陳 顯，姜 健

(1.江蘇省血液中心，江蘇 南京 210042;2.無(wú)錫市中心血站，江蘇 無(wú)錫 214000)

血液制劑不濾白進(jìn)行臨床輸注可引起非溶血性發(fā)熱、血小板輸注無(wú)效、免疫抑制，甚至病毒感染等一系列臨床輸血反應(yīng)。目前，國(guó)內(nèi)多家采供血機(jī)構(gòu)已開展了血液濾白操作，尤其是江蘇省所有采供血機(jī)構(gòu)已將血液濾白比例需要達(dá)到99%以上作為血站3年一度周期評(píng)審驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，要求除卻制備手工濃縮血小板等特殊血液制劑外所有全血必須經(jīng)濾白才可投入臨床使用，從而進(jìn)一步保證用血安全。

血液濾白有多種方法，使用全血白細(xì)胞濾器進(jìn)行濾白作為最便捷的方式已廣泛用于全國(guó)各大采供血機(jī)構(gòu)。目前，市場(chǎng)上使用的全血白細(xì)胞濾器基本為第3代產(chǎn)品，主要是采用聚酯纖維無(wú)紡布作濾膜,并在纖維中添加了特殊的高分子聚合材料，通過(guò)攔截過(guò)濾和細(xì)胞黏附等方式，可以濾除全血中99.9%的白細(xì)胞，使過(guò)濾后殘余白細(xì)胞的數(shù)值達(dá)到國(guó)標(biāo)甚至歐標(biāo)的效果。本研究調(diào)研了市場(chǎng)上常見的幾種全血白細(xì)胞濾器，通過(guò)測(cè)試比較了不同濾器的濾白效果及濾器在血液制備流程中對(duì)部分血液制劑成分的影響，旨在為各家采供血機(jī)構(gòu)選擇合適的濾器提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1標(biāo)本來(lái)源 血液樣品采集在江蘇省血液中心流動(dòng)獻(xiàn)血車上進(jìn)行，體采科按照《GB18467-2011獻(xiàn)血者健康檢查要求》對(duì)獻(xiàn)血者健康征詢、初篩檢測(cè)后進(jìn)行全方位評(píng)估，完全合格者方可獻(xiàn)血，采集后的400 mL全血需滿足2019版《血站技術(shù)操作規(guī)程》和《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》，采集時(shí)間需小于13 min，全血肉眼觀察無(wú)色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況。2020年3月共采集160份(血袋廠家：山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司，保存液為ACD，批號(hào)：202002)。采集后全程冷鏈至成分制備科完成血液交接，將全血充分混勻，使用無(wú)菌接駁設(shè)備和全自動(dòng)成分血分離機(jī)將該全血均勻分為2份，每份200 mL。對(duì)其中一份(對(duì)照組)全血不經(jīng)白細(xì)胞濾器直接離心分離速凍后制備成新鮮冰凍血漿(FFP)，另一份(研究組)則使用目前國(guó)內(nèi)常用的4種全血白細(xì)胞濾器(即A、B、C、D組，A、B組為國(guó)產(chǎn)硬殼濾器，C組為進(jìn)口軟殼濾器，D組為進(jìn)口硬殼濾器)進(jìn)行濾白后截取少量全血，剩余部分離心分離后速凍制備成FFP。

1.1.2儀器 SEPAMTIC-SL(Ⅲ)全自動(dòng)成分血分離機(jī)(德國(guó)LMB公司)，MBF-21速凍機(jī)(盧森堡多美達(dá)公司)、TSCDⅡ無(wú)菌接駁機(jī)(日本泰爾茂比司特公司)、殘余白細(xì)胞計(jì)數(shù)器Adam-rWBC(韓國(guó)NanoEnTeK公司)、ACL7000血凝儀(德國(guó)貝克曼公司)、西斯美康XP-100(日本西斯美康公司)等。

1.1.3試劑 白細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(NanoEntek公司，批號(hào)3RW16303)、游離血紅蛋白(Hb)測(cè)定試劑盒(北京瑞爾達(dá)生物科技有限公司，批號(hào)200409)、Ⅷ因子試劑盒(Hemosil公司，批號(hào)495571)等。

1.2方法

1.2.1殘余白細(xì)胞計(jì)數(shù) 4組截取的少量全血充分混勻后使用Adam-rWBC系統(tǒng)進(jìn)行殘余白細(xì)胞計(jì)數(shù)，并同《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》中濾過(guò)后白細(xì)胞殘余量進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算合格率。按照《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》白細(xì)胞殘留量應(yīng)≤2.5×106個(gè)/U，根據(jù)2019版《血站技術(shù)操作規(guī)程》，75%的抽檢結(jié)果應(yīng)落在質(zhì)量控制指標(biāo)范圍內(nèi)。

1.2.2濾器吸附量 對(duì)4種濾器濾前、濾后進(jìn)行稱重，計(jì)算濾器的全血吸附量。

1.2.3儲(chǔ)存期末溶血率 將濾白后全血在6 h內(nèi)分離制備成1 U去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞和FFP，使用西斯美康XP-100測(cè)量去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中血紅蛋白(Hb)含量和血細(xì)胞比容(Hct)，應(yīng)用血漿游離Hb測(cè)定試劑盒 (Trinder法) 檢測(cè)上清液游離Hb濃度，根據(jù)公式(1- Hct)×游離Hb濃度/Hb濃度×1 000×100%計(jì)算儲(chǔ)存期末溶血率。按照《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》儲(chǔ)存期末溶血率小于紅細(xì)胞總量的0.8%。

1.2.4FFP中Ⅷ因子含量 將待測(cè)FFP置于37 ℃水浴箱中迅速融化，使用ACL7000血凝儀檢測(cè)2組全血6 h內(nèi)分離制備的FFP中Ⅷ因子含量。

2 結(jié) 果

2.14組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率和濾器吸附量比較 A組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率未達(dá)到要求，與B、C、D組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 4組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率和濾器吸附量比較

2.24組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb含量、Hct、35 d儲(chǔ)存期末溶血率比較 4組全血濾白后均達(dá)到要求。C、D組全血濾白后儲(chǔ)存期末溶血率略優(yōu)于A、B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 4組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb含量、Hc儲(chǔ)存期末溶血率比較

2.34組全血濾白前后對(duì)FFP中Ⅷ因子含量的影響比較 A、B、D組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 4組全血濾白后對(duì)FFP中Ⅷ因子含量的影響比較

3 討 論

血液中含有的白細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)中重要的組成成分,不僅是導(dǎo)致臨床非溶血性發(fā)熱反應(yīng)的元兇,也是經(jīng)血傳播病原體在血液中的主要載體，還能引起免疫抑制、同種免疫等一系列輸血反應(yīng)，危及受血者生命安全。另外，全血若不濾白進(jìn)行儲(chǔ)存，白細(xì)胞易崩解后產(chǎn)生白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等一系列生物活性分子，同樣也會(huì)引起臨床輸血過(guò)敏等反應(yīng)。自20世紀(jì)60年代開始研發(fā)全血白細(xì)胞濾器，發(fā)展至今已是第3代濾器，通過(guò)攔截過(guò)濾和細(xì)胞黏附去除全血中白細(xì)胞，可去除99.9%以上的白細(xì)胞，并使殘留白細(xì)胞≤2.5×106個(gè)/U，極大地提升了白細(xì)胞清除率，同時(shí)，血小板在過(guò)濾過(guò)程中也能黏附在濾膜上,從而促進(jìn)白細(xì)胞的進(jìn)一步黏附,進(jìn)一步提升過(guò)濾效率，從而進(jìn)一步保證臨床用血的安全性。

本研究采用4種國(guó)內(nèi)常用的全血白細(xì)胞濾器驗(yàn)證了其實(shí)用性。白細(xì)胞濾器關(guān)鍵指標(biāo)是濾過(guò)后白細(xì)胞殘留量符合《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》。從表1可見，A組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率僅為60.0%，B、C、D組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率均在97.5%。由于本中心對(duì)冷沉淀凝血因子的需求量較大，血液采集后需及時(shí)送往本中心成分制備科開展FFP制備。所以，多數(shù)血液自采集開始到成分科交接時(shí)血液的儲(chǔ)存時(shí)間還不滿3 h，血液自身溫度很難達(dá)到2～6 ℃，存在熱血過(guò)濾的情況較多，不同溫度的血液過(guò)濾對(duì)白細(xì)胞的清除是有區(qū)別的[1-5]，尤其是熱血過(guò)濾，對(duì)濾器自身的質(zhì)量要求較高。本研究結(jié)果顯示，B、C、D組全血經(jīng)熱血過(guò)濾后白細(xì)胞可達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，而A組40%沒有達(dá)到國(guó)標(biāo)，若將A組血液溫度降至2～6 ℃再進(jìn)行過(guò)濾，濾白合格率可提升至80.0%。但由于全血降溫所需時(shí)間較長(zhǎng)，會(huì)影響本中心后續(xù)FFP的制備效率，建議需要制備較大量FFP的采供血機(jī)構(gòu)可以選擇B、C、D組可以承受熱血過(guò)濾的白細(xì)胞濾器，保證濾白質(zhì)量。另外，本研究結(jié)果顯示，4組濾器吸附量差異不大，提示4組濾器對(duì)全血的吸附程度相當(dāng)。

本研究隨后針對(duì)濾白后的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞進(jìn)行了Hb、Hct及儲(chǔ)存期末溶血率(35 d)檢測(cè)，結(jié)果顯示，4組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb、Hct均達(dá)到國(guó)標(biāo)要求。影響白細(xì)胞濾器實(shí)用性的另一個(gè)質(zhì)量問(wèn)題是溶血[6-8]。從本研究結(jié)果來(lái)看，4組35 d儲(chǔ)存期末溶血率在全血濾白后均達(dá)到<0.8%的標(biāo)準(zhǔn)，但C、D組全血濾白后期末溶血率略優(yōu)于A、B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

FFP和冷沉淀凝血因子的質(zhì)量一直是關(guān)注的重點(diǎn)，影響Ⅷ因子的因素很多，濾器的質(zhì)量也是其中之一。濾器作為外源性生物材料，主要通過(guò)物理攔截和細(xì)胞黏附等方式對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行過(guò)濾清除[9]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，濾白同時(shí)會(huì)引起血液中部分凝血因子活性的變化，從而對(duì)后續(xù)血液制劑質(zhì)量造成影響[10-13]。所以，為探討濾器對(duì)FFP中Ⅷ因子活性有無(wú)影響，本研究對(duì)4組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，A、B、D組全血濾白后Ⅷ因子含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而C組則無(wú)明顯差異。證明了不同材質(zhì)濾器確實(shí)可以影響凝血因子的變化，也同時(shí)為血站選擇合適濾器從而提高成分制備產(chǎn)品尤其是FFP、冷沉淀凝血因子的質(zhì)量提供了數(shù)據(jù)支持。