倪詩(shī)瑤 劉欠欠

（上海市崇明區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，上海 202150）

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全是把握食品安全的關(guān)鍵，其中農(nóng)藥殘留問(wèn)題一直是大眾關(guān)注的熱點(diǎn)。但是，現(xiàn)有的農(nóng)藥殘留分析方法主要是依靠氣相色譜儀、色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀等造價(jià)高昂的儀器進(jìn)行檢測(cè)分析，這些儀器的操作繁瑣、檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，無(wú)法滿足當(dāng)下既要保證食品安全又要快速完成檢測(cè)的需求；同時(shí)，《中共中央 國(guó)務(wù)院關(guān)于深化改革加強(qiáng)食品安全工作的意見(jiàn)》指出，農(nóng)產(chǎn)品和食品的抽檢量將會(huì)逐步提升。因此，建立一套適宜農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)的方法就顯得尤為重要。在此背景下，筆者擬采用酶抑制率法和膠體金免疫層析法，對(duì)草莓中10種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥（毒死蜱、噻嗪·異丙威、氯氰菊酯、甲氰菊酯、啶蟲(chóng)脒、腐霉利、嘧霉胺、吡蟲(chóng)啉、吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑）的殘留進(jìn)行快速檢測(cè)，并對(duì)相關(guān)檢測(cè)結(jié)果與定量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，以期篩選出適用于草莓農(nóng)藥殘留檢測(cè)的高準(zhǔn)確度速測(cè)方法?，F(xiàn)將相關(guān)測(cè)試結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

供檢測(cè)的草莓為草莓專業(yè)合作社種植的“紅顏”草莓。試驗(yàn)使用的緩沖溶液、酶試劑、顯色劑、底物、農(nóng)藥膠體金快速檢測(cè)試紙均為上海復(fù)博農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)。

將10種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥（毒死蜱、噻嗪·異丙威、氯氰菊酯、甲氰菊酯、啶蟲(chóng)脒、腐霉利、嘧霉胺、吡蟲(chóng)啉、吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑）按產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)上推薦的濃度進(jìn)行稀釋，混勻后噴灑至草莓全株，并于施藥后1 d、2 d、3 d、6 d、10 d、15 d、20 d、24 d、29 d采集草莓果實(shí)樣品（分別編號(hào)D1、D2、D3、D6、D10、D15、D20、D24、D29），然后進(jìn)行農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)及定量檢測(cè)。10種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥的使用濃度或劑量和安全間隔期見(jiàn)表1。

表1 參加測(cè)試的10種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥及其使用濃度和安全間隔期

1.1.2 儀 器

檢測(cè)儀器為CL-BⅢ八通道農(nóng)藥殘留速側(cè)儀、CL-BⅢ Plus手持便攜式智慧速測(cè)儀（上海復(fù)博農(nóng)業(yè)科技有限公司提供）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀島津LCMS-8045、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀Agilent 7890B-7000C。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 定量檢測(cè)法

定量檢測(cè)依據(jù)《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T 20769-2008》和《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法GB 23200.8-2016》的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。另外，本實(shí)驗(yàn)以定量檢測(cè)結(jié)果作為酶抑制率法和膠體金免疫層析法的準(zhǔn)確性判定依據(jù)。

1.2.2 酶抑制率法

酶抑制率法的檢測(cè)原理：在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)；在正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，會(huì)產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算抑制率，通過(guò)抑制率即可判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在[1]。

按照GB/T 5009.199-2003中的酶抑制率法，對(duì)采集的草莓樣品進(jìn)行快速檢測(cè)。具體檢測(cè)步驟[1]：（1）樣品處理及步驟。將采集的草莓樣品用干凈的紙巾擦掉表面的泥土，剪成1 cm2左右的碎片，放入提取瓶中，加入5 mL緩沖溶液，振蕩1 min左右后倒出提取液，靜置3 min左右。取2.5 mL樣品提取液，加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑，搖勻后于37 ℃放置15 min。再加入0.1 mL底物，搖勻后倒入比色皿中，然后置于儀器的比色池，記錄反應(yīng)3 min的吸光度變化值。（2）結(jié)果計(jì)算。抑制率（%）=[(ΔA0-ΔA1)÷ΔA0]×100%，其中，ΔA0為對(duì)照溶液反應(yīng)3 min吸光度的變化值，ΔA1為樣品溶液反應(yīng)3 min的吸光度變化值。（3）結(jié)果判定。當(dāng)抑制率≥50%時(shí)，表示有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品結(jié)果為陽(yáng)性。

1.2.3 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法的檢測(cè)原理：樣品中的農(nóng)藥經(jīng)提取后，與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙中檢測(cè)線（T線）上的抗原結(jié)合，從而產(chǎn)生檢測(cè)線顏色深淺的變化，通過(guò)對(duì)檢測(cè)線與控制線（C線）顏色深淺進(jìn)行比較，即可對(duì)樣品中的農(nóng)藥進(jìn)行定性判斷[2]。

具體檢測(cè)步驟：在室溫20～30 ℃下，將采集的草莓樣品用干凈的紙巾擦掉表面的泥土，剪成1 cm2左右的碎片，根據(jù)提供的農(nóng)藥試紙說(shuō)明書(shū)，稱取相應(yīng)質(zhì)量的樣品，置于15 mL聚苯乙烯離心管中，再加入4 mL提取液，振蕩30 s，靜置1 min，得到待檢液。使用一次性吸管吸取樣品待檢液，緩慢加3滴于加樣孔中，反應(yīng)10 min后進(jìn)行結(jié)果判定。

具體結(jié)果判定方法：陰性，T線顯色高于或者等于C線顯色，均表示樣品中的待測(cè)物濃度低于檢測(cè)限；陽(yáng)性，T線顯色低于C線顯色，或者T線不顯色，均表示樣品中的待測(cè)物濃度等于或高于檢測(cè)限；無(wú)效，未出現(xiàn)C線，表示操作過(guò)程不正確或試紙已失效。見(jiàn)圖1。

圖1 膠體金免疫層析法試紙檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果與分析

由于《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB 2763-2019》中無(wú)噻嗪·異丙威和苯醚甲環(huán)唑在草莓上的限量值[3]，故在本實(shí)驗(yàn)中，噻嗪·異丙威在草莓上的限量值參照其在黃瓜上的限量值，苯醚甲環(huán)唑在草莓上的限量值參照其在西瓜上的限量值。草莓中10種高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)藥的農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。酶抑制率法對(duì)草莓中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類兩類農(nóng)藥的抑制率結(jié)果見(jiàn)表3。膠體金免疫層析法對(duì)草莓中10種農(nóng)藥的農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表2 草莓中10種農(nóng)藥的農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)結(jié)果 (單位：mg/kg)

表3 酶抑制率法對(duì)草莓中兩類農(nóng)藥的抑制率結(jié)果 (單位：%)

表4 膠體金免疫層析法對(duì)草莓中10種農(nóng)藥的農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果

由表2、表3、表4可知，酶抑制率法僅限于檢測(cè)草莓中有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類兩類農(nóng)藥，其檢測(cè)結(jié)果與定量檢測(cè)結(jié)果在施藥后20 d的樣品上，存在偏差，表明該方法的檢測(cè)準(zhǔn)確性不高，且其檢出限不能滿足《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB 2763-2019》中規(guī)定的果蔬農(nóng)藥最大殘留限量要求。而膠體金免疫層析法的檢測(cè)結(jié)果與定量檢測(cè)結(jié)果完全一致，表明該方法的檢測(cè)準(zhǔn)確性更高。

3 結(jié)果與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，酶抑制率法的檢測(cè)準(zhǔn)確性不高、檢測(cè)范圍小，僅限于檢測(cè)有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類兩類農(nóng)藥，不能對(duì)其他農(nóng)藥的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，且其檢出限不能滿足《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB 2763-2019》中規(guī)定的果蔬農(nóng)藥最大殘留限量要求，故該方法的檢測(cè)局限性較大。膠體金免疫層析法的檢測(cè)結(jié)果與定量檢測(cè)結(jié)果完全一致，檢測(cè)準(zhǔn)確性更高、檢測(cè)范圍更廣、針對(duì)性更強(qiáng)，且檢測(cè)條件受環(huán)境影響較小，檢測(cè)時(shí)間較短[4]。因此，在草莓農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)中可應(yīng)用膠體金免疫層析法進(jìn)行檢測(cè)。

但是，快速檢測(cè)技術(shù)目前還不能進(jìn)行大范圍推廣應(yīng)用，這主要是因?yàn)椋海?）快速檢測(cè)產(chǎn)品還沒(méi)有獲得行政許可，且快速檢測(cè)產(chǎn)品的性能無(wú)法保證；（2）檢測(cè)人員多為基層監(jiān)管人員，對(duì)快速檢測(cè)技術(shù)的掌握程度不夠；（3）快速檢測(cè)技術(shù)的檢測(cè)成本高[5-6]，例如，本實(shí)驗(yàn)中的膠體金免疫層析法，每張檢測(cè)卡紙的價(jià)格約為20元，若遇大量樣本，檢測(cè)成本則會(huì)非常高。因此，只有妥善解決上述問(wèn)題，才能實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)技術(shù)的大范圍推廣應(yīng)用，進(jìn)而提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全水平。