李文燕,蔣小英,熊令根

(福建省龍巖市第一醫(yī)院,福建 龍巖 364000)

乳腺癌是臨床常見的惡性腫瘤,早期可見乳房腫塊、乳頭溢液等癥狀,該病被稱為女性“隱形殺手”。據(jù)調(diào)查顯示,乳腺癌發(fā)病率居女性惡性腫瘤首位,且呈上升趨勢[1]。隨著疾病的進(jìn)展,癌細(xì)胞可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,出現(xiàn)多器官病變,威脅患者的生命。因此,尋找與疾病相關(guān)的分子標(biāo)志物,分析疾病的臨床病理特征,有利于乳腺癌的早期診斷和治療。Ki-67是細(xì)胞增殖的標(biāo)志性指標(biāo),其在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常,可用于判斷腫瘤細(xì)胞的增殖活性,預(yù)測惡性腫瘤發(fā)展及預(yù)后情況[2]。GCDFP-15是人體大汗腺的標(biāo)志物,可以從乳腺囊泡病的囊泡液中提取,是用于診斷乳腺癌的常用標(biāo)記物[3]。有研究顯示,乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤[4]。AR屬于核受體超家族中的類固醇受體,具有保持體內(nèi)激素平衡、刺激蛋白質(zhì)合成代謝等作用。有研究發(fā)現(xiàn),AR高表達(dá)與乳腺癌患者總生存期正相關(guān)[5]。本研究旨在探討Ki-67、GCDFP-15、AR在乳腺癌中的表達(dá),并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2019年1月至2021年1月龍巖市第一醫(yī)院收治的135例乳腺癌患者組織標(biāo)本進(jìn)行研究,設(shè)為研究組;選取120例本院體檢健康者組織標(biāo)本進(jìn)行研究,設(shè)為對照組。研究組年齡28～63歲,平均(48.61±4.52)歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移75例,未轉(zhuǎn)移60例;臨床分期:Ⅰ～Ⅱ期110例,Ⅲ期12例,Ⅳ期13例。對照組年齡26～61歲,平均(48.39±4.13)歲。兩組年齡比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。本研究已獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)》制定診斷標(biāo)準(zhǔn):食欲不振,消瘦,乏力,或貧血;有乳房腫塊,乳房皮膚異常;病理檢查證實(shí)[6]。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn);預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月;腫瘤未累及臨近臟器;既往無腫瘤史;單側(cè)原發(fā)乳腺癌的女性患者;患者知情簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 嚴(yán)重心肝腎功能不全患者;免疫功能、凝血機(jī)制異常者;溝通障礙者;深度昏迷,意識模糊者;拒絕治療,中途退出研究者;妊娠、圍產(chǎn)、哺乳期女性;復(fù)發(fā)性乳腺癌者;外院行放化療、分子生物治療等特殊治療者;手術(shù)不耐受者。

2 主要試劑

UltraView Universal DAB Detection Kit檢測試劑盒,購自羅氏公司;Ki-67(克隆號:MX006)、GCDFP-15(克隆號:23A3)、AR(克隆號:EP120)單克隆抗體,均購自福州邁新公司。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 組織標(biāo)本檢測 所有組織標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林組級固定液(北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司,批號20181108)固定,全自動(dòng)脫水機(jī)前處理,包埋切片,切片厚度3μm,65℃烤片60 min。經(jīng)充分烤片后的玻片按照檢測試劑盒的要求,在Benchmark ULTRA全自動(dòng)免疫組化儀中進(jìn)行相關(guān)抗原(Ki-67、GCDFP-15、AR)的檢測,運(yùn)行結(jié)束后清洗玻片,中性樹膠封片,顯微鏡下觀察。

3.2 免疫組織化學(xué)染色分析 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核存在棕黃色顆粒即定義為陽性細(xì)胞。定性觀察:在光鏡下觀察,將每一張切片中棕黃色陽性細(xì)胞數(shù)＞10%定義為表達(dá)陽性,陽性細(xì)胞數(shù)≤10%定義表達(dá)陰性。

3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布時(shí)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,采用χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.4 結(jié)果

(1)Ki-67、GCDFP-15、AR表達(dá)情況比較 研究組Ki-67的陽性表達(dá)率為68.15%(92/135),明顯高于對照組的17.50%(21/120);研究組GCDFP-15的陽性表達(dá)率為55.56%(75/135),明顯高于對照組的9.17%(11/120);研究組AR的陽性表達(dá)率為85.93%(116/135),明顯高于對照組的25.83%(31/120),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組Ki-67、GCDFP-15、AR表達(dá)情況比較[例(%)]

(2)Ki-67、GCDFP-15、AR表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示,Ki-67、GCDFP-15、AR與乳腺癌患者絕經(jīng)、臨床分期、組織學(xué)分級、內(nèi)分泌治療、分化程度及神經(jīng)侵犯之間均呈正相關(guān)(P＜0.05)。見表2。

表2 研究組Ki-67、GCDFP-15、AR陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理的相關(guān)性分析

(3)Ki-67、GCDFP-15、AR陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 不同年齡段、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。未絕經(jīng)、低臨床分期(Ⅰ～Ⅱ期)、有內(nèi)分泌治療、有神經(jīng)侵犯的乳腺癌患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組絕經(jīng)、高臨床分期(Ⅲ或Ⅳ期)、無內(nèi)分泌治療、無神經(jīng)侵犯的患者(P＜0.05);組織學(xué)分級中,Ⅱ級的乳腺癌患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組Ⅰ、Ⅲ級(P＜0.05);分化程度中,中分化的乳腺癌患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組低分化、高分化患者(P＜0.05)。見表3。

表3 研究組Ki-67、GCDFP-15、AR陽性表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

4 討論

乳腺癌是女性常見腫瘤,多發(fā)于45～55歲。近年來,隨著人們生活習(xí)慣的改變,其發(fā)病率逐漸升高,且呈年輕化趨勢。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國每年約有27萬女性被確診為乳腺癌,嚴(yán)重威脅患者的生命[7]。乳腺癌是一種血管依賴性腫瘤,其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,到目前為止尚未找到其致癌原因,但已發(fā)現(xiàn)諸多與乳腺癌發(fā)病有關(guān)的高危因素,而乳腺癌在早期治愈率較高。因此,尋找與乳腺癌相關(guān)的標(biāo)志物對疾病進(jìn)行預(yù)測并制訂相關(guān)治療方案對改善患者預(yù)后具有重要意義。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖聯(lián)系密切的抗原,其與染色質(zhì)及細(xì)胞有絲分裂有關(guān),是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期不可缺少的重要組成部分;Ki-67半衰期短,且退出細(xì)胞周期后能快速降解,故常用于檢測惡性腫瘤增殖情況[8-9]。有研究顯示,Ki-67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原,在細(xì)胞增殖期表達(dá),能夠特異性反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性[10]。GCDFP-15可在正常成人和胎兒的大汗腺、泌乳腺、耵聹腺和涎腺組織中表達(dá),此外胎兒的氣管和支管上的腺泡細(xì)胞也可表達(dá),故被認(rèn)為是與汗腺分泌相關(guān)的腺體分化標(biāo)志物,是診斷乳腺癌的腫瘤標(biāo)記物,具有很好的特異性[11]。AR是雄激素作用的中介物質(zhì),可與雄激素結(jié)合,而雄激素可以抑制乳腺癌細(xì)胞生長,還可與雌激素協(xié)同刺激乳腺癌細(xì)胞生長和增生[12]。

本研究結(jié)果顯示,研究組Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均明顯高于對照組(P＜0.05);未絕經(jīng)、低臨床分期(Ⅰ～Ⅱ期)、有內(nèi)分泌治療、有神經(jīng)侵犯的乳腺癌患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組絕經(jīng)、高臨床分期(Ⅲ或Ⅳ期)、無內(nèi)分泌治療、無神經(jīng)侵犯的患者(P＜0.05);Ⅱ級患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組Ⅰ、Ⅲ級(P＜0.05);中分化患者組織標(biāo)本中Ki-67、GCDFP-15、AR的陽性表達(dá)率均高于同組低分化、高分化患者(P＜0.05);相關(guān)性分析顯示,Ki-67、GCDFP-15、AR與乳腺癌患者絕經(jīng)、臨床分期、組織學(xué)分級、內(nèi)分泌治療、分化程度及神經(jīng)侵犯之間均呈正相關(guān)(P＜0.05),提示Ki-67表達(dá)與乳腺癌組織生長、腫瘤的侵襲有關(guān),可迅速反映惡性腫瘤增殖情況,是臨床對乳腺癌診斷及治療的一個(gè)重要標(biāo)志;GCDFP-15在乳腺癌中呈高表達(dá);AR可能參與乳腺癌的發(fā)展,可成為臨床上診斷乳腺癌的指標(biāo)。分析其原因可能是,Ki-67只在增殖細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)發(fā)生反應(yīng),可用于識別生長中正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞,反映細(xì)胞群體增殖活性,同時(shí)能降低同質(zhì)性細(xì)胞間黏附力,重塑細(xì)胞外基質(zhì),促使癌腫生成新的血管,從而參與乳腺癌等惡性腫瘤的發(fā)展[13]。AR是乳腺瘤的預(yù)后因素之一,可通過抑制腫瘤生長起重要作用[14]。

綜上所述,乳腺癌組織中Ki-67、GCDFP-15、AR陽性表達(dá)率明顯升高,可能協(xié)同參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展,能更準(zhǔn)確地判斷乳腺癌的病情。