鄭淑晶 王佳 胡德 李陽 冷向陽 王淑敏

中圖分類號(hào) R282 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）02-0179-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.02.09

摘 要 目的 優(yōu)化桂枝芍藥知母湯（GSZD）的提取工藝。方法 采用高效液相色譜法同時(shí)測定GSZD中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚9個(gè)成分的含量。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以料液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間為考察因素，以上述9個(gè)成分含量和干膏得率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用層次分析法和熵權(quán)法確定各指標(biāo)的復(fù)合權(quán)重并計(jì)算綜合評(píng)分，以Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化GSZD的提取工藝參數(shù)并驗(yàn)證。結(jié)果 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚含量和干膏得率的復(fù)合權(quán)重分別為0.12、0.10、0.05、0.12、0.14、0.06、0.13、0.15、0.10、0.03。GSZD的最優(yōu)提取工藝為料液比1 ∶ 14（g/mL）、提取2次、提取時(shí)間3.0 h;3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的綜合評(píng)分均值為95.879，RSD為0.50%（n=3），與預(yù)測綜合評(píng)分（94.328）的偏差為1.64%。結(jié)論 本研究確定了GSZD的最優(yōu)提取工藝。

關(guān)鍵詞 桂枝芍藥知母湯;提取工藝;層次分析法;熵權(quán)法;權(quán)重分析;Box-Behnken響應(yīng)面法

Optimization of extraction technology of Guizhi shaoyao zhimu decoction

ZHENG Shujing，WANG Jia，HU De，LI Yang，LENG Xiangyang，WANG Shumin（School of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Changchun 130117， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE To optimize the extraction technology of Guizhi shaoyao zhimu decoction （GSZD）. METHODS The contents of 9 components in GSZD were determined by HPLC， such as ephedrine hydrochloride， pseudoephedrine hydrochloride， mangiferin， paeoniflorin， liquiritin， 5-O-methylvisammioside， glycyrrhizic acid， cinnamic acid， 6-gingerol. On the basis of single factor experiment， taking material-liquid ratio， extraction times and extraction time as inspection factors， taking the contents of above 9 components and the yield of dry extract as evaluation indicators， the analytic hierarchy process and entropy weight method were used to determine the composite weight of each index and calculate the comprehensive score; the extraction technology parameters of GSZD were optimized by Box-Behnken response surface method， and the validation tests were conducted. RESULTS The composite weight of the contents of ephedrine hydrochloride， pseudoephedrine hydrochloride， mangiferin， paeoniflorin， glycyrrhizin， 5-O-methylvisa- midol， glycyrrhizinate， cinnamic acid， 6-gingerol and the yield of dry extract were respectively 0.12， 0.10， 0.05， 0.12， 0.14， 0.06， 0.13， 0.15， 0.10， 0.03. The optimal extraction technology of GSZD is that the ratio of material to liquid is 1 ∶ 14（g/mL）， extraction is 2 times， and the extraction time is 3.0 h; average comprehensive score of the 3 verification tests was 95.879， and RSD was 0.50% （n=3）， the deviation from the predicted comprehensive score （94.328） was 1.64%. CONCLUSIONS In this study， the optimal extraction technology of GSZD is determined.

KEYWORDS ? Guizhi shaoyao zhimu decoction; extraction technology; analytic hierarchy technology; entropy weight method; weight analysis; Box-Behnken response surface method

桂枝芍藥知母湯（Guizhi-shaoyao-zhimu decoction，GSZD），由桂枝、芍藥（白芍）、甘草、麻黃、生姜、白術(shù)、知母、防風(fēng)、（炮）附子組成，始載于《金匱要略》，曰“諸肢節(jié)疼痛，身體魁羸，腳腫如脫，頭眩短氣，溫溫欲吐，桂枝芍藥知母湯主之”[1]。周揚(yáng)俊等[2]于《金匱玉函經(jīng)二注》中提及：“桂枝治風(fēng)，麻黃治寒，白術(shù)治濕，故以桂枝、麻黃、白術(shù)為君藥;防風(fēng)佐桂，附子佐麻黃、白術(shù)，故以防風(fēng)、附子為佐藥。其芍藥、生姜、甘草亦和發(fā)其營衛(wèi)，如桂枝湯例也;知母治腳腫，引諸藥祛邪益氣力，故以芍藥、生姜、甘草、知母為臣藥;附子行藥勢(shì)，為開痹大劑?！痹摲降闹饕π殪铒L(fēng)除濕、溫經(jīng)散寒、滋陰清熱，可用于臨床治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膝骨性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎及腰間盤突出等病癥[1]。有研究指出，該方的主要作用機(jī)制包括抑制滑膜炎癥增生、減少軟骨破壞和骨損傷、抑制炎癥細(xì)胞侵襲、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)使其維持平衡等[3]。藥理學(xué)研究證實(shí)，桂枝中所含的肉桂酸具有抑菌、利膽、抗突變、抗侵襲和抑制肺癌細(xì)胞惡性表達(dá)等藥理作用[4];白芍中的芍藥苷可以通過抑制單核細(xì)胞來減慢炎癥的反應(yīng)速率，從而發(fā)揮抗炎作用[5]。王曉燕[6]研究發(fā)現(xiàn)，灌胃桂枝與白芍水煎液能夠明顯減輕雞蛋清所致的大鼠足跖腫脹，抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹，抗炎效果十分明顯。鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿為麻黃的重要成分，前者發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，后者發(fā)揮抗炎作用[7]。芒果苷為知母的主要活性成分，具有緩解喘氣不舒、抗自由基氧化、抗炎、抑菌和調(diào)節(jié)免疫等作用[8-10]。有研究表明，甘草中的甘草苷可抑制氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，甘草酸則可通過抑制氧化損傷來減少炎癥因子的產(chǎn)生[11]。6-姜酚是生姜的主要活性成分，極具藥用價(jià)值，研究發(fā)現(xiàn)其有顯著的抗炎、止痛、強(qiáng)心、抗氧化作用[12]。薛寶云等[13]研究發(fā)現(xiàn)，防風(fēng)中的5-O-甲基維斯阿米醇苷能降低發(fā)熱大鼠的體溫，且解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗血小板聚集作用較明顯?；诖?，本研究以鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸、甘草酸、6-姜酚的含量和干膏得率作為提取工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用層次分析法和熵權(quán)法計(jì)算復(fù)合權(quán)重，并結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化GSZD的提取工藝，旨在為后續(xù)GSZD的研究開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括LC-20AT型高效液相色譜系統(tǒng)及其配備的SPD-M20A型光電二極管陣列檢測器、SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器（日本Shimadzu公司），MS105DU型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），GXZ-9140MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），TGL16M型高速離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司），RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）等。

1.2 主要藥品與試劑

知母飲片、甘草飲片、炮附子（黑順片）飲片（批號(hào)分別為38420007、05620036、D01020009）均購自河北仁心藥業(yè)有限公司;桂枝飲片、白芍飲片、白術(shù)飲片、防風(fēng)飲片（批號(hào)分別為200403、200402、200401、200302）均購自安國市安興中藥飲片有限公司;麻黃飲片（批號(hào)201911004）購自內(nèi)蒙古普康藥業(yè)有限公司;生姜飲片（批號(hào)201022）購自河北楚風(fēng)中藥飲片有限公司。上述所有飲片經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)王淑敏教授鑒定，均為真品且符合2020年版《中國藥典》（一部）各藥項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)[14]。甘草苷、甘草酸、芍藥苷、6-姜酚、芒果苷、肉桂酸、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（批號(hào)分別為DST200412-009、DSTDG000601、DSTDS007001、DST190716-027、DST190305- 031、DST190413-045、DST190213-006，純度均為98.0%）均購自成都德斯特生物技術(shù)有限公司;鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)分別為171241-201809、171237- 201809，純度分別為100.0%、99.8%）均購自中國食品藥品檢定研究院;乙腈（色譜純）購自美國Sigma公司;其余試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 GSZD的制備

稱取桂枝12 g、白芍9 g、知母12 g、防風(fēng)12 g、麻黃6 g、白術(shù)15 g、生姜15 g、甘草6 g、炮附子6 g，加水1 400 mL，浸泡30 min，武火煮沸，轉(zhuǎn)文火微沸，煎煮兩次，每次60 min，合并兩次濾液，濃縮至100 mL，即得（每1 mL中含生藥0.93 g）。

2.2 多指標(biāo)成分的含量測定

采用高效液相色譜法進(jìn)行測定。

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚對(duì)照品各適量，加甲醇溶解，制成上述各對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為2.016、2.024、2.048、4.028、2.026、2.016、2.002、2.000、0.203 mg/mL的單一對(duì)照品溶液。取上述各單一對(duì)照品溶液適量，加甲醇稀釋，制成上述各對(duì)照品質(zhì)量濃度分別為201.6、202.4、204.8、402.8、202.6、201.6、200.2、200.0、20.3 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取GSZD 1 mL，加入4倍體積的甲醇，渦旋混勻，10 000 r/min離心10 min，取上清液，過0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按照GSZD處方量，分別稱取缺麻黃、缺知母、缺白芍、缺甘草、缺防風(fēng)、缺桂枝、缺生姜、缺附子、缺白術(shù)的陰性樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行提取、濃縮，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以Waters XSelect ?HSS T3（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～5 min，95.5%B;5～8 min，95.5%B→91%B;8～13 min，91%B→82%B;13～28 min，82%B→80%B;28～35 min，80%B→77%B;35～43 min，77%B→72%B;43～51 min，72%B→57%B;51～59 min，57%B→30%B;59～64 min，30%B→5%B;64～70 min，5%B）;流速為1.0 mL/min;檢測波長為210 nm（0～17 min，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿）、254 nm（17～20 min，芒果苷）、235 nm（20～29 min，芍藥苷、甘草苷）、254 nm（29～33 min，5-O-甲基維斯阿米醇苷）、280 nm（33～52 min，肉桂酸）、235 nm（52～58 min，甘草酸）、280 nm（58～62 min，6-姜酚）;柱溫為35 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。取“2.2.1”～“2.2.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸、甘草酸、6-姜酚色譜峰峰形良好，理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)不低于30 000，分離度均大于1.5，陰性樣品對(duì)測定無干擾，色譜圖見圖1。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣1、4、6、8、10、12、14、16 μL，記錄峰面積。以各待測成分進(jìn)樣量（x，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

2.2.6 定量限與檢測限考察 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，以甲醇進(jìn)行倍比稀釋，再按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以信噪比3 ∶ 1、10 ∶ 1分別計(jì)算檢測限、定量限。結(jié)果見表2。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚峰面積的RSD分別為0.52%、1.44%、1.84%、0.51%、0.35%、1.59%、1.03%、1.48%、0.87%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、肉桂酸、甘草酸、6-姜酚峰面積的RSD分別為1.64%、1.96%、1.40%、1.26%、1.58%、1.43%、1.47%、1.07%、1.70%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，再按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚含量的RSD分別為2.32%、2.20%、2.35%、2.28%、2.14%、2.22%、1.89%、2.05%、2.34%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取已知含量的GSZD 6份，各1 mL，分別加入一定量的單一對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚的平均加樣回收率分別為96.90%、99.83%、99.28%、100.72%、101.15%、96.42%、101.47%、98.25%、99.09%，RSD分別為0.99%、1.28%、0.71%、0.43%、2.06%、1.33%、0.99%、1.24%、1.43%（n=6），表明該方法回收率良好。

2.3 干膏得率的測定

精密吸取GSZD 20 mL，置于已干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，再于105 ℃下干燥3 h，取出，置于干燥器中冷卻30 min，精密稱定質(zhì)量，計(jì)算干膏得率：干膏得率（%）=干膏質(zhì)量/藥材總量×100%。

2.4 指標(biāo)權(quán)重的確定

2.4.1 層次分析法確定權(quán)重系數(shù) 根據(jù)“君臣佐使”組方規(guī)律，將9個(gè)成分含量和干膏得率作為權(quán)重指標(biāo)予以量化，即將10個(gè)指標(biāo)分為4個(gè)層次，確定各指標(biāo)的先后順序如下：鹽酸麻黃堿=鹽酸偽麻黃堿=肉桂酸>芍藥苷=芒果苷=甘草苷=甘草酸=6-姜酚>5-O-甲基維斯阿米醇苷>干膏得率，構(gòu)建成對(duì)比較的優(yōu)先判斷矩陣，并賦予各指標(biāo)相對(duì)評(píng)分，詳見表3。

根據(jù)表3結(jié)果，鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、肉桂酸、芍藥苷、芒果苷、甘草苷、甘草酸、6-姜酚、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量和干膏得率10個(gè)指標(biāo)經(jīng)層次分析后得到的權(quán)重系數(shù)（Aj）分別為0.193 1、0.193 1、0.193 1、0.073 9、0.073 9、0.073 9、0.073 9、0.073 9、0.032 6、0.018 5，一致性比率（consistent ratio，CR）為0.013 4<0.10，各項(xiàng)指標(biāo)的優(yōu)先判斷矩陣具滿意的一致性，表明權(quán)重系數(shù)有效[15]。

2.4.2 熵權(quán)法確定權(quán)重系數(shù) 熵權(quán)法是將每個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)作為1個(gè)隨機(jī)變量，計(jì)算該指標(biāo)的熵權(quán)系數(shù)。確定權(quán)重的計(jì)算步驟如下：（1）原始數(shù)據(jù)矩陣歸一化，建立原始評(píng)價(jià)指標(biāo)矩陣;設(shè)m個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)n個(gè)評(píng)價(jià)對(duì)象的原始數(shù)據(jù)矩陣為A=（aij）mn，對(duì)其歸一化后得到R=（Xij）mn，對(duì)數(shù)值大者為優(yōu)的指標(biāo)而言，按照以下公式歸一化：

Xij=（aij-[min

j] {aij}）/（[max

j] {aij}-[min

j] {aij}）（式中，Xij為第i次實(shí)驗(yàn)時(shí)第j個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的取值，i=1，2，3，…，m;j=1，2，3，…，n）。（2）將原始數(shù)據(jù)矩陣（Xij）mn轉(zhuǎn)換為概率矩陣（Pij）mn;在信息熵公式中Pi為某個(gè)信息的概率，滿足0≤Pi≤1，因此必須先對(duì)矩陣（Xij）mn進(jìn)行歸一化處理，經(jīng)處理后的矩陣即可視為指標(biāo)的概率矩陣。公式如下：Pij=Xij/[∑][j=1][n]Xij（式中，Pij為第j次實(shí)驗(yàn)在第i個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)下的概率）。（3）計(jì)算指標(biāo)的熵值，確定第i個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的信息熵（Hi）。公式如下：Hi=-k[∑][j=1][n]PijlnPij，k=1/lnn。（4）計(jì)算指標(biāo)的熵權(quán)系數(shù)（Wj）。公式如下：Wj=1-Hi /[∑][i=1][m]（1-Hi），[∑][1][m]Wj=1，0≤Wj≤1。由此公式可知，Xij值相差越大時(shí)，Hi越小，表明提供的信息量越大，其權(quán)重值越大，該指標(biāo)就越重要[16]。結(jié)果見表4。

2.4.3 計(jì)算復(fù)合權(quán)重 通過層次分析法和熵權(quán)法分別計(jì)算得到鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、肉桂酸、芍藥苷、芒果苷、甘草苷、甘草酸、6-姜酚、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量和干膏得率的相關(guān)權(quán)重，并參考下式計(jì)算10個(gè)指標(biāo)的復(fù)合權(quán)重（ωj）：ωj=WjAj/[∑][i=1][m]WjAj。結(jié)果顯示，上述10個(gè)指標(biāo)的復(fù)合權(quán)重分別為0.12、0.10、0.15、0.12、0.05、0.14、0.13、0.10、0.06、0.03。

2.5 單因素實(shí)驗(yàn)

2.5.1 料液比的考察 稱取GSZD處方量藥材，在提取時(shí)間2 h、提取1次的條件下，分別對(duì)料液比1 ∶ 8、1 ∶ 10、1 ∶ 12、1 ∶ 14、1 ∶ 16、1 ∶ 18（g/mL）進(jìn)行考察，計(jì)算綜合評(píng)分。公式如下：綜合評(píng)分=100[∑][i=1][m]（ωjXj）/Xjmax（式中，Xj為第j個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)的數(shù)值，Xjmax為第j個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)中的最大值）。結(jié)果顯示，隨著溶劑的增加，綜合評(píng)分呈先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)料液比為1 ∶ 12時(shí)綜合評(píng)分最高，故選擇料液比為1 ∶ 12，詳見圖2A。

2.5.2 提取次數(shù)的考察 稱取GSZD處方量藥材，在提取時(shí)間2.0 h、料液比1 ∶ 12（g/mL）的條件下，分別對(duì)提取次數(shù)1、2、3次進(jìn)行考察，按“2.5.1”項(xiàng)下方法計(jì)算綜合評(píng)分。結(jié)果顯示，隨著提取次數(shù)的增加，綜合評(píng)分呈先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)提取次數(shù)為2次時(shí)，綜合評(píng)分最高，表明此時(shí)藥材被提取得較完全，若再繼續(xù)提取，綜合評(píng)分反而降低，故選擇提取次數(shù)為2次，詳見圖2B。

2.5.3 提取時(shí)間的考察 稱取GSZD處方量藥材，在料液比1 ∶ 12（g/mL）、提取2次的條件下，分別對(duì)提取時(shí)間1、1.5、2.0、2.5、3.0 h進(jìn)行考察，按“2.5.1”項(xiàng)下方法計(jì)算綜合評(píng)分。結(jié)果顯示，隨著提取時(shí)間的延長，綜合評(píng)分呈先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)提取時(shí)間為2.5 h時(shí)，綜合評(píng)分最高，故選擇提取時(shí)間為2.5 h，詳見圖2C。

2.6 Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

2.6.1 實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以料液比（A，g/mL）、提取次數(shù)（B，次）、提取時(shí)間（C，h）為自變量，以綜合評(píng)分（Y）為響應(yīng)值，利用Design-Expert 8.0.6.1軟件設(shè)計(jì)3因素3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化GSZD提取工藝，其中A分別為1 ∶ 10、1 ∶ 12、1 ∶ 14（g/mL），B分別為1、2、3次，C分別為2.0、2.5、3.0 h。響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見表5。

2.6.2 數(shù)據(jù)處理與分析 運(yùn)用Design-Expert 8.0.6.1軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，得到各因素與綜合評(píng)分之間的二次多元回歸方程為Y=76.63+10.26A+11.21B-1.55C+1.14AB+3.50AC+7.23BC-0.57A 2-19.92B 2+1.24C 2。進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表6。由表6可知，模型的F=26.52，P=0.000 1，表明二次多元回歸模型良好;擬合方程的相關(guān)系數(shù)（R 2）為0.971 5，表明響應(yīng)值的變化有97.15%來自于所選自變量，模型誤差較小;失擬項(xiàng)F=3.40，P=0.134 1>0.05，表明未知因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾小。確定3個(gè)因素對(duì)GSZD綜合評(píng)分的影響順序?yàn)锽>A>C，其中，A、B、BC、B 2對(duì)綜合評(píng)分的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而C、AB、AC、A 2、C 2對(duì)綜合評(píng)分的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

為進(jìn)一步評(píng)價(jià)A、B、C之間交互作用對(duì)綜合評(píng)分的影響，本研究采用Design-Expert 8.0.6.1軟件繪制了各因素交互作用對(duì)綜合評(píng)分影響的響應(yīng)面圖與等高線圖，結(jié)果見圖3。等高線的形狀可以反映交互作用的強(qiáng)弱，越趨向橢圓表示交互作用越強(qiáng)，越趨向圓形則交互作用越弱[17]。由圖3可知，B與C交互作用較為明顯，A與B、A與C交互作用不明顯?；贒esign-Expert 8.0.6.1軟件優(yōu)化得到GSZD的最優(yōu)提取工藝如下：料液比1 ∶ 14（g/mL）、提取次數(shù)2.49次、提取時(shí)間3.0 h，綜合評(píng)分的預(yù)測值為94.328。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，本研究確定最優(yōu)提取工藝如下：料液比1 ∶ 14（g/mL）、提取次數(shù)2次、提取時(shí)間3.0 h。

2.6.3 提取工藝驗(yàn)證 根據(jù)最優(yōu)提取工藝條件，設(shè)計(jì)3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表7。3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)分均值為95.879，RSD為0.50%，與預(yù)測綜合評(píng)分的偏差為1.64%，表明優(yōu)化工藝穩(wěn)定、可靠。

3 討論

目前，中藥飲片復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)多以多指標(biāo)成分的含量及出膏率作為考察指標(biāo)，因此本研究建立了同時(shí)測定GSZD中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、芒果苷、芍藥苷、甘草苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、甘草酸、肉桂酸、6-姜酚9個(gè)有效成分含量的高效液相色譜法。與現(xiàn)有測定GSZD中有效成分的方法比較[18-19]，本方法穩(wěn)定、靈敏度高，既兼顧了方中多味藥材有效成分的含量，又符合中藥多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，為后續(xù)GSZD的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

多指標(biāo)綜合評(píng)分的關(guān)鍵是權(quán)重系數(shù)的確定，常用的權(quán)重賦權(quán)法有主觀賦權(quán)法和客觀賦權(quán)法[20]。主觀賦權(quán)法是根據(jù)指標(biāo)的重要性確定權(quán)重，主觀因素占比較大[21]。客觀賦權(quán)法是根據(jù)所反映的客觀信息來確定權(quán)重，不僅體現(xiàn)中藥“君臣佐使”的重要性，并且存在一定權(quán)重與實(shí)際指標(biāo)相反的情況，客觀性更強(qiáng)[20]。兩種賦權(quán)方法各有特色，將二者結(jié)合起來所涵蓋的信息更全面、合理。因此，本研究以中醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，按照“君臣佐使”的組方規(guī)律對(duì)GSZD中10個(gè)指標(biāo)進(jìn)行層次分析確定主觀權(quán)重，再利用熵權(quán)法確定客觀權(quán)重，并將二者組合運(yùn)用以計(jì)算復(fù)合權(quán)重，從而優(yōu)化GSZD的提取工藝。這樣不僅結(jié)合了兩種賦權(quán)方法的優(yōu)點(diǎn)使主客觀并重，還保證了各指標(biāo)綜合評(píng)分的合理性。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)模型擬合結(jié)果結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定GSZD的最優(yōu)提取工藝為料液比1 ∶ 14（g/mL）、提取次數(shù)2次、提取時(shí)間3.0 h。

綜上所述，本研究確定了GSZD的最優(yōu)提取工藝，優(yōu)化后的提取工藝穩(wěn)定、可行，可為后續(xù)GSZD的研究開發(fā)提供參考。

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收稿日期：2021-06-01 修回日期：2021-12-01）

（編輯：鄒麗娟）