廖云瓊， 呂顏枝， 陳永亮， 康永剛

（徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇徐州 221006）

近年來(lái)， 由于養(yǎng)殖過(guò)程中長(zhǎng)期使用抗生素和化學(xué)添加劑，導(dǎo)致食品安全出現(xiàn)較多問(wèn)題，因此開(kāi)發(fā)安全高效新型生物飼料具有非常重要的意義（蘇晨曦等，2015）。微生物發(fā)酵飼料是利用微生物菌劑在人為控制條件下， 對(duì)飼料進(jìn)行發(fā)酵而成的一種新型微生物飼料（阮棟等，2019），研究表明，微生物發(fā)酵可以提高飼料中粗蛋白質(zhì)含量， 降低粗纖維含量， 還可以產(chǎn)生大量有益于畜禽健康的代謝產(chǎn)物，具有提高飼料利用率、改善腸道健康、加強(qiáng)肉雞免疫功能等特點(diǎn)（陳曉春等，2021；Cheng等，2014）。目前，用于生產(chǎn)發(fā)酵飼料的微生物菌劑主要有乳酸桿菌、芽孢桿菌、酵母菌、鏈球菌、黑曲霉和米曲霉等（翟曉莉，2011），其中枯草芽孢桿菌能夠改善畜禽腸道的菌群結(jié)構(gòu)， 抑制或殺滅致病菌，促進(jìn)機(jī)體的消化吸收，增強(qiáng)機(jī)體免疫力和提高抗應(yīng)激能力（Molnar 等，2011）。 目前，以枯草芽孢桿菌和酵母菌作為混合菌劑用來(lái)發(fā)酵飼料在白羽肉雞中的應(yīng)用鮮見(jiàn)報(bào)道。 本試驗(yàn)以枯草芽孢桿菌和酵母菌為發(fā)酵菌劑，肉雞基礎(chǔ)飼糧為底物，通過(guò)微生物發(fā)酵制作發(fā)酵飼料， 飼喂白羽肉雞以研究其對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能、 免疫性能及肉品質(zhì)的影響， 為復(fù)合微生物發(fā)酵飼料在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 復(fù)合微生物菌劑由枯草芽孢桿菌N-8、枯草芽孢桿菌N-10 和酵母菌組成，按4∶4∶3 的比例混合， 活菌數(shù)平均為 1.0×1010cfu/g，由徐州市隆興生物科技有限公司提供。

發(fā)酵飼料的制備： 在基礎(chǔ)飼糧中加入40%水，將配制好的復(fù)合微生物菌劑以40 mL/kg 均勻噴灑在基礎(chǔ)飼糧上，邊噴灑邊混勻，然后裝入規(guī)格為50 kg 的發(fā)酵塑料袋中，排出空氣密封后，在溫度為30 ℃的條件下發(fā)酵3 d，發(fā)酵結(jié)束后將其烘干， 即得復(fù)合微生物發(fā)酵飼料。 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選取體重相近、健康無(wú)病的愛(ài)拔益加（AA+）1 日齡肉仔雞600只，公母各半，隨機(jī)分為5組，每組120只，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別用25%、50%、75%和100%發(fā)酵飼料替代基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)期為42 d。 試驗(yàn)肉仔雞由湯陰縣全達(dá)家禽育種有限公司提供。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。 試驗(yàn)前徹底清掃、沖洗、消毒雞舍、雞籠及飼喂設(shè)備，采用層疊式雞籠飼養(yǎng)，每籠5只雞，定時(shí)飼喂，自由采食、飲水，早晚觀(guān)察雞只采食及健康情況， 嚴(yán)格按照肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)飼喂，定期清掃消毒雞舍，嚴(yán)格按照免疫程序接種疫苗。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能測(cè)定 分別在1 日齡和42 日齡時(shí)對(duì)每只雞空腹稱(chēng)重，詳細(xì)記錄飼料消耗量，計(jì)算平均日采食量、平均日增重、料重比。

1.4.2 免疫性能測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后， 隨機(jī)抽取接近平均體重且健康的雞60只， 每個(gè)重復(fù)2只，于翅下靜脈采血5 mL，分離血清后置于-20 ℃冰箱中保存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA 法）測(cè)定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）含量，試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所， 各指標(biāo)由徐州市動(dòng)物疫病工程技術(shù)研究中心協(xié)助完成。

1.4.3 肉品質(zhì)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后， 于次日08：00頸靜脈放血屠宰隨機(jī)抽取的60只雞， 宰前禁食12 h，禁水2 h，取胸肌肉樣進(jìn)行肉品質(zhì)測(cè)定。采用上海雷磁生產(chǎn)的精密酸度計(jì) （PHS-3C）45 min 內(nèi)測(cè)定pH， 采用柯尼卡美能達(dá)生產(chǎn)的色彩色差計(jì)（CR-400）測(cè)定肉樣亮度（L*）、紅度（a*）和黃度（b*）， 采用德國(guó)麥特斯生產(chǎn)的肌肉嫩度測(cè)定儀（C-LM3B）測(cè)定肉樣剪切力值，采用北京布拉德生產(chǎn)的失水率測(cè)定儀（Bulader-M10）測(cè)定肉樣失水率。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用Excel 2020 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)處理，SPSS 20.0 進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行Duncan’s 多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，試驗(yàn)Ⅳ組平均日增重最高，顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組（P ＜0.05），與試驗(yàn)Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞0.05），試驗(yàn)Ⅳ組比對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ組分別提高了9.20%、8.35%、6.19%、2.58%；試驗(yàn)Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ組料重比顯著低于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組（P ＜ 0.05），試驗(yàn)Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ組組間差異不顯著（P ＞0.05），試驗(yàn)Ⅳ組比對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別降低了 0.04、0.03、0.01、0.01。

表2 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞免疫性能的影響 由表3 可知， 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞免疫性能影響顯著， 試驗(yàn)Ⅳ組IgA、IgG 和IgM 含量均顯著高于對(duì)照組（P ＜ 0.05），且隨著飼糧中發(fā)酵飼料比例的增加而增加， 其中試驗(yàn)Ⅳ組IgA 含量比對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別提高了97.11、89.44、44.04、34.86 ng/mL（P ＜ 0.05）；試驗(yàn)Ⅳ組IgG 含量顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、 Ⅱ組（P＜ 0.05），與試驗(yàn)Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞ 0.05）；試驗(yàn)Ⅳ組IgM 含量最高，顯著高于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組（P ＜0.05），與試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表3 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞免疫性能的影響 μg/mL

2.3 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響 由表4 可知， 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)雞胸肌黃度（b*）和失水率均無(wú)顯著影響（P ＞ 0.05）。試驗(yàn)Ⅲ、Ⅳ組 pH 均顯著低于其他組（P ＜ 0.05）；試驗(yàn)Ⅲ和Ⅳ組亮度（L*）和紅度（a*）均顯著高于其他組（P ＜0.05）；試驗(yàn)Ⅳ組剪切力最小，顯著低于對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組（P ＜0.05），與試驗(yàn)Ⅲ組相比差異不顯著（P ＞0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組失水率最低，與其他組相比差異不顯著（P ＞0.05）。

表4 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響

3 討論

3.1 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響 微生物發(fā)酵飼料是利用微生物菌劑大量繁殖，將飼料中蛋白質(zhì)、淀粉、纖維素等大分子物質(zhì)分解成有機(jī)酸、 游離氨基酸、 可溶性多肽、維生素等小分子物質(zhì)，使發(fā)酵后的飼料更容易被消化吸收（孫波等，2021；吳逸飛等，2016），同時(shí)發(fā)酵可去除抗?fàn)I養(yǎng)因子， 提高飼料的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)、適口性及消化能力，從而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能（梁天柱等，2021），但由于受到微生物菌劑種類(lèi)、配比、試驗(yàn)動(dòng)物、飼養(yǎng)環(huán)境、飼養(yǎng)管理模式等影響， 微生物發(fā)酵飼料在肉雞飼養(yǎng)中的應(yīng)用有著不同的飼喂效果（趙永玉，2021）。 Ashayerizadeh 等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，飼用發(fā)酵菜籽粕對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、 肉質(zhì)和脂質(zhì)代謝能等產(chǎn)生了有益影響。葉成智等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加2.5%發(fā)酵飼料可提高肉雞的日采食量和日增重。 本試驗(yàn)研究表明， 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料能顯著提高白羽肉雞平均日采食量和日增重， 降低料重比， 這可能是因?yàn)榘l(fā)酵飼料通過(guò)微生物發(fā)酵產(chǎn)生了特殊的香味，提高了適口性，增加了肉雞的采食量，進(jìn)而提高了日增重（楊榮等，2019；劉晶晶等，2014），與孫汝江等（2012）、舒剛等（2013）的研究結(jié)果一致。 但也有研究認(rèn)為，添加5% ～10%發(fā)酵飼料對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響，添加15%時(shí)對(duì)肉仔雞平均日增重有顯著影響 （倪玉姣等，2012）， 與本試驗(yàn)中微生物菌劑添加比例不同，比文獻(xiàn)報(bào)道的比例高，這可能與選擇的菌劑種類(lèi)、菌劑配比、試驗(yàn)動(dòng)物、飼養(yǎng)管理模式等不同有關(guān)。

3.2 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞免疫性能的影響 動(dòng)物體血清中IgA、IgG 和 IgM 的含量能夠反映機(jī)體免疫功能的高低 （馬偉斌等，2021），它能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，在機(jī)體抵抗外界病原體侵蝕感染中起著非常重要的作用（閆理東等，2012）。 IgA 可以阻止微生物在呼吸道上皮附著，抑制病毒增殖，是阻礙病原體入侵動(dòng)物機(jī)體的第一道防線(xiàn)；IgG 具有激活補(bǔ)體、中和毒素的作用（張獻(xiàn)月，2013）。 有研究認(rèn)為，復(fù)合微生態(tài)制劑能夠改善肉仔雞的腸道健康，提高其對(duì)飼料的消化吸收率， 促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，提高機(jī)體免疫球蛋白含量，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體抗病能力 （呂遠(yuǎn)蓉等，2017）。 李錦等（2019）研究認(rèn)為，乳酸菌發(fā)酵飼料顯著提高了雛雞體內(nèi)免疫球蛋白 IgA、IgM、IgG、NDV-Ab 含量， 表明乳酸菌發(fā)酵飼料可提高雛雞體液免疫和細(xì)胞免疫功能。 劉淑嬌等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，利用0.4%、0.6%和0.8%的復(fù)合益生菌（乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌）可顯著提高肉仔雞21 日齡和 42 日齡的 IgG 含量。 孫煥林（2015）研究也認(rèn)為， 枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉籽粕可顯著提高29～ 64 d 免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）的含量。 本試驗(yàn)研究表明， 血清中免疫球蛋白的含量隨飼糧中復(fù)合微生物發(fā)酵飼料的增加而增加， 當(dāng)添加量為 100%時(shí)， 血清中 IgA、IgG 和IgM 的含量最高， 說(shuō)明復(fù)合微生物發(fā)酵飼料提高了白羽肉雞血清免疫球蛋白水平，改善了肉雞的免疫效果，這可能是因?yàn)閺?fù)合微生物發(fā)酵飼料中的枯草芽孢桿菌和酵母菌可以調(diào)節(jié)白羽肉雞腸道菌群及刺激腸道組織產(chǎn)生免疫球蛋白， 增加腸道中乳酸菌數(shù)量，從而提高肉雞的免疫功能。

3.3 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響 雞肉品質(zhì)評(píng)定可以通過(guò)pH、顏色、嫩度、系水力等指標(biāo)衡量，pH 是動(dòng)物屠宰后肌肉酸度的直觀(guān)表現(xiàn)（安文俊等，2011），能夠反映肌肉糖原酵解的速率，還會(huì)影響肌肉顏色、嫩度及貯存期（Calvo 等，2017），是肉品質(zhì)理化指標(biāo)的主要檢測(cè)項(xiàng)目。 朱瑾等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌可以降低肌肉pH，提高系水力，改善肉品質(zhì)。 本試驗(yàn)研究表明， 復(fù)合微生物發(fā)酵飼料可顯著降低胸肌pH，與陳婷等（2019）研究結(jié)果一致。 肉色是消費(fèi)者衡量肉品好壞的感官指標(biāo)， 而嫩度是消費(fèi)者評(píng)價(jià)肉質(zhì)口感的重要指標(biāo)， 通常嫩度由剪切力來(lái)反映，剪切力值越大，肌纖維越粗，嫩度則越低，反之嫩度越高（魏清宇等，2018）。有研究表明，飼糧中添加200 mg/kg 枯草芽孢桿菌和200 mg/kg 富硒酵母可顯著提高胸肌的系水力、嫩度（王海波等，2021）。 李菊等（2007）研究認(rèn)為，0.5%乳酸菌發(fā)酵液添加到肉雞日糧中，可使胸肌和腿肌的肉色紅度、黃度提高，剪切力值降低。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌和酵母菌能夠增加肌肉a* 值， 說(shuō)明復(fù)合微生物菌劑改善了雞肉的顏色，延長(zhǎng)了貨架期，孫波等（2021）研究也表明，復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料能將納雍土雞的a* 值提高3.13%， 顯著改善了肉色，本試驗(yàn)中，復(fù)合微生物發(fā)酵飼料為100%時(shí)， 胸肌 L*、a* 和 b* 值均高于其他各組， 說(shuō)明枯草芽孢桿菌和酵母菌在一定程度上能改善雞肉顏色，與陳婷等（2019）研究結(jié)果相似。 梁天柱等（2021）研究表明，發(fā)酵飼料可在一定程度上降低廣西三黃雞胸肌、腿肌的剪切力，并且顯著降低腿肌剪切力。 本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，復(fù)合微生物發(fā)酵飼料100%添加時(shí)，剪切力最小，失水率最低，說(shuō)明飼糧通過(guò)枯草芽孢桿菌、酵母菌等混合發(fā)酵后， 能顯著提高白羽肉雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率，肌肉的抗氧化能力增加，從而使白羽肉雞肌肉嫩度增加，水分流失減少，從而改善了肉的品質(zhì)。

4 結(jié)論

復(fù)合微生物發(fā)酵飼料可顯著提高白羽肉雞的平均日增重、降低料重比，并能有效提高白羽肉雞的免疫性能， 改善雞肉品質(zhì)。 本試驗(yàn)條件下，當(dāng)添加100%復(fù)合微生物發(fā)酵飼料時(shí)效果最好，值得推廣應(yīng)用。