王貞 魏玲 駱宏 廖志堅 莫春妍 姬艷麗 羅廣平

Chido/Rodgers血型系統(tǒng)的抗原并不位于紅細胞膜的固有結(jié)構(gòu)上，而是攜帶于結(jié)合在紅細胞膜表面的補體第四成分（C4）的C4d片段上；C4具有C4A和C4B兩個同種型，分別由兩個緊密連鎖的基因C4A和C4B基因編碼，大多數(shù)情況下，Ch抗原攜帶在C4B上，而Rg抗原攜帶在C4A上，共價結(jié)合在紅細胞表面[1]。Chido/Rodgers抗原可以被經(jīng)典的紅細胞血型鑒定方法檢測到，且在這些抗原和C4之間的關(guān)系被證實之前，已經(jīng)被當作血型抗原，因此Chido/Rodgers被歸納為第17個人類血型系統(tǒng)[2]。目前，在Chido/Rodgers血型系統(tǒng)中已鑒定出9種抗原，其中8種為高頻抗原，其中Ch1（CH/RG1）至Ch6（CH/RG6）、Rg1（CH/RG11）和Rg2（CH/RG1）抗原頻率超過90%，個別抗原頻率高達99%[2]。針對Chido/Rodgers抗原的抗體是IgG抗體，主要是IgG2和IgG4[3]，通常不會引起溶血性輸血反應或新生兒溶血[2，4-5]。由于Chido/Rodgers抗原多為高頻抗原，因此抗-Chido/Rodgers抗體極為罕見，本文對國內(nèi)首例疑似抗-Chido/Rodgers抗體進行鑒定，并對鑒定方法報道如下：

材料與方法

1 研究對象 患者，漢族，女性，32歲。無輸血史，曾有2次不良孕產(chǎn)史，此次診斷為雙胎妊娠胚胎停育，需手術(shù)終止妊娠，在手術(shù)備血過程中發(fā)現(xiàn)交叉配血不合，標本送至本中心臨床輸血研究所進行檢測。

2 主要試劑與儀器 單克隆抗-A、抗-B 試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司，批號20190610），Rh血型分型卡（江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司，批號：202002006），反定型試劑紅細胞、抗體篩選細胞及試劑譜細胞（本實驗室自制），胰酶（sigma公司，批號：SLBS8956），菠蘿酶（sigma公司，批號：BCCC9201），Coombs微柱凝膠卡（西班牙Grifols公司，批號：17071.01），離心機KA-2200（日本，KUBOTA 公司），恒溫孵育箱及卡式離心機（西班牙Grifols公司）。

3 血型鑒定 試管法鑒定患者ABO血型，Rh血型分型卡鑒定患者Rh型，應用Coombs微柱凝膠卡進行間接抗人球?qū)嶒灒↖AT）確證患者RhD血型。

4 抗體篩選試驗 將患者血清與抗體篩選細胞分別在鹽水介質(zhì)與Coombs微柱凝膠卡中進行反應，觀察凝集強度，同時將患者血清與患者自身紅細胞進行反應作為對照。

5 血型單特異性抗體鑒定實驗 將患者血清與試劑譜細胞在Coombs微柱凝膠卡中進行反應，觀察凝集強度。

6 患者血清與酶處理譜細胞反應 分別將胰酶和菠蘿酶與壓積試劑譜細胞以4∶1體積比混合，37℃孵育30 min，用生理鹽水洗滌3次后與患者血清在Coombs微柱凝膠卡中進行反應，觀察凝集強度。

7 患者血清與新鮮血漿的中和抑制試驗 將患者血清與3人份獻血者新鮮血漿以4∶1體積比混勻，同時將患者血清與磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffered saline，PBS）以相同體積比混合做為稀釋對照，于室溫孵育30 min，然后將混合有新鮮血漿的患者血清與譜細胞在微柱凝膠卡中反應，對照組同樣進行微柱凝膠卡反應，觀察凝集強度。

結(jié) 果

1 血型鑒定 患者血型為O型，Ccdee。

2 抗體篩選試驗 患者血清與Ⅰ號篩選細胞反應呈2+凝集，與Ⅲ號篩選細胞反應呈弱陽性，與Ⅱ號篩選細胞及自身細胞反應陰性，結(jié)果提示患者血清中存在不規(guī)則抗體。

3 血型單特異性抗體鑒定實驗 患者血清僅與9號和11號譜細胞反應陰性，與6號及10號譜細胞反應呈弱陽性，與其余細胞反應均呈2+凝集（結(jié)果見表1），對照譜細胞格局表無法判斷抗體的特異性，需進一步進行鑒定。

4 患者血清與酶處理譜細胞反應 分別采用胰酶和菠蘿酶處理譜細胞后，患者血清與酶處理細胞反應均為陰性（結(jié)果見表1），根據(jù)此結(jié)果結(jié)合與常規(guī)譜細胞反應強度不一致的特性，推測該患者血清中可能存在抗-Chido/Rodgers抗體。

5 患者血清與新鮮血漿的中和抑制試驗 應用新鮮血漿吸收后的患者血清與譜細胞在微柱凝膠卡中反應，結(jié)果均為陰性，PBS稀釋對照組結(jié)果與未吸收的患者血清的譜細胞反應格局一致（結(jié)果見表1），說明該患者血清中的抗體可被新鮮血漿中和，符合抗-Chido/Rodgers抗體可被新鮮血漿中的補體成分中和的關(guān)鍵特性，證實為抗-Chido/Rodgers抗體。

表1 譜細胞反應格局表

討 論

高頻抗體通常會與所有譜細胞凝集或僅有極個別的細胞呈陰性反應，無法直接通過譜細胞反應格局進行抗體判定，同時還需要與自身抗體導致的譜細胞全凝集以及混合抗體導致的譜細胞全凝集進行區(qū)別。高頻抗體通常直抗陰性，可與自身抗體導致的譜細胞全凝集進行區(qū)分，而與混合抗體的鑒別則需要與酶處理細胞進行反應加以區(qū)分，根據(jù)不同的酶對于不同抗原的作用不同，通過酶處理譜細胞反應格局進行抗體的鑒定。

在進行抗體篩查及抗體鑒定時應同時采用自身紅細胞與血漿反應作為自身對照，如果自身對照無凝集，則可排除自身抗體。在本案例中，患者血漿與自身細胞反應呈陰性，首先排除了自身抗體?；颊哐迮c11個譜細胞中的9個譜細胞均發(fā)生凝集反應，并且凝集強度不一致，與其余2個譜細胞反應陰性，此反應格局首先懷疑存在混合抗體，因此我們進一步采用了胰酶、菠蘿酶處理的譜細胞分別進行抗體鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者血清與胰酶和菠蘿酶處理后的譜細胞反應均為陰性，不符合常規(guī)混和抗體特征。初步判斷為高頻抗體，但通常高頻抗體會導致譜細胞全凝集且凝集強度均一，如本實驗室曾鑒定出的抗-JMH抗體及Cromer血型系統(tǒng)的抗-IFC抗體等，而本案例抗體與譜細胞反應凝集強度不一致，因此提示患者血清中可能存在抗-Chido/Rodgers抗體。

Chido/Rodgers同樣是高頻抗原，但由于Chido/Rodgers抗原不表達于紅細胞固有結(jié)構(gòu)上，而是位于來自血漿結(jié)合在紅細胞表面的補體C4上，不同個體間的補體水平差異較大，結(jié)合于紅細胞膜上的補體C4也有很大的差異，對應的不同個體間Chido/Rodgers抗原變化很大，而且很難將弱陽性的紅細胞與陰性的紅細胞區(qū)分開來，因此盡管抗-Chido/Rodgers抗體是高頻抗體，但其與不同的細胞反應強度不一致，甚至會出現(xiàn)反應為陰性的情況[2，6-8]，這是抗-Chido/Rodgers抗體的重要特點，本實驗結(jié)果與此相符；同時紅細胞膜上的Chido/Rodgers抗原可被多種酶破壞[8]，經(jīng)多種酶處理后的紅細胞與抗-Chido/Rodgers抗體反應陰性，本案例抗體鑒定結(jié)果與這些特性均相符合。但其他血型系統(tǒng)的一些抗體，如JMH血型系統(tǒng)抗體、Inb血型抗體也與多種酶處理后的譜細胞反應陰性，因此需要進一步的實驗加以甄別。

抗-Chido/Rodgers抗體有一個區(qū)別于其他血型抗體的最關(guān)鍵特性，即可以被新鮮血漿中的補體成分中和，抑制其與紅細胞的凝集反應[9-10]，為了進一步確證，在本案例中，我們采用了新鮮混合血漿對患者血清進行中和抑制試驗，中和后的患者血清與譜細胞反應均為陰性，說明其抗體可被新鮮血漿中和，符合抗-Chido/Rodgers抗體的關(guān)鍵特征，證實患者血清中的抗體為抗-Chido/Rodgers抗體。吳梅筠曾報道一例歐美病例產(chǎn)生抗-Chido抗體，應用譜細胞進行鑒定，發(fā)現(xiàn)患者血漿與其中一個譜細胞反應為陰性，與其他譜細胞反應強度為1+或2+，再應用另一套不同的譜細胞鑒定時，同樣出現(xiàn)反應強度不一致（1+或2+），也有一個譜細胞反應陰性，最后應用血漿中和抑制試驗及胰蛋白酶處理紅細胞與患者血漿反應，最終鑒定為抗-Chido抗體[7]，與本文案例結(jié)果一致。

本文首次在國內(nèi)對一例疑似針對高頻抗原的罕見抗-Chido/Rodgers抗體進行鑒定，該抗體屬于IgG抗體，目前報道的抗-Chido/Rodgers抗體絕大多數(shù)來自于反復輸血的患者，本文案例沒有輸血史，但是有2次不良孕產(chǎn)史，因此該類抗體可能經(jīng)免疫刺激產(chǎn)生。由于國內(nèi)市場商業(yè)化抗-Ch和抗-Rg抗體的缺乏，無法鑒定患者紅細胞Chido/Rodgers抗原；同時Chido、Rodgers抗原的編碼基因（C4B和C4A基因）高度同源（同源性高達99%）且緊密連鎖，均含有41個外顯子，其基因型及其復雜，不同的氨基酸序列編碼不同的同種型，但Ch和Rg表型與特定的同種異型體之間并無直接關(guān)聯(lián)[2]，對C4B和C4A基因進行分子檢測仍然無法準確判定其表型，因此在臨床鑒定時進行基因測序分析的意義不大。應用不同種酶處理譜細胞與患者血漿反應，以及應用新鮮混合血漿對患者血清進行中和抑制試驗，是目前臨床上用以鑒定抗-Chido/Rodgers抗體最適合的實驗手段，而其中最關(guān)鍵的是新鮮混合血漿的中和抑制實驗，在初步判斷抗體可能為抗-Chido/Rodgers抗體時，必須進行該實驗進行最終鑒別診斷及確證。由于血漿中的補體活性在室溫存放2小時后開始下降，因此在進行補體中和抑制試驗時應盡可能采用新鮮采集的外周血樣本血漿，以確保中和抑制試驗的順利進行。

抗-Chido/Rodgers抗體在紅細胞輸注中目前被認為沒有臨床意義，沒有造成明顯的溶血性輸血反應的報道，而且用放射性標記Chido陽性紅細胞輸注給有抗-Chido抗體的患者，患者無免疫性輸血反應[11-12]，因此臨床檢出抗-Chido/Rodgers抗體的患者需要輸注紅細胞治療時可以選擇配血中不凝集或凝集強度最弱的血液輸注；在極少數(shù)的個例中，曾發(fā)現(xiàn)抗-Chido/Rodgers抗體與一些輸入新鮮冰凍血漿、血漿因子及含有血漿的濃縮血小板后引發(fā)的嚴重過敏反應有關(guān)[13-15]，有此類抗體的患者在輸注血漿類血液成分時需引起臨床注意。

在臨床輸血工作中，常常會遇到抗體篩查或抗體鑒定全凝集反應，通常為混合抗體或者高頻抗體，酶處理紅細胞在此類抗體的鑒定中具有重要作用，在臨床進行輸血前檢查發(fā)現(xiàn)譜細胞全凝集時，需應用酶處理譜細胞進行鑒定，應用不同的酶處理譜細胞進行實驗，再根據(jù)反應格局結(jié)合不同血型系統(tǒng)抗體的特性進一步判斷，必要時增加相關(guān)特異性實驗加以確證，進而保障臨床輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突