杜 超，卓秋琪

1.山東羅欣藥業(yè)集團股份有限公司(山東 臨沂 276000)

2.深圳萬樂藥業(yè)有限公司(廣東 深圳 518000)

鹽酸苯達莫司汀，4-{5-[雙-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酸鹽，是水溶性雙功能烷化藥物。其機制是通過烷基化，使DNA的單鏈與雙鏈交聯，干擾DNA的功能與合成，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。鹽酸苯達莫司汀合成是20世紀60年代一位德國科學家提出，并在苯丁酸氮芥的基礎上進行改造，從而擁有3個活性基團，其獨特的結構使其具有烷基化和抗代謝雙重治療作用[1-5]。雖然目前國內多家醫(yī)藥公司已對鹽酸苯達莫司汀進行仿制與研究。但其使用與推廣的程度卻遠遠不夠。相對于其它化療藥物，鹽酸苯達莫司汀及其制劑產品價格更加低廉，在醫(yī)藥市場的競爭下更具優(yōu)勢[6-13]。

目前鹽酸苯達莫司汀相關研究主要涉及藥理、臨床療效以及體內代謝的研究而體外質量研究的相關報道較少。同時，在本產品的制備工藝中，殘留溶劑是檢驗成品質量優(yōu)劣的一個重要指標。在殘留溶劑檢驗方法中，氣相色譜法(GC)具有準確度高、分析速度快、操作簡便且檢測數據直觀、清晰等優(yōu)勢。所以建立測定鹽酸苯達莫司汀中殘留溶劑的頂空氣相色譜法(HS-GC)，以便有效檢測其殘留量情況，確保產品安全性[14-18]。

1 儀器與試劑

1.1主要儀器電子天平(METTLER TOLEDO，型號：XP205)；氣相色譜儀(Agilent Technologies Inc，型號：Agilent 7890A)。

1.2主要試劑鹽酸苯達莫司汀(批號：Y191201、Y191202、Y191203，廠家：深圳萬樂藥業(yè)公司)；二甲基亞砜(Fisher Chemical，批號：170606)；甲醇(Fisher Chemical，批號：182704)；乙醇(Merck，批號：K50144627815)；二氯甲烷(OCEANPAK ALEXATIVE CHEMICAL，批號：Di0010798)乙酸乙酯(Fisher Chemical，批號：166509)；四氫呋喃(Avantor Performance Materials，批號：0000186814)。

2 方法與結果

2.1色譜條件Agilent DB-624毛細管柱為色譜柱；流速1.0 mL/min；分流比10∶1；起始溫度40 ℃，維持4 min，以30 ℃/min的速率升溫至180 ℃，維持10 min；檢測器為火焰離子化檢測儀(FID)；檢測器溫度250 ℃；進樣口溫度220 ℃；平衡溫度80 ℃，平衡時間30 min。

2.2溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取鹽酸苯達莫司汀0.2 g，置頂空瓶中，加二甲基亞砜(DMSO)2 mL溶解，即得。

2.2.2 對照品溶液 分別稱取甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯與四氫呋喃各適量，加DMSO稀釋制成每1 mL中含甲醇300 μg、乙醇500 μg、二氯甲烷60 μg、乙酸乙酯500 μg、四氫呋喃72 μg的混合貯備溶液。取1 mL貯備液至10 mL量瓶中，并用DMSO定容至刻度，即得。

2.3專屬性試驗和系統(tǒng)適用性分析按“2.2.1”項制備對照品溶液，取空白溶劑(即DMSO)和對照品溶液各2 mL，分別置頂空瓶中，密封，記錄圖譜，考察系統(tǒng)適用性和測定方法的專屬性(表1，圖1～2)，分離度>1.5即為合格。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯與四氫呋喃5種有機溶劑在確定的毛細管氣相色譜條件下獲得良好地分離，溶劑DMSO不存在干擾5種殘留溶劑測定的成分，樣品中其它成分也不影響相應5種殘留溶劑的檢測結果。各相鄰色譜峰的分離度分別為9.84、13.74、19.36、2.80、52.20；5種有機溶劑的理論塔板數分別為14 867、21 328、38 620、143 959、147 040。

圖1 溶劑DMSO氣相典型色譜圖

圖2 對照品溶液氣相典型色譜圖

表1 對照品溶液氣相數據

2.4線性、定量限、檢測限分析按“2.2.2”項制備混合溶劑貯備溶液，依次精密量取0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分別置于10 mL量瓶中，定容至刻度，取2 mL置頂空瓶中，密封，分析，結果顯示各殘留溶劑在各濃度范圍內線性關系良好，見表2。按“2.2.2”項制備混合溶劑貯備溶液，取上述各貯備溶液，逐級稀釋，當S/N≥10時，即為定量限，當S/N≥3時，即為檢測限，見表2。其試驗結果符合測定結果。

表2 5種殘留溶劑線性關系、定量限、定量限試驗結果

2.5準確度分析精密稱取樣品1.0 g共9份，分別至10 mL量瓶中，分別精確移取0.8、0.8、0.8、1.0、1.0、1.0、1.2、1.2、1.2 mL線性貯備液(含甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃分別為3.01，5.01，0.61，5.01，0.73 mg/mL)至各量瓶中，定容至刻度。取2 mL置頂空瓶中，密封，分析，各殘留溶劑的RSD在0.40%～0.90%之間，符合準確度的要求，見表3。

表3 鹽酸苯達莫司汀回收率試驗結果

2.6精密度

2.6.1 日內、日間精密度 按“2.2”項下制備混合溶劑貯備溶液，取2 mL置頂空瓶中，連續(xù)進樣6次，記錄圖譜，連續(xù)3 d，同法操作，日內精密度(共3 d)5種殘留溶劑的RSD分別為0.52%、0.78%、1.14%、1.13%、1.08%，符合日內精密度RSD<2.0%的要求，見表4～6。

表4 日內精密度試驗結果(第1 d)

表5 日內精密度試驗結果(第2 d)

表6 日內精密度試驗結果(第3 d)

2.6.2 重復性 精密稱取本品約1.0 g，共6份，分別置于10 mL量瓶中，并依次加入“2.2.2”項下混合對照品貯備液各1 mL，混勻并定容至刻度。量取供試液2 mL，頂空進樣，記錄圖譜，結果顯示，各殘留溶劑的RSD均<2.0%，重復性良好，見表7。

表7 鹽酸苯達莫司汀重復性試驗結果

2.7耐用性分析將原始色譜條件中的一項改動，柱溫設定為(40±2) ℃，流速調為(1.0±0.2)mL/min；進樣口溫度設定為(220±10) ℃，分流比設定為(10±2)∶1；檢測器溫度設定為(250±10)℃；頂空瓶平衡溫度設定為(80±5)℃；將原始色譜條件中的色譜柱DB-624(320 μm×30 m，0.18 μm)更換為ZB-624(530 μm×30 m，3.00 μm)，然后對樣品進行測定，結果顯示當設定的色譜條件略有變化時，各成分相對保留時間，理論塔板數基本穩(wěn)定，且各成分分離度良好，該法耐用性良好，見表8。

表8 鹽酸苯達莫司汀耐用性分析

2.8供試品中殘留溶劑的測定按“2.1”項下色譜條件與測定法，進行測定，結果顯示3批供試品中各殘留溶劑均未檢出，此法適用于鹽酸苯達莫司汀的殘留溶劑的檢查。

3 討論

化學原料藥的合成過程中不可避免會使用各種有機溶劑溶解各種反應原料，有時選擇合適的溶劑還可在產品精制過程提高產量、決定藥物的純度、晶型。然而，有機溶劑殘留在藥物中，如果超出安全閾值時，就會對人體產生危害。根據該方法的檢測結果，原料藥合成過程中使用的有機溶劑均未檢出，符合中國藥典對有機殘留物的要求，可為藥品的生產上市提供有效技術支持。

對于色譜柱的選擇，本次測定中因5種有機溶劑極性相差較大，且為使待測溶劑得到最大兼容和讓系統(tǒng)適應性得到最優(yōu)化，故選擇中性色譜柱(DB-624)。

對于平衡溫度的選擇，為了兼顧效率和靈敏度，一般選擇被測有機溶劑沸點偏高的溫度作為平衡溫度。本實驗5種溶劑，沸點約在39.75～78.5 ℃，本研究選擇了80 ℃作為平衡溫度。平衡時間，只需所有溶劑峰面積增加并趨于平緩時即可；對于空白溶劑的選擇，為了準確測定各殘留溶劑含量，需選擇原料藥(API)和待測溶劑能夠完全溶解的溶劑，并且不干擾其他色譜峰。DMSO具有極性高、沸點高、熱穩(wěn)定性好，可溶于大多數有機物質。同時，在測定時并不干擾其他主成分，因此選擇DMSO作為溶劑。

本實驗建立的HS-GC準確、靈敏，可用于鹽酸苯達莫司汀中殘留溶劑的測定。