蔣冰心，蓋 迪，陳方新，高智謀

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，安徽合肥 230036)

由大豆疫霉(Phytophthorasojae)引致的大豆疫霉根腐病是大豆上具有毀滅性的一種土傳病害，其嚴(yán)重制約大豆生產(chǎn)[1-3]。目前對于大豆疫霉根腐病的防治主要采用綜合治理的策略與方法，藥劑防治仍是控制大豆疫霉根腐病發(fā)生與流行的關(guān)鍵技術(shù)措施之一[4-5]。雖然生產(chǎn)上已有一些有效藥劑，但有些地區(qū)由于高頻次施用化學(xué)農(nóng)藥，導(dǎo)致田間致病菌抗藥性群體逐年上升而導(dǎo)致防治效果下降[6-8]。因此，尋求防治大豆疫霉根腐病的新型有效殺菌劑對于有效控制大豆疫霉根腐病的危害尤為迫切和重要。筆者在現(xiàn)有研究[9-12]的基礎(chǔ)上，測定了當(dāng)前生產(chǎn)上8種常用殺菌劑對大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了復(fù)配研究，旨在為防治大豆疫霉根腐病的有效藥劑及復(fù)配劑的篩選、研發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑97%烯酰嗎啉TC(江蘇耕耘化學(xué)有限公司)，95%氟嗎啉TC(沈陽化工研究院)，97%甲霜靈TC(江蘇寶靈化工股份有限公司)，98%嘧菌酯TC(山東中農(nóng)聯(lián)合生物科技股份有限公司)，98%霜脲氰TC(紹興東湖生化有限公司)，99%霜霉威TC(西安近代化學(xué)研究所)，98%啶酰菌胺TC(河北蘭升生物科技有限公司)，50%苯甲·丙環(huán)唑EW(先正達(dá)(中國)投資有限公司)。將上述原藥用丙酮溶解配制成5 000 μg/mL母液，置于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)菌株大豆疫霉根腐病菌(Phytophthorasojae)菌株TH25系從田間發(fā)生大豆疫霉根腐病的大豆植株上分離、鑒定獲得[13]，現(xiàn)保存于安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病原真菌實(shí)驗(yàn)室。

1.3 試驗(yàn)培養(yǎng)基利馬豆培養(yǎng)基(LBA)。稱取利馬豆60 g，加水1 L，浸泡12 h后在60 ℃下水浴1 h，雙層紗布過濾取上清。上清液補(bǔ)足水至1 L，加入瓊脂粉20 g，煮沸后持續(xù)沸騰3 min，121 ℃下高壓蒸汽滅菌15～20 min。

1.4 殺菌劑毒力測定采用菌絲生長速率法[14]。將保存于12 ℃冰箱的供試大豆疫霉菌株在LBA培養(yǎng)基上活化，移至LBA平板上，25 ℃黑暗培養(yǎng)6 d。將8種供試藥劑母液用無菌水稀釋成7個相適應(yīng)的濃度梯度。分別吸取2 mL配好的藥液于無菌培養(yǎng)皿中，倒入18 mL熔化并冷卻至50℃左右的LBA培養(yǎng)基，充分混合均勻后靜置冷卻，得到終濃度分別為0.01、005、0.10、0.20、0.50、1.00、5.00 μg/mL的含藥LBA平板。用直徑6 mm的打孔器將活化好的供試菌株菌落制成菌碟，用接種環(huán)將菌碟置于含藥的培養(yǎng)基平板中央，菌絲面朝下。每個處理濃度5次重復(fù)，以不含藥的LBA平板為對照。接種后置于生物培養(yǎng)箱中25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)，6 d后用十字交叉法測量菌落直徑(mm)，計(jì)算菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率=[(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-6)]×100%

將藥劑濃度轉(zhuǎn)化成對數(shù)(x)，抑制率轉(zhuǎn)化成機(jī)率值(y)，根據(jù)x與y的線性關(guān)系求出毒力回歸曲線方程y=a+bx、相關(guān)系數(shù)(r)、有效抑制中濃度(EC50)。

1.5 復(fù)配劑聯(lián)合毒力和共毒系數(shù)測定根據(jù)毒力測定結(jié)果，選取毒力較強(qiáng)且在藥劑類型上具有代表性的甲霜靈、烯酰嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰4種藥劑按照1∶1、1∶2、2∶1、1∶3、3∶1 5個配比進(jìn)行兩兩復(fù)配試驗(yàn)，以尋求對大豆疫霉毒力更強(qiáng)的藥劑復(fù)配組合。試驗(yàn)采用Sun等[15]的方法。在測定單劑毒力的基礎(chǔ)上，分別測定不同組合各配比混劑的聯(lián)合毒力，再計(jì)算各混劑的理論毒力指數(shù)TTI、實(shí)際毒力指數(shù)ATI和共毒系數(shù)CTC。

毒力指數(shù)(TI)= 標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/ 供試藥劑EC50× 100

混劑實(shí)際毒力指數(shù)(ATI)= 標(biāo)準(zhǔn)藥劑EC50/ 混劑EC50× 100

混劑理論毒力指數(shù)(TTI)= 單劑A的TI × PA + 單劑B的TI × PB

(PA和PB分別是混劑中有效成分的百分含量)

混劑的共毒系數(shù)(CTC)= ATI /TTI × 100

2種藥劑復(fù)配的相互作用判斷：當(dāng)CTC ≥ 120時(shí)，判定2種藥劑具有增效作用；當(dāng)80

2 結(jié)果與分析

2.1 8種殺菌劑對大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，供試8種藥劑對大豆疫霉菌株的EC50值表現(xiàn)為甲霜靈<烯酰嗎啉<霜脲氰<氟嗎啉<嘧菌酯<啶酰菌胺<苯甲·丙環(huán)唑<霜霉威；其中，甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰、氟嗎啉和嘧菌酯對大豆疫霉毒力強(qiáng)(EC50<1 μg/mL)；啶酰菌胺和苯甲·丙環(huán)唑毒力中等(1 μg/mL< EC50< 5 μg/mL)；霜霉威對大豆疫霉毒力最弱(EC50= 48.342 9 μg/mL>10 μg/mL)(表1)。

表1 供試藥劑對大豆疫霉根腐病菌的毒力Table 1 Toxicity of the tested fungicides to Phytophthora sojae isolate

2.2 4種殺菌劑復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力及共毒系數(shù)聯(lián)合毒力測定結(jié)果顯示，甲霜靈、烯酰嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰4種藥劑兩兩復(fù)配所形成的6個復(fù)配組合在試驗(yàn)設(shè)定的5種配比范圍內(nèi)，均存在產(chǎn)生一定增效作用的復(fù)配組合(表2～7)。其中，嘧菌酯+甲霜靈、烯酰嗎啉+甲霜靈、烯酰嗎啉+霜脲氰3個復(fù)配組合在5種配比下均有增效作用(表2～4)；霜脲氰+甲霜靈復(fù)配組合在1∶3、1∶2、2∶1、3∶1配比時(shí)有增效作用，1∶1配比時(shí)為相加作用(表5)，嘧菌酯+烯酰嗎啉復(fù)配組合在1∶1、1∶2、2∶1配比時(shí)有增效作用，其余為相加作用(表6)；嘧菌酯+霜脲氰復(fù)配在1∶2配比時(shí)有增效作用，其余比例為相加作用(表7)。

在嘧菌酯+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶1配比時(shí)最大，CTC1∶1=261，2∶1配比時(shí)其次(表2)。烯酰嗎啉+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=174，1∶1配比時(shí)其次(表3)。烯酰嗎啉+霜脲氰復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=356，1∶1配比時(shí)其次(表4)。霜脲氰+甲霜靈復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶3配比時(shí)最大，CTC1∶3=272，3∶1配比時(shí)其次(表5)。嘧菌酯+烯酰嗎啉復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶1配比時(shí)最大，CTC1∶1=326，2∶1配比時(shí)其次(表6)。嘧菌酯+霜脲氰復(fù)配組合中，復(fù)配劑CTC在1∶2配比時(shí)最大，CTC1∶2=267(表7)。綜上所述，烯酰嗎啉與霜脲氰按1∶3復(fù)配，嘧菌酯和烯酰嗎啉按1∶1復(fù)配，霜脲氰和甲霜靈按1∶3復(fù)配，嘧菌酯和霜脲氰按1∶2復(fù)配，嘧菌酯和甲霜靈按1∶1復(fù)配，烯酰嗎啉+甲霜靈按1∶3復(fù)配，復(fù)配劑CTC最大，增效作用最佳。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，藥劑復(fù)配CTC大小不僅與藥劑種類有關(guān)，還與藥劑配比有關(guān)。

表2 嘧菌酯和甲霜靈復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 2 Combined toxicity of azoxystrobin and metalaxyl to Phytophthora sojae

表3 烯酰嗎啉和甲霜靈復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 3 Combined toxicity of dimethomorph and metalaxyl to Phytophthora sojae

表4 烯酰嗎啉和霜脲氰復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 4 Combined toxicity of dimethomorph and cymoxanil to Phytophthora sojae

表5 霜脲氰和甲霜靈復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 5 Combined toxicity of cymoxanil and metalaxyl to Phytophthora sojae

表6 嘧菌酯和烯酰嗎啉復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 6 Combined toxicity of azoxystrobin and dimethomorph to Phytophthora sojae

表7 嘧菌酯和霜脲氰復(fù)配對大豆疫霉根腐病菌的聯(lián)合毒力Table 7 Combined toxicity of azoxystrobin and cymoxanil to Phytophthora sojae

3 結(jié)論與討論

采用菌絲生長速率法，測定了甲霜靈、烯酰嗎啉、氟嗎啉、嘧菌酯、霜脲氰、霜霉威、啶酰菌胺、苯甲·丙環(huán)唑8種殺菌劑對大豆疫霉根腐病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰、氟嗎啉和嘧菌酯對大豆疫霉菌毒力較強(qiáng)，可用于大豆疫霉根腐病的防治。甲霜靈作為防治作物疫病的主打藥劑在多年使用后，仍對大豆疫霉有很強(qiáng)的毒力，而有些報(bào)道[6-8]指出在一些地區(qū)大豆疫霉已對甲霜靈產(chǎn)生了抗藥性。其原因可能與安徽大豆產(chǎn)區(qū)較少使用甲霜靈防治大豆疫霉根腐病有關(guān)。為了避免或延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，在病害防治上應(yīng)盡量避免長期單一使用某一殺菌劑，提倡不同藥劑交替使用或混合使用。

經(jīng)藥劑復(fù)配篩選，發(fā)現(xiàn)甲霜靈、烯酰嗎啉、霜脲氰和嘧菌酯兩兩復(fù)配均可產(chǎn)生對抑制大豆疫霉有顯著增效作用的配比混合物；其中，尤以烯酰嗎啉與霜脲氰按1∶3復(fù)配、嘧菌酯和烯酰嗎啉按1∶1復(fù)配、霜脲氰和甲霜靈按1∶3復(fù)配、嘧菌酯和霜脲氰按1∶2復(fù)配、嘧菌酯和甲霜靈按1∶1復(fù)配、烯酰嗎啉+甲霜靈按1∶3復(fù)配，增效作用最佳。該研究結(jié)果為防治大豆疫霉根腐病的新型復(fù)配劑開發(fā)及生產(chǎn)上藥劑合理混用提供了科學(xué)依據(jù)。