丁旭鋒，湯姣，孫大林，史卿菁，黃園

1.宜興市婦幼保健院生殖健康科，江蘇無(wú)錫 214200；2.宜興市婦幼保健院檢驗(yàn)科，江蘇無(wú)錫 214200；3.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合男科，江蘇南京 210029

隨著國(guó)家生育政策的調(diào)整，男性的生育力評(píng)估進(jìn)一步受到家庭和社會(huì)的重視，男性不育癥的發(fā)病率也有上升趨勢(shì)，夫妻不孕不育的原因中男方的因素占30%～50%。男性生育力的評(píng)估重點(diǎn)是精子的檢測(cè)。常規(guī)檢查精子的濃度和活力及精子形態(tài)學(xué)檢查對(duì)生育的評(píng)估并不全面，精子DNA 損傷程度的評(píng)價(jià)是有效的補(bǔ)充。精子DNA 損傷程度主要用精子DNA 碎片指數(shù)（DNA-fragmetation-index,DFI）和高DNA 染色性精子比率（high dyeable sperm index,HDS）兩個(gè)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)，精子DFI、HDS 與精子濃度及活力的相關(guān)性研究有各種報(bào)道[1]。本文選擇2020年1 月—2021 年11 月在宜興市婦幼保健院生殖健康科進(jìn)行精液檢查的325 份精液標(biāo)本數(shù)據(jù)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)和分析，初步研究了精子DFI、HDS 與精子常見(jiàn)指標(biāo)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)了部分指標(biāo)新的相關(guān)性依據(jù)，并進(jìn)行了分析和探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究對(duì)于325 份精液標(biāo)本數(shù)據(jù)按照相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分組，有不育癥患者也有孕前優(yōu)生檢查的男性，年齡20～51 歲，平均（30.13±4.93）歲。分析主要參數(shù)的相關(guān)性。具體分組方式如下。①按照精子濃度分組，低濃度組：精子濃度低于20×106/mL，23份，平均年齡（29.65±4.07）歲；中濃度組：精子濃度（20～60）×106/mL，118 份，平均年齡（30.22±4.87）歲；高濃度組：精子濃度60×106/mL 以上,184 份，平均年齡（30.07±5.10）歲。3 組年齡對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。②按照精子的活力分組，低活力組：PR＜32%，101 份，平均年齡（30.42±5.07）歲；中活力組：PR:32%～50%，105 份，平均年齡（30.34±4.72）歲；高活力組：PR＞50%，119 份，平均年齡（29.61±5.01）歲。3 組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。③按照DFI 分組，低DFI 組：DFI＜15%，169 份，平均年齡（29.47±3.94）歲；中DFI組：15%＜DFI＜30%，106 份，平均年齡（30.50±5.76）歲；高DFI 組：DFI＞30%，50 份，平均年齡（31.36±5.82）歲。3 組年齡對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：身體基本健康的男性；男性體征明顯；無(wú)生殖系統(tǒng)疾病史；無(wú)局部外傷史；無(wú)腮腺炎病史；備孕前主動(dòng)要求檢查精液或有不育病史門診檢查精液。

排除標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)精子癥患者，精子濃度低于2×106/mL，前向運(yùn)動(dòng)精子比率（PR）低于5%的檢查者，死精子癥患者，精液量小于0.8 mL 的檢查者；禁欲天數(shù)不在2～7 d 內(nèi)的檢測(cè)者。

1.3 方法

1.3.1 精液標(biāo)本處理 所有檢查對(duì)象均要求禁欲2～7 d，平均禁欲天數(shù)為（3.86±1.28）d，在本單位專門的取精室手淫取精，采用專門的取精管儲(chǔ)存精液標(biāo)本，取精后標(biāo)本送到檢驗(yàn)科37℃水浴恒溫箱保存精液30～60 min，然后分成兩份標(biāo)本，送檢DFI 及HDS的標(biāo)本為0.6～0.7 mL，剩余部分進(jìn)行精液常規(guī)及形態(tài)學(xué)檢查，進(jìn)行DFI 及HDS 檢測(cè)的標(biāo)本在-20℃冰箱中冷凍保存，每天通過(guò)南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司專門冷鏈外送到該實(shí)驗(yàn)室。

1.3.2 檢測(cè)方法 精液體積、濃度、活力、及液化時(shí)間由本院檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室采用半自動(dòng)精液分析儀，由上海北昂醫(yī)療技術(shù)有限公司提供，檢驗(yàn)科從事精液檢測(cè)的工作人員固定在2～3 名經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的檢驗(yàn)師之中。精子DFI、HDS 檢測(cè)由南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司負(fù)責(zé)檢測(cè)，主要流程：首先用37℃恒溫水浴箱孵育冷凍的精液標(biāo)本，精液完全溶解后，檢測(cè)精子濃度，用專門的稀釋液按比例稀釋至（1～2）×106/mL，加入酸化液后再加入專門的染色劑，再將標(biāo)本用Sparrow 流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，軟件進(jìn)行分析，形成精子DFI 和HDS 值。

1.4 觀察指標(biāo)

本研究主要觀察指標(biāo)為：精子濃度（單位：106/mL）；精子活力即前向運(yùn)動(dòng)精子比率（progressive rate, PR）（單位：%）；DFI(單位：%）；HDS(單位：%）。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間差異比較以t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。精子濃度及活力與DFI 及HDS 的相關(guān)性均采用Pearson 相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 精子濃度與精子DFI 及HDS 的相關(guān)性分析

精子濃度逐步升高，精子的DFI 及HDS 逐步降低，呈負(fù)相關(guān)（r=-0.180、-0.137）。低濃度組DFI、HDS 均大于高濃度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），中濃度組的DFI 也大于高濃度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而3 組HDS 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本組研究中低濃度組和中濃度的組DFI 及HDS 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 不同濃度精子的DFI 及HDS 比較[(±s)，%]

表1 不同濃度精子的DFI 及HDS 比較[(±s)，%]

組別低濃度組(A)中濃度組(B)高濃度組(C)t/P 值（A-B）t/P 值（B-C）t/P 值（A-C）精子濃度（×106/mL）＜20 20～60＞60樣本數(shù)23 118 184 DFI 22.42±12.35 20.12±13.26 15.23±10.10-0.769/0.443-3.625/＜0.001-3.137/0.002 HDS 8.96±5.05 6.99±4.67 6.20±3.22-1.826/0.069-1.739/0.083-3.604/＜0.001

2.2 精子活力與精子DFI 及HDS 的相關(guān)性分析

隨著精子活力的提高，精子的DFI 及HDS 逐步降低，呈負(fù)相關(guān)（r=-0.135、-0.225）。低活力組的HDS 高于中活力組及高活力組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），3 組DFI 對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。中活力組的DFI 及HDS 與高活力組對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同活力精子的DFI 及HDS 比較[(±s)，%]

表2 不同活力精子的DFI 及HDS 比較[(±s)，%]

組別低活力組(a)中活力組(b)高活力組(c)t/P 值（a-b）t/P 值（b-c）t/P 值（a-c）PR 精子（%）＜32 32～50＞60樣本數(shù)101 105 119 DFI 19.38±12.55 16.91±11.96 16.48±10.81-1.446/0.150-0.282/0.777-1.841/0.067 HDS 8.20±4.93 6.11±3.53 5.89±3.09-3.509/＜0.001-0.497/0.619-4.227/＜0.001

2.3 不同DFI 精子的HDS 比較

隨著精子DFI 的變化，HDS 的變化很不明顯，DFI 不同組別中的DHS 對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），變化幅度很小，每組的HDS 均數(shù)接近總體樣本均數(shù)。見(jiàn)表3。

表3 不同DFI 精子的HDS 比較[(±s)，%]

表3 不同DFI 精子的HDS 比較[(±s)，%]

組別低DFI 組(Ⅰ)中DFI 組(Ⅱ)高DFI 組(Ⅲ)總體樣本t/P 值（Ⅰ～Ⅱ）t/P 值（Ⅱ～Ⅲ）t/P 值（Ⅰ～Ⅲ）DFI（%）＜15 15～30＞30樣本數(shù)169 106 50 325 DFI 8.85±3.48 20.99±3.95 39.47±8.49 17.52±11.81 26.714/＜0.001 18.590/＜0.001 37.554/＜0.001 HDS 6.78±2.70 6.76±5.39 6.19±4.31 6.68±4.02-0.041/0.968-0.655/0.513-1.168/0.244

3 討論

精子在受精卵的形成過(guò)程中主要的作用是提供男方的DNA，精子的DNA 是男性將遺傳信息傳給下一代的主要物質(zhì)[2]，精子DNA 的完整性對(duì)胚胎的形成和發(fā)育有重要的意義，影響受孕率和流產(chǎn)率[3]，由于各種原因如生活環(huán)境的污染，生殖系統(tǒng)的疾病，甚至精神壓力等都可能導(dǎo)致精子DNA 的損傷[4]，精子DNA 的損傷檢測(cè)是近年來(lái)評(píng)價(jià)精子DNA的主要方式[5]。DFI 是指精子細(xì)胞核中斷裂的DNA的比率。HDS 也叫高DNA 著色性[6]或精子成熟度，精子的細(xì)胞核未完全縮合即未成熟的情況下可表現(xiàn)為高染色的特點(diǎn)，HDS 是指不成熟的精子即高可染性精子占總精子的比率[7]。多數(shù)研究認(rèn)為，DFI和HDS 的評(píng)價(jià)對(duì)男性生育能力有一定的價(jià)值[8]。絕大多數(shù)研究認(rèn)為DFI 是獨(dú)立于精液常規(guī)參數(shù)的指標(biāo)，對(duì)于男性生育力評(píng)估，DFI 比精液常規(guī)參數(shù)更有預(yù)測(cè)作用[9-10]，DFI 具有更加客觀、穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，不易受其他檢測(cè)因素的影響[11]。研究認(rèn)為精子DFI升高可能導(dǎo)致精子的受精能力下降，可能會(huì)抑制胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育，易導(dǎo)致女方胚胎丟失，給妊娠過(guò)程帶來(lái)不良的影響[12-13]。

精子的濃度和活力與DFI 的相關(guān)性分析研究報(bào)道較多，但是與HDS 的相關(guān)性研究文獻(xiàn)報(bào)道相對(duì)較少。本研究顯示精子的濃度與精子DFI 及HDS 均呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.180、-0.137），劉鵬等[13]研究認(rèn)為DFI 與精子濃度存在負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.087）和本研究相一致，但也有研究認(rèn)為DFI 和精子濃度無(wú)相關(guān)性[14]。本研究也顯示隨著精子濃度變化DFI 的變化較HDS 的變化更明顯，提示精子DNA 碎片的形成因素和生精功能可能有較大相關(guān)性。本研究顯示精子活力與精子DFI 及HDS 呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.135、-0.225），馮玲等[15]研究認(rèn)為精子活力與DFI 呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.402）,庾偉堅(jiān)等[16]研究也發(fā)現(xiàn)DFI 與精子活力成負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.450）,與本研究結(jié)果基本相一致。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著精子活力的提高，HDS 的變化較敏感，而DFI 的變化相對(duì)較小，可見(jiàn)影響精子活力變化的因素可能和影響精子細(xì)胞核成熟程度的因素有較大的相關(guān)性。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)于正?；盍拥哪行裕粗谢盍M和高活力組），隨著精子活力提升，其DFI 及HDS 下降幅度較小,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

對(duì)于HDS 的臨床價(jià)值存在部分爭(zhēng)議，目前臨床認(rèn)為精子HDS 小于15%更有利于生育。但是，據(jù)陸金春[17]認(rèn)為，HDS 參數(shù)的臨床意義并不明確。據(jù)譚志國(guó)等[18]研究認(rèn)為隨著精索靜脈曲張程度的加重，精子DFI 逐漸升高，而HDS 則不受影響。有研究報(bào)道男性的年齡變化和精子HDS 并無(wú)相關(guān)性[7]，而戎春浩等[19]研究認(rèn)為隨著禁欲天數(shù)的延長(zhǎng)，精子的活力下降，DFI 升高，但是HDS 在下降。帥俊等[20]研究認(rèn)為和HDS 與DFI 成正相關(guān)（r=0.150），而本研究發(fā)現(xiàn)精子HDS 與精子濃度及活力呈現(xiàn)不同程度的負(fù)相關(guān)性(r=-0.135、-0.225)，但是單純以精子DFI 分組中各組的HDS 變化很小，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可見(jiàn)精子DFI 與HDS 基本沒(méi)有直接的相關(guān)性，即精子DNA 的損傷程度和精子細(xì)胞核的成熟程度無(wú)明顯的直接相關(guān)性。

綜上所述，男性精液檢查是評(píng)價(jià)生育力的主要途徑，但是精液常規(guī)波動(dòng)性較大，精子DFI 及HDS 的檢測(cè)是生育能力的重要補(bǔ)充，精子DFI 及HDS 與精子濃度及活力存在負(fù)相關(guān)性，但是DFI 與HDS 直接的相關(guān)性很小。精子DFI 對(duì)生育的影響意義較明確，對(duì)于HDS的臨床價(jià)值有必要進(jìn)一步研究。