任晨晨 馮果 李瑋 王建科 彭禮珍 朱光林 王文靜 蘇紅梅

中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）04-0419-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.04.07

摘 要 目的 研究苗藥了哥王不同部位提取物對(duì)健康大鼠的腎毒性作用，為了哥王的毒性作用機(jī)制及臨床用藥提供參考。方法 以70%乙醇為溶劑，采用滲漉法提取，得了哥王乙醇總提取物;將上述提取物用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得相應(yīng)部位提取物，剩余為水部位提取物。將SD大鼠隨機(jī)分為乙醇總提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組、水部位組和空白組，每組12只（雌雄各半）。給藥組大鼠灌胃相應(yīng)劑量的藥液（乙醇總提取物317.520 mg/kg、石油醚部位7.875 mg/kg、乙酸乙酯部位78.435 mg/kg、正丁醇部位53.865 mg/kg、水部位76.545 mg/kg），每天1次，連續(xù)給藥2周，再停藥恢復(fù)2周;空白組大鼠灌胃等體積1.0%羧甲基纖維素鈉溶液。實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠的一般情況，取尿液（第14、28天）、血清和雙腎組織（第15、29天），計(jì)算其腎臟指數(shù)，檢測(cè)血清和尿液中的腎功能指標(biāo)水平并觀察腎組織的病理形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果 給藥期間，與空白組比較，乙醇總提取物組、乙酸乙酯部位組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)量和飲食量減少、大便稀薄、體質(zhì)量下降等中毒行為活動(dòng)特征;石油醚部位組、正丁醇部位組和水部位組大鼠精神狀態(tài)較空白組稍差，活動(dòng)量和飲食量稍減少，大便稀薄，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢;但各組大鼠肛溫?zé)o較大變化。給藥2周后，乙醇總提取物組大鼠的腎臟指數(shù)，乙醇總提取物組、乙酸乙酯部位組大鼠血清中N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）水平，正丁醇部位組大鼠血清中NAG水平，水部位組大鼠血清中Cr水平，以及乙醇總提取物組、石油醚部位組大鼠尿液中NAG水平，乙酸乙酯部位組大鼠尿液中NAG、尿蛋白水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）;在病理形態(tài)學(xué)觀察中，乙醇總提取物組、石油醚部位組和乙酸乙酯部位組大鼠有不同程度的腎小管結(jié)構(gòu)不清、細(xì)胞腫脹、少數(shù)細(xì)胞壞死，伴有腎小球固縮、腎小管硬化、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。停藥后，大鼠以上癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)有明顯改善，活動(dòng)量和飲食量增加，大便趨于正常。停藥恢復(fù)2周后，各給藥組大鼠血清和尿液中上述指標(biāo)水平均恢復(fù)至與空白組接近（P>0.05）;各給藥組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)清晰，乙醇總提取物組、石油醚部位組和乙酸乙酯部位組大鼠少見細(xì)胞腫脹和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論 苗藥了哥王乙醇總提取物、石油醚部位和乙酸乙酯部位均具有一定的腎毒性，且具有一定的可逆性。其毒性成分可能為脂溶性成分。

關(guān)鍵詞 了哥王;苗藥;腎毒性;乙醇總提取物;乙酸乙酯部位;石油醚部位;大鼠

Study on nephrotoxicity of the extracts from different parts of Miao medicine Wikstroemia indica

REN Chenchen1，F(xiàn)ENG Guo1，2，LI Wei1，2，WANG Jianke2，PENG Lizhen1，ZHU Guanglin1，WANG Wenjing1，SU Hongmei1（1. School of Pharmacy， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China; 2. National Engineering Research Center of Miao Medicine， Guiyang 550025， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To study the nephrotoxicity of the extracts from different parts of Miao medicine Wikstroemia indica in healthy rats， and to provide reference for the study of its toxicity mechanism and clinical drug use. METHODS Using 70% ethanol as solvent， total ethanol extract of W. indica was extracted with diacolation method. After dispersing the above extract with water， the fractions of corresponding fractions were obtained with petroleum ether， ethyl acetate and n-butanol， and the rest was the extract of water fraction. SD rats were randomly divided into total ethanol extract group， petroleum ether fraction group， ethyl acetate fraction group， n-butanol fraction group， water fraction group and blank group， with 12 rats in each group （half male and half female）. The rats in the administration groups were given the corresponding dose of drug solution intragastrically （total ethanol extract 317.520 mg/kg， petroleum ether fraction 7.875 mg/kg， ethyl acetate fraction 78.435 mg/kg， n-butanol fraction 53.865 mg/kg and water fraction 76.545 mg/kg）， once a day， for conse- cutive 2 weeks， and then stopped taking drug for 2 weeks; rats in the blank group were given equal volume of 1.0% sodium carboxymethyl cellulose solution intragastrically. During the experiment， the general conditions of rats were observed. The samples of urine （on the 14th and 28th day）， serum and bilateral renal tissues （on the 15th and 29th day） were taken respectively， the renal index was calculated， the levels of renal function indexes in serum and urine were detected， and the pathomorphological changes of renal tissues were observed. RESULTS During administration， compared with blank group， the rats in the total ethanol extract group and ethyl acetate fraction group showed poisoning behavior and activity characteristics such as mental depression， decreased activity and diet， thin stool and decreased body mass. The mental state of the rats in the petroleum ether fraction group， n-butanol fraction group and water fraction group were slightly worse than that in blank group， and slightly decreased activity and diet as well as thin stool， and slowly increased body mass were found; however， there was no significant difference in anal temperature in each group. After 2 weeks of administration， the renal index in total ethanol extract group， the serum levels of N-acetylglucosaminidase （NAG）， urea nitrogen （BUN） and creatinine （Cr） in total ethanol extract group and ethyl acetate fraction group， serum level of NAG in n-butanol fraction group and serum level of Cr in water fraction group， as while as NAG levels in urine of rats in total ethanol extract group and petroleum ether fraction group， NAG and urinary protein levels in urine of rats in ethyl acetate fraction group were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）. In the pathomorphological observation， renal tubules showed different degrees of unclear structure， cell swelling and a few cell necrosis in the total ethanol extract group， petroleum ether fraction group and ethyl acetate fraction group， accompanying by glomerular pyknosis， renal tubular sclerosis and inflammatory cell infiltration， compared with blank group. After drug withdrawal， the mental state of rats in the administration groups were significantly improved， the amount of activity and diet increased， and the stool tended to be normal. Two weeks after drug withdrawal and recovery， the levels of above indexes in serum and urine of rats in administration groups returned to be close to that in blank group （P>0.05）; the glomerular structure of rats in each administration group gradually recovered clearly， and cell swelling and inflammatory cell infiltration were rare in total ethanol extract group， petroleum ether fraction group and ethyl acetate fraction group. CONCLUSIONS The total ethanol extract， petroleum ether fraction and ethyl acetate fraction of Miao medicine W. indica have certain nephrotoxicity and reversibility. The toxic component may be fat soluble.

KEYWORDS? ?Wikstroemia indica; Miao medicine; nephrotoxicity; total ethanol extract; ethyl acetate fraction; petroleum ether fraction; rat

苗藥了哥王是瑞香科植物南嶺蕘花Wikstroemia indica（L.）C. A. Mey.的根及根皮。該藥始載于《嶺南采藥錄》，性味苦寒、微辛，有毒，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、止痛等功效，主要用于治療瘰疬、癰腫、風(fēng)濕痛、百日咳、跌打損傷等[1]?，F(xiàn)代研究表明，了哥王具有抗菌、抗炎鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、抗瘧、利尿、鎮(zhèn)咳祛痰、降低心肌耗氧量和改善心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量等藥理作用[2-4]，常用于臨床治療慢性支氣管炎、急慢性感染性炎癥、頸淋巴結(jié)腫大、乳腺炎、肝炎、肝硬化、肝腹水、腎炎、肢體疼痛、帶狀皰疹、皮下剝離傷、坐骨神經(jīng)痛及輔助治療多種癌癥（如乳腺癌、惡性淋巴癌、肺癌及各種體表癌）[5-9]。該藥療效確切，但毒性較大，在安全性方面存在較大問題，《生草藥性備要》《嶺南采藥錄》《廣西中藥志》《南寧市藥物志》等著作均明確記載了哥王“大毒”或“有毒”。另外，本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中對(duì)其提取物進(jìn)行了急性毒性研究，發(fā)現(xiàn)其乙醇總提取物、石油醚部位和乙酸乙酯部位均有比較大的毒性[10]，同時(shí)也對(duì)其炮制工藝、炮制前后藥效和毒性變化等進(jìn)行了探討[11-16]。為進(jìn)一步明確了哥王的毒性部位、毒性作用臟器和毒性作用機(jī)制，本課題組對(duì)其腎毒性進(jìn)行研究，以期為了哥王的毒性作用機(jī)制及臨床用藥提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

ADVIA 1800型全自動(dòng)生化分析儀購自德國(guó)Siemens公司;BX53F型光學(xué)顯微鏡購自日本Olympus公司;KD-3368旋轉(zhuǎn)型組織切片機(jī)購自浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司;FA2004型電子分析天平購自上海衡平儀器儀表廠;Targin VX-02型多管渦旋振蕩器購自北京踏錦科技有限公司;MIKRO 220R型低溫高速離心機(jī)購自德國(guó)Hettich公司;Sorvall RC 6+離心機(jī)購自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;202-3AB型電熱恒溫干燥箱購自天津市泰斯特儀器有限公司;BJ1型不銹鋼代謝籠購自湖南長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

了哥王藥材于2019年12月購自廣西壯族自治區(qū)玉林市玉州區(qū)玉林銀豐國(guó)際中藥港，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李瑋教授鑒定為真品。N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（N-acetylglucosaminidase，NAG）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、尿蛋白、肌酐（creatinine，Cr）試劑盒均購自南京建成科技有限公司，批號(hào)分別為20190512、20190515、20190512、20190510;甲醛購自重慶茂業(yè)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為20181216;二甲苯購自重慶川東化工有限公司，批號(hào)為200180610;蘇木精、伊紅染料均購自北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)分別為G1140、G1120;戊巴比妥鈉購自美國(guó)Sigma公司，批號(hào)為922L0310;其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

本研究所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量為（200±20）g，購自湖南長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）2019-0014，動(dòng)物合格證號(hào)為43000200002163。所有大鼠均飼養(yǎng)于12 h光照/12 h避光循環(huán)、溫度（25±1） ℃、相對(duì)濕度（50±10）%的動(dòng)物房?jī)?nèi)，自由攝食、飲水。

2 方法

2.1 了哥王藥材不同部位的制備

取了哥王藥材7.9 kg，用12倍量的70%乙醇以3 mL/（min·kg）的流速滲漉提取，提取液回收乙醇至無醇味，濃縮、真空干燥后，粉碎成細(xì)粉，得了哥王乙醇總提取物796.32 g（1 g相當(dāng)于了哥王藥材9.92 g）。取乙醇總提取物藥粉408.0 g，用水分散，依次用等體積的石油醚（沸程60～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次萃取1 h，分別合并石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液，揮干溶劑，干燥后，粉碎成細(xì)粉，得到石油醚部位14.49 g（1 g相當(dāng)于了哥王藥材408.87 g）、乙酸乙酯部位147.70 g（1 g相當(dāng)于了哥王藥材40.12 g）、正丁醇部位101.20 g（1 g相當(dāng)于了哥王藥材58.55 g）。剩余的水溶液濃縮、干燥后，粉碎成細(xì)粉，得水部位144.00 g（1 g相當(dāng)于了哥王藥材41.15 g）。

2.2 藥液的配制

分別精密稱取乙醇總提取物0.794 g、石油醚部位0.020 g、乙酸乙酯部位0.196 g、正丁醇部位0.135 g、水部位0.191 g，分別加入1.0%羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）溶液配制成50 mL的樣品混懸液，備用。

2.3 分組與給藥

取SD大鼠72只，常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為乙醇總提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組、水部位組和空白組，每組12只（雌雄各半）。給藥組大鼠灌胃相應(yīng)劑量的藥物，每天1次，連續(xù)給藥2周，再停藥恢復(fù)2周;空白組灌胃等體積1.0%CMC-Na溶液，每天1次，連續(xù)2周。給藥期間，所有大鼠均正常攝食、飲水。給藥劑量分別為：乙醇總提取物317.520 mg/kg、石油醚部位7.875 mg/kg、乙酸乙酯部位78.435 mg/kg、正丁醇部位53.865 mg/kg、水部位76.545 mg/kg，劑量參考筆者前期預(yù)實(shí)驗(yàn)和文獻(xiàn)[15]設(shè)置。大鼠灌胃體積為20 mL/kg。

2.4 觀察指標(biāo)和檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)期間，觀察大鼠的一般情況，包括精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、毛色變化、飲食量、飲水量等，并每隔2天稱定大鼠體質(zhì)量，測(cè)量其肛溫。于第14天給藥后，每組隨機(jī)取6只大鼠，用代謝籠收集24 h尿液，留尿期間動(dòng)物不攝食，自由飲水。將代謝籠集尿器置于冰上，加入1%疊氮鈉溶液作為防腐劑。于第15天腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液（每100 g腹腔注射0.1 mL）麻醉后于腹主動(dòng)脈取血，解剖大鼠，取雙腎組織，稱其質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)，并留取腎組織作病理學(xué)檢查。每組余下的6只大鼠，于第15天正常供給飼料與水，于第28天同法收集24 h尿液，于第29天同法取血、取雙腎組織，計(jì)算臟器指數(shù)，并留取腎組織作病理學(xué)檢查。

收集的尿液以12 000 r/min離心5 min，取上清液于-20 ℃保存，采用全自動(dòng)生化分析儀分別檢測(cè)尿液中NAG、尿蛋白的水平;留取的血樣靜置40 min后，以12 000 r/min離心15 min，分離血清，于-20 ℃保存，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中NAG、BUN、Cr的水平;取腎（雙側(cè)）組織稱定質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)（臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）后，以10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，經(jīng)蘇木精-伊紅（hematoxylin-? ? eosin staining，HE）染色后，于光學(xué)顯微鏡下觀察組織的病理變化。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示，采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般情況變化

整個(gè)觀察期，空白組大鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)正常，飲食量大，毛發(fā)光滑，大便正常。給藥期間，乙醇總提取物組和乙酸乙酯部位組大鼠精神比較萎靡，活動(dòng)少且卷縮成團(tuán)，飲食量減少，大便稀薄;停藥后以上癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)有明顯改善，活動(dòng)量和飲食量增加，大便趨于正常。給藥期間，石油醚部位組、正丁醇部位組和水部位組大鼠精神狀態(tài)較空白組稍差，活動(dòng)量有所減少，飲食量減少，大便稀薄;停藥后以上癥狀較快好轉(zhuǎn)，精神狀態(tài)有明顯改善，活動(dòng)量和飲食量增加，大便很快趨于正常。實(shí)驗(yàn)過程中，空白組、水部位組、正丁醇部位組均無大鼠死亡，乙醇總提取物組和乙酸乙酯部位組在給藥第2周各有3只大鼠死亡，石油醚部位組有1只大鼠死亡。

3.2 大鼠體質(zhì)量、肛溫變化

給藥期間，空白組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)快，乙醇總提取物組、乙酸乙酯部位組大鼠給藥第7、9、11、13天時(shí)的體質(zhì)量均較同期空白組顯著下降（P<0.05或P<0.01）;停藥后，上述組別大鼠的體質(zhì)量停止下降，逐漸增長(zhǎng)，但其體質(zhì)量仍顯著低于同期空白組（P<0.05或P<0.01）。給藥期間，石油醚部位組、正丁醇部位組、水部位組大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，且石油醚部位組、正丁醇部位組大鼠給藥第13天時(shí)的體質(zhì)量均顯著低于同期空白組（P<0.05）;停藥后，上述組別大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)迅速，但石油醚組大鼠第15天和正丁醇組大鼠第15、17天時(shí)的體質(zhì)量均顯著低于同期空白組（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠的肛溫比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。了哥王不同提取物對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響見表1。

3.3 大鼠腎臟指數(shù)變化

給藥2周后，與空白組比較，乙醇總提取物組大鼠的腎臟指數(shù)顯著增加（P<0.05）;乙酸乙酯部位組大鼠的腎臟指數(shù)有所降低，石油醚部位組、正丁醇部位組、水部位組大鼠的腎臟指數(shù)有所增加，但組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。停藥恢復(fù)2周后，各給藥組大鼠的腎臟指數(shù)恢復(fù)至與空白組接近，各給藥組與空白組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。了哥王不同提取物對(duì)大鼠腎臟指數(shù)的影響見表2。

3.4 大鼠血清中NAG、BUN、Cr水平變化

給藥2周后，與空白組比較，乙醇總提取物組、乙酸乙酯部位組大鼠血清中NAG、BUN、Cr水平，正丁醇部位組大鼠血清中NAG水平和水部位組大鼠血清中Cr水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。停藥恢復(fù)2周后，各給藥組大鼠血清中NAG、BUN、Cr水平均恢復(fù)至與空白組接近，各給藥組與空白組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。了哥王不同提取物對(duì)大鼠血清中NAG、BUN、Cr水平的影響見表3。

a：乙醇總提取物組和乙酸乙酯部位組大鼠在給藥第2周各死亡3只，石油醚部位組死亡1只;b：與空白組比較，P<0.01;c：與空白組比較，P<0.05

3.5 大鼠尿液中NAG、尿蛋白水平變化

給藥2周后，與空白組比較，乙醇總提取物組、石油醚部位組大鼠尿液中NAG水平和乙酸乙酯部位組大鼠尿液中NAG、尿蛋白水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。停藥恢復(fù)2周后，各給藥組大鼠尿液中NAG、尿蛋白水平均恢復(fù)至與空白組接近，各給藥組與空白組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。了哥王不同提取物對(duì)大鼠尿液中NAG、尿蛋白水平的影響見表4。

a：乙醇總提取物組和乙酸乙酯部位組大鼠在給藥第2周各死亡3只，石油醚部位組大鼠死亡1只;b：與空白組比較，P<0.01;c：與空白組比較，P<0.05

3.6 大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)變化

給藥2周后，空白組大鼠的腎小球內(nèi)未見細(xì)胞增生、出血、纖維化，腎小管未見擴(kuò)張、萎縮、變性、壞死，間質(zhì)未見水腫、出血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎盂黏膜未見細(xì)胞壞死、脫落、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);乙醇總提取物組大鼠的腎小管結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞腫脹，少數(shù)細(xì)胞壞死，伴有腎小球固縮;石油醚部位組大鼠的腎小管結(jié)構(gòu)不清，上皮細(xì)胞溶解、壞死，伴有腎小球固縮、腎小管硬化;乙酸乙酯部位組大鼠的腎小管上皮細(xì)胞腫脹脫落，腎小球結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞腫脹，少數(shù)細(xì)胞壞死，血管擴(kuò)張，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);正丁醇部位組大鼠的腎小管結(jié)構(gòu)清晰，未見變性、壞死，少見水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);水部位組大鼠的腎小管結(jié)構(gòu)清晰，未見變性、壞死、水腫、出血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化。停藥恢復(fù)2周后，各給藥組大鼠的腎小球結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)，乙醇總提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組大鼠腎組織少見細(xì)胞腫脹和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見細(xì)胞壞死、腎小球固縮、腎小管硬化;正丁醇部位組和水部位組大鼠的腎小管結(jié)構(gòu)清晰，未見變性、壞死、水腫、出血。了哥王不同提取物對(duì)大鼠腎組織形態(tài)學(xué)影響的顯微圖見圖1。

4 討論

NAG廣泛分布在哺乳動(dòng)物各組織中，為人類泌尿系統(tǒng)所特有的酶。目前，尿液中的NAG檢測(cè)已被作為觀察腎損傷的首選指標(biāo)，尤其是用于環(huán)境腎毒性物質(zhì)的研究[17-19]。BUN和Cr作為反映腎功能的指標(biāo)，在臨床上應(yīng)用廣泛。BUN和Cr同時(shí)檢測(cè)更有意義，如二者同時(shí)升高，說明腎損傷嚴(yán)重[20-22]。另外，尿蛋白也是腎臟疾病診斷和療效評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)，尤其是中、低分子量的尿蛋白與腎損傷的早期診斷、治療和患者預(yù)后密切相關(guān)[23-24]。

本研究主要考察苗藥了哥王不同部位提取物對(duì)健康大鼠的腎毒性，結(jié)果表明，給藥2周后，苗藥了哥王乙醇總提取物、乙酸乙酯部位可使大鼠出現(xiàn)精神萎靡、活動(dòng)量和飲食量減少、大便稀薄、體質(zhì)量下降等中毒行為活動(dòng)特征;僅乙醇總提取物組大鼠的腎臟指數(shù)升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;乙醇總提取物組和乙酸乙酯組大鼠血清中NAG、BUN和Cr水平均明顯升高，乙醇總提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組大鼠尿液中NAG水平和乙酸乙酯部位組尿蛋白水平均明顯升高，且與空白組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;而正丁醇部位、水部位對(duì)大鼠上述指標(biāo)的影響較小。在病理形態(tài)學(xué)觀察中，乙醇總提取物組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組大鼠均可見腎小管結(jié)構(gòu)不清、上皮細(xì)胞溶解和壞死、腎小球固縮、腎小管硬化、細(xì)胞腫脹、少數(shù)細(xì)胞壞死、血管擴(kuò)張、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等腎組織病理損傷情況，但嚴(yán)重程度不一;正丁醇部位組、水部位組大鼠腎小管結(jié)構(gòu)清晰，未見變性、壞死，未見或少見水腫、出血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化等腎組織病理改變。停藥恢復(fù)2周后，各組大鼠血清和尿液中上述腎功能相關(guān)指標(biāo)水平均恢復(fù)至與空白組接近，腎組織的病理損傷也明顯減輕，基本恢復(fù)正常。

綜上所述，苗藥了哥王乙醇總提取物、石油醚部位、乙酸乙酯部位均具有一定的腎毒性，可對(duì)大鼠腎組織造成一定損傷;停藥一定時(shí)間后，大鼠腎損傷有所減輕，具有一定的可逆性。了哥王毒性成分主要存在于乙酸乙酯及石油醚部位，推測(cè)毒性成分為脂溶性成分，但其具體成分及毒性機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 浙江植物志編輯委員會(huì). 浙江植物志：第四卷[M].杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1999：255-256.

[ 2 ] SHAO M，HUANG X J，LIU J S，et al. A new cytotoxic biflavonoid from the rhizome of Wikstroemia indica[J]. Nat Prod Res，2016，30（12）：1417-1422.

[ 3 ] HUANG W H，ZHOU G X，WANG G C，et al. A new biflavonoid with antiviral activity from the roots of Wiks-? ?troemia indica[J]. J Asian Nat Prod Res，2012，14（4）：401-406.

[ 4 ] 張金娟，熊英，李瑋，等.了哥王炮制前后的藥效比較研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26（5）：1118-1120.

[ 5 ] 邵萌，黃曉君，孫學(xué)剛，等.了哥王根莖中的酚性成分及其抗腫瘤活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，26（6）：851-855，875.

[ 6 ] 顏紅，夏新華，王揮，等.西瑞香素對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33（9）：41-43，81.

[ 7 ] LU C L，ZHU L，PIAO J H，et al. Chemical compositions extracted from Wikstroemia indica and their multiple activi- ties[J]. Pharm Biol，2012，50（2）：225-231.

[ 8 ] 姜洪芳，白雪，牛慧彥，等.西瑞香素對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲及遷移能力的影響[J].實(shí)用藥物與臨床，2016，19（2）：131-135.

[ 9 ] WANG L Y，UNEHARA T，KITANAKA S. Anti-inflammatory activity of new guaiane type sesquiterpene from Wikstroemia indica[J]. Chem Pharm Bull （Tokyo），2005，53（1）：137-139.

[10] 張金娟，熊英，張貴林，等.了哥王提取物及其不同提取部位的急性毒性研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（11）：2829-2830.

[11] 張金娟，熊英，李瑋，等. 哥王生品及2種炮制品的急性毒性比較研究[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（9）：1172-1174.

[12] 鄭傳奇，馮果.了哥王化學(xué)成分及毒性研究進(jìn)展[J].貴州醫(yī)藥，2019，43（10）：1536-1538.

[13] 鄭傳奇，馮果，李瑋，等.苗藥了哥王“汗?jié)n法”炮制前后抗小鼠免疫性炎癥的“量-效-毒”關(guān)系研究[J].中國(guó)藥房，2020，31（6）：661-665.

[14] 馮果，李瑋，何新，等.苗藥了哥王不同炮制品乙醇提取物對(duì)小鼠的急性毒性作用比較[J].中國(guó)藥房，2017，28（25）：3536-3540.

[15] 馮果，李瑋，何新，等.苗族藥了哥王不同提取物對(duì)正常大鼠肝毒性的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（11）：96-102.

[16] FENG G，CHEN Y L，LI W，et al. Exploring the Q-marker of “sweat soaking method” processed radix Wikstroemia indica：based on the “effect-toxicity-chemicals” study[J]. Phytomedicine，2018，45：49-58.

[17] D’AMICO G，BAZZI C. Urinary protein and enzyme excretion as markersof tubular damage[J]. Curr Opin Nephrol Hypertens，2003，12（6）：639-643.

[18] 董德平，嚴(yán)沖，錢開成，等.尿微量蛋白聯(lián)合尿酶測(cè)定對(duì)糖尿病腎損害的臨床意義[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2001，19（3）：185.

[19] 席向紅，魏軍，張玉蓉. NAG活性檢測(cè)在腎病診斷中的意義[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2007，29（2）：168-169.

[20] 俞詩源，魏娉婷，郭耀，等.中藥復(fù)方對(duì)麻黃素仔鼠血清BUN、Cr含量和腎組織的影響[J].西北師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，49（6）：84-90.

[21] 劉學(xué)文，楊衛(wèi)彬，荊志偉.益腎化濁顆粒對(duì)腺嘌呤飼喂法所致慢性腎衰大鼠血清中BUN，Crea含量的影響[J].世界中醫(yī)藥，2013，8（12）：1474-1477.

[22] 鄒川，吳禹池，林啟展，等.中藥結(jié)腸洗液聯(lián)合基礎(chǔ)療法對(duì)慢性腎功能衰竭患者BUN、SCr、UA及IS的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，32（9）：1192-1195.

[23] 朱國(guó)文，李熙建.腎臟功能不同程度損害時(shí)尿中幾種微量蛋白與尿酶變化分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，28（6）：489-491.

[24] 萬毅剛，孫偉，王婧，等.早期慢性腎臟病尿蛋白與中醫(yī)證候相關(guān)性研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，28（9）：801-805.

（收稿日期：2021-09-08 修回日期：2021-11-14）

（編輯：舒安琴）