張曼曼

（江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 211100）

引言

鹽酸雷尼替丁膠囊對(duì)于治療潰瘍病和胃酸高分泌病具有十分重要的作用，尤其在治療十二指腸潰瘍時(shí)十分有效。在鹽酸雷尼替丁的實(shí)際應(yīng)用過程中，臨床上主要使用膠囊劑，而在美國和英國藥典以及日本藥局方當(dāng)中均未對(duì)膠囊劑進(jìn)行收載。我國在2000 版藥典當(dāng)中針對(duì)鹽酸雷尼替丁膠囊的原料和制劑，采用TCL 法對(duì)相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了控制，但發(fā)現(xiàn)用碘蒸氣方法顯色不夠穩(wěn)定，而且重現(xiàn)性相對(duì)較差。對(duì)此，本文結(jié)合原料含量測定方法開展了具體的實(shí)驗(yàn)研究，并運(yùn)用HPCL 法對(duì)鹽酸雷尼替丁膠囊的相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分析，通過自身對(duì)照法來進(jìn)行計(jì)算。通過具體實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用HPTC 法可以有效分離鹽酸雷尼替丁和相關(guān)物質(zhì)峰，并能夠限量分析相關(guān)物質(zhì)，操作十分簡便和快速，準(zhǔn)確性相對(duì)較高。

1 鹽酸雷尼替丁膠囊概述

鹽酸雷尼替丁的化學(xué)名稱為N’-甲基-N-[2-[[[5-[（二甲氨基）甲基]-2-呋喃基]-甲基]硫代]乙基]-2-硝基-1，1-乙烯二胺鹽酸鹽，主要用于治療反流性食管炎、胃潰瘍以及其他高胃酸分泌疾病等。其藥理作用主要包括以下兩方面，一是，藥理雷尼替丁具有競爭性阻滯組胺與H2受體結(jié)合的作用。抑制胃酸作用，以摩爾計(jì)為西咪替丁的5 倍～12 倍，因此為強(qiáng)效的H2受體阻滯劑。具體來說，鹽酸雷尼替丁膠囊是一種選擇性的H2受體阻滯劑，通過作用于胃壁細(xì)胞上的H2受體，抑制胃酸的基礎(chǔ)分泌和進(jìn)食后的分泌，從而降低胃酶的活性。目前主要用于胃炎、胃糜爛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍的治療，此外，對(duì)幽門螺旋桿菌感染也有抑制和殺滅作用。治療的療程跟所治療的疾病有關(guān)系，治療胃炎、胃糜爛，雷尼替丁療程為2 周左右[1]。治療胃潰瘍、十二指腸潰瘍，療程在4 周～8 周。伴有幽門螺旋桿菌感染時(shí)，需要先聯(lián)合使用其他3 種藥物，將幽門螺旋桿菌先根治，然后再治療胃炎、胃糜爛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等。二是，毒理小鼠口服的LD50 1440 mg/kg～1 750 mg/kg。連續(xù)口服5 周的每天最大無毒劑量，大鼠（雄）為500 mg/kg，大鼠（雌）為250 mg/kg，犬為40 mg/kg。連續(xù)26 周的每天最大無毒劑量，大鼠為100 mg/kg，犬為40 mg/kg。小鼠口服100 mg/kg～200 mg/kg 達(dá)114 周，大鼠口服100 mg/kg～2 000 mg/kg 達(dá)129 周，均未見致癌作用[2]。

2 HPCL 法分析鹽酸雷尼替丁膠囊中有關(guān)物質(zhì)

2.1 儀器和試劑

本次實(shí)驗(yàn)需要采用的儀器包括高效液相色譜儀和二極管陣列檢測器等，試藥則由我國藥品生物制品檢定廠提供的鹽酸雷尼替丁，樣品則為我國8 個(gè)省市廠家所生產(chǎn)的市售藥品，甲醇選用色譜純，其余為分析純。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.2.1 色譜條件

色譜柱的柱溫為25℃，流動(dòng)相主要為0.1 mol·L-1醋酸銨-甲醇，其體積比為64∶36，流速則設(shè)定為1.0 mol/min-1，檢測波長度為320 nm，進(jìn)樣量則達(dá)到10 μL。

2.2.2 檢測波長和流動(dòng)相，確定樣品濃度

在本次實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，原料藥含量的測定波長主要采用320 nm。上述流動(dòng)相不僅能夠保證峰形，而且還具有比較適中的保留時(shí)間。兩倍時(shí)間主要是指在12 min 內(nèi)完成具體的分析工作，并要確保鹽酸雷尼替丁和相關(guān)物質(zhì)能夠得到有效分離，滿足具體的要求。樣品質(zhì)量濃度主要選擇0.15 mg/mL，這樣不僅能夠稀釋100 倍，而且還能夠與對(duì)照液響應(yīng)相適中，確保檢出量能夠滿足具體要求，具有合適的信噪比，能夠與藥典當(dāng)中含量測定濃度保持一致[3-4]。這樣在色譜條件相同時(shí)，不僅可以進(jìn)行定量分析，而且還能夠檢查相關(guān)物質(zhì)[5]。

2.2.3 空白實(shí)驗(yàn)

相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員需要采用流動(dòng)相制成相應(yīng)的空白溶液，并按照“有關(guān)物質(zhì)檢查法”進(jìn)樣，但其色譜圖上并沒有任何色譜峰，對(duì)照品和供試品都選用鹽酸鹽，在一定時(shí)間內(nèi)，自身對(duì)照的稀溶液仍然存在，而且量保持不變。在同等色譜條件下使用稀鹽酸進(jìn)行進(jìn)樣，可以證實(shí)為氯離子峰。

2.2.4 線性實(shí)驗(yàn)

對(duì)適量的鹽酸雷尼替丁對(duì)照品進(jìn)行精密稱取，在加入流動(dòng)相后進(jìn)行定量稀釋，從而制成相應(yīng)濃度的溶液。之后，相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員需要按照“有關(guān)物質(zhì)檢查法”的相關(guān)方法進(jìn)一步開展實(shí)驗(yàn)，從而得到進(jìn)樣量和峰面積回歸方程，其中，進(jìn)樣量需要控制在0.3μg/μL～3 μg/μL 范圍以內(nèi)，且要具有良好線性[6]。

2.2.5 專屬性實(shí)驗(yàn)

相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員在采用HPLC 法開展實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要確保分離度能夠滿足具體要求，而通過回收率實(shí)驗(yàn)，可以對(duì)HPLC 法的準(zhǔn)確程度進(jìn)行驗(yàn)證，具有較強(qiáng)的專屬性。

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員需要連續(xù)取同一批樣品進(jìn)行3 次相關(guān)物質(zhì)分析，各雜質(zhì)峰面積和與自身對(duì)照主峰面積比保持相同，其中n=6，RSD=0.28%。相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員還需要連續(xù)對(duì)同一樣品溶液進(jìn)行5 次取樣，各雜質(zhì)峰面積和與自身對(duì)照主峰面積間的比保持相同，其中n 為5，RSD 為0.28%。

2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)和耐用性實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)人員需要分別取供試品溶液在0、4、8、24h進(jìn)行進(jìn)樣，并要對(duì)雜質(zhì)峰總面積和對(duì)照液比較進(jìn)行測定，可以發(fā)現(xiàn)，其比例基本保持不變。通過對(duì)不同型號(hào)的C18 柱進(jìn)行使用，對(duì)同一份樣品進(jìn)行測定，可以發(fā)現(xiàn)只是在保留時(shí)間方面存在一定的差異，而各雜質(zhì)峰面積和對(duì)照液峰面積之間相比，比例基本保持不變。

2.2.8 有關(guān)物質(zhì)檢查法

實(shí)驗(yàn)人員需要將適量鹽酸雷尼替丁膠囊內(nèi)容量取出，然后進(jìn)行精密稱定，在加入流動(dòng)相溶解之后，可以制成0.15 mg/mL的溶液，將其進(jìn)行過濾處理，將初濾液棄去，以續(xù)濾液作為供試品溶液，并要精密吸取1 mL，在100 mL量瓶當(dāng)中放置。之后，需要加入流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，一直達(dá)到刻度值，然后搖勻處理，最后得到0.001 5 mg/mL 的對(duì)照溶液。相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員需要取10 μL 對(duì)照溶液注入液相色譜儀，并對(duì)儀器靈敏度進(jìn)行調(diào)整，確保主成分色譜峰高度可以達(dá)到量程的20%～25%。然后，需要取10 μL供試品溶液，將其注入液相色譜儀中，對(duì)色譜圖進(jìn)行記錄，一直到供試品溶液主成分峰的保留時(shí)間的2 倍。對(duì)供試品溶液色譜圖進(jìn)行分析，例如顯雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰的面積總和應(yīng)該小于對(duì)照品溶液主峰面積的4 倍[7]。

2.2.9 樣品中相關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

根據(jù)擬定方法對(duì)鹽酸雷尼替丁膠囊相關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分析，并與TLC 法進(jìn)行對(duì)比，可以得到如表1 結(jié)果。

表1 10 批樣品有關(guān)物質(zhì)HPLC 分析結(jié)果及與TLC 對(duì)比

3 結(jié)果討論

首先，根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)和結(jié)果可知，通過對(duì)HPLC法進(jìn)行使用，可以對(duì)鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中相關(guān)物質(zhì)總量進(jìn)行準(zhǔn)確檢查，并能夠?qū)Σ煌瑯悠冯s質(zhì)情況進(jìn)行區(qū)別。例如，9 號(hào)樣品采用HPLC 測定，可以發(fā)現(xiàn)其具有3 個(gè)雜質(zhì)峰，而運(yùn)用TLC 方法則只出現(xiàn)了一個(gè)雜質(zhì)斑點(diǎn)，且只是對(duì)比其他樣品顏色相對(duì)深一些，由此可以看出，HPLC 的分離效果相對(duì)較好。

其次，選用自身對(duì)照法來分析相關(guān)物質(zhì)，該方法當(dāng)中所規(guī)定的供試品溶液各雜質(zhì)峰面積和應(yīng)該低于自身對(duì)照溶液主峰面積的4 倍，這與我國藥典的現(xiàn)行方法相符合。

最后，該方法的色譜條件可以同時(shí)測定鹽酸雷尼替丁膠囊含量，其加樣回收率可以達(dá)到100.8%，而RSD 則可以達(dá)到0.91%，其中n 為6。在相同色譜條件下，不僅可以進(jìn)行定量分析，而且還能夠檢查相關(guān)物質(zhì)，采用此方法同時(shí)測定10 批樣品含量，其結(jié)果符合原標(biāo)準(zhǔn)方法。

4 結(jié)語

綜上所述，通過采用HPLC 法，可以有效分析鹽酸雷尼替丁膠囊的有關(guān)物質(zhì)，而且此種方法相對(duì)TLC 方法具有更為明顯的優(yōu)勢(shì)，不僅操作簡單方便，而且影響因素相對(duì)較少，可以有效實(shí)現(xiàn)鹽酸雷尼替丁和其他雜質(zhì)之間的完全分離，限量檢查相關(guān)物質(zhì)，而且還可以在同一色譜條件下檢查有關(guān)物質(zhì)和進(jìn)行含量測定，因此應(yīng)用價(jià)值較高，應(yīng)得到進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。