胡佳敏，袁慧情，劉思溢，侯鑒基，梁少華，羅 輝,,3，吳斌華,,3*（.廣東省天然藥物研究與開發(fā)重點實驗室；.廣東湛江海洋醫(yī)藥研究院；3.南方海洋科學與工程廣東省實驗室（湛江），廣東湛江 5403）

方格星蟲（Sipunculus nudus），俗稱沙蟲，肉質(zhì)鮮美，富含多種蛋白質(zhì)、多種氨基酸和微量元素，藥食兩用[1]。我國藥典記載了其藥用價值，被稱為“海洋冬蟲夏草”，具有滋陰降火、清肺補虛以及補腎養(yǎng)顏等功能，可治療骨蒸潮熱、陰虛盜汗、肺虛咳喘等癥狀，對治療肺癆咳嗽、神經(jīng)衰弱、小兒脾虛與腎虧而夜尿頻繁等均有效果，民間常用于治療小兒夜間遺尿（驗方）[2-3]。中藥經(jīng)鹽灸制法炮制常具有提高功效的作用[4-5]。本研究將方格星蟲進行鹽炙，觀察其是否能提高水負荷大鼠的縮尿功能，并將其與市售的縮泉丸進行比較，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

SPF 級雄性大鼠體質(zhì)量為180～220 g（由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，動物合格證編號為No.44007200078821）；賽多利斯QUINTIX224-1CN分析天平；SL-100 高速多功能粉碎機（浙江省永康市松青五金廠）；UPH-Ⅱ-10T優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)（成都超純科技有限公司）；縮泉丸（吉林龍鑫藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：191002022）；方格星蟲干制品購于湛江東風市場；羧甲基纖維素鈉購于廊坊森軒纖維素有限公司；5 號篩購于言錦絲網(wǎng)加工廠；代謝籠由廣東醫(yī)科大學藥理教研室研制；LP-C30001 電子天平，通感0.1g（昆山優(yōu)科維特電子科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 動物培養(yǎng)及篩選 SD 大鼠由廣東醫(yī)科大學海洋醫(yī)藥研究院動物房飼養(yǎng)。動物房溫度保持在20～25 ℃，采用光照定時裝置（12 h光照，12 h黑暗），鼠糧每天按照100 g/只，每天及時補充食用水。水負荷多尿模型：實驗前12～18 h禁食不禁水，按體質(zhì)量灌胃生理鹽水22 mL/kg，收集2 h尿液，凡尿量超過灌注體積的40%者即為合格[6]。

1.2.2 藥物的配制 操作依據(jù)相關(guān)文獻[7]，將蟲體干燥、粉碎，過5 號篩將粉末配成用0.5%羧甲基纖維素鈉68 g/L 的混懸液，待用。因粉末比較難溶于水，因此用羧甲基纖維素鈉輔助增溶。取干燥蟲體進行鹽炙，具體如下：稱取50 mg 方格星蟲干制品，置于500 mL 燒杯內(nèi)；另稱取食鹽1.5 mg 溶于9 mL 超純水中，倒入燒杯，使鹽水充分滲入方格星蟲干制品內(nèi)部；然后將其置入炒藥鍋內(nèi)，用文火加熱翻炒至微黃色；晾涼打粉，過5 號篩，配成0.5%羧甲基纖維素鈉68 g/L的混懸液，待用。同時取適量縮泉丸，粉碎，過5 號篩，將粉末配成0.5%羧甲基纖維素鈉234 g/L 的混懸液，待用。

1.2.3 動物分組 與給藥將32 只合格的SD 大鼠隨機分為陰性對照組（NC 組）、方格星蟲干制品組（SP組）、方格星蟲干制品鹽炙組（SP-salt 組）、縮泉丸組（陽性對照組，PC 組），每組8 只。各組按照大鼠體質(zhì)量每200 g 灌胃1 mL 藥物或者含0.5%羧甲基纖維素鈉的超純水：NC 組按體質(zhì)量灌含0.5%羧甲基纖維素鈉的超純水；SP 組按體質(zhì)量灌干制品液；SP-salt 組按體質(zhì)量灌干制品鹽炙液；PC 組按體質(zhì)量灌縮泉丸液。給藥方法：連續(xù)給藥10 d（給藥第9 天晚上禁食不禁水，過夜），于第2 天給藥1 h 后用50 mL/kg 的水對各組大鼠灌胃造成水負荷。以代謝籠收集大鼠的尿液，并計算尿量體質(zhì)量比和排泄率。

1.2.4 代謝指標 擠盡膀胱余尿，代謝籠法收集各組大鼠5 h 尿液，以尿量體質(zhì)量比及排泄率為判斷指標對各組藥效進行評價。尿量體質(zhì)量比（mL/kg）＝大鼠尿量（mL）/大鼠（kg）；排泄率（%）=大鼠每小時內(nèi)排尿量（mL）/灌胃鹽水量（kg）。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 尿量

SP-salt 組和PC 組大鼠0～1 h 時的尿量體質(zhì)量比均低于NC 組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。其余各時間段各組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見圖1。

圖1 各組對水負荷大鼠尿量影響的比較

2.2 排泄率

SP-salt組和PC組大鼠0～1 h的排泄率均低于NC組（P＜0.05），其余各時間段各組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見圖2。

圖2 各組對水負荷大鼠排泄率影響的比較

3 討論

中醫(yī)將改善尿頻、夜尿、遺尿等癥狀的現(xiàn)象稱為“縮尿”[8]，小兒遺尿之病總不離腎之虛[4]，而五臟六腑皆可相關(guān)，其機乃屬三焦失司而膀胱不約[4,9]，其治當以補腎固本止遺為要，寒熱虛實者，則隨證而治，用縮泉丸可治腎陽虛之癥[10]?？s泉丸治療此癥由來已久，然而它屬于陸地藥材，當前供應(yīng)有限。本研究中采用的縮泉丸是復合方劑，益智仁為君藥，溫補脾腎，固精氣，縮小便；烏藥為臣藥，調(diào)氣散寒，除膀胱腎間冷氣，止小便頻數(shù)；佐之以山藥，健脾補腎，固澀精氣。三藥合用，溫腎祛寒，使下焦得溫而寒去，則膀胱之氣復常，約束有權(quán)，溺頻遺尿可痊愈。方格星蟲屬湛江特色海產(chǎn)品，營養(yǎng)價值高，具有滋陰補陽、清肺降火、提高免疫力、縮尿止遺等功效。前期研究發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)研制的方格星蟲縮尿功能并不強，因此我們嘗試將方格星蟲進行鹽炙，以期增強其縮尿功能。在中醫(yī)理論著作《本草蒙筌》中，陳嘉謨有“鹽入腎臟仍仗軟堅”的描述，說明中藥通過鹽炙，可以引藥入腎經(jīng)，更好地發(fā)揮其軟堅散結(jié)的作用。根據(jù)中醫(yī)藥傳統(tǒng)鹽炙理論，經(jīng)過鹽炙是可以加強藥物作用的，而當前對縮尿作用的研究，主要集中在對益智仁鹽炙方面[11]。本研究參考上述文獻的操作方法：將凈藥材或生片加入一定量的食鹽水混合均勻后，經(jīng)悶潤使鹽水滲入藥材組織內(nèi)部，置炒藥鍋內(nèi)，用文火(微火)加熱翻炒至顯微黃火色，透香氣時，取出，攤晾散熱制得。研究中發(fā)現(xiàn)，動物多尿模型有單純水負荷模型、D-半乳糖致衰老模型、腎陽虛多尿模型、自然衰老模型、水負荷＋利尿藥模型等[12]。李夢琪等[13]通過水負荷多尿模型說明縮尿丸提取物對縮尿的作用；馮惠敏等[14]通過水負荷多尿模型對益智仁縮尿進行了研究。因此，參照上述方法，我們采用單純水負荷多尿模型進行試驗。本實驗結(jié)果顯示，SP-salt組和PC組大鼠0～1 h時的尿量體質(zhì)量比和排泄率均低于NC 組（P＜0.05），其余各時間段各組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，說明鹽炙后的方格星蟲具有明顯的縮尿功能。SP-salt組與PC 組比較雖差異無統(tǒng)計學意義，但鹽灸方格星蟲屬藥食同源性食品，營養(yǎng)價值豐富、味道鮮美，可為開發(fā)利用提供基礎(chǔ)。