郭留城，杜利月，馮慧慧，高笑笑，崔鳳靈

(河南師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453007)

氧化槐定堿(Oxysophoridine，OSR)是從豆科槐屬植物苦豆子(SophoraalopecuroidesL.)中提取得到的一種重要的生物堿，現(xiàn)已經(jīng)可以人工合成.現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，OSR具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等多種藥理活性[1-4].然而，由于其半衰期短，體內(nèi)沒(méi)有靶向性，會(huì)導(dǎo)致人體產(chǎn)生呼吸減慢、昏迷、甚至死亡等不良反應(yīng)[4].

在貯存的過(guò)程中，氧化槐定堿易變質(zhì).張軍帥等人[5]采用冷凍干燥法將OSR制備成了粉針劑，延緩了制劑中OSR的變質(zhì)，延長(zhǎng)了OSR制劑的保質(zhì)期，提高了OSR制劑的用藥安全.然而將OSR制備成靶向制劑的研究，尚未見(jiàn)有報(bào)道.從提高臨床療效、降低副作用的角度入手，利用單因素實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，將OSR制備成具有靶向功能的脂質(zhì)體制劑，可以在一定程度上提高OSR的療效，降低毒副作用，方便臨床用藥，也可以豐富OSR的藥物制劑，從而使OSR更好地服務(wù)于臨床[6].薄膜法制備的脂質(zhì)體分散性好，載藥量較高[6-7]，因此，本文采用改良薄膜法制備OSR脂質(zhì)體.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

主要試劑:氧化槐定堿對(duì)照品(批號(hào)：190322，純度98.7%)和氧化槐定堿原料(批號(hào)：190409)購(gòu)于南京道斯夫生物科技有限公司，大豆卵磷脂(批號(hào)：EXR1DRK4)和膽固醇(批號(hào)：R8ARE2KU)購(gòu)于上海薩恩化學(xué)技術(shù)有限公司，乙腈(色譜級(jí)，批號(hào)：C11988756)購(gòu)于上海麥克林生化科技有限公司，蒸餾水自制，其他試劑均為分析純.

主要儀器：JEM-2100型高分辨透射電子顯微鏡(日本電子公司)、Zetasizer Nano ZS 90(馬爾文)激光粒度儀(德芮克國(guó)際股份有限公司)、1260型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技公司)、Agilent Cary100型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)安捷倫科技公司)、RE100-S型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器股份公司)、DSC204F1型差示掃描量熱儀(德國(guó)耐馳公司)、Spectrum 400F型中遠(yuǎn)紅外光譜儀(美國(guó)珀金埃爾默儀器有限公司)、MS105DU/A型分析天平(梅特勒-托利多國(guó)際有限公司).

1.2 溶液的配制及OSR脂質(zhì)體的制備

OSR儲(chǔ)備液的制備：精密稱取OSR對(duì)照品13.2 mg，用雙蒸水配制成1 mmol/L的溶液.

PBS緩沖溶液的配制：稱取4.00 g NaCl,0.10 g KCl,0.72 g Na2HPO4,0.12 g KH2PO4溶于400 mL蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至500 mL，即得PBS緩沖液[4].

大豆卵磷脂(Lecithin High Potency，LHP)和膽固醇(Cholesterol，CHO)混合液的制備：稱取LHP 2.4 g和CHO 0.4 g，加入100 mL氯仿超聲溶解后，制成240 mL溶液，作為L(zhǎng)HP和CHO的混合液.

OSR脂質(zhì)體的制備：取處方量的LHP和CHO混合溶液，在室溫下，旋干溶劑，加入處方量的OSR(原料)溶液，37 ℃渦旋水合1 h，再加入處方量的PBS緩沖溶液，渦旋水合至規(guī)定時(shí)間，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得OSR脂質(zhì)體[6,8-9].

供試品溶液的制備[8]：取OSR脂質(zhì)體5 mL，離心分離脂質(zhì)體，精密量取上清液2 mL，用PBS緩沖溶液稀釋，使OSR的質(zhì)量濃度約為120 μg/mL，搖勻，0.22 μm濾膜過(guò)濾，即得.

陰性溶液的制備[9]：制備不含OSR的空白脂質(zhì)體，操作方法同“供試品溶液的制備”，即得.

1.3 OSR含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))測(cè)定方法

1.3.1色譜條件

采用Waters Symmetry?C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為0.05%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三乙胺水溶液(磷酸調(diào)pH為3.5)與乙腈混合液(體積比為95∶5)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL.

1.3.2專屬性實(shí)驗(yàn)

按照1.3.1中色譜條件設(shè)定儀器參數(shù)，進(jìn)樣量10 μL，取1.2中的對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖譜[10-11].

1.3.3線性關(guān)系的考察

按照1.3.1中色譜條件設(shè)定儀器參數(shù)，取OSR儲(chǔ)備液適量，制成240.840、187.320、133.800、80.280、26.760、24.084、18.732、13.380、8.028、2.676 μg/mL的溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖譜和峰面積[5,11]，計(jì)算出回歸方程.

1.3.4方法學(xué)考察

按照文獻(xiàn)報(bào)道[5,11-12]的方法進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和加樣回收率實(shí)驗(yàn).

精密度實(shí)驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣6次，記錄色譜圖譜和峰面積.

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：平行制備OSR脂質(zhì)體6批，按照1.2中供試品溶液的制備方法，制備供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件做重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，記錄色譜圖譜和峰面積.

加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取1 g LHP和300 mg CHO溶于10 mL氯仿中，在室溫下，旋干溶劑.平行制備3批，分別加入OSR 120 mg、150 mg、180 mg，按照1.2中OSR脂質(zhì)體的制備方法，制備3種不同質(zhì)量濃度的OSR脂質(zhì)體.按1.3.1中色譜條件，測(cè)定脂質(zhì)體中OSR的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，計(jì)算平均回收率.

1.4 包封率和載藥量的測(cè)定

取制備好的OSR脂質(zhì)體5 mL，在轉(zhuǎn)速為50 000 r/min條件下，離心30 min[13]，取上清液用0.22 μm濾膜過(guò)濾，按1.3.1中色譜條件，測(cè)定OSR的峰面積，計(jì)算OSR的質(zhì)量，作為未包封OSR質(zhì)量W1；制備脂質(zhì)體時(shí)加入的OSR質(zhì)量為W2，制備脂質(zhì)體時(shí)加入的輔料質(zhì)量為W3，分別計(jì)算包封率(encapsulation efficiency，EE%)和載藥量(drug loading capacity，DL%)[6,8-9]：

1.5 單因素實(shí)驗(yàn)方法

改變LHP和CHO的質(zhì)量比:固定LHP的用量為1 g,OSR的用量為150 mg，改變CHO的用量，使LHP和CHO的質(zhì)量比為10∶0.5,10∶1.0,10∶3.0,10∶5.0,10∶7.0,10∶9.0和10∶10.0.按上述質(zhì)量比，稱取LHP和CHO，加入氯仿溶解后，按照1.2中操作，制備OSR脂質(zhì)體.按1.2中供試品溶液的制備方法，將OSR脂質(zhì)體制備成供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件，采用HPLC法測(cè)定未包封的OSR，計(jì)算包封率[8-9].

改變LHP和OSR的質(zhì)量比:固定LHP的用量為1 g，CHO的用量為300 mg，改變OSR的用量，使LHP和OSR的質(zhì)量比為10∶0.5,10∶1.0,10∶1.5,10∶2.0,10∶3.0,10∶5.0和10∶7.0.按照1.2中操作，制備OSR脂質(zhì)體.按1.2中供試品溶液的制備方法，將OSR脂質(zhì)體制備成供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件，采用HPLC法測(cè)定未包封的OSR，計(jì)算包封率[8-9].

水合時(shí)間的優(yōu)化:量取LHP和CHO的混合液2 mL和1 mmol/L OSR緩沖溶液1 mL，分別采用0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h的水合時(shí)間制備OSR脂質(zhì)體，按照1.2中操作，制備OSR脂質(zhì)體.按1.2中供試品溶液的制備方法，將OSR脂質(zhì)體制備成供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件，采用HPLC法測(cè)定未包封的OSR，計(jì)算包封率[6,8-9].

1.6 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

單因素實(shí)驗(yàn)無(wú)法評(píng)估實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不同因素之間的相互作用，因此，采用Design-Expert.V8.0.6.1 軟件進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)，優(yōu)化OSR脂質(zhì)體的制備過(guò)程，以揭示這些不同單因素之間的相互作用，并優(yōu)化OSR脂質(zhì)體的制備過(guò)程[8-9,14-15].選擇對(duì)包封率有顯著影響的3個(gè)參數(shù)(LHP與CHO的質(zhì)量比：A；LHP與OSR的質(zhì)量比：B；水合時(shí)間：C，h)作為考察對(duì)象，以包封率作為測(cè)定指標(biāo).結(jié)合1.5中實(shí)驗(yàn)結(jié)果，每個(gè)因素選擇3個(gè)級(jí)別.這3個(gè)因素的3個(gè)級(jí)別(-1、0、1)分別如下：LHP與CHO的質(zhì)量比(10∶1.0,10∶3.0,10∶5.0)，LHP與OSR的質(zhì)量比(10∶1.0,10∶1.5和10∶2.0)和水合時(shí)間(1.0、1.5和2.0 h).構(gòu)建了包含17個(gè)實(shí)驗(yàn)運(yùn)行的設(shè)計(jì)矩陣，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn).

1.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化后的最佳制備工藝，制備3批OSR脂質(zhì)體，按1.2中供試品溶液的制備方法，分別將OSR脂質(zhì)體制備成供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件，采用HPLC法測(cè)定未包封的OSR，計(jì)算包封率.

1.8 OSR脂質(zhì)體的表征

載藥量的測(cè)定:取1.7中制備的OSR脂質(zhì)體混懸液，按1.2中供試品溶液的制備方法，分別將OSR脂質(zhì)體制備成供試品溶液，按照1.3.1中色譜條件，采用HPLC法測(cè)定未包封的OSR，按1.4中載藥量計(jì)算公式，計(jì)算載藥量.

脂質(zhì)體形態(tài):取1.7中制備的OSR脂質(zhì)體混懸液，以超純水適當(dāng)稀釋后，在專用銅網(wǎng)上制樣，在防塵裝置中靜置并自然揮干，使OSR樣品沉積在銅網(wǎng)上，放大5萬(wàn)倍，加速電壓200 kV，觀察并攝像[8-9].

粒徑分布與Zeta電位:取1.7中制備的OSR脂質(zhì)體混懸液，以超純水適當(dāng)稀釋后，采用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定Zeta電位、粒徑及粒徑分布[8,14].

紅外光譜表征:取1.7中制備的OSR脂質(zhì)體混懸液，真空干燥得OSR脂質(zhì)體粉末.分別取CHO,LHP,OSR,物理混合物和OSR脂質(zhì)體粉末，加入溴化鉀固體，充分研細(xì)，壓片，在400～4 000 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外分光掃描，記錄圖譜[8].

差示掃描量熱分析:取CHO,LHP,OSR,物理混合物與1.7中制備的OSR懸混液真空干燥后的脂質(zhì)體粉末，進(jìn)行差示掃描量熱(differential scanning calorimetry，DSC)分析.工作條件：以空鋁坩堝為空白參考池，另一鋁坩堝為樣品池，在樣品池中放入樣品約10 mg，置于機(jī)器中進(jìn)行圖譜掃描；N2作為吹掃氣，掃描速度10 ℃·min-1，掃描范圍30～300 ℃，記錄圖譜[8].

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定方法的可靠性

2.1.1專屬性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

OSR含量測(cè)定方法的專屬性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1.結(jié)果顯示OSR的分離度較好，專屬性強(qiáng)，陰性無(wú)干擾.

2.1.2線性關(guān)系考察結(jié)果

測(cè)得的OSR峰面積，用Origin Pro 8.5軟件進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程為Y=5.487 27X-1.535 23，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5，線性范圍為：2.676～240.840 μg/mL.結(jié)果顯示OSR的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與峰面積呈良好的線性關(guān)系.

2.1.3方法學(xué)考察結(jié)果

精密度實(shí)驗(yàn)測(cè)得的OSR峰面積，用Origin Pro 8.5軟件進(jìn)行線性回歸分析，峰面積的RSD值為0.58%(n=6).重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)得的OSR峰面積，用Excel 2016軟件進(jìn)行相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD值)分析，峰面積的RSD值為0.91%(n=6).回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)得的OSR峰面積，用Excel 2016軟件進(jìn)行均值和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD值)分析，3種不同質(zhì)量濃度的OSR溶液，平均回收率分別為98.53%，99.22%，98.79%，RSD值分別為0.83%，0.93%，0.86%(n=3).結(jié)果表明，精密度、重復(fù)性和回收率均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則9101項(xiàng)下規(guī)定.

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

LHP與CHO不同質(zhì)量比的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2.由圖2可知，隨著CHO質(zhì)量的增加包封率先升高，隨后下降，在LHP和CHO的質(zhì)量比為10∶3.0時(shí)包封率達(dá)到最佳.LHP與OSR不同質(zhì)量比的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3.由圖3可知，隨著OSR質(zhì)量的增加包封率先升高，隨后下降，在質(zhì)量比為10∶1.5時(shí)包封率達(dá)到最佳.

不同水合時(shí)間對(duì)OSR脂質(zhì)體影響的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖4.由圖4可知，隨著水合時(shí)間的增加包封率逐漸升高，在水合時(shí)間大于1.5 h時(shí)包封率基本不再增加.因此，選擇LHP與CHO的質(zhì)量比為10∶1.0,10∶3.0,10∶5.0，LHP與OSR的質(zhì)量比為10∶1.0,10∶1.5和10∶2.0和水合時(shí)間為1.0、1.5和2.0 h，作為響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的因素水平.

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

應(yīng)用Design-Expert V8.0.6.1對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表1，響應(yīng)面模型的方差分析結(jié)果見(jiàn)表2，3個(gè)因素對(duì)包封率的等高線和三維響應(yīng)面見(jiàn)圖5、圖6和圖7.以包封率對(duì)各因素自變量進(jìn)行模型擬合，通過(guò)擬合得到的二次回歸方程為OSR包封率(%)=59.27+0.79A+1.89B-1.15C-0.62AB-3.96AC-1.72BC-11.58A2-12.48B2-9.66C2(R2=0.938 6，失擬度檢驗(yàn)F值為5.65，P=0.063 8>0.05)，由擬合方程結(jié)果可知擬合模型F值為11.90(P=0.001 8<0.05)，信噪比值為8.425，相對(duì)較高，表明該擬合模型擬合結(jié)果良好，實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間的相關(guān)性較高，能夠高度準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)際情況.

表1 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表2 Box-Behnken響應(yīng)面模型的方差分析

根據(jù)二次回歸方程擬合結(jié)果，固定一個(gè)因素水平[14-15]，進(jìn)行OSR包封率對(duì)其他兩個(gè)因素的擬合，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的三維效應(yīng)曲面圖，并對(duì)OSR的提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選.圖5、圖6和圖7中OSR的包封率隨著各變量的增加而增加，到達(dá)最大值后逐漸下降.最佳制備工藝處方為：LHP與CHO的質(zhì)量比為10∶3.09、LHP與OSR的質(zhì)量比為10∶1.54、水合時(shí)間為1.46 h，與單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本吻合.

2.4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按最優(yōu)工藝制備的3批OSR脂質(zhì)體的包封率分別為57.68%，57.30%，59.09%，平均包封率為58.02%，RSD值為1.63%.OSR脂質(zhì)體包封率的實(shí)測(cè)平均值為58.02%與預(yù)測(cè)值為59.41%非常接近，偏差較小，預(yù)測(cè)性良好，說(shuō)明OSR的最佳制備工藝穩(wěn)定、可行.

2.5 OSR脂質(zhì)體的表征

2.5.1載藥量的測(cè)定

按最優(yōu)工藝制備的3批OSR脂質(zhì)體的載藥量分別為6.24%，6.20%，6.38%，平均載藥量為6.27%，RSD值為1.52%，平行3批OSR脂質(zhì)體的載藥量誤差較小，說(shuō)明OSR的最佳制備工藝穩(wěn)定.

2.5.2脂質(zhì)體形態(tài)

透射電鏡拍攝的OSR脂質(zhì)體的形狀，見(jiàn)圖8.由圖8可知，OSR的外觀成類球形均勻分散，多數(shù)為單室脂質(zhì)體.

2.5.3粒徑分布與Zeta電位測(cè)定結(jié)果

動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定的粒徑及粒徑分布結(jié)果見(jiàn)圖9，Zeta電位測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖10.由圖9可知，OSR的粒徑為154.1 nm，分散系數(shù)(PDI)為0.329，說(shuō)明OSR脂質(zhì)體粒徑分布較為均勻；由圖10可知，OSR脂質(zhì)體的Zeta電位為-29.9 mV，其絕對(duì)值?15 mV，結(jié)合DLVO理論可知，制備的OSR脂質(zhì)體混懸液穩(wěn)定，不易發(fā)生絮凝[8,15].

2.5.4紅外光譜表征結(jié)果

OSR脂質(zhì)體的紅外測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖11.圖11 a線顯示，1 670 cm-1處吸收峰為CHO的C=C伸縮振動(dòng)峰，3 431 cm-1處的吸收峰為CHO的-OH伸縮振動(dòng)峰，2 934 cm-1為-CH3的伸縮振動(dòng)峰，1 360～1 470 cm-1為-CH3的不對(duì)稱伸縮振動(dòng).圖11b線顯示，1 630 cm-1和3 010 cm-1處吸收峰分別為L(zhǎng)HP的C=C伸縮振動(dòng)峰和碳碳雙鍵上氫的伸縮振動(dòng)峰，1 740 cm-1和1 236 cm-1處吸收峰分別為L(zhǎng)HP分子中酯鍵的C=O和C-O-C伸縮振動(dòng)峰，3 323 cm-1處的吸收峰為L(zhǎng)HP的-OH和-NH的伸縮振動(dòng)峰，2 925 cm-1、2 853 cm-1和1 466 cm-1依次為-CH2-的不對(duì)稱伸縮振動(dòng)、對(duì)稱伸縮振動(dòng)和面內(nèi)彎曲振動(dòng)峰，1 090 cm-1和722 cm-1分別為醇羥基的C-O伸縮振動(dòng)峰和O-H面外彎曲振動(dòng)峰；1 066 cm-1、1 657 cm-1和827 cm-1分別為氨基的C-N伸縮振動(dòng)峰、N-H面內(nèi)彎曲振動(dòng)峰和N-H面外彎曲振動(dòng)峰，1 378 cm-1為-CH3的面內(nèi)對(duì)稱彎曲振動(dòng)峰，-CH3的面內(nèi)不對(duì)稱彎曲振動(dòng)峰和伸縮振動(dòng)峰被-CH2-相應(yīng)位置的峰所掩蓋.圖11c線是CHO和LHP物理混合物的紅外圖譜，對(duì)比圖11a,b,c 3線可知，圖11c線是圖11a線和b線簡(jiǎn)單地疊加，明顯區(qū)別于OSR脂質(zhì)體的紅外圖11e線.圖11d線顯示，1 620 cm-1和1 249 cm-1處吸收峰分別為OSR分子中酰胺鍵的C=O和C-N伸縮振動(dòng)峰，1 020 cm-1～1 220 cm-1處吸收峰為OSR分子中的叔胺中C-N伸縮振動(dòng)峰，1 349 cm-1和1 304 cm-1處吸收峰為OSR分子中叔碳?xì)涞恼駝?dòng)吸收峰，其余的吸收峰為OSR的不同化學(xué)環(huán)境中-CH2-的振動(dòng)峰.圖11e線顯示，OSR分子中酰胺鍵的C=O和C-N伸縮振動(dòng)峰、叔胺中C-N伸縮振動(dòng)峰和叔碳?xì)涞恼駝?dòng)吸收峰得以保留，紅外吸收峰位幾乎沒(méi)有變化，說(shuō)明OSR進(jìn)入脂質(zhì)體囊泡中.此外，圖11e線與c線和d線對(duì)比，在2 000～3 600 cm-1范圍內(nèi)OSR脂質(zhì)體的紅外吸收峰的位置和峰形發(fā)生了明顯的變化，進(jìn)一步說(shuō)明OSR進(jìn)入脂質(zhì)體囊泡中.

2.5.5差示掃描量熱分析結(jié)果

OSR脂質(zhì)體的差示掃描量熱分析測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖12.圖12結(jié)果表明，CHO(a線)在151.1 ℃時(shí)出現(xiàn)一個(gè)熔點(diǎn)峰；LHP是由卵磷脂、腦磷脂、肌醇磷脂、神經(jīng)鞘磷脂、磷脂酸和其他磷脂組成的復(fù)雜混合物，所以LHP的DSC圖(b線)出現(xiàn)多個(gè)吸熱峰；OSR(c線)在96.5 ℃時(shí)出現(xiàn)一個(gè)熔點(diǎn)峰，在225.5 ℃時(shí)出現(xiàn)一個(gè)放熱峰；對(duì)比CHO,LHP和OSR的DSC圖可以發(fā)現(xiàn)，藥物與兩者的物理混合物的DSC圖(d線)是三者的簡(jiǎn)單疊加，說(shuō)明藥物與CHO和LHP的物理混合物不能形成脂質(zhì)體；OSR脂質(zhì)體(e線)在204.8 ℃附近出現(xiàn)新的放熱峰，在228.2 ℃附近出現(xiàn)新的吸熱峰，說(shuō)明形成新物質(zhì)，不是簡(jiǎn)單的物料疊加，證明生成了OSR脂質(zhì)體[8].

3 結(jié) 論

采用單因素實(shí)驗(yàn)法，剖析OSR脂質(zhì)體制備過(guò)程中輔料用量的影響，采用Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，剖析多個(gè)因素對(duì)OSR脂質(zhì)體的共同的影響，優(yōu)化了OSR脂質(zhì)體的制備工藝.單因素實(shí)驗(yàn)與響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相結(jié)合，具有預(yù)測(cè)性好的優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)于只能分析離散型數(shù)據(jù)的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì).單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)合Box-Behnken響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，采用線性模型，求得回歸方程，通過(guò)合理預(yù)測(cè)得出最佳工藝條件.OSR的最佳制備工藝為：大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為10∶3.09、大豆卵磷脂與藥物的質(zhì)量比為10∶1.54、水合時(shí)間為1.46 h.制備的OSR脂質(zhì)體的外觀成類球形，平均粒徑為154.1 nm，分散系數(shù)為0.329，平均包封率為58.02%(RSD為1.63%)，平均載藥量為6.27%(RSD為1.52%)，Zeta電位為-29.9 mV，采用紅外光譜法、差示掃描量熱分析等表征法證明了OSR脂質(zhì)體的形成.采用預(yù)測(cè)的最佳工藝制備的OSR脂質(zhì)體，粒徑較小，PDI值較低，脂質(zhì)體分散性好，Zeta電位絕對(duì)值較高，不易發(fā)生沉淀，說(shuō)明優(yōu)化的OSR脂質(zhì)體制備方法穩(wěn)定可靠.