陳 龍，單艷敏，廖桂堂，崔闊澍，伍亞瓊，楊淞杰

(1.河套學院農(nóng)學系，內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)和草原有害生物防治檢疫總站，呼和浩特 010051；3.成都信息工程大學，成都 610225；4.四川省農(nóng)業(yè)技術推廣總站，成都 610041；5.四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳植物保護站，成都 610041)

【研究意義】春尺蠖(ApocheimacinerariusErschoff)隸屬于鱗翅目，尺蛾科，屬于暴發(fā)性食葉害蟲，在我國北方區(qū)域分布較廣，并逐步向四川、云南等南部區(qū)域遷移，其主要危害胡楊、檸條、蘋果等林木，還危害小麥、玉米等農(nóng)作物，近年該蟲呈蔓延分布趨勢，已對發(fā)生區(qū)域造成了嚴重的損失[1-2]。嗅覺感受系統(tǒng)是昆蟲與外界交流的重要方式，對外界環(huán)境中成千上萬氣味分子的感知和判斷發(fā)揮了重要作用，體內(nèi)多種嗅覺蛋白參與了該識別過程，主要包括氣味結(jié)合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)、化學感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)、氣味受體(odorant receptors,ORs)、離子型受體(ionotropic receptors,IRs)、感受神經(jīng)元膜蛋白(sensory neuron membrane proteins,SNMPS)以及氣味降解酶(odorant degration enzymes,ODEs)等，昆蟲遷飛、聚集、取食量等多種生理行為活動都與其存在重要關聯(lián)[3]?！厩叭搜芯窟M展】近年，對昆蟲化學生態(tài)學的研究在嗅覺感受機理的理論研究和應用方面取得了較大突破，運用反向化學生態(tài)學研究嗅覺相關蛋白的生物學功能，可篩選出高效、無公害、綠色的防治害蟲的防治靶標位點[4-7]。高通量測序技術的快速發(fā)展，極大促進了昆蟲基因組、轉(zhuǎn)錄組，特別是無參考基因組信息的昆蟲基因組學研究。尤其是轉(zhuǎn)錄組測序技術具備在特定時間段、較全面地記錄某一物種轉(zhuǎn)錄活動，并快速獲得其全轉(zhuǎn)錄組信息的特點，其操作簡單高效便捷，是非模式昆蟲基因挖掘、功能鑒定以及遺傳多樣性分析的一種有效手段[8-10]。目前，通過轉(zhuǎn)錄組基因測序技術，在昆蟲化學感受系統(tǒng)、滯育、抗性等領域均取得快速進展，并在昆蟲基因差異表達、功能基因發(fā)現(xiàn)挖掘等方面均有較好應用，特別是檢測到較多與昆蟲嗅覺相關的基因[11-12]?！颈狙芯壳腥朦c】基于轉(zhuǎn)錄組測序技術，鑒定并篩選春尺蠖嗅覺相關基因，對其進行基因注釋和系統(tǒng)進化分析?！緮M解決的關鍵問題】明確參與調(diào)控春尺蠖嗅覺系統(tǒng)對氣味化合物的識別蛋白，探明嗅覺識別機理，為進一步闡明春尺蠖有關生理行為，進行藥劑研發(fā)和綠色防控提供分子生物學基礎。

1 材料與方法

1.1 供試昆蟲

試驗昆蟲來源于內(nèi)蒙古烏拉特前旗人工檸條草場(108°45′23.63″E、40°46′4.19″N)，2019年冬季將春尺蠖越冬蛹置于恒溫[(22±1)℃]、光周期L：D=18 h：6 h、相對濕度55%～59% 條件下的人工氣候箱中培養(yǎng)，待春尺蠖羽化后，分別選取羽化第3天大小相同、活力充沛的雌、雄蛾成蟲各5頭，用液氮速凍后置于-80 ℃冰箱中備用。

1.2 RNA提取與質(zhì)檢

采用Trizol Reagent(Invitrogen,Carlsbad，CA，USA)方法分別提取上述春尺蠖雌、雄成蟲樣品的總RNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA質(zhì)量。RNA檢測分別采用NanoPhotometer spectrophotometer(IMPLEN，CA，USA)和Agilent 2100 bioanalyzer(Agilent Technologies，CA，USA)精確檢測RNA樣品的純度和完整性，來保證轉(zhuǎn)錄組測序?qū)悠返囊蟆?/p>

1.3 cDNA文庫構建與測序

利用真核生物mRNA中多含有polyA尾的特征，取檢測合格的RNA樣品1.5 μg，加入Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，而后加入試劑破碎緩沖劑(fragmentation buffer)，已富集的mRNA被打斷成多個短小的片段，隨后以其為模板，加入六堿基隨機引物(random hexamers)和緩沖液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I等原料先后合成cDNA第1和2鏈；合成的cDNA雙鏈經(jīng)AMPure XP 磁珠純化，而后修復其末端并加A尾及測序接頭，再次利用AMPure XP 磁珠選擇cDNA片段。經(jīng)PCR富集構建的cDNA文庫合格后，采用Illumina Hiseq 2500平臺進行測序。

1.4 序列組裝和基因注釋

高通量測序獲得的原始數(shù)據(jù)中包含少量帶有測序接頭或測序質(zhì)量較低的讀數(shù)(reads)，為了保證數(shù)據(jù)分析的質(zhì)量及可靠性，需要對原始數(shù)據(jù)中帶接頭(adapter)、含N(N表示無法確定堿基信息)和低質(zhì)量reads(Qphred≤20的堿基數(shù)占整個read長度的50%以上的reads)經(jīng)過原始數(shù)據(jù)過濾、測序錯誤率檢查、GC含量分布檢查，獲得后續(xù)分析使用的高質(zhì)量讀數(shù)(clean reads)。利用轉(zhuǎn)錄組de novo組裝軟件Trinity對clean reads進行組裝，clean reads被組裝得到的集合為該物種的Unigenes，為了獲取全面的基因功能信息，使用BLAST軟件將序列信息與Nr，Nt，Pfam，KOG，Swiss-prot，KEGG和GO七大公共數(shù)據(jù)庫進行比對(設定e值<10-5)從而獲取該Unigenes序列的蛋白功能注釋信息。

1.5 春尺蠖嗅覺相關基因的鑒定與序列比對

結(jié)合轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的基因功能注釋和blastp結(jié)果，鑒定出嗅覺相關蛋白基因，同時利用DNAMAN 6.0 軟件對蛋白序列進行多重序列比對。

1.6 春尺蠖嗅覺相關基因的系統(tǒng)進化分析

利用MEGA 6.0軟件中的鄰接法(Neighbor-Joining)構建系統(tǒng)進化樹，p距離，重復運行1000次。

2 結(jié)果與分析

2.1 春尺蠖Illumina測序與組裝

經(jīng)Illumina HiSeq 2500高通量測序平臺上機測序后，共產(chǎn)生48 893 742 條原始讀數(shù)(raw reads)(雌蟲23 367 873條，雄蟲25 525 869條，表1)，經(jīng)處理后，共獲得46 510 487條chean reads，數(shù)據(jù)共計13.95 GB(GenBank登錄號：PRJN648143)，春尺蠖雌、雄成蟲兩樣品的Q30(堿基正確識別率為99.9%)百分比均≥ 93.68%，GC含量均≥43.51%。

為了使轉(zhuǎn)錄本更加準確、可靠，將測序所得序列經(jīng)Trinity軟件對其拼接、組裝，共得到Unigenes 37 542 條，平均長度為1328 bp，N50長度為2241 bp；拼接出的Unigenes大多數(shù)長度分布在300～1000 bp，其中，長度在 301～1000 bp的Unigenes為22 980條，占比61.21%，長度大于1000 bp的 Unigenes為14 562 條，占比 38.79%(表2)。從上述轉(zhuǎn)錄組測序和組裝結(jié)果來看，測序質(zhì)量較高、序列組裝的完整性較好。

2.2 轉(zhuǎn)錄組基因注釋及功能分類

將組裝好的Unigenes 分別與Nr、Nt、Pfam、KOG、Swiss-prot、KEGG和GO七大據(jù)庫比對分析(表3)，注釋到Nr數(shù)據(jù)庫13 757條，占比36.64%，數(shù)量最多；注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫5444條，占比14.5%，數(shù)量最少；至少成功注釋到一個數(shù)據(jù)庫的Unigenes數(shù)量為17 296條。

表1 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計

表2 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組組裝質(zhì)量統(tǒng)計

表3 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組基因注釋統(tǒng)計

在Nr數(shù)據(jù)庫的注釋結(jié)果中對Unigenes的物種分布統(tǒng)計(圖1)顯示，春尺蠖轉(zhuǎn)錄組Unigenes注釋到的物種涉及233種，其中與斜紋夜蛾Spodopteralitura(2237個，占16.3%)，棉鈴蟲Helicoverpaarmigera(2107個，占15.3%)注釋到的基因信息較多，均在2000個以上。在34個物種中注釋到的基因信息均在10個以上，其余物種注釋到的信息均在個位數(shù)。

圖1 Nr數(shù)據(jù)庫中注釋的春尺蠖Unigenes的物種分布Fig.1 Species distribution of Apocheima cinerariusunigenes in the Nr database

2.3 Unigenes功能分類

春尺蠖轉(zhuǎn)錄組中共有11 174個Unigenes 分別被注釋到GO數(shù)據(jù)庫中的細胞組分(Cellular component)、分子功能(Molecular function)和生物過程(Biological process)3大類的55個功能組(圖2)。在細胞組分中，細胞部分(Cell part)和細胞(Cell)所注釋到的Unigenes數(shù)量最多，均為3557個；在分子功能中，在結(jié)合(Binding)組中注釋到的Unigenes數(shù)量最多，為6199個，其次為催化活性(Calytic activities)，為4483個；在生物過程中，細胞過程(Cellular process)組中注釋到的Unigenes數(shù)量最多，共有6418個，其次為代謝過程(Metabolic processes)，為5569個。

圖2 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組Unigenes GO功能注釋Fig.2 Annotated Unigenes in the transcriptome of Apocheima cinerarius in GO database

根據(jù)基因參與的KEGG代謝通路分為5個分支：A.細胞過程(運輸和分解代謝,細胞群,細胞運動,細胞生長和死亡); B.環(huán)境信息處理(膜運輸,信號轉(zhuǎn)導,信號分子和相互作用); C.遺傳信息處理(折疊、分類和降解,復制和修復,轉(zhuǎn)錄,翻譯); D.代謝(氨基酸代謝,其它次生代謝產(chǎn)物的生物合成,碳水化合物代謝,能量代謝,糖生物合成與代謝,脂肪代謝,輔助因子和維生素的代謝,其它氨基酸的代謝,萜類和多酮的代謝,核苷酸代謝,槪貌,生物降解和代謝); E.有機系統(tǒng)(循環(huán)系統(tǒng);發(fā)育,消化系統(tǒng),內(nèi)分泌系統(tǒng),環(huán)境適應,排泄系統(tǒng),免疫系統(tǒng),神經(jīng)系統(tǒng),細分為感官系統(tǒng)) According to the KEGG metabolic pathway involved by genes,it can be divided into five branches: A.Cellular Processes(Transport and catabolism; Cellular commiunity; Cell motility; Cell growth and death)；B.Environmental Information Processing(Membrane transport; Signal transduction;Signaling molecules and interaction)；C.Genetic Information Processing(Folding,sorting and degradation;Replication and repair;Transcription;Translation); D.Metabolism(Amino acid metabolism; Biosynthesis of other secondary metabolites; Carbohydrate metabolism; Energy metabolism;Glycan biosynthesis and metabolism; Lipid metabolism;Metabolism of cofactors and vitamins;Metabolism of other amino acids; Metabolism of terpenoids and polyketides; Nucleotide metabolism; Overvivew;Xenobiotics biodegradation and metabolism)；E.Organismal Systems(Circulatory system; Development;Digestive system; Endocrine system;Environmental adaptation;Excretory system; Immune system; Nervous system; Sensory system)圖3 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組KEGG 代謝通路Fig.3 KEGG pathways in the transcriptome of Apocheima cinerarius

為了與生物學現(xiàn)象相關聯(lián)，對其進行科學的解釋，將Unigenes與KEGG數(shù)據(jù)庫比對分析，共發(fā)現(xiàn)有5444個基因注釋到230個代謝通路，其歸屬于細胞過程(A，Cellular Processes)，環(huán)境信息處理(B，Environmental Information Processing)，遺傳信息處理(C，Genetic Information Processing)，代謝(D，Metabolism)，有機系統(tǒng)(E，Organismal Systems) 5個分支(圖3)，其中，注釋到代謝分支上的基因數(shù)最多，為1674個，其次為有機系統(tǒng)，為1494個，其余分支注釋上的基因均小于1000個，而細胞過程分支上注釋到的基因數(shù)最少，只有780個。

2.4 春尺蠖嗅覺相關基因的鑒定與序列分析

從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中共發(fā)現(xiàn)注釋信息為嗅覺相關基因70個，包括22個OBPs、23個CSPs、14個ORs(包括13個普通受體和1個共受體ORco)，8個IRs和3個SNMPs(表4)。

對鑒定得到22個氣味結(jié)合蛋白(OBPs)基因，命名為AcinOBP1～AcinOBP22。從序列比對分析(圖4)得知，除AcinOBP3、AcinOBP7、AcinOBP19和AcinOBP21～AcinOBP22外，其余17個OBP均具有完整的開放閱讀框(ORF)，其中AcinOBP1、AcinOBP2、AcinOBP4～AcinOBP6、AcinOBP9～AcinOBP11、AcinOBP12～AcinOBP13、AcinOBP16～AcinOBP17、AcinOBP20具有6個保守的半胱氨酸，屬于Classic OBP；AcinOBP8、AcinOBP14和AcinOBP18均缺少第2和第5個半胱氨酸，具有4個保守的半胱氨酸，屬于Minus-C。鑒定得到的22個OBPs氨基酸一致性為18.35%。鑒定得到23個化學感受蛋白基因(CSPs)基因(圖5)，命名為AcinCSP1～AcinOBP23，所有的CSPs均具完整的ORF，同時包含4個保守的半胱氨酸，序列一致性為18.15%。

表4 春尺蠖轉(zhuǎn)錄組中與嗅覺相關基因統(tǒng)計

陰影部分C表示保守的半胱氨酸殘基Shaded part C indicates cysteine residues圖4 春尺蠖OBPs基因氨基酸序列比對Fig.4 Alignment of amino acid sequences of OBPs of Apocheima cinerarius

陰影部分 C 表示半胱氨酸殘基Shaded part C indicates cysteine residues圖5 春尺蠖CSPs基因氨基酸序列比對Fig.5 Alignment of amino acid sequences of CSPs of Apocheima cinerarius

2.5 春尺蠖嗅覺相關基因系統(tǒng)進化分析

本研究將春尺蠖與茶尺蠖Ectropisoblique、國槐尺蠖Semiothisacinerearia、家蠶Bombyxmori、亞洲玉米螟Ostriniafurnacalis4種同鱗翅目昆蟲共計139個OBPs構建了系統(tǒng)進化樹(圖6)。春尺蠖全部22個OBPs集中聚在同一分支上，卻沒有與同為尺蛾科的茶尺蠖和國槐尺蠖聚為一類。相反，茶尺蠖和國槐尺蠖各個OBPs卻分別聚在一支上。

從春尺蠖CSPs基因與茶尺蠖、國槐尺蠖、家蠶、亞洲玉米螟 4種同鱗翅目昆蟲的96個CSPs構建的系統(tǒng)進化樹結(jié)果中可以看出，春尺蠖與茶尺蠖形成了清晰的直系同源譜系，共有9對CSPs聚到同一分支上，包括AcinCSP2/EoblCSP15、AcinCSP3/EoblCSP6、AcinCSP8/EoblCSP10、AcinCSP10/EoblCSP7、AcinCSP12/EoblCSP8、AcinCSP14/EoblCSP21、AcinCSP15/EoblCSP9、AcinCSP18/EoblCSP1、AcinCSP23/EoblCSP11。

OBP蛋白來源物種:茶尺蠖(EoblOBP)， 國槐尺蠖(ScinOBP),家蠶(BmorOBP),亞洲玉米螟(OfurOBP)Sources species of OBP proteins:Ectropis oblique(EoblOBP),Semiothisa cinerearia(ScinOBP),Bombyx mori(BmorOBP),Ostrinia furnacalis(OfurOBP)圖6 春尺蠖OBPs 的系統(tǒng)進化樹Fig.6 Phylogenetic tree of OBPs in Apocheima cinerarius

CSP蛋白來源物種: 茶尺蠖(EoblCSP)，國槐尺蠖(ScinCSP)，家蠶(BmorCSP)，亞洲玉米螟(OfurCSP)Source species of CSP proteins: Ectropis oblique(EoblCSP),Semiothisa cinerearia(ScinCSBP),Bombyx mori(BmorCSP),Ostrinia furnacalis(OfurCSP)圖7 春尺蠖CSPs系統(tǒng)進化樹Fig.7 Phylogenetic tree of CSPs in Apocheima cinerarius

3 討 論

目前，模式生物基因組測序技術日趨完善，其參考序列已被更好的應用于個體研究中，但非模式生物由于缺乏基因組信息參考，傳統(tǒng)的克隆研究方法限制了其在分子生物學領域的發(fā)展速度。隨著高通量測序技術的進步，測序成本逐漸降低，轉(zhuǎn)錄組測序技術成為非模式生物挖掘功能基因的最有效途徑[8]。與傳統(tǒng)的克隆方法相比，這些新技術簡單、高效、省時[13-15]。在轉(zhuǎn)錄組測序效果分析中，一般認為，N50長度越長，數(shù)據(jù)組裝的完整性越好；Q30大于80%，測序質(zhì)量可靠[16]。本研究對春尺蠖雌雄成蟲進行轉(zhuǎn)錄組測序并進行數(shù)據(jù)組裝，共獲取37 542條Unigenes，測序樣本的Q30均≥93.68%，N50長度為2241 bp，較好滿足后續(xù)轉(zhuǎn)錄組分析要求，可為后續(xù)基因注釋及生物信息學分析提供可靠保證，同時為獲取更多的新基因提供了可能。

通常認為，非模式生物的基因注釋方法一般包括：Nt數(shù)據(jù)庫比對注釋唯一基因、進行Nr、Swiss-prot等數(shù)據(jù)庫比對注釋GO基因、進行KEGG等數(shù)據(jù)庫等比對注釋KEGG代謝途徑等[17]。本研究對春尺蠖轉(zhuǎn)錄組所有組裝獲得的Unigenes進行功能注釋，共有17 296(46.07%)條被成功注釋到Nr、Nt、Pfam、KOG、Swiss-prot、KEGG和GO等7大公共據(jù)庫，其中注釋到Nr數(shù)據(jù)庫13 757條，數(shù)量最多，占比36.64%，這與大多數(shù)昆蟲在Nr數(shù)據(jù)庫中的Unigenes注釋結(jié)果類似，如楊爽等[18]在鱗翅目螟蛾科大蠟螟觸角轉(zhuǎn)錄組的研究中Nr數(shù)據(jù)庫注釋到Unigenes的比例最高，為41.82%。

一般情況，大量基因序列沒有獲得注釋，可能是由于序列片段長度過短而無法獲取同源比對結(jié)果，屬于非編碼序列或新基因以及比對的參考基因組不夠豐富[19-21]。本研究發(fā)現(xiàn)春尺蠖轉(zhuǎn)錄組注釋中發(fā)現(xiàn)，還有20 246條(53.93%)未獲得注釋，這與宋月芹等[22]在錘脅蹺蝽Yemmasignatus觸角轉(zhuǎn)錄組分析中發(fā)現(xiàn)相似，即錘脅蹺蝽觸角轉(zhuǎn)錄組在至少在一個數(shù)據(jù)庫里注釋成功的46 224條(40.02%)，還有69 267條(59.98%)基因未注釋。孟翔等[23]在鱗翅目細蛾科荔枝蒂蛀蟲轉(zhuǎn)錄組的研究中發(fā)現(xiàn)在7大數(shù)據(jù)庫中至少 1 條數(shù)據(jù)庫注釋成功的Unigenes 有 22 348條,占總Unigenes 數(shù)的32.39%。原因之一可能是上述研究中獲取的Unigenes片段較短，有相當大的比例在300 bp以下，但本研究獲得的Unigenes片段均在300 bp以上，同時鱗翅目昆蟲家蠶、棉鈴蟲、斜紋夜蛾和煙芽夜蛾等均為已知基因組物種，同源序列比對的參考基因組信息較為豐富，因此，推測測序未獲注釋的主要原因為序列屬于非編碼序列或新基因。

多數(shù)轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明，注釋到Unigenes數(shù)最多的往往是已知基因組親緣關系最近的物種[24]，如扶桑綿粉蚧Phenacoccussolenopsis、黃粉蟲Tenebriomolitor及梨小食心蟲Grapholithamolesta[25-28]。但本研究中得出的結(jié)果卻不同，同源比對上基因數(shù)最多的是同為鱗翅目已知基因組的斜紋夜蛾Spodopteralitura(2237個，16.3%)，而非同為尺蠖蛾科未知基因組的茶尺蠖Ectropisoblique(比對數(shù)僅有38條)，可能是因為親緣關系更近的茶尺蠖還未獲得基因組序列，與已知基因組序列的鱗翅目昆蟲相比已知的基因序列信息過少導致，且已有茶尺蠖基因序列大多為單個組織測序所得，而本研究的基因則是以成蟲測序獲得，所以比對基因的數(shù)目較少。

近年來，隨著高通量測序技術的快速發(fā)展，國內(nèi)外許多學者通過轉(zhuǎn)錄組測序鑒定得到大量嗅覺相關基因[11,18,22,29-32]。本研究通過高通量測序技術對春尺蠖進行轉(zhuǎn)錄組測序，結(jié)合基因功能注釋，春尺蠖Unigenes分別被注釋到GO數(shù)據(jù)庫中的細胞組分、分子功能和生物過程3大類的55個功能組，其中注釋生物過程和分子功能的Unigenes較多，在細胞過程組中注釋到的Unigenes數(shù)量最多，共有6418個，其次為結(jié)合組中注釋到的Unigenes數(shù)量最多，為6199個，與大多數(shù)昆蟲嗅覺基因轉(zhuǎn)錄組研究結(jié)果一致，但不同來源的測序材料在GO數(shù)據(jù)庫中注釋到的Unigenes歸類有所不同，這與器官之間的功能差異相關[33]。blastp驗證結(jié)果，深度挖掘共獲取70個與春尺蠖嗅覺相關的靶標基因，包括22個OBPs，23個CSP，14個ORs(包括13個普通受體，和1個共受體ORco)，8個IRs和3個SNMPs。本研究獲得的70個靶標基因中CSP的占比較高(32.85%)，這比其他觸角中研究得出的CPS基因占比偏高[34]，這可能由于化學感受蛋白在觸角等化學感受器官中廣泛表達，還在非化學感受器官中也有表達。在已獲取的鱗翅目昆蟲基因組和轉(zhuǎn)錄組信息中也發(fā)現(xiàn)各種類型的嗅覺相關基因。如小菜蛾Plutellaxylostella成蟲觸角轉(zhuǎn)錄組中共發(fā)現(xiàn)25個OBPs、15個CSPs、54個ORs和16個IRs；二化螟Chilosuppressalis成蟲觸角轉(zhuǎn)錄組中共鑒定出26個OBPs、21個CSPs、47個ORs和20個IRs[35]。相比上述鱗翅目昆蟲的轉(zhuǎn)錄組研究結(jié)果，本研究中鑒定到的春尺蠖嗅覺相關基因大部分均在合理范圍之內(nèi)，而OR和IR數(shù)量偏少。這可能是因為其它昆蟲的嗅覺相關基因是從觸角中轉(zhuǎn)錄組中鑒定出來的，而春尺蠖嗅覺相關基因是從成蟲轉(zhuǎn)錄組中得到的，很多在觸角中低表達水平的受體基因無法被檢測到。

在本研究中構建的春尺蠖與國槐尺蠖、家蠶、茶尺蠖、亞洲玉米螟的OBPs和CSPs系統(tǒng)進化樹結(jié)果中，22個AcinOBP全部聚在一個分支上，說明春尺蠖AcinOBP屬于直系同源基因，在嗅覺識別中發(fā)揮類似的功能[36]。從CSPs進化分析結(jié)果可以看出，春尺蠖與茶尺蠖親緣關系最近，其9個CSPs與茶尺蠖成對聚在同一分支，表明二者在感受外界環(huán)境中具有類似的感受系統(tǒng)。

4 結(jié) 論

本研究通過高通量測序技術，對春尺蠖雌雄成蟲轉(zhuǎn)錄組基因進行Unigenes注釋及蛋白功能分析，將其Unigenes注釋到GO數(shù)據(jù)庫的3大類的55個功能組、經(jīng)KEGG數(shù)據(jù)庫對比分析后形成了230個代謝通路，共獲取嗅覺相關基因70個，并將注釋的相關基因與4種春尺蠖的代表性近緣昆蟲進行系統(tǒng)進化分析，基于轉(zhuǎn)錄組信息驗證了與茶尺蠖清晰的直系同源譜系關系，為今后深入研究其嗅覺識別作用機理奠定了基因信息基礎，為運用嗅覺基因的轉(zhuǎn)錄組學研究結(jié)果，應用于春尺蠖預期防治提供了理論依據(jù)。