徐偉君，王 娟，馮 利，代霞霞

(西安文理學(xué)院，陜西 西安 710065)

大葉女貞(Ligustrumcompactum)屬木犀科女貞屬，為落葉或常綠、半常綠的灌木、小喬木或喬木[1～3]。根系發(fā)達(dá),適應(yīng)性強(qiáng)，可抗氯氣、二氧化硫和氟化氫等有毒氣體[4]，具有很高的綜合利用價(jià)值，是目前園林造景和城市綠化的主要樹(shù)種之一。本文通過(guò)對(duì)大葉女貞幼嫩莖段進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)條件的探索，以期為大葉女貞再生體系的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 外植體材料

以大葉女貞的幼嫩莖段和幼嫩葉片為外植體。

1.2 培養(yǎng)基1.3 方法

1.3.1 消毒方法 分別用75%酒精浸泡15s + 1.0%次氯酸鈉浸泡20min、75%酒精浸泡30 s+0.1%升汞溶液浸泡6 min + 1.0%次氯酸鈉浸泡10 min這兩種不同的組合對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理，消毒后用無(wú)菌水沖洗4遍。將幼嫩莖段切成1 cm左右，葉片切成0.5*0.5 cm大小接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。1周后統(tǒng)計(jì)污染情況。

表1 培養(yǎng)基成分

以上7種培養(yǎng)基的pH均調(diào)至6.0～6.5之間,蔗糖含量為25 g/L, 瓊脂7 g/L。以C為對(duì)照。

1.3.2 愈傷組織誘導(dǎo) 利用本試驗(yàn)篩選的較適宜的方法消毒后，將嫩莖切成 1 cm長(zhǎng)，葉片切成 0.5*0.5 cm大小，分別接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

2 結(jié)果與分析2.1 不同消毒方式的污染情況

1周后統(tǒng)計(jì)污染率，如表2所示， 75%酒精浸泡30s+0.1%升汞溶液浸泡6min+1.0%次氯酸鈉浸泡10min滅菌效果更好，污染率僅有4%。

表2 不同消毒方式的消毒效果

2.2 不同外植體的愈傷組織誘導(dǎo)情況

使用兩種不同的外植體在最適植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合的培養(yǎng)基MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)的萌動(dòng)情況及分析如下：

接種后培養(yǎng)15d ,幼嫩葉片稍有些卷曲或隆起,幼嫩莖段兩端開(kāi)始膨大。培養(yǎng)25 d左右, 在幼嫩莖段切口處產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的愈傷組織,愈傷組織均呈白色或淺綠色。

表3 不同外植體的愈傷組織萌動(dòng)情況

使用幼嫩莖段作為外植體時(shí)，愈傷組織萌動(dòng)所需時(shí)間較少，最短只需13d就形成愈傷組織，30d時(shí)的出愈率為86.0%；而幼嫩葉片卻需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能形成愈傷組織，且褐化嚴(yán)重。

2.3 不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

由表4可知，不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)存在差別: 在A1的培養(yǎng)基上愈傷組織生長(zhǎng)緩慢且出愈率較低。在A2的培養(yǎng)基上相對(duì)出愈率較高, 并且愈傷組織顏色呈綠色, 較疏松，后期生長(zhǎng)慢。在A3的培養(yǎng)基上愈傷組織玻璃化嚴(yán)重。在B1的培養(yǎng)基上愈傷組織生長(zhǎng)緩慢且玻璃化嚴(yán)重。在B2上的愈傷組織生長(zhǎng)較好，為白色或淡綠色,且較為致密。

表4 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合的培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.4 不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)愈傷組織繼代培養(yǎng)的影響

將誘導(dǎo)形成的胚性愈傷組織分別接種于A2和B2培養(yǎng)基上，繼代培養(yǎng)15后的結(jié)果。在A2培養(yǎng)基上形成了大量的松散愈傷，而B(niǎo)2培養(yǎng)基繼代形成的愈傷組織更加致密，胚性愈傷組織所占比例更大。

3 結(jié)論

雖然植物細(xì)胞具有全能性[5]，但是不同部位的再生的難易程度不同。選用條件方便、效果好的部位可以降低組織培養(yǎng)的難度，尤其莖尖的生長(zhǎng)勢(shì)和分化率都優(yōu)于莖段[6]。但是林木的莖尖培養(yǎng)比較困難[7]，而幼嫩的莖段更容易培養(yǎng)[8]。本文以幼嫩的莖段和子葉為試材，結(jié)果發(fā)現(xiàn)愈傷組織誘導(dǎo)的最適外植體為幼嫩的莖段，而幼嫩葉片在培養(yǎng)過(guò)程中容易卷曲；在本試驗(yàn)中，MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D為最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基。此外，由于大葉女貞的嫩莖帶有葉片，在剪去葉片生后留下的葉腋處容易殘留污染源，只有用多種消毒方式結(jié)合才能有效地降低污染率，本文中較適宜的消毒處理是30s 75%酒精+6 min 0.1%升汞+10 min 1.0%次氯酸鈉的組合。