類植物生長調(diào)節(jié)劑，對草本或木本的單子葉或雙子葉作物具有強烈的抑制生長作用。具有矮化植株、防止倒伏、提高綠葉素含量的作用。烯效唑具有用量小、活性強，且不會使植株畸形，持效期長，對人畜安全的優(yōu)點，可用于水稻、小麥、玉米、花生、大豆、棉花、果樹、花卉等作物。烯效唑還具有高效、廣譜、內(nèi)吸的殺菌作用，對稻瘟病、小麥根腐病、玉米小斑病、水稻惡苗病、小麥赤霉病、菜豆炭疽病顯示良好的抑菌作用。

目前國內(nèi)有關(guān)烯效唑可濕性粉劑的分析方法未見公開報道。本文采用高效液相色譜法對5%烯效唑可濕性粉劑進行定量分析，該方法操作簡便快捷，分離效果好，精密度和準確度均能達到定量分析的要求。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 甲醇(色譜純)；超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；烯效唑標樣，已知質(zhì)量分數(shù)99.3% ；5%烯效唑可濕性粉劑。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：日立Primaide，具有二極管陣列檢測器和自動進樣器；日立色譜工作站；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18、5μm填充物。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：ψ(甲醇：水)=75+25(V/V)；流量：1.0mL/min；柱溫：30±2℃；檢測波長：254nm；進樣體積：10μL；保留時間：烯效唑約7.5min。典型的烯效唑標樣和5%烯效唑可濕性粉劑的高效液相色譜圖(圖1、2)。

圖1 烯效唑標樣高效液相色譜圖

圖2 5%烯效唑可濕性粉劑高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的配制 稱取0.05g烯效唑標樣(精確至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超聲波振蕩5min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取含烯效唑0.05g的試樣(精確至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超聲波振蕩5min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2針標樣溶液的響應(yīng)值相對變化<1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中烯效唑峰面積分別進行平均。試樣中烯效唑的質(zhì)量分數(shù)ω(%)，按式(1)計算：

(1)

式中：

A1──標樣溶液中烯效唑峰面積的平均值；

A2──試樣溶液中烯效唑峰面積的平均值；

m1──標樣的質(zhì)量，g；

m2──試樣的質(zhì)量，g；

P──標樣中烯效唑的質(zhì)量分數(shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過日立Primaide高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得烯效唑的紫外波長掃描圖(圖3)。從圖中可以看到烯效唑最大吸收波長在254nm處，在該波長處靈敏度較高，干擾較少，能夠滿足分析的要求，故將檢測波長確定為254 nm。

圖3 烯效唑的紫外光譜圖

色譜柱選擇250mm×4.6mm(i.d.)ZORBAX SB-C18、5um的不銹鋼柱。根據(jù)烯效唑物化性質(zhì)和溶劑的紫外吸收波長，選擇甲醇作為溶劑溶解樣品，并以甲醇和水作為流動相。將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，隨著甲醇比例的增加，保留時間減小，當甲醇與水比例達到80： 20時，有雜質(zhì)峰干擾烯效唑，峰純度達不到試驗要求，最終選擇Ψ(甲醇：水)=75： 25作為流動相，流速1.0mL/min。該條件下，烯效唑色譜峰峰形較好，與雜質(zhì)能完全分離，具有良好的精密度和準確度，并且分析時間較短，提高了工作效率。

3.2 分析方法的特異性試驗 將2.4.1、2.4.2配制的烯效唑標樣溶液和試樣溶液，在上述色譜操作條件下進行全波段掃描、峰純度分析。結(jié)果表明標樣溶液和試樣溶液中烯效唑峰純度均>990，有效成分出峰處無其他物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

3.3 分析方法的線性相關(guān)性試驗 稱取0.05g烯效唑標樣(精確至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超聲波振蕩5min，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取3、4、5、6、7mL上述溶液，分別置于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配置成5個不同濃度的標準溶液。在上述色譜操作條件下進行分析，以烯效唑質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線(圖4)，得到烯效唑線性回歸方程為y=12 8446x-76 083，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 5。

圖4 烯效唑線性關(guān)系圖

3.4 分析方法的精密度試驗 從同一產(chǎn)品中準確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，測得烯效唑的標準偏差為0.015，變異系數(shù)為0.29%(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗結(jié)果

3.5 分析方法的準確度試驗 從已知質(zhì)量分數(shù)(5.19%)的烯效唑可濕性粉劑中稱取5個試樣，分別加入一定量的烯效唑標樣(99.3%)，在上述色譜操作條件下進行分析，測得烯效唑的平均回收率為99.72%(表2)。

表2 分析方法的準確度試驗結(jié)果

4 結(jié)論

本文建立了烯效唑可濕性粉劑有效成分含量測定的高效液相色譜分析方法，試驗結(jié)果表明，本方法分離效果好、線性關(guān)系良好，具有較高的精密度和準確度，分析操作簡便快捷，是烯效唑可濕性粉劑產(chǎn)品質(zhì)量控制較為理想的分析方法。