符小琴 范 晴 勾 丹 鐘如意 周應(yīng)軍 鄒勝文 肖定福*
(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長沙 410128;2.麻陽苗族自治縣職業(yè)中學(xué),懷化 419400;3.湖南今漢藥業(yè)有限公司,長沙 410014;4.湖南文鳳農(nóng)牧科技有限公司,婁底 417700)
迷迭香(Rosmarinusofficinalis)又名海洋之露、艾菊,為唇形科迭香屬多年生常綠草本植物[1]。我國最早對迷迭香的記載始于《草本拾遺》,表明迷迭香曾經(jīng)在曹魏時期引種;20世紀(jì)70年代末至80年代初,我國從加拿大和美國引進(jìn)迷迭香并成功栽培,現(xiàn)主要分布于南方地區(qū)的云南、貴州和廣西等地,其中貴州獨(dú)立山縣成為迷迭香生產(chǎn)的主要基地[2]。迷迭香的莖、葉和花經(jīng)過加工提取可以制成迷迭香提取物,其含有黃酮類、萜類與精油類以及酚酸類等生物活性成分,具有豐富的生物活性成分及藥理作用。其中,鼠尾草酸、迷迭香酸和鼠尾草酚具有收斂、緊致肌膚、改善循環(huán)功能、刺激毛發(fā)再生、改善脫發(fā)、鎮(zhèn)靜安神、提神醒腦以及消除胃脹氣等作用,另外還具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤、降血脂和護(hù)肝等生物學(xué)功能[3-7]。迷迭香提取物作為多功效、天然和綠色的中草藥飼料添加劑,滿足了人們對健康食物的需求理念,成為飼料添加劑的研究熱潮。目前,針對迷迭香提取物對肉雞影響的研究較多,對蛋雞鮮有報道,而特色品牌雞蛋生產(chǎn)需要需求一種能夠有效提高蛋品質(zhì),并實現(xiàn)抗氧化應(yīng)激的天然飼料添加劑。因此,本試驗在黑羽綠殼蛋雞飼糧中添加不同水平的迷迭香提取物,探討其對黑羽綠殼蛋雞生長性能、蛋品質(zhì)、抗氧化功能以及血清生化指標(biāo)的影響,旨在探討迷迭香提取物在蛋雞飼糧中的作用效果及合理的添加水平,以期為迷迭香提取物在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。
試驗選用690羽體重接近、健康的22周齡蘇禽綠殼蛋雞與五黑雞的雜交F1代黑羽綠殼蛋雞。試驗所用的迷迭香提取物由湖南某公司提供,主要成分為迷迭香酸(≥5%)、熊果酸(≥3%)、葉綠素(≥4%)和黃酮(≥16%),其他成分為二氧化硅和玉米淀粉以1∶4比例組成的載體。
試驗選取22周齡、體重相近、采食正常、健康的黑羽綠殼蛋雞690羽(試驗采用的種雞),隨機(jī)分為5個組,每組6個重復(fù),每個重復(fù)母雞20羽、公雞3羽。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,4個試驗組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加50、100、200和400 mg/kg迷迭香提取物的飼糧。試驗預(yù)試期1周,正試期14周?;A(chǔ)飼糧參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制,為玉米-豆粕型粉狀飼糧,其組成及營養(yǎng)水平見表1。
表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %
續(xù)表1項目 Items含量 Content營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)11.34粗蛋白質(zhì) CP16.49賴氨酸 Lys0.79蛋氨酸 Met0.36鈣 Ca0.35總磷 TP0.62有效磷 AP0.41
試驗于2020年7月1日至2020年10月13日在湖南雙峰縣文鳳農(nóng)牧科技有限公司種雞場進(jìn)行。試驗采用2層全階梯式雞籠飼養(yǎng),每個重復(fù)1籠,各組均勻分布在1~2層。雞只自由采食(計量不限量),飲水通過乳頭式飲水器全天供應(yīng)。每天飼喂2次(07:00和15:30),每天12:00、17:00準(zhǔn)時收集當(dāng)天全部雞蛋。雞舍自然通風(fēng)和機(jī)械通風(fēng)相結(jié)合,保證16 h光照時間,每天記錄雞舍的溫度濕度,保持舍內(nèi)衛(wèi)生,每周清理2次剩料和雞糞,免疫按照雞場防疫規(guī)定進(jìn)行。
1.4.1 生產(chǎn)性能
以重復(fù)為單位,每天記錄各重復(fù)雞的采食量、產(chǎn)蛋總數(shù)和蛋重,每周記錄死淘亡雞數(shù)(公母)、畸形蛋數(shù)(臟蛋數(shù)、破殼蛋數(shù)和軟殼蛋數(shù)),計算蛋雞平均日采食量(ADFI,以重復(fù)為單位,包括公雞、母雞)、平均蛋重、平均每只入舍蛋雞的產(chǎn)蛋枚數(shù)(統(tǒng)計期內(nèi)的總產(chǎn)蛋數(shù)/入舍母雞數(shù))、平均每只入舍蛋雞的產(chǎn)蛋重量(統(tǒng)計期內(nèi)的產(chǎn)蛋重量/入舍母雞數(shù))、料蛋比、入舍雞產(chǎn)蛋率(100×統(tǒng)計期內(nèi)產(chǎn)蛋總數(shù)/入舍雞總數(shù))、畸形蛋率和全期死淘率(死淘雞全為母雞)。
1.4.2 蛋品質(zhì)
正試期結(jié)束前3 d各重復(fù)每天隨機(jī)收集雞蛋10枚,即每個重復(fù)30枚雞蛋,共900個雞蛋(以重復(fù)為單位編號)帶回實驗室待測蛋品質(zhì)。
1.4.2.1 常規(guī)蛋品質(zhì)指標(biāo)
每個重復(fù)隨機(jī)選取20枚雞蛋,每組120枚,共600枚,測定常規(guī)蛋品質(zhì)指標(biāo)。蛋形指數(shù):用游標(biāo)卡尺測蛋的長徑和短徑;蛋形指數(shù)=長徑/短徑。蛋殼強(qiáng)度:將完整的雞蛋尖端朝上、鈍端朝下至于蛋殼強(qiáng)度測定儀測定。蛋殼厚度:用蛋殼厚度測定儀測帶膜蛋殼的鈍、中、銳端,取三者平均值。蛋殼相對重量(%)=100×蛋殼重/蛋重。哈氏單位和蛋黃顏色:用SONOVA蛋白質(zhì)自動分析儀測定。蛋黃相對重量(%)=100×蛋黃重/蛋重。蛋黃指數(shù):用高度游標(biāo)卡尺測量蛋黃的高度,用游標(biāo)卡尺測量蛋黃的直徑,精確到0.02 mm,蛋黃指數(shù)(%)=100×高度/直徑。
1.4.2.2 全蛋粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)含量
正試期最后3 d每個重復(fù)每天隨機(jī)取1枚雞蛋,每組18枚,共90枚。將完整的鮮雞蛋打入帶蓋的錫紙盒中,用玻璃棒(恒重)攪拌均勻,蓋好錫紙盒蓋并留出空隙以便排出雞蛋受熱產(chǎn)生的氣體,65 ℃恒溫箱烘8~12 h,每隔30 min中攪拌1次,烘至恒重;用磨粉機(jī)磨成粉末,再用105 ℃恒溫箱烘2~3 h至恒重,密封保存。用凱氏定氮法(GB 5009.5—2010)測定全蛋中CP含量,用索氏浸提法(GB/T 14772—2008)測定全蛋中EE含量。
每組隨機(jī)取18枚雞蛋,將蛋液混勻分裝至1.5 mL離心管中,于-20 ℃保存?zhèn)溆?。測定時,按照1∶4(質(zhì)量體積比)加入無水乙醇,在冰水浴條件下進(jìn)行組織勻漿,設(shè)置低溫離心機(jī)參數(shù)為4 ℃、3 500 r/min,離心10 min,離心后取上清液待測。采用試劑盒(南京建成生物工程研究所)測定全蛋中TG和TC含量,測定方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。
1.4.3 血清抗氧化指標(biāo)
試驗結(jié)束時,禁食12 h,在每個重復(fù)中隨機(jī)挑選2只母雞,進(jìn)行翅靜脈采血5 mL于乙二胺四乙酸(EDTA)真空采血管中,于室溫傾斜靜置1 h后,在3 500 r/min的條件下離心15 min,收集血清分裝于1.5 mL離心管中,-20 ℃保存。采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定血清總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量,測定方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。
1.4.4 血清生化指標(biāo)
試驗結(jié)束時,禁食12 h,在每個重復(fù)中隨機(jī)挑選2只母雞,進(jìn)行翅靜脈采血5 mL于普通真空采血管中,于室溫傾斜靜置1 h后,在3 500 r/min的條件下離心15 min,收集血清分裝于1.5 mL離心管中,-20 ℃保存。采用邁瑞B(yǎng)S-200全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)和試劑盒(南京建成生物工程研究所)檢測血清總蛋白(TP)、葡萄糖(Glu)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、TG、TC、肌酐(CREA)、尿素氮(UN)含量以及堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性,測定方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。
試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2013進(jìn)行初步整理,采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行一般線性模型(單變量)分析,采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,0.05
由表2可知,與對照組相比,在試驗后期(30~36周齡),飼糧添加50 mg/kg迷迭香提取物有提高黑羽綠殼蛋雞平均蛋重的趨勢(0.05
0.05)。
表2 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table 2 Effects of Rosmarinus officinalis extract on performance of black feather green shell laying hens
2.2.1 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞常規(guī)蛋品質(zhì)指標(biāo)的影響
由表3可知,與對照組相比,飼糧添加100、200和400 mg/kg迷迭香提取物極顯著提高黑羽綠殼蛋雞蛋黃顏色(P<0.01),飼糧添加不同水平迷迭香提取物對平均蛋重、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋黃相對重量和蛋殼相對重量均無顯著影響(P>0.05)。
表3 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞常規(guī)蛋品質(zhì)指標(biāo)的影響Table 3 Effects of Rosmarinus officinalis extract on conventional egg quality indices of black feather green shell laying hens (n=120)
2.2.2 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞全蛋中TC、TG、CP和EE含量的影響
由表4可知,與對照組相比,飼糧添加400mg/kg迷迭香提取物顯著提高黑羽綠殼蛋雞全蛋中CP含量(P<0.05),飼糧添加不同水平迷迭香提取物對全蛋中TC、TG和EE含量均無顯著影響(P>0.05)。
表4 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞全蛋中TC、TG、CP和EE含量的影響Table 4 Effects of Rosmarinus officinalis extract on contents of TC, TG, CP and EE in whole eggs of black feather green shell laying hens (n=18)
由表5可知,與對照組比,飼糧添加100和200 mg/kg迷迭香提取物顯著提高黑羽綠殼蛋雞血清T-AOC(P<0.05),飼糧添加100、200和400 mg/kg迷迭香提取物極顯著提高血清GSH-Px活性(P<0.01),飼糧添加不同水平迷迭香提取物有降低血清MDA含量的趨勢(0.05
0.05)。
表5 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of Rosmarinus officinalis extract on serum antioxidant indices of black feather green shell laying hens (n=12)
由表6可知,與對照組相比,飼糧添加200和400 mg/kg迷迭香提取物顯著降低黑羽綠殼蛋雞血清Glu含量(P<0.05),飼糧添加100和200mg/kg迷迭香提取物極顯著提高血清ALP活性(P<0.01),飼糧添加100、200和400 mg/kg迷迭香提取物極顯著降低血清CREA含量(P<0.01),飼糧添加不同水平迷迭香提取物對血清TP、HDL、LDL、TG、TC和UREA含量以及ALT、AST活性均無顯著影響(P>0.05)。
表6 迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞血清生化指標(biāo)的影響Table 6 Effects of Rosmarinus officinalis extract on serum biochemical indices of black feather green shell laying hens (n=12)
續(xù)表6項目 Items迷迭香提取物添加水平 Rosmarinus officinalis extract supplemental levels/(mg/kg)0(對照 Control)50100200400P值P-value高密度脂蛋白 HDL/(mmol/L)0.69±0.390.87±0.370.88±0.431.01±0.251.21±0.360.219低密度脂蛋白 LDL/(mmol/L)0.77±0.120.70±0.120.69±0.140.65±0.890.57±0.090.141甘油三酯 TG/(mmol/L)8.21±1.487.78±1.076.78±1.677.58±2.077.04±0.610.619總膽固醇 TC/(mmol/L)3.18±0.473.26±0.572.81±0.512.94±0.472.53±0.570.880肌酐 CREA/(μmol/L)32.09±18.84Aa31.92±10.83Aa13.79±2.86Bb15.76±6.48Bb13.41±5.81Bb<0.001尿素 UREA/(mmol/L)0.08±0.030.13±0.030.07±0.030.06±0.030.06±0.040.472
迷迭香作為藥食同源植物,含有萜類、黃酮類和酚酸類等活性成分,具有抗氧化、抗菌、護(hù)肝以及降血糖、血脂等作用。楊建生等[8]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加0.3%迷迭香草粉可以顯著提高40周齡京粉1號蛋雞的產(chǎn)蛋率,對平均蛋重和料蛋比無顯著影響。Radwan等[9]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加0.5%和1.0%的止痢草、百里香、迷迭香及姜黃提高了飼料轉(zhuǎn)化率、總蛋重、產(chǎn)蛋率及孵化性能。本試驗結(jié)果表明,與對照組相比,飼糧添加不同水平迷迭香提取物對黑羽綠殼蛋雞前期、后期和全期的入舍雞產(chǎn)蛋率、平均每只入舍蛋雞的產(chǎn)蛋枚數(shù)、平均每只入舍雞蛋的產(chǎn)蛋重量、料蛋比、畸形蛋率和全期死淘率均無顯著影響,但在試驗后期飼糧添加50 mg/kg迷迭香提取物有提高平均蛋重的趨勢;同時,本試驗結(jié)果表明,飼糧添加50、200和400 mg/kg迷迭香提取物可顯著降低試驗前期的ADFI,但沒有呈現(xiàn)一定的劑量關(guān)系,對試驗后期和全期的ADFI沒有顯著影響,這可能與蛋雞試驗飼養(yǎng)前期沒有適應(yīng)迷迭香提取物的特殊氣味有關(guān)。
關(guān)于飼糧中添加迷迭香提取物對蛋雞蛋品質(zhì)的報道較少。家禽不能自身合成蛋黃色素,而由親脂性的含氧羥基、酮基類胡蘿卜素以及天然的葉黃素沉積在蛋黃中,且主要受飼糧中葉黃素沉積的影響[10]。目前,消費(fèi)者更傾向于購買蛋黃顏色較深的雞蛋。安婷婷等[11]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加迷迭香草粉可以顯著提高存放1和15 d雞蛋的哈氏單位,顯著提高蛋黃顏色。楊建生等[8]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加0.3%迷迭香草粉可以顯著提高蛋黃顏色,對哈氏單位、蛋黃重等無顯著影響。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加100、200和400 mg/kg迷迭香提取物可極顯著提高蛋黃顏色,與以上研究結(jié)果相似。這可能由于迷迭香提取物中的綠原酸及黃酮類物質(zhì)較高,而其在蛋黃中逐漸沉積使蛋黃色澤更高。同時,楊建生等[8]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加0.3%迷迭香草粉可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率,添加0.9%迷迭香草粉可顯著降低蛋殼強(qiáng)度,對平均蛋重、蛋殼重量、蛋殼厚度、蛋白高度、蛋形指數(shù)和哈氏單位等沒有顯著影響。本試驗結(jié)果表明,在蛋殼厚度和蛋形指數(shù)上與楊建生等[8]的研究結(jié)果一致,但在蛋殼強(qiáng)度上存在差異,這可能由于迷迭香添加的形式及數(shù)量以及蛋雞品種、周齡不同而有差異。
雞蛋中蛋白質(zhì)和脂肪容易被人體吸收,且其中含有豐富的氨基酸、脂肪酸、維生素及礦物質(zhì)。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加400 mg/kg迷迭香提取物可以顯著提高全蛋中CP含量,添加200 mg/kg迷迭香提取物有提高全蛋中CP含量的趨勢;飼糧添加迷迭香提取物對全蛋中EE含量沒有顯著影響。膽固醇和TG與機(jī)體脂質(zhì)代謝的密切相關(guān),膽固醇是機(jī)體不可或缺的物質(zhì),若膽固醇太高則會影響機(jī)體健康,容易誘導(dǎo)動脈粥樣硬化、心血管栓塞的發(fā)生[12]。因此,降低雞蛋中的膽固醇和TG含量具有重要意義[13]。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加迷迭香提取物對全蛋中TC和TG含量沒有顯著影響,這說明迷迭香提取物可以提高雞蛋營養(yǎng)水平,改善蛋品質(zhì),符合目前消費(fèi)者對高蛋白質(zhì)食品的需求。
脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是機(jī)體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基(ROS)攻擊細(xì)胞膜不飽和脂肪酸引起。當(dāng)機(jī)體內(nèi)ROS產(chǎn)生與清除調(diào)節(jié)失衡時,機(jī)體容易發(fā)生氧化損傷。T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px和MDA是目前評價機(jī)體抗氧化能力強(qiáng)弱的主要指標(biāo)。劉亞楠等[14]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加迷迭香提取物可以提高京海黃雞血清T-AOC,降低血清MDA含量,且以200 mg/kg添加組抗氧化能力最強(qiáng)。劉大林等[15]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加150 mg/kg迷迭香精油能顯著提高肉雞血清SOD和GSH-Px活性,顯著降低血清MDA含量。沈根明等[16]研究發(fā)現(xiàn),飼糧添加0.3%迷迭香可顯著提高高溫蛋雞血清SOD和CAT活性,顯著降低血清MDA含量。張澤生等[17]研究發(fā)現(xiàn),中、高劑量迷迭香組分別顯著和極顯著提高Ⅱ型糖尿病模型小鼠血清SOD活性,降低MDA含量。梁正敏等[18]研究發(fā)現(xiàn),迷迭香酸可以提高肺喘小鼠組織的SOD和GSH-Px活性,改善肺組織損傷。Torki等[19]研究發(fā)現(xiàn),添加單一或組合的迷迭香、蒔蘿和菊苣能夠顯著提高抗熱應(yīng)激蛋雞血漿GSH-Px活性。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加迷迭香提取物能顯著提高黑羽綠殼蛋雞血清T-AOC和GSH-Px活性,對血清CAT和SOD活性無顯著影響,有降低血清MDA含量的趨勢。本試驗結(jié)果與前人研究結(jié)果具有相似性,說明迷迭香提取物的主要成分可提高蛋雞的抗氧化能力,這可能與迷迭香提取物含有的迷迭香酸、黃酮類和綠原酸等具有清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、2,2′-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)自由基和羥基自由基等多種自由基的功能有關(guān)[20-23]。
血液生化指標(biāo)是反映機(jī)體健康狀況的敏感指標(biāo),與動物生長、機(jī)體代謝、營養(yǎng)狀況和疾病密切相關(guān)。ALP是一組同工酶,主要在骨骼(40%~75%)、肝臟、胎盤和小腸(20%)等部位分布[24]。血清ALP活性反映動物成骨細(xì)胞活性,隨著年齡的增大,血清ALP活性降低[25]。同時,研究發(fā)現(xiàn),野葛葉總黃酮提取物可顯著提高大鼠血清ALP活性,促進(jìn)成骨細(xì)胞功能活動,進(jìn)而促進(jìn)骨的形成[26];飼料添加綠原酸可以顯著提高草魚血清ALP活性,對預(yù)防外界微生物具有積極作用[27]。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加100和200 mg/kg迷迭香提取物可極顯著提高黑羽綠殼蛋雞血清ALP活性,可能原因是迷迭香提取物有利于提高成骨細(xì)胞功能活性或預(yù)防外界微生物,其作用機(jī)制需進(jìn)一步研究。
Glu是機(jī)體供能的主要物質(zhì),由胰島素和胰高血糖素共同調(diào)控,血清Glu含量的高低反映機(jī)體糖代謝情況。據(jù)報道,迷迭香提取物具有降血糖作用[28-30]。Bakirel等[28]研究發(fā)現(xiàn),迷迭香提取物可以降低高脂飼糧誘導(dǎo)的新西蘭兔血液Glu含量升高并改善其耐糖性能。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加200和400 mg/kg迷迭香提取物可顯著降低黑羽綠殼蛋雞血清Glu含量,與以上研究結(jié)果一致,說明迷迭香提取物具有降血糖作用,這可能與迷迭香提取物中的活性成分迷迭香酸(5%)具有降血糖的作用有關(guān)。CREA是動物肌肉分解的主要產(chǎn)物,是檢測腎功能的常用指標(biāo),反映腎小球的濾過功能。CREA含量降低表明腎小球的濾過功能提高[31]。本試驗結(jié)果表明,飼糧添加100、200和400 mg/kg迷迭香提取物可極顯著降低黑羽綠殼蛋雞血清CREA含量,說明迷迭香提取物具有保護(hù)腎臟作用,這可能與迷迭香提取物中的活性成分具有抗脂質(zhì)氧化和清除自由基作用有關(guān)。
綜上所述,在本試驗條件下,飼糧添加200~400 mg/kg迷迭香提取物可改善黑羽綠殼蛋雞蛋品質(zhì),降低血清Glu和CREA含量,并能提高其抗氧化能力,表明迷迭香提取物具有作為蛋雞飼料添加劑的開發(fā)潛力。