施佳玉， 周立強， 林 泉， 孫 毅,

(1. 同濟大學醫(yī)學院，上海 200092； 2. 上海市干細胞臨床轉(zhuǎn)化研究院，同濟大學附屬東方醫(yī)院，上海 200120)

當今人類社會面臨著巨大的老齡化人口壓力，亟需提高出生率及母嬰健康。環(huán)境因素在胚胎發(fā)育時期對神經(jīng)發(fā)生和可塑性的建立具有長期的影響。研究表明，在胚胎發(fā)育時期存在著關(guān)鍵的時間窗口，此時胚胎最容易受到外界環(huán)境刺激的干擾[1-4]。大量的研究表明環(huán)境干擾(例如戰(zhàn)爭，饑荒和地震等)會增加子代罹患精神疾病的可能性，包括抑郁癥、藥物成癮、情緒焦慮和注意力缺陷多動障礙[1,5-13]。例如，Clover等[14]發(fā)現(xiàn)如果母親在妊娠期間情緒低落或焦慮，會影響到后代的神經(jīng)發(fā)育，增加后代出現(xiàn)情緒、行為和認知問題的風險。在模式動物的相關(guān)研究中，產(chǎn)前的各種應激源會對小鼠后代大腦的神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)元形態(tài)、神經(jīng)環(huán)路以及功能等造成巨大影響[15-16]。

情緒是大腦皮層與皮層下結(jié)構(gòu)協(xié)同作用的結(jié)果，皮層下結(jié)構(gòu)(杏仁核、背側(cè)前扣帶回、海馬等)對情緒的即刻反應至關(guān)重要；大腦額葉皮層則起重要調(diào)節(jié)作用，高級皮層能夠?qū)ν庵艿母兄X傳入并與以往經(jīng)驗進行整合，從而產(chǎn)生情緒的內(nèi)部體驗[17]。γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)是大腦中主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，參與人類和其它動物焦慮及抑郁行為調(diào)節(jié)，大量研究表明其在情緒調(diào)節(jié)中具有重要功能[18]。多巴胺(dopamine, DA)則是大腦中最豐富的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase, Th)是其合成限速酶。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，兒茶酚胺主要控制認知功能，如情感，學習和記憶[19-20]。盡管關(guān)于孕期應激對子代的影響已有大量研究，然而以全轉(zhuǎn)錄組測序分析為基礎(chǔ)的產(chǎn)前應激導致后代小鼠情緒改變的分子機制尚不清楚。

因此本研究通過構(gòu)建產(chǎn)前束縛動物模型，結(jié)合全轉(zhuǎn)錄組測序分析、行為學實驗以及免疫組化實驗等來揭示產(chǎn)前束縛導致后代小鼠情緒改變的分子機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

小鼠以12 h的光/暗周期進行飼養(yǎng)。動物實驗程序符合同濟大學醫(yī)學研究倫理委員會的指導原則(倫理編號： TJAA06621104)。本研究采用近交系C57BL6小鼠，通過每天清晨檢查陰道栓塞來確定妊娠時間。將孕鼠分為產(chǎn)束縛應激組(STR組)和對照組(CTL組)，共獲得后代75只小鼠，其中STR組子代有39只，CTL組子代有36只，見表1。其中產(chǎn)后第3天(postnatal day 3, P3)的STR組和CTL組后代各來自至少3只母鼠，產(chǎn)后第30天(postnatal day 30, P30)的STR組和CTL組后代各來自至少2只母鼠；產(chǎn)后第120天(postnatal day 120, P120)的STR組和CTL組后代各來自至少8只母鼠。

表1 實驗動物分組

1.2 束縛應激模型構(gòu)建和樣本收集

在小鼠妊娠最后1周，即胚胎第14天至分娩期間，使用與孕鼠體型相近的柱狀束縛器，對孕鼠進行束縛應激(60 min/d，上午8∶00開始)。對照組孕鼠置于籠中不受干擾。P3的小鼠大腦用于混合樣品測序；出生后21 d時，將仔鼠與母鼠分開，并按雌雄進行分籠處理。對P30小鼠大腦進行冠狀冰凍切片，并進行免疫熒光染色；其余小鼠于P120進行行為學實驗。

1.3 免疫熒光染色

本研究中使用的抗體主要包括Calbindin(Cell signaling 2136，1∶100，美國)，GABA(Abcam ab86186，1∶200，英國)，Drd2(Proteintech 55084-1-AP，1∶500，美國)，Th(Synaptic Systems 213 104，1∶500)；熒光標記的二抗購自賽默飛世爾科技(美國)或Jackson ImmunoResearch(美國)。

1.4 曠場測試

按照Prut等[21]的描述進行曠場試驗，該測試提供了一個用于系統(tǒng)地評估小鼠對新環(huán)境的探索行為。實驗前，將小鼠放置于測試房間適應30 min以上，然后將其置于開放場地中央，觀察并記錄其在場地中央停留的時間以及運動總距離。

1.5 條件恐懼記憶測試

條件恐懼記憶測試包括3個內(nèi)容: 2 min(80 dB)的白噪聲條件刺激；2 s足部電擊(0.4 mA)；2 min的間歇期。條件恐懼測試2 d后，所有小鼠在相同的背景下進行測試。經(jīng)過2 min的適應期后，在2 min(80 dB)的白噪聲條件中評估其恐懼情緒。

1.6 轉(zhuǎn)錄組分析

收集新鮮P3的CTL組和STR組雄性小鼠的大腦，并采用震蕩切片機于人工腦脊液(artificial cerebrospinal fluid, ACSF，實驗室自制)中進行切片，厚度為300 μm。獲取內(nèi)側(cè)前額葉皮層(CTL組，n=2；STR組，n=3)、海馬(CTL組，n=2；STR組，n=3)和杏仁核組織(CTL組，n=2；STR組，n=3)。本研究使用RNeasy Mini Kit(Qiagen 74104，德國)提取并純化總RNA。再通過Illumina(美國)系統(tǒng)的Stranded Total RNA Prep(Illumina，美國)，Ligation with Ribo-Zero Plus(Illumina，美國)試劑盒對質(zhì)檢合格的100 ng總RNA進行文庫制備，然后采用Agilent Bioanalyzer 2100對其進行質(zhì)量評估，并使用Illumina NovaSeq6000(Illumina，美國)進行測序。

本次研究利用HISAT2(2.2.1版)和StringTie(2.1.4版)將測序數(shù)據(jù)比對到小鼠基因組(GENCODE M25, GRCm38.p6, https:∥www.gen-codegenes.org/mouse/)，并利用R包Rsubread(2.0.1版)的featureCounts函數(shù)對基因表達進行定量分析。使用limma軟件包(版本3.46.0)分析對照和束縛應激條件下的差異表達基因(differentially expressed genes, DEGs)。DEGs的選擇標準為P<0.05，|log2(Fold Change)|>0.25。

通過R包WGCNA(1.69版)進行加權(quán)基因共表達網(wǎng)絡(luò)分析(weighted gene co-expression network analysis, WGCNA)。具體而言，將軟閾值(soft value)設(shè)置為13，構(gòu)建無尺度分布拓撲矩陣(scale-free topological matrix)。設(shè)置“deepSplit”參數(shù)為3，通過Dynamic Hybrid Cut算法確定基因模塊，并將高度相關(guān)的模塊(相關(guān)性在0.99以上的模塊)合并為一個模塊。在默認參數(shù)下，通過R包的ClusterProfiler(版本3.16.1)對各模塊中的基因進行GO富集分析。通過Cytoscape軟件(版本3.8.2)對各模塊中前30個核心基因(hub-gene，即具有最高相關(guān)性的基因)間的網(wǎng)絡(luò)連接進行可視化。

1.7 成像處理

采用激光共聚焦顯微成像系統(tǒng)(蔡司，LSM800，德國)對染色后的腦切片進行顯微成像。CTL組和STR組中具有相似解剖結(jié)構(gòu)的腦片用于成像。用Imaris軟件(Bitplane，版本9.2.1)對獲得的圖像進行處理。

1.8 統(tǒng)計學處理

通過R或Prism(GraphPad，版本8.0)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。采用曼-惠特尼檢驗(Mann-Whitney)來評估獨立實驗組之間的統(tǒng)計學意義。分析所得差異顯著性均以雙尾(two-tailed)概率展示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 產(chǎn)前束縛應激模型

為了研究孕期母鼠應激對后代大腦發(fā)育的影響，適當?shù)膶嶒瀯游锬Ｐ褪鞘直匾?。妊娠應激源種類繁多，包括束縛應激、社會秩序改變[22]、電擊[23]、噪音[24]、水中浸泡[25]、毒素[15]和手術(shù)[16]。所有這些方法都可以作為有效的應激源，其中“束縛”應激的方式條件易控，是嚙齒類動物的主要應激方法。為了研究產(chǎn)前束縛應激引發(fā)后代形態(tài)學、神經(jīng)生物學和行為學缺陷的分子機制，本研究構(gòu)建了產(chǎn)前束縛應激模型。在研究在小鼠妊娠期最后1周對孕鼠進行束縛應激處理，見圖1。小鼠妊娠的第3周被認為等同于人類妊娠的妊娠晚期，這一時期是易引起子代患發(fā)育相關(guān)精神疾病的關(guān)鍵時期[26]。

圖1 產(chǎn)前束縛應激模型Fig.1 The prenatal restraint stress model妊娠最后1周(胚胎第14天-分娩)，每天將孕鼠置于束縛容器中60 min；在P3，收集內(nèi)側(cè)前額葉皮層、海馬和杏仁核進行轉(zhuǎn)錄組分析；在P120，對動物進行焦慮樣行為測試(曠場和條件恐懼記憶)

在P3，收集仔鼠內(nèi)側(cè)前額葉皮層、海馬和杏仁核組織進行全轉(zhuǎn)錄組分析；其余的仔鼠飼養(yǎng)至P30或P120，分別進行免疫熒光染色和行為學測試(曠場和條件恐懼記憶)。

2.2 產(chǎn)前束縛應激引起子代的焦慮樣行為

2.2.1 曠場測試 對CTL組和STR組的成年子代進行曠場測試。數(shù)據(jù)顯示，CTL組在中心的時間約占整個測試時間的16%，而STR組占比約10%(小鼠在中心的時間占比分別為，CTL組: 16.49%±8.65%，n=12；STR組: 9.86%±3.27%，n=12，P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。同時CTL組的平均行程約14 000 cm，而STR組的平均行程約11 000 cm[小鼠行程分別為，CTL組: (14 692±3 032)cm，n=12；STR組: (11 109±2 153) cm，n=12，P<0.05]，差異有統(tǒng)計學意義。這說明STR組子代在場地中的行程較短，在中心的時間也明顯減少，見圖2。

2.2.2 條件恐懼記憶測試 對CTL組和STR組的成體后代進行提示性條件恐懼測試(cued fear-conditioning)。數(shù)據(jù)顯示，CTL組子代的凍結(jié)反應率為30%，而STR組子代的凍結(jié)反應率為50%，且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這說明產(chǎn)前應激顯著增強了小鼠的凍結(jié)行為(被動防御策略)出現(xiàn)的概率，見圖2。以上行為學實驗結(jié)果說明，產(chǎn)前束縛應激會誘發(fā)后代出現(xiàn)焦慮樣行為。

圖2 產(chǎn)前應激會引發(fā)焦慮樣行為Fig.2 Prenatal stress caused anxiety-like behaviorsA: 曠場測試，小鼠在曠場中的運動路徑；B: 在礦場測試中，經(jīng)產(chǎn)前應激處理的成體后代在場地中運動距離變短，在場地中心的駐留時間比也明顯減少；C: CS，條件刺激。US，非條件刺激。3CS-US: 3組CS-US訓練；D: 產(chǎn)前應激顯著提高小鼠的凍結(jié)行為的百分比；*P<0.05，Kruskal-Wallis檢驗，每組條件下n=12

2.3 產(chǎn)前束縛應激改變了子代內(nèi)側(cè)前額葉皮層、海馬和杏仁核的基因表達

為了探究產(chǎn)前應激對子代影響的潛在分子機制，本研究對CTL/STR-P3的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行條件下的差異表達基因(differentially expressed gene, DEG)分析。以|log2FoldChange|>0.25，P<0.05作為差異表達基因的篩選閾值，發(fā)現(xiàn)在杏仁核中有134個基因顯著上調(diào)，有102個基因顯著下調(diào)；在海馬中顯著上調(diào)基因有133個，顯著下調(diào)基因有118個；在內(nèi)側(cè)前額葉皮層中顯著上調(diào)基因有227個，顯著下調(diào)基因有212個(圖3A～C)。在3個腦區(qū)DEG多與神經(jīng)發(fā)生，突觸形成和離子轉(zhuǎn)運相關(guān)。在內(nèi)側(cè)前額葉皮層中，產(chǎn)前束縛應激改變了調(diào)控Wnt和Bmp信號通路相關(guān)基因(如Cdc42、Ppp3r1、Fgf15、Rap1a、Zak、Rasgrp2、Rasgrp1、Fgf10、Fgfr1)以及GABA能突觸形成相關(guān)的基因(如Gabrb3、Gabbr1、Gng2、Slc32a1、Gls2、Gad1)的表達。在海馬中，產(chǎn)前束縛應激改變調(diào)節(jié)神經(jīng)分化相關(guān)的基因(如Sema5b、Prmt7、Dapl1、Sema4b、Meig1、Tbcb、Nr2c2、Dll1、Igsf9、Nhlh2、Hes5)，MAPK信號通路相關(guān)的基因(如Map3k3、Myc、Mapk14、Mapk3),以及離子通道相關(guān)的基因(如P2rx7、Gabra5、Chrna7、Kcna1、Kcnj13、Lrrc8c、Cacng4)的表達。在杏仁核中,產(chǎn)前束縛應激改變調(diào)節(jié)細胞分化相關(guān)的基因(如Notch2、Fzd1、Ngfr、Sema5b、Med1、Tulp3、Arhgap24、Sfrp2、Zic2、Lmx1a、Kif26b、Wls)以及鈣離子通道相關(guān)基因(如Trpc5、Chrna7、Cacna2d2、Tmco1)的表達。DEG分析結(jié)果表明產(chǎn)前束縛應激對神經(jīng)發(fā)生有著巨大的影響。

圖3 P3小鼠CTL與STR組中AMY，HPC，mPFC的差異基因火山圖Fig.3 Volcano plot of AMY, HPC, mPFC in CTL/STR-P3 miceA: 杏仁核(AMY)的差異基因火山圖；B: 海馬(HPC)的差異基因火山圖；C: 內(nèi)側(cè)前額葉皮層(mPFC)的差異基因火山圖；圖中紅色圓點代表差異顯著(P<0.05)的基因(其中l(wèi)og2FoldChange>0.25為顯著上調(diào)基因，log2FoldChange<-0.25為顯著下調(diào)基因)；藍色圓點表示P<0.05，|log2FoldChange|<0.25的基因；綠色與灰色圓點表示無顯著差異(P>0.05)的基因

為了進一步尋找各區(qū)域基因共表達網(wǎng)絡(luò)特征及關(guān)鍵基因，本團隊進行了WGCNA分析。本研究通過WGCNA分析確定了6個基因簇(模塊)，見圖4A、B。針對這6個模塊的GO分析揭示了產(chǎn)前應激大腦中發(fā)生的關(guān)鍵生物學事件。分析表明，產(chǎn)前應激對P3后代小鼠杏仁核基因表達的影響最小(圖4A、B)。紅色模塊中基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在內(nèi)側(cè)前額葉皮層中發(fā)生了明顯的特異性改變，綠色模塊對應產(chǎn)前應激后海馬特異的變化。

內(nèi)側(cè)前額葉皮層特異的紅色模塊中的關(guān)鍵基因與GABA能神經(jīng)元功能密切相關(guān)(即Prdm12、Tgm6、Erbb3、Dlx2)，見圖4B、C、D。GO分析結(jié)果顯示，DA合成限速酶基因Th有所富集(圖4C，右圖)。在海馬中，產(chǎn)前應激顯著影響了綠色模塊中基因的表達，包括Emx2、Lef1、Trp73、Neurog2、Dll1、Rest、Dmrta2、Pou4f1、Foxj1(圖4B、C)。綜上所述，轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明產(chǎn)前應激顯著影響了不同腦區(qū)，這可能與成年后代的焦慮樣行為有直接關(guān)系。

圖4 產(chǎn)前應激條件下P3的mPFC、HPC和AMY的DEG，WGCNA和GO分析Fig.4 DEG, WGCNA, and GO analyses of gene expression in the medial prefrontal cortex(mPFC), hippocampus(HPC), and amygdala(AMY) of prenatally stressed offspring at P3A: 熱圖顯示了P3時，mPFC、HPC、AMY樣本的基因表達；B: P3樣本的層級聚類樹狀圖顯示，WGCNA分析得到的共表達基因模塊。與分支相對應的模塊用樹狀圖下的顏色帶進行標記。采用0.25閾值合并，得到6個基因模塊；C: 紅色模塊的關(guān)鍵基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和GO；D: 綠色模塊的關(guān)鍵基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和GO

2.4 產(chǎn)前束縛應激削弱了子代GABA能神經(jīng)發(fā)生和DA能的信號通路

研究團隊在之前的研究表明，產(chǎn)前應激在內(nèi)側(cè)前額葉皮層中干擾microRNA的活性可引起嚴重的焦慮樣恐懼行為[27]。本次全轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析表明，在受產(chǎn)前束縛應激處理的后代小鼠大腦中，調(diào)節(jié)GABA能神經(jīng)發(fā)生、GABA合成和運輸、DA能通路的多個關(guān)鍵基因在內(nèi)側(cè)前額葉皮層中顯著下調(diào)，表明內(nèi)側(cè)前額葉皮層中基因表達的改變可能導致這種表型(圖4C)。為了評估產(chǎn)前應激誘導的GABA能神經(jīng)發(fā)生的潛在缺陷，本研究通過免疫組化實驗對內(nèi)側(cè)前額葉皮層中的GABA能神經(jīng)元進行了檢測。采用抗Calbindin和抗GABA抗體標記GABA能神經(jīng)元。本研究發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)前應激的P30小鼠大腦中，運動皮層、前邊緣皮層(prelimbic，PL)和下邊緣皮層(infralimbic，IL)中標記的GABA能神經(jīng)元數(shù)量減少(圖5A，B)，提示產(chǎn)前應激后代小鼠的大腦中GABA能神經(jīng)發(fā)生受阻。在P30小鼠內(nèi)側(cè)前額葉皮層中，DA受體Drd2在運動皮層和扣帶皮層的表達水平降低(圖5C)。通過免疫染色檢測，本研究發(fā)現(xiàn)黑質(zhì)區(qū)的DA神經(jīng)元明顯減少。內(nèi)側(cè)前額葉皮層中Th的表達減少也可能是由DA能神經(jīng)發(fā)生和前腦區(qū)的投射缺陷所致(圖5D)。

圖5 產(chǎn)前應激影響GABA能神經(jīng)形成和多巴胺能通路Fig.5 Prenatal stress impaired GABAergic neurogenesis and dopaminergic pathwayA： 產(chǎn)前應激使得P30運動皮層(M)，扣帶皮層(Cg1)，PL，及IL中的Calbindin陽性中間神經(jīng)元減少，PL，前邊緣皮層，IL，下邊緣皮層，CTL，對照組。STR，應激組。紅色虛線區(qū)域為成像區(qū)域；B： 產(chǎn)前應激降低M和Cg1中GABA免疫染色信號。GABA，γ-氨基丁酸；C： 產(chǎn)前應激降低了Drd2在M和Cg1中的表達；D： 在P30應激組中，中腦的黑質(zhì)區(qū)(SN)中Th陽性細胞減少；比例尺，70 μm

3 討 論

焦慮樣行為的特點之一是過度恐懼，通常是在沒有真正危險的情況下對特定對象或情境作出反應[28-30]。情緒產(chǎn)生的主要區(qū)域是前額葉皮層(主要是內(nèi)側(cè)前額葉皮層)、杏仁核、海馬。前額葉皮層-杏仁核-海馬環(huán)路在壓力、妊娠及分娩時被放大。內(nèi)側(cè)前額葉皮層被認為可以調(diào)節(jié)恐懼情緒的出現(xiàn)和消退。產(chǎn)前應激極大地損害了這些腦區(qū)的功能[11,31-34]。盡管孕期應激對子代的影響已取得了巨大的進展，但令人遺憾的是，目前對大腦應對外部環(huán)境刺激(如孕期壓力)的細胞和分子機制知之甚少。目前零散的信息極大地阻礙進一步揭示孕期應激長期影響神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)環(huán)路的形成以及相關(guān)行為的作用機制。

本研究通過構(gòu)建產(chǎn)前束縛動物模型，結(jié)合全轉(zhuǎn)錄組測序分析、行為學實驗以及免疫熒光染色實驗來揭示產(chǎn)前束縛應激引起后代小鼠情緒改變的分子機制。本研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前應激對后代小鼠(P3)主要改變了內(nèi)側(cè)前額葉皮層中的DA能通路，減少了GABA能神經(jīng)元的細胞數(shù)量。在海馬區(qū)下調(diào)了神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)環(huán)路相關(guān)基因的表達，而對杏仁核的基因表達影響較小。除此之外，本研究的分析表明產(chǎn)前應激改變了后代小鼠大腦中的其他特異性基因的表達(如離子通道、鈣離子信號傳導、肌動蛋白細胞骨架、激素相關(guān)信號傳導相關(guān)基因)。另外，研究表明Drd2在紋狀體和前額葉皮層中高表達，是情緒加工與變化的關(guān)鍵基因[35]。而在本研究中，STR后代(P30)內(nèi)側(cè)前額葉皮層中DA合成限速酶Th和DA受體Drd2的表達水平顯著降低，提示其與焦慮樣行為的出現(xiàn)密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明SN區(qū)域表達Th的神經(jīng)元細胞數(shù)目相對減少，DA神經(jīng)元到內(nèi)側(cè)前額葉皮層區(qū)域的投射相應減少，間接解釋了Th在內(nèi)側(cè)前額葉皮層區(qū)域表達量降低的現(xiàn)象。此外，不能排除這種減少是由神經(jīng)發(fā)生受阻或細胞凋亡增加所造成的可能性。Tobe等[36]發(fā)現(xiàn)在雄性大鼠的腦中，產(chǎn)前“束縛”應激不會引起明顯的細胞凋亡。

由于全轉(zhuǎn)錄組測序反映的是所有細胞的基因平均表達水平，測序的解析度較低，易掩蓋一些群體數(shù)量比較小的細胞類型的基因表達變化。在本研究中杏仁核區(qū)的基因表達變化不明顯，可能是由于小部分細胞類型的變化被其它細胞所掩蓋。單細胞轉(zhuǎn)錄組測序可客觀精準地解析混雜細胞群體中的稀少細胞亞群及基因表達變化，為破譯異質(zhì)細胞群中特異性的基因表達變化提供了可能。

除此之外，Salari等[37]發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前束縛應激導致母體出現(xiàn)焦慮樣行為，同時增強了其下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adrenal axis, HPA axis)的活動，且導致雄性后代的焦慮樣行為和HPA的活性加強。Mahmoudi等[38]發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前束縛應激可能通過減少大腦腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)而影響空間記憶，誘發(fā)成年后代雌性小鼠的焦慮和抑郁樣行為。產(chǎn)前應激在不同性別后代中發(fā)揮不同作用的分子機制也有待進一步研究揭示。

綜上所述，本研究系統(tǒng)地闡述了產(chǎn)前束縛應激與后代焦慮樣行為之間的聯(lián)系，并揭示了其潛在的分子機制，為解釋產(chǎn)前應激引起后代焦慮相關(guān)的行為變化提供了可能，也可以為今后解析孕婦在妊娠期間受到外界環(huán)境刺激導致后代出現(xiàn)自閉癥和行為障礙等疾病的分子機制提供參考[39]。