段寧馨 鄒玉婷 古飛燕 劉功良 趙曉娟

摘 要：氟喹諾酮類藥物是一類廣泛應(yīng)用于畜牧疾病防治的化學(xué)合成抗菌藥，若過量使用會對消費者的身體健康構(gòu)成威脅，因此建立高效的檢測方法對監(jiān)管動物源性食品中氟喹諾酮類藥物殘留具有重要意義。本文簡述氟喹諾酮類獸藥的種類及毒性危害，針對動物源性食品中氟喹諾酮類抗生素殘留檢驗方法的研究進(jìn)展進(jìn)行詳細(xì)闡述，以期為動物源性食品中氟喹諾酮類藥物殘留監(jiān)控提供參考。

關(guān)鍵詞：氟喹諾酮類;獸藥殘留;食品;質(zhì)量安全;檢測方法

Recent Progress in Analytical Methods for Detection of Fluoroquinolone Residues in Food of Animal Origin

DUAN Ningxin， ZOU Yuting， GU Feiyan， LIU Gongliang， ZHAO Xiaojuan*

（Guangdong Provincial Key Laboratory of Lingnan Specialty Food Science and Technology， College of Light Industry and

Food Science， Zhongkai University of Agriculture and Engineering， Guangzhou 510225， China）

Abstract： Fluoroquinolones， a group of synthetic antibiotics， are widely used in the prevention and control of livestock diseases. If overused， fluoroquinolones will pose a threat to peoples’ health. Therefore， it is of great significance to establish an efficient detection method for monitoring fluoroquinolones residues in animal-derived food. In this paper， we introduce readers to the types and toxicity of fluoroquinolones， and present a detailed review of recent progress in the development of detection methods for fluoroquinolones residues in animal-derived food. It is expected that this review can provide a reference for the monitoring of fluoroquinolones residues in animal-derived food.

Keywords： fluoroquinolones; veterinary drug residues; food; quality and safety; detection methods

DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20210618-176

中圖分類號：TS207.3? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-8123（2022）01-0056-07

引文格式：

段寧馨， 鄒玉婷， 古飛燕， 等. 動物源性食品中氟喹諾酮類獸藥殘留檢測方法研究進(jìn)展[J]. 肉類研究， 2022， 36（1）： 56-62. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20210618-176.? ? http：//www.rlyj.net.cn

DUAN Ningxin， ZOU Yuting， GU Feiyan， et al. Recent progress in analytical methods for detection of fluoroquinolone residues in food of animal origin[J]. Meat Research， 2022， 36（1）： 56-62. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20210618-176.? ? http：//www.rlyj.net.cn

氟喹諾酮類藥物也稱4-喹諾酮類藥物、喹諾酮羧酸類藥物[1]，因其抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、生物利用度高、耐藥發(fā)生率低、在組織中廣泛分布等特點，被廣泛應(yīng)用于臨床實踐和畜牧疾病的防治[2-4]。隨著飼養(yǎng)食用動物數(shù)量的大量增加，獸藥濫用及殘留超標(biāo)問題更為突出。為了保護(hù)消費者的身體健康，歐盟和美國食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定，動物源性食品中氟喹諾酮類藥物的殘留量為30～1 900 μg/kg[5-6]。我國GB 31650—2019

《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》對動物源性食品中的氟喹諾酮設(shè)置了最大殘留限量，例如，恩諾沙星在牛肉、羊肉中的最大殘留限量為100 μg/kg，達(dá)氟沙星在牛肉中的最大殘留限量為200 μg/kg，沙拉沙星在雞肉中的最大殘留限量為10 μg/kg，氟喹諾酮在家禽產(chǎn)蛋期禁用。在哺乳期動物飼養(yǎng)中使用氟喹諾酮類藥物可能會在生乳中留下殘留物。氟喹諾酮類藥物的廣泛使用和誤用具有潛在危險，因為它們的殘留物可能會持續(xù)存在于可食用動物組織中，并可能導(dǎo)致耐藥菌株的發(fā)展或過敏。因此，對動物源性食品中氟喹諾酮藥物殘留量進(jìn)行檢測具有重要意義。

1 氟喹諾酮類藥物的分類

氟喹諾酮類藥物是一類化合物，包含大量合成抗菌劑，而且數(shù)量還在不斷增加。首個被批準(zhǔn)用于臨床醫(yī)學(xué)的氟喹諾酮類藥物是諾氟沙星，第1種被批準(zhǔn)用于動物的氟喹諾酮類藥物恩諾沙星于20世紀(jì)80年代末獲得批準(zhǔn)，一般是由含氟苯環(huán)合成含氟喹啉類化合物后與哌嗪縮合而得。在結(jié)構(gòu)上，所有的氟喹諾酮類藥物都在基本喹諾酮核的第6位含有1 個氟原子[7]。氟喹諾酮類藥物可分為4 代：第1代包括原喹諾酮類化合物，如萘啶酸、惡啉酸、哌啶酸和西諾沙星;第2代包括環(huán)丙沙星、恩諾沙星、馬波沙星、達(dá)諾沙星、雙氟沙星、諾氟沙星和依諾沙星;第3代在保持第2代特性的同時，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性也較低，包括奧比沙星、左氧氟沙星、司帕沙星和格帕沙星;第4代包括曲瓦沙星、加替沙星、莫西沙星、吉西沙星和西他沙星[8]。目前常見的氟喹諾酮類藥物的化學(xué)名稱及結(jié)構(gòu)如表1所示。

2 氟喹諾酮類藥物的毒性危害

氟喹諾酮類藥物是一類高效抗生素，廣泛用于人類和獸醫(yī)學(xué)，用于治療呼吸道疾病和腸道細(xì)菌感染。氟喹諾酮類藥物通過抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均表現(xiàn)出抑制作用，其最大的特點是抗菌活性強(qiáng)，廣泛用于畜禽疾病的預(yù)防和治療。科學(xué)規(guī)范的使用可有效增加藥物的脂溶性，提升藥物的殺菌效果，同時不會對畜禽產(chǎn)品食用者的健康產(chǎn)生危害。但有些飼養(yǎng)人員為了自身利益，將氟喹諾酮長期超標(biāo)應(yīng)用于畜禽飼養(yǎng)中，這會增加食源性抗生素耐藥病原菌的風(fēng)險，并導(dǎo)致微生物耐藥性明顯增長，畜禽疾病的治療效果會受到影響，而且可能會導(dǎo)致獸藥殘留物持續(xù)存在于可食用動物組織中。氟喹諾酮的毒性很大程度上取決于劑量和動物種類。大量動物實驗表明，臨床治療量會引起幼齡動物的軟組織、骨骼和關(guān)節(jié)感染，尤其是幼齡動物的關(guān)節(jié)病和眼部毒性（包括視網(wǎng)膜變性和某些氟喹諾酮的包膜下白內(nèi)障）[9-10]。長期食用氟喹諾酮含量超標(biāo)的畜禽肉會對人體造成不良反應(yīng)，如引起排尿、造血功能紊亂，也可能引發(fā)光敏和過敏反應(yīng)等[11-12]，對人體中樞系統(tǒng)引發(fā)的神經(jīng)毒性及對人體的呼吸系統(tǒng)均會產(chǎn)生不良影響。

3 氟喹諾酮類藥物的提取凈化方法

3.1 固相萃取

固相萃取法是分析物被轉(zhuǎn)移到固相，在取樣過程中被保留，然后將固相從樣品中分離出來，并通過使用液體或流體進(jìn)行洗脫或通過熱解吸進(jìn)入氣相來回收分析物。固相萃取是一種廣泛應(yīng)用的樣品制備技術(shù)，用于分離選定的分析物[13]。梁思慧等[14]用靜電紡絲法制備聚丙乙烯納米纖維膜，然后修飾聚多巴胺，建立一種新型的固相萃取前處理方法，該方法的基質(zhì)凈化能力顯著升高，再結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測淡水魚中四環(huán)素和氟喹諾酮殘留，檢出限為0.3～1.5 μg/kg，定量限為1.5～5.0 μg/kg，樣品的加標(biāo)回收率為94.37%～102.82%。Bagheri等[15]采用二維金屬有機(jī)框架作為一種有效的吸附劑，從牛乳樣品提取氟喹諾酮類藥物。結(jié)果表明，二維金屬有機(jī)框架對氧氟沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星具有良好的提取能力，同時發(fā)現(xiàn)醋酸溶液對氟喹諾酮的洗脫吸附效果較好，最后采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對提取的目標(biāo)物進(jìn)行檢測分析。金屬有機(jī)框架具有孔隙率高、比表面積大和結(jié)構(gòu)可調(diào)等特性，提升了固相萃取法的萃取能力和提取效率。

3.2 固-液萃取

固-液萃取法利用萃取劑使固體物料中的可溶性物質(zhì)溶解于其中，多次萃取后達(dá)到分離、提取的目的。Johnston等[16]使用乙腈從均質(zhì)組織中提取分析物，利用聚合物反相和陰離子交換柱對提取液進(jìn)行處理，然后通過反相高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時分析鱒魚、對蝦和鮑魚中的8 種喹諾酮類和氟喹諾酮類藥物，結(jié)果表明，所有分析物均獲得了良好的回收率，定量限為5 μg/kg（環(huán)丙沙星為10 μg/kg），檢測限為1～3 μg/kg。相比液-液萃取法，固-液萃取法可以有效將分析物與干擾組分分離，簡化樣品預(yù)處理過程，提高分析物的回收率。

3.3 分散液-液微萃取

分散液-液微萃取法是一種采用三元溶劑體系的新型高效預(yù)濃縮技術(shù)[17]，已被應(yīng)用于不同基質(zhì)中多種有機(jī)化合物和無機(jī)化合物的測定，其優(yōu)點是操作簡單、提取時間短、成本低。分散液-液微萃取法是一種改進(jìn)的溶劑萃取方法，與其他方法相比，受體相比大大降低。Moema等[18]

建立分散液-液微萃取方法，用于從雞肝樣品中提取6 種氟喹諾酮類藥物，使用液相色譜-二極管陣列檢測器對分散液-液微萃取提取物進(jìn)行分析。結(jié)果表明，在最佳條件下，加標(biāo)回收率為83%～102%，檢出限為5.3～

18.5 μg/kg。Tsai等[19]開發(fā)了一種發(fā)光方法，篩選豬肝中恩諾沙星及其代謝物環(huán)丙沙星的殘留物，目標(biāo)分析物在乙腈-1.5%三氟乙酸-氯化鈉中提取，通過分散液-液微萃取凈化，最后利用時間分辨分光光度計通過鋱敏化發(fā)光進(jìn)行檢測。此方法的優(yōu)點在于僅使用少量氯化溶劑即可完成凈化和富集。

3.4 免疫親和層析

免疫親和層析是一種有效的抗體分離方法，它利用抗體或抗體片段作為配體，保持其結(jié)合能力，將其固定在固體支持基質(zhì)上。最近幾年，免疫親和層析的高選擇性也使其成為開發(fā)各種特定分析方法的手段。Yang Yamei等[20]介紹了一種新型混合床免疫柱方法，以磺胺甲惡唑為半抗原制備一種新的針對磺胺類藥物的寬譜特異性單克隆抗體，該單克隆抗體與6 種磺胺類藥物交叉反應(yīng)活性為31%～112%;進(jìn)一步偶聯(lián)免疫親和柱層析，同時分離豬和雞肌肉組織中的13 種喹諾酮類和6 種磺胺類抗生素，最后采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，動物肌肉中19 種抗生素的定量限為0.5～3.0 μg/kg，加標(biāo)回收率為72.6%～107.6%。此混合床免疫層析法與僅使用一種抗體的傳統(tǒng)免疫親和層析相比，顯示出共提取和共清除2 組分析物的能力[21]，而且耗時短且成本低。

3.5 分散固相萃取

分散固相萃取法，又稱為QuEChERS（quick， easy， cheap， effective， rugged， safe），是2003年提出的一種快速、簡單、廉價、有效、安全的萃取方法[22]，可以在短時間內(nèi)有效分離多種復(fù)雜化合物。目前，分散固相萃取法已被用于動物源性食品中違禁藥物等多種藥物殘留分析。Lombardo-Agüí等[23]利用QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定歐盟規(guī)定的8 種獸用喹諾酮類藥物，分別對蜂蜜、蜂王漿和蜂膠等蜂產(chǎn)品進(jìn)行評估，結(jié)果表明，化合物的分離僅在3 min內(nèi)完成，對于同一批6 個樣品，整個測定過程（包括樣品處理）不超過40 min。

王志昱等[24]建立可以同時準(zhǔn)確檢測雞胗和雞肝中11 種喹諾酮類和4 種四環(huán)素類抗生素的分析方法，采用QuEChERS法進(jìn)行樣品前處理，經(jīng)冰乙酸-乙腈-水溶液（1∶84∶15，V/V）提取，Discovery?DSC-18吸附劑凈化，使用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測，選用甲醇-0.1%甲酸體系作為流動相對目標(biāo)物進(jìn)行梯度洗脫，多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測。該前處理技術(shù)節(jié)省時間、重現(xiàn)性高、價格低廉。Hu Kai等[25]通過席夫堿縮合反應(yīng)，將氨基修飾的四氧化三鐵納米粒子與活性單體1，3，5-三甲?；g苯三酚和2，5-二氨基苯磺酸反應(yīng)，制備混合模式磁性磺化共價有機(jī)骨架復(fù)合材料，進(jìn)一步利用其作為分散固相萃取材料，建立一種高效測定食品中β受體激動劑和氟喹諾酮類化合物的方法。結(jié)果表明，樣品中β受體激動劑和氟喹諾酮類藥物的加標(biāo)回收率分別為95.8%～105.2%和94.5%～105.8%。與固相萃取法相比，分散固相萃取法的穩(wěn)定性較好，簡化了提取和清洗步驟，溶劑消耗量少，同時可以獲得高回收率。

3.6 分散微固相萃取

分散微固相萃取技術(shù)原理是將待凈化提取液直接加入含有固體填料的離心管中，通過渦旋、振蕩等方式將待測目標(biāo)物吸附于填料上，而后將解吸相加入到吸附劑中，將分析物從吸附劑中解吸出來。相較于傳統(tǒng)的固相萃取技術(shù)，分散微固相萃取將吸附劑分散到樣品基質(zhì)或其萃取物中，吸附劑顆粒和目標(biāo)物之間的密切接觸有利于提高整個過程的效率。Vakh等[26]基于磁分散微固相萃取分析物，使用多泵流系統(tǒng)，采用化學(xué)發(fā)光法測定牛乳中的氟喹諾酮類藥物，采用Ce4+、Tb3+、SO32-與Zr-Fe-C磁性納米粒子結(jié)合制得磁分散微固相萃取材料，將水和混合物注入裝有多泵流系統(tǒng)檢測器的離心管中，從而在牛乳基質(zhì)中通過化學(xué)發(fā)光篩選氟喹諾酮類藥物。該法可以減少樣品和試劑的損耗，并提高測定結(jié)果的重現(xiàn)性。

3.7 超臨界流體萃取

超臨界流體萃取是采用超臨界流體作為萃取劑從固體或液體中萃取可溶組分，根據(jù)各物質(zhì)的特性不同進(jìn)行萃取分離[27]。與其他提取技術(shù)相比，其優(yōu)點是使用了超臨界溶劑，提取過程更加高效。Shen Jingyu等[28]采用超臨界流體萃取法提取雞肉中諾氟沙星和氧氟沙星，通過確定提取參數(shù)，優(yōu)化超臨界流體萃取條件，使雞肉樣品中氟喹諾酮類藥物的回收率足夠高，達(dá)到70%～87%，該前處理技術(shù)無需進(jìn)一步的樣品清除，簡便易操作。

4 氟喹諾酮類藥物的檢測方法

4.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是以高壓系統(tǒng)輸送的液體為流動相，試樣流經(jīng)色譜柱時與固定相發(fā)生相互作用，由于試樣中各組分的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)存在差異，因此，各組分與固定相之間的作用力不同，從而實現(xiàn)分離。高效液相色譜作為一種高效的分離分析技術(shù)，具有準(zhǔn)確、靈敏、可同時測定多組分等特點，已廣泛應(yīng)用于食品中多種殘留物的定性和定量分析等食品安全檢測、醫(yī)藥化工、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域[29-31]。農(nóng)業(yè)部1025號公告-14—2008[29]規(guī)定，動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測方法為高效液相色譜法。方永衛(wèi)等[32]利用高效液相色譜-紫外檢測器法對動物性產(chǎn)品中麻保沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星3 種氟喹諾酮類藥物殘留進(jìn)行測定，3 種物質(zhì)的檢測限均為500 μg/L，

肉品中的加標(biāo)回收率為82.0%～105.6%。Yu Hu等[33]采用基質(zhì)固相分散和高效液相色譜結(jié)合二極管陣列檢測器同時測定豬組織中氟喹諾酮類、磺胺類和四環(huán)素類獸藥，平均加標(biāo)回收率為80.6%～103.1%，檢出限為0.007～0.034 μg/kg。

4.2 液相色譜-質(zhì)譜法

液相色譜-質(zhì)譜法結(jié)合了色譜的分離能力和質(zhì)譜的定性能力，可對復(fù)雜化合物進(jìn)行更精準(zhǔn)、簡便的定性和定量分析。與高效液相色譜法相比，液相色譜-質(zhì)譜法的靈敏度、準(zhǔn)確性及適用性均得到提升。此外，與氣相色譜-質(zhì)譜法相比，液相色譜-質(zhì)譜法在分離和測定高沸點、熱不穩(wěn)定化合物及生物活性物質(zhì)方面具有獨特優(yōu)勢。

夏駿等[34]建立了一種測定動物源性食品中氟喹諾酮類藥物殘留量的QuEChERS-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，結(jié)果表明，禽蛋中氟喹諾酮的檢出限為3.0 μg/kg，定量限為4.0 μg/kg，加標(biāo)回收率為61.0%～105.2%。Tian Hongzhe[35]建立了檢測牛乳中氯霉素、恩諾沙星及29 種農(nóng)藥殘留的液相色譜-質(zhì)譜法，該方法的定量限為300～1 450 μg/L，加標(biāo)回收率為71%～107%，可用于實際樣品中痕量農(nóng)藥殘留的測定。

4.3 免疫分析技術(shù)

4.3.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法通過抗原與抗體的高特異性結(jié)合和酶的高催化率來增強(qiáng)檢測信號，使該檢測方法達(dá)到高靈敏度。酶聯(lián)免疫法可定量檢測特異性抗體，用于篩選大量樣品[36]。楊熠等[37]采用活性脂法合成人工抗原，建立一種基于卵黃抗體的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法，用于測定動物性產(chǎn)品中恩諾沙星殘留，檢出限為4.323 μg/L，紫外光譜及人工抗原蛋白電泳結(jié)果均表明，半抗原與載體蛋白已成功偶聯(lián)。Jiang Jinqiang等[38]利用沙拉沙星通過碳二亞胺偶聯(lián)法合成免疫原和包被抗原，并利用細(xì)胞融合技術(shù)合成沙拉沙星單克隆抗體，建立一種測定魚類樣品中氟喹諾酮藥物殘留的間接競爭酶聯(lián)免疫法，結(jié)果表明，魚類樣品中沙拉沙星的檢出限為0.002 μg/L。樊曉博等[39]以單克隆抗體為基礎(chǔ)，將辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗原與處理好的樣品進(jìn)行偶聯(lián)，并用該酶標(biāo)抗原直接競爭酶聯(lián)免疫法測定生乳、雞肉、魚肉和蝦中的氟喹諾酮殘留。結(jié)果表明，該法檢測限為0.15 μg/L，加標(biāo)回收率為70.0%～121.5%。

4.3.2 化學(xué)發(fā)光及化學(xué)發(fā)光免疫分析法

化學(xué)發(fā)光技術(shù)主要依賴于氧化反應(yīng)發(fā)出的光[40-41]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是基于高靈敏的化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)和高特異性的免疫反應(yīng)，用于抗原、抗體、酶、半抗原、藥物等的分析檢測技術(shù)。Li Jie等[42]基于氟喹諾酮可以增強(qiáng)鈰和甲氧基熒光素類化合物之間的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，建立一種用于牛乳中氟喹諾酮類化合物的超靈敏化學(xué)發(fā)光測定方法，采用分子印跡聚合物選擇性提取氟喹諾酮，氟喹諾酮的日內(nèi)加標(biāo)回收率為93.6%～107.4%，日間加標(biāo)回收率為92.98%～102.30%，最低檢出限為

1×10-4 μmol/L，化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)與分子印跡技術(shù)的結(jié)合使氟喹諾酮類藥物的檢測靈敏度和選擇性得到較大提升。Tao Xiaoqi等[43]建立一種基于單鏈可變片段的化學(xué)發(fā)光競爭間接酶聯(lián)免疫法，用于測定魚類和蝦中的氟喹諾酮殘留，與傳統(tǒng)比色檢測法相比，化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附法顯著提高了免疫分析的靈敏度，諾氟沙星的檢出限為0.2 μg/L，環(huán)丙沙星和恩諾沙星的檢出限均低于0.2 μg/L。

4.3.3 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法是將特異性的抗原或抗體相互作用，目標(biāo)待測物與膠體金墊上的特異性抗體結(jié)合，繼續(xù)前移被截留在聚集帶時，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果[44-45]。

膠體金免疫層析法可以在較短時間內(nèi)獲得結(jié)果，而酶聯(lián)免疫法則需要復(fù)雜的洗滌和酶消化過程。Zhu Yan等[46]制備了一種快速檢測雞肌肉和肝臟中12 種氟喹諾酮殘留的特異性單克隆抗體膠體金免疫層析試紙條，氟喹諾酮與固定在硝酸纖維素膜上的抗原競爭，當(dāng)檢測線存在時，諾氟沙星和培氟沙星的最低檢出限為25 μg/L，其他氟喹諾酮的最低檢出限為50 μg/L，該方法可作為快速篩選動物源性食品中氟喹諾酮類藥物殘留的工具。Byzova等[47]利用天然抗血清制備膠體金抗體偶聯(lián)物，建立氧氟沙星的免疫層析測定方法，膠體金標(biāo)記的特點是使用天然抗血清代替純化的免疫球蛋白或特異性抗體，這使得合成過程更容易，且不影響檢出限。該方法可用于簡化不同化合物免疫層析分析測試系統(tǒng)的制備。

4.3.4 熒光免疫測定法

熒光免疫分析技術(shù)是定量熒光標(biāo)記的免疫分析[48]，

有競爭型和夾心型2 種模式，是一種高靈敏檢測手段，具有特異性強(qiáng)、檢測速度快、實用性強(qiáng)等優(yōu)勢。Hu Gaoshuang等[49]開發(fā)了一種基于上轉(zhuǎn)換納米粒子的熒光免疫技術(shù)，檢測動物源性食品中氟喹諾酮類殘留量，結(jié)果表明，恩諾沙星的檢出限為1×10-2 μg/L，添加諾氟沙星的動物性食品中其加標(biāo)回收率為82.37%～132.22%，該方法對氟喹諾酮類殘留量的檢測具有很大優(yōu)勢，且處理簡單，無需任何預(yù)處理即可直接進(jìn)行分析，靈敏、無干擾。趙維章等[50]將環(huán)丙沙星抗原與熒光微球標(biāo)記環(huán)丙沙星單克隆抗體偶聯(lián)，建立一種時間分辨熒光免疫層析的方法，用于測定牦牛肉中環(huán)丙沙星、恩諾沙星等藥物殘留，定量限小于0.96 μg/kg。

4.4 傳感器法

傳感器是基于待測物的光學(xué)或電化學(xué)等性質(zhì)并將待測物的化學(xué)信號轉(zhuǎn)化為光信號或電信號進(jìn)行檢測[51-52]。與光譜、質(zhì)譜和色譜技術(shù)相比，傳感器法具有響應(yīng)快、靈敏度高、小型化、檢測簡單且儀器便于攜帶等優(yōu)點。Song Yinpan等[53]合成具有類石墨烯納米結(jié)構(gòu)的鈷鎳雙金屬有機(jī)框架，并基于該金屬有機(jī)框架建立一種測定恩諾沙星的電化學(xué)適配體傳感器，恩諾沙星的檢出限為2×10-7 μg/L。Liu Xiuying等[54]將生物素化的恩諾沙星適配體固定在上轉(zhuǎn)換納米顆粒表面，接著適配體在恩諾沙星上折疊后形成復(fù)合物，進(jìn)一步利用分子印跡技術(shù)使甲基丙烯酸單體圍繞復(fù)合物進(jìn)行聚合，移除恩諾沙星后得到雙識別印跡孔穴。該適配體-分子印跡聚合物/納米顆?；旌蟼鞲邢到y(tǒng)可同時實現(xiàn)分子識別和信號轉(zhuǎn)換，不同魚樣品中恩諾沙星的加標(biāo)回收率為87.05%～96.24%，檢出限和定量限分別為0.04、0.12 μg/L。該傳感器的選擇性好、重現(xiàn)性高、穩(wěn)定性良好且適用性強(qiáng)。

Wang Minghua等[55]將1，3，6，8-四（4-甲?；交┸藕腿矍璋吠ㄟ^亞胺鍵進(jìn)行縮聚反應(yīng)，制得共價有機(jī)骨架，進(jìn)一步基于共價有機(jī)骨架構(gòu)建一種電化學(xué)適配體傳感器，可對氨芐西林和恩諾沙星2 種抗生素進(jìn)行高靈敏檢測，氨芐西林和恩諾沙星的檢出限分別為4×10-8、6.07×10-6 μg/L，

加標(biāo)回收率分別為99.5%～103.0%和101.0%～112.4%。相比傳統(tǒng)的電化學(xué)傳感器，該電化學(xué)適配體傳感器將適配體與電化學(xué)檢測方法相結(jié)合，使得恩諾沙星等藥物的檢測靈敏度和選擇性大幅提高。

5 結(jié) 語

氟喹諾酮類抗生素抗菌活性強(qiáng)、生物利用度高，已被廣泛用于預(yù)防和治療家畜疾病。但近年來動物源性食品中氟喹諾酮類抗生素的濫用及殘留超標(biāo)事件時常發(fā)生，耐藥性微生物的增加對消費者健康保護(hù)和獸醫(yī)醫(yī)學(xué)來說是一個重大挑戰(zhàn)。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB 31650—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》對不同食品中氟喹諾酮類抗生素規(guī)定了最大殘留限量，因此，建立高效、靈敏、便捷的氟喹諾酮類藥物的檢測方法對保障動物源性食品安全具有重要意義。目前，食品中氟喹諾酮類獸藥檢測方法主要有高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、免疫分析法和傳感器法等。由于動物源性食品中氟喹諾酮類藥物的殘留量較低和樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，在測定前需要利用前處理方法對樣品中的目標(biāo)分析物進(jìn)行有效提取、凈化和富集。隨著新技術(shù)和新材料的不斷出現(xiàn)和發(fā)展，開發(fā)簡單、通用的樣品制備程序，以實現(xiàn)更少的污染和更快速、有效的分離提取，進(jìn)一步提高氟喹諾酮類藥物檢測的重復(fù)性、穩(wěn)定性和便捷性，開發(fā)高效的快速檢測技術(shù)將是今后研究工作的重點。

參考文獻(xiàn)：

[1] GHORBANI M， AGHAMOHAMMADHASSAN M， CHAMSAZ M， et al. Dispersive solid phase microextraction[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry， 2019， 118： 793-809. DOI：10.1016/j.trac.2019.07.012.

[2] HAIN E， ADEJUMO H， ANGER B， et al. Advances in antimicrobial activity analysis of fluoroquinolone， macrolide， sulfonamide， and tetracycline antibiotics for environmental applications through improved bacteria selection[J]. Journal of Hazardous Materials， 2021， 415： 125686. DOI：10.1016/j.jhazmat.2021.125686.

[3] MADIKIZELA L M， NOMNGONGO P N， PAKADEV E. Synthesis of molecularly imprinted polymers for extraction of fluoroquinolones in environmental， food and biological samples[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2022， 208： 114447. DOI：10.1016/j.jpba.2021.114447.

[4] TUREL I. The interactions of metal ions with quinolone antibacterial agents[J]. Coordination Chemistry Reviews， 2002， 232（1/2）： 27-47. DOI：10.1016/S0010-8545（02）00027-9.

[5] The European Medicines Agency. Commission regulation （EU） （2010） No.37/2010 of 22 December 2009 on pharmacologically active substances and their classification regarding maximum residue limits in foodstuffs of animal origin[S]. 2009-12-22.

[6] Codex Alimentarius Commission （CAC）. Codex alimentarius international food standards： maximum residue limits （MRLs） and risk management recommendations （RMRs） for residues of veterinary drugs in foods： CX/MRL 2-2018[S]. CAC， 2018.

[7] GOUVEA R， SANTOS F D， AQUINO M D， et al. Fluoroquinolones in industrial poultry production， bacterial resistance and food residues： a review[J]. Revista Brasileira de Ciência Avícola， 2015， 17（1）： 1-10. DOI：10.1590/1516-635x17011-10.

[8] PANG Guofang. Fluoroquinolone[M]//Analytical methods for food safety by mass spectrometry. Salt Lake City： Academic Press， 2018： 375-410. DOI：10.1016/B978-0-12-814165-6.00011-7.

[9] MARTINEZ M， MCDERMOTT P， WALKER R. Pharmacology of the fluoroquinolones： a perspective for the use in domestic animals[J]. Veterinary Journal， 2006， 172（1）： 10-28. DOI：10.1016/j.tvjl.2005.07.010.

[10] WIDIYANTI P M， SUDARWANTO M B， SUDARNIKA E， et al. The use of enrofloxacin antibiotic as a veterinary drug and its residual hazards on public health[J]. Indonesian Bulletin of Animal and Veterinary Sciences， 2019， 29（2）： 75. DOI：10.14334/wartazoa.v29i2.2015.

[11] 李四華， 張海智. 獸藥殘留的危害及對策[J]. 中國畜禽種業(yè)， 2018， 14（12）： 43.

[12] 馬君梅. 畜產(chǎn)品中獸藥殘留檢測方法研究進(jìn)展[J]. 鄉(xiāng)村科技， 2020， 11（28）： 46-47. DOI：10.19345/j.cnki.1674-7909.2020.28.026.

[13] 李冬玲. 淺談食品農(nóng)藥殘留檢測中樣品前處理技術(shù)[J]. 食品安全導(dǎo)刊， 2020， 33： 172-173. DOI：10.16043/j.cnki.cfs.2020.33.114.

[14] 梁思慧， 戴海蓉， 張鏵尹， 等. 聚多巴胺納米纖維膜固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測淡水魚中四環(huán)素類和氟喹諾酮類藥物殘留[J].

色譜， 2021， 39（6）： 624-632. DOI：10.3724/SP.J.1123.2020.12026.

[15] BAGHERI N， LAWATI H， SHARJI N， et al. Magnetic zinc based 2D-metal organic framework as an efficient adsorbent for simultaneous determination of fluoroquinolones using 3D printed microchip and liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Talanta， 2021， 224： 121796. DOI：10.1016/j.talanta.2020.121796.

[16] JOHNSTON L， MACKAY L， CROFT M. Determination of quinolones and fluoroquinolones in fish tissue and seafood by high-performance liquid chromatography with electrospray ionisation tandem mass spectrometric detection[J]. Journal of Chromatography A， 2002， 982（1）： 97-109. DOI：10.1016/S0021-9673（02）01407-3.

[17] WANG Qiangfei， CHEN Renji， SHATNER W， et al. State-of-the-art on the technique of dispersive liquid-liquid microextraction[J]. Ultrasonics Sonochemistry， 2019， 51： 369-377. DOI：10.1016/j.ultsonch.2018.08.010.

[18] MOEMA D， NINDI M M， DUBE S. Development of a dispersive liquid-liquid microextraction method for the determination of fluoroquinolones in chicken liver by high performance liquid chromatography[J]. Analytica Chimica Acta， 2012， 730： 80-86. DOI：10.1016/j.aca.2011.11.036.

[19] TSAI W H， CHUANG H Y， CHEN H H， et al. Application of dispersive liquid-liquid microextraction and dispersive micro-solid-phase extraction for the determination of quinolones in swine muscle by high-performance liquid chromatography with diode-array detection[J]. Analytica Chimica Acta， 2009， 656（1/2）： 56-62. DOI：10.1016/j.aca.2009.10.008.

[20] YANG Yamei， WANG Yadan， NIU Rui， et al. Preparation and characterization of chitosan microparticles for immunoaffinity extraction and determination of enrofloxacin[J]. International Journal of Biological Macromolecules， 2016， 93： 783-788. DOI：10.1016/j.chroma.2008.08.116.

[21] LI Cun， WANG Zhanhui， CAO Xingyuan， et al. Development of an immunoaffinity column method using broad-specificity monoclonal antibodies for simultaneous extraction and cleanup of quinolone and sulfonamide antibiotics in animal muscle tissues[J]. Journal of Chromatography A， 2008， 1209（1/2）： 1-9. DOI：10.1016/j.chroma.2008.08.116.

[22] ARIAS O D， LUCAS J， BATISTA-ANDRADE J A， et al. Chitosan from shrimp shells： a renewable sorbent applied to the clean-up step of the QuEChERS method in order to determine multi-residues of veterinary drugs in different types of milk[J]. Food Chemistry， 2018， 240： 1243-1253. DOI：10.1016/j.foodchem.2017.08.041.

[23] LOMBARDO-AGüí M， GARCíA-CAMPA?A A M， GáMIZ-GRACIA L， et al. Determination of quinolones of veterinary use in bee products by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry using a QuEChERS extraction procedure[J]. Talanta， 2012， 93： 193-199. DOI：10.1016/j.talanta.2012.02.011.

[24] 王志昱， 張桂芳， 張曉瑜， 等. QuEChERS-高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法同時檢測雞胗和雞肝中15 種喹諾酮類和四環(huán)素類抗生素[J]. 肉類研究， 2020， 34（3）： 51-57. DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20200131-023.

[25] HU Kai， SHI Yanmei， ZHU Weixia， et al. Facile synthesis of magnetic sulfonated covalent organic framework composites for simultaneous dispersive solid-phase extraction and determination of β-agonists and fluoroquinolones in food samples[J]. Food Chemistry， 2020， 339： 128079. DOI：10.1016/j.foodchem.2020.128079.

[26] VAKH C， POCHIVALOV A， KORONKIEWICZ S， et al.

A chemiluminescence method for screening of fluoroquinolones in milk samples based on a multi-pumping flow system[J]. Food Chemistry， 2019， 270： 10-16. DOI：10.1016/j.foodchem.2018.07.073.

[27] 陳淦銘. 超臨界流體萃取技術(shù)的研究與應(yīng)用[J]. 遼寧化工， 2021， 50（1）： 55-57. DOI：10.14029/j.cnki.issn1004-0935.2021.01.016.

[28] SHEN Jingyu， KIM M R， LEE C J， et al. Supercritical fluid extraction of the fluoroquinolones norfloxacin and ofloxacin from orally treated-chicken breast muscles[J]. Analytica Chimica Acta， 2004， 513（2）： 451-455.

DOI：10.1016/j.aca.2004.02.065.

[29] 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所. 動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測 高效液相色譜法： 農(nóng)業(yè)部1025號公告-14—2008[S]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社， 2008.

[30] 尹華丁， 張蕾， 丁亞平， 等. 水產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 今日畜牧獸醫(yī)， 2020， 36（11）： 3-4. DOI：10.3969/j.issn.1673-4092.2020.11.002.

[31] TOLDRA F， REIG M. Methods for rapid detection of chemical and veterinary drug residues in animal foods[J]. Trends in Food Science and Technology， 2006， 17（9）： 482-489. DOI：10.1016/j.tifs.2006.02.002.

[32] 方永衛(wèi)， 師永華， 郭向陽. 高效液相色譜法檢測動物性產(chǎn)品中3 種氟喹諾酮類藥物殘留的研究[J]. 肉類工業(yè)， 2019（11）： 44-47.

[33] YU Hu， MU Hui， HU Yinmei. Determination of fluoroquinolones， sulfonamides， and tetracyclines multiresidues simultaneously in porcine tissue by MSPD and HPLC-DAD[J]. Journal of Pharmaceutical Analysis， 2012， 2（1）： 76-81. DOI：10.1016/j.jpha.2011.09.007.

[34] 夏駿， 李勇， 吳科盛， 等. QuEChERS-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中氟喹諾酮類殘留量[J]. 江西畜牧獸醫(yī)雜志， 2019（6）： 1-5.

[35] TIAN Hongzhe. Determination of chloramphenicol， enrofloxacin and 29 pesticides residues in bovine milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Chemosphere， 2011， 83（3）： 349-355. DOI：10.1016/j.chemosphere.2010.12.016.

[36] LIU Long， ZHANG Aihong， WANG Xinghe. A sensitive and simple enzyme-linked immunosorbent assay using polymer as carrier[J]. Biological and Pharmaceutical Bulletin， 2020， 43（5）： 757-761. DOI：10.1248/bpb.b20-00048.

[37] 楊熠， 孟坤杰， 趙紅瓊， 等. 酶聯(lián)免疫吸附法檢測動物源性食品中恩諾沙星殘留量[J]. 食品科學(xué)， 2017， 38（8）： 239-243. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201708037.

[38] JIANG Jinqiang， ZHANG Haitang， WANG Ziliang. Multiresidue determination of sarafloxacin， difloxacin， norfloxacin， and pefloxacin in fish using an enzyme-linked immunosorbent assay[J]. Procedia Environmental Sciences， 2011， 8（1）： 301-306. DOI：10.1016/j.proenv.2011.10.048.

[39] 樊曉博， 謝蘭心. 酶標(biāo)抗原直接競爭ELISA檢測食品中氟喹諾酮類藥物多殘留[J]. 食品科學(xué)， 2015， 36（24）： 265-269. DOI：10.7506/spkx1002-6630-201524049.

[40] 林金明， 趙利霞， 王栩. 化學(xué)發(fā)光免疫分析[M]. 北京： 化學(xué)工業(yè)出版社， 2008： 9.

[41] 李源珍， 生威， 劉恩梅， 等. 化學(xué)發(fā)光酶免疫法測牛奶中3 種喹諾酮類藥物[J]. 食品研究與開發(fā)， 2013， 34（16）： 78-81. DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.16.022.

[42] LI Jie， LU Siying， XIANG Jianxing， et al. Class-specific determination of fluoroquinolones based on a novel chemiluminescence system with molecularly imprinted polymers[J]. Food Chemistry， 2019， 298： 125066. DOI：10.1016/j.foodchem.2019.125066.

[43] TAO Xiaoqi， CHEN Min， JIANG Haiyang， et al. Chemiluminescence competitive indirect enzyme immunoassay for 20 fluoroquinolone residues in fish and shrimp based on a single-chain variable fragment[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry， 2013， 405（23）： 7477-7484. DOI：10.1007/s00216-013-7174-9.

[44] 路明， 張慶雨， 孫琛， 等. 膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測中的作用分析[J]. 中國食品， 2021（5）： 111. DOI：10.3969/j.issn.1000-1085.2021.05.055.

[45] CHEN Yanni， LIU Liqiang， XU Liguan， et al. Gold immunochromatographic sensor for the rapid detection of twenty-six sulfonamides in foods[J]. Nano Research， 2017， 10（8）： 2833-2844. DOI：10.1007/s12274-017-1490-x.

[46] ZHU Yan， LI Lin， WANG Zhanhui， et al. Development of an immunochromatography strip for the rapid detection of 12 fluoroquinolones in chicken muscle and liver[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2008， 56（14）： 5469-5474. DOI：10.1021/jf800274f.

[47] BYZOVA N A， SMIRNOVA N I， ZHERDEV A V， et al. Rapid immunochromatographic assay for ofloxacin in animal original foodstuffs using native antisera labeled by colloidal gold[J]. Talanta， 2014， 119： 125-132. DOI：10.1016/j.talanta.2013.10.054.

[48] SHEN Xing， CHEN Jiahong， Lü Shuwei， et al. Fluorescence polarization immunoassay for determination of enrofloxacin in pork liver and chicken[J]. Molecules， 2019， 24（24）： 4462. DOI：10.3390/molecules24244462.

[49] HU Gaoshuang， SHENG Wei， ZHANG Yan， et al. A novel and sensitive fluorescence immunoassay for the detection of fluoroquinolones in animal-derived foods using upconversion nanoparticles as labels[J]. Analytical and Bioanalytical Chemistry， 2015， 407（28）： 8487-8496. DOI：10.1007/s00216-015-8996-4.

[50] 趙維章， 崔乃元， 張漢青， 等. 時間分辨熒光免疫層析定量檢測牦牛肉中喹諾酮類藥物[J]. 食品工業(yè)科技， 2020， 41（18）： 239-243; 251. DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020.18.038.

[51] FARIA L V D， LISBOA T P， CAMPOS N D S， et al. Electrochemical methods for the determination of antibiotic residues in milk： a critical review[J]. Analytica Chimica Acta， 2021， 1173： 338569. DOI：10.1016/j.aca.2021.338569.

[52] CAPOFERRI D， ALVAREZ-DIDUK R， CARLO M D， et al. Electrochromic molecular imprinting sensor for visual and smartphone-based detections[J]. Analytical Chemistry， 2018， 90（9）： 5850-5856. DOI：10.1021/acs.analchem.8b00389.

[53] SONG Yinpan， XU Miaoran， LIU Xiao， et al. A label-free enrofloxacin electrochemical aptasensor constructed by a semiconducting CoNi-based metal-organic framework （MOF）[J]. Electrochimica Acta， 2021， 368： 137609. DOI：10.1016/J.ELECTACTA.2020.137609.

[54] LIU Xiuying， REN Jing， SU Lihong， et al. Novel hybrid probe based on double recognition of aptamer-molecularly imprinted polymer grafted on upconversion nanoparticles for enrofloxacin sensing[J]. Biosensors and Bioelectronics， 2017， 87： 203-208. DOI：10.1016/j.bios.2016.08.051.

[55] WANG Minghua， HU Mengyao， LIU Jiameng， et al. Covalent organic framework-based electrochemical aptasensors for the ultrasensitive detection of antibiotics[J]. Biosensors and Bioelectronics， 2019， 132： 8-16. DOI：10.1016/j.bios.2019.02.040.