植愛(ài)萍，何秋霞，羅 楠

（湯臣倍健股份有限公司，廣東珠海 519040）

0 引言

一般而言，酸價(jià)是指中和油脂中的游離脂肪酸所需要的氫氧化鉀的毫克數(shù)，酸價(jià)并不是油脂固有的值，而是隨著油脂的精制程度、保存時(shí)的水解程度、油炸時(shí)的加熱程度等因素而變化[1]。油脂的穩(wěn)定性[2-4]是保證油脂及富含油脂食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要因素，酸價(jià)是評(píng)價(jià)油脂穩(wěn)定性和加工工藝合理與否的重要指標(biāo)之一。在食品中添加油脂不僅能改變其感官性質(zhì)，還能增加食品的熱量，同時(shí)促使食品中脂溶性維生素的吸收[5]。油脂在存儲(chǔ)過(guò)程中，由于光、熱、空氣中的氧，以及油脂中的水和酶的作用，會(huì)發(fā)生變質(zhì)腐敗的復(fù)雜變化，這種變化稱(chēng)為酸敗[6-10]。酸價(jià)是判斷油脂變質(zhì)程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)對(duì)油脂中酸價(jià)的檢測(cè)可以保證油脂的安全[11-12]。

目前，國(guó)家規(guī)定的酸價(jià)檢測(cè)方法主要有國(guó)標(biāo)GB 5009.229—2016，此國(guó)標(biāo)包括冷溶劑滴定法、冷溶劑自動(dòng)電位滴定法、熱乙醇指示劑滴定法等3 種方法[13]，均要求且樣品油脂的提取時(shí)間室溫浸提12 h以上，用提取出來(lái)的油脂做成樣品溶液進(jìn)行測(cè)定[14-15]。另外，冷溶劑自動(dòng)電位滴定法[16-18]中要求測(cè)定滴定過(guò)程中樣品溶液pH 值的變化并繪制相應(yīng)的pH 值-滴定體積實(shí)時(shí)變化曲線(xiàn)及其一階微分曲線(xiàn)，以游離脂肪酸發(fā)生中和反應(yīng)所引起的“pH 值突躍”為依據(jù)判定滴定終點(diǎn)，最后通過(guò)滴定終點(diǎn)消耗的標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積計(jì)算油脂試樣的酸價(jià)[13]，但在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中可以用儀器自動(dòng)讀取溶液mv-滴定體積實(shí)時(shí)變化曲線(xiàn)及其一階微分曲線(xiàn)的變化并自動(dòng)繪制相應(yīng)的電動(dòng)勢(shì)MV-滴定體積（V） 實(shí)時(shí)變化曲線(xiàn)及其一階微分曲線(xiàn)。在行業(yè)中，軟膠囊酸價(jià)項(xiàng)目制定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)會(huì)遵循該國(guó)標(biāo)要求進(jìn)行酸價(jià)檢測(cè)。但由于軟膠囊品種繁多，且軟膠囊的配方及合成工藝不是很復(fù)雜，提取過(guò)程較固體、半固體樣品簡(jiǎn)單。另外，該國(guó)標(biāo)里面的檢測(cè)方法及樣品前處理方法比較籠統(tǒng)，根據(jù)公司生產(chǎn)的11 類(lèi)軟膠囊產(chǎn)品的酸價(jià)測(cè)定方法進(jìn)行探究，通過(guò)精密度進(jìn)行比對(duì)，為實(shí)驗(yàn)室及檢測(cè)機(jī)構(gòu)在進(jìn)行保健食品軟膠囊酸價(jià)檢測(cè)時(shí)提供參考方法。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

AL204 型電子天平（精確至0.1 mg），G20 型自動(dòng)電位滴定儀，DGi113-SC 型復(fù)合pH 玻璃電極，瑞士梅特勒-托利多公司產(chǎn)品；RE-2010 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，鄭州予達(dá)儀器科技有限公司產(chǎn)品；250 mL 平底燒瓶。

1.2 試劑

石油醚（I）、丙醇異、乙醚、無(wú)水硫酸鈉（分析純），廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)提供；氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）、氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）、氫氧化鉀- 乙醇滴定液（0.05 mol/L） 酚酞指示劑（1%，95%乙醇）、中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1）、三級(jí)水，湯臣倍健股份有限公司提供。

1.3 樣品

魚(yú)油軟膠囊、天然維E 軟膠囊、角鯊烯軟膠囊、靈芝孢子油軟膠囊、維A 維D 軟膠囊、越橘葉黃素酯、β -胡蘿卜素軟膠囊、魚(yú)油牛磺酸軟膠囊、蜂膠軟膠囊、β - 胡蘿卜素軟膠囊、DHA 藻油軟膠囊、輔酶Q10 維E 軟膠囊，湯臣倍健股份有限公司提供。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 方法一GB 5009.229-2016 第一法 冷溶劑滴定法

稱(chēng)取軟膠囊內(nèi)容物適量置于250 mL 錐形瓶中，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），充分振搖使樣品完全溶解。用氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.1 mol/L） 進(jìn)行手動(dòng)滴定至溶液初顯微紅色，且15 s 內(nèi)不褪色，即為滴定終點(diǎn)，記錄下消耗的滴定液體積（V）。

1.4.2 方法二 GB 5009.229—2016 第二法 冷溶劑自動(dòng)電位滴定法

稱(chēng)取軟膠囊內(nèi)容物適量置于與自動(dòng)電位滴定儀配套的杯子中，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），利用儀器攪拌功能充分?jǐn)嚢枋箻悠烦浞秩芙?。用氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L） 進(jìn)行自動(dòng)電位滴定，滴定結(jié)束后直接讀取滴定體積V。同時(shí)做空白試驗(yàn)，消耗體積為V0。

1.4.3 方法三

取軟膠囊內(nèi)容物約30 g，置于250 mL 平底燒瓶中，加入樣品體積3～5 倍體積的石油醚（I） 在常溫下靜置浸提12 h 以上。慢慢把上清液經(jīng)過(guò)裝有約10 g 無(wú)水硫酸鈉的三角漏斗中（加入上清液前先用石油醚（I） 潤(rùn)濕無(wú)水硫酸鈉），上清液濾完后，用石油醚少量多次潤(rùn)洗碘量瓶和無(wú)水硫酸鈉，濾液和洗液收集于干燥的平底燒瓶中，用水浴溫度低于45 ℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑旋干。按軟膠囊酸價(jià)大小，稱(chēng)取所得油脂樣品2～3 g，加入50～100 mL 中性乙醚-異丙醇混合液（1∶1），充分振搖使樣品完全溶解。若提取所得油脂為淺色液體油脂，則按方法一進(jìn)行手工滴定；若提取所得油脂為深色液體油脂，則按方法二用電位滴定法進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 方法四

精密稱(chēng)取軟膠囊2～3 g，(精確至0.1 mg），其質(zhì)量（m） 單位為克，置于50 mL 離心管中，加入石油醚（I） 20～40 mL，振搖提取1 min（80～100 次/ min），將離心管置于用離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心5 min。將全部上清液緩緩轉(zhuǎn)移至與自動(dòng)電位滴定儀配套的杯子中，加入調(diào)中性后的乙醚-異丙醇混合液（1∶1） 至50 mL，用自定電位滴定儀器進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算公式

式中：X——酸價(jià)，mg/g；

V——試樣消耗的標(biāo)準(zhǔn)滴定液體積，mL；

V0——空白消耗的標(biāo)準(zhǔn)滴定液體積，mL；

c——滴定溶液的的濃度，mol/L；56.1——?dú)溲趸浀哪栙|(zhì)量，g/mol；

m——滴定用供試品的稱(chēng)樣量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法一適用樣品范圍

以魚(yú)油軟膠囊、天然維E 軟膠囊、角鯊烯軟膠囊、靈芝孢子油軟膠囊、維A 維D 軟膠囊為研究對(duì)象，其內(nèi)容物幾乎為無(wú)色液體油脂，且滴定過(guò)程中無(wú)過(guò)渡顏色變化，當(dāng)?shù)竭_(dá)滴定終點(diǎn)時(shí)產(chǎn)生明顯的顏色變化，可以用方法一進(jìn)行測(cè)定。由于氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.05 mol/L） 溶劑容易揮發(fā)，濃度不穩(wěn)定，且有效期較短[19]，因此選用氫氧化鈉滴定液進(jìn)行滴定。經(jīng)對(duì)比研究，方法二：稱(chēng)樣量為20 g，滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L） 時(shí)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差比方法一：稱(chēng)樣量為20 g，滴定液為氫氧化鉀-乙醇滴定液（0.05 mol/L） 時(shí)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小，因此方法二最優(yōu)，后面檢測(cè)方法所用的滴定液均為氫氧化鈉滴定液（0.02 mol/L）。

方法一測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，方法二測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 方法一測(cè)定結(jié)果

表2 方法二測(cè)定結(jié)果

2.2 方法二適用樣品范圍

以β -胡蘿卜素軟膠囊、藻油軟膠囊、輔酶Q10維E 軟膠囊為研究對(duì)象，其內(nèi)容物能直接溶解于混合溶劑或石油醚（I） 中的油脂，可選用自動(dòng)電位滴定儀直接進(jìn)行滴定。由于滴定杯子容量為100 mL，20 g 內(nèi)容物在小于100 mL 溶劑中溶解不完全，且不溶的樣品容易包裹電極表面，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性差。為了使消耗體積能達(dá)到0.5 mL 以上，檢測(cè)結(jié)果獲得良好的重現(xiàn)性，使用稱(chēng)樣量為5 g，滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L） 的方案最優(yōu)。

20 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3，10 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4，5 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5。

表3 20 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果

表4 10 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果

表5 5 g 稱(chēng)樣量檢測(cè)結(jié)果

2.3 方法三適用樣品范圍

以越橘葉黃素酯β - 胡蘿卜素軟膠囊、魚(yú)油?；撬彳浤z囊、蜂膠軟膠囊為研究對(duì)象。經(jīng)分析測(cè)定可知，魚(yú)油?；撬彳浤z囊內(nèi)容物中?；撬岢煞直旧頌樗嵝晕镔|(zhì)[20]，能部分溶解于混合溶劑中，會(huì)消耗一定量氫氧化鈉滴定液，因此直接滴定的酸價(jià)結(jié)果嚴(yán)重偏高；越橘葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊、蜂膠軟膠囊等軟膠囊內(nèi)容物顏色較深，且內(nèi)容物中含有不溶于乙醚-異丙醇混合液（1∶1） 或石油醚（I）中的成分，此不溶性成分會(huì)干擾電極的穩(wěn)定性[21]，使檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性較差。因此，這3 種膠囊的內(nèi)容物需要經(jīng)提取油脂進(jìn)行測(cè)定。魚(yú)油牛磺酸軟膠囊內(nèi)容物提取所得油脂為淺色油脂，可按稱(chēng)取油脂后按方法一直接手動(dòng)滴定；蜂膠軟膠囊內(nèi)容物提取所得油脂雖然為淺色油脂，但滴定過(guò)程中有橙黃色的過(guò)渡顏色變化，影響肉眼判斷滴定終點(diǎn)，因此用自動(dòng)電位滴定法進(jìn)行測(cè)定。葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊用石油醚（I） 提取所得油脂溶液為紫紅色，因此用自動(dòng)電位滴定法進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)過(guò)對(duì)比試驗(yàn)，樣品提取時(shí)間為1 h 即可提取到足量油脂進(jìn)行試驗(yàn)，不需進(jìn)行12 h 的提取過(guò)程。以上稱(chēng)樣量為2～3 g、滴定液為氫氧化鈉（0.02 mol/L）。

浸提時(shí)間對(duì)油脂提取效果的影響見(jiàn)表6，方法三檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。

表6 浸提時(shí)間對(duì)油脂提取效果的影響/mg·g-1

表7 方法三檢測(cè)結(jié)果

2.4 方法四適用樣品范圍

在實(shí)際工作中，考慮的往往只是油脂的酸敗導(dǎo)致軟膠囊酸敗變質(zhì)的原因，卻忽視了軟膠囊內(nèi)容物中除了油脂之外的物質(zhì)帶入的游離羧酸基團(tuán)引起軟膠囊酸敗變質(zhì)的作用，因此方法四以越橘葉黃素酯β -胡蘿卜素軟膠囊、魚(yú)油?；撬彳浤z囊、蜂膠軟膠囊為研究對(duì)象，以軟膠囊內(nèi)容物稱(chēng)樣量為m 值[16]。

方法四檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 方法四檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)4 種測(cè)定方法具體測(cè)定條件及適用范圍的研究，方法一是對(duì)國(guó)標(biāo)GB 5009.229—2016《第一法 冷溶劑滴定法》的細(xì)化，適用于單純淺色油類(lèi)混合配制而成的淺色內(nèi)容物軟膠囊樣品。方法二是對(duì)國(guó)標(biāo)GB 5009.229—2016 第二法 冷溶劑自定電位滴定法的細(xì)化，適用于能全部溶解于混合溶劑或石油醚（I） 中的深色內(nèi)容物軟膠囊樣品。方法三是對(duì)不能全部溶于混合溶劑或石油醚（I） 中的深色內(nèi)容物軟膠囊，或本身含酸性物質(zhì)的軟膠囊樣品提取方法及測(cè)定條件的細(xì)化。方法四是根據(jù)實(shí)際情況考慮樣品整體性質(zhì)對(duì)軟膠囊酸敗的影響而開(kāi)發(fā)的方法，測(cè)定的是定量?jī)?nèi)容物中所含油脂的酸價(jià)。企業(yè)可根據(jù)自身樣品的特性選擇準(zhǔn)確可靠的方法。