陳曉曉，段寶生

（1.包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000；2.鄂爾多斯市中心醫(yī)院，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017000）

0 引言

SLCO1B1基因位于12號染色體上，它包含15個(gè)外顯子和14個(gè)內(nèi)含子[1]，SLCO1B1有40多種單基因核酸多態(tài)性，但4號外顯子區(qū)388A＞G和5號外顯子區(qū)521T＞C是兩種常見的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，形成四種單倍型＊1a、＊15、＊1b、＊5，其編碼轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OATP1B1，主要介導(dǎo)肝細(xì)胞對內(nèi)源性化合物和臨床藥物的吸收，從而影響物質(zhì)在血漿中的濃度及藥物活性，與他汀類藥物致患者橫紋肌溶解和肌病等藥物副作用密切相關(guān)[2]。人類ApoE基因位于第19號染色體長臂上，包含4個(gè)外顯子與3個(gè)內(nèi)顯子[3]，ApoE基因有?2、?3、?4三種等位基因?？尚纬?種可能的ApoE基因型。ApoE介導(dǎo)動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程，對動脈粥樣硬化的衰減有一定作用[4]。它也是許多大腦淀粉樣蛋白-β沉積的組成部分，包括阿爾茨海默病中的淀粉樣蛋白-β沉積，從而影響阿爾茨海默病的發(fā)病與發(fā)展[5]。本研究通過實(shí)驗(yàn)檢測，了解鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群SLCO1B1和ApoE基因多態(tài)性分布情況，為該地區(qū)蒙古族人群基因遺傳學(xué)、心腦血管疾病和阿爾茨海默病的預(yù)防、服用他汀類藥物療效和致肌病風(fēng)險(xiǎn)評估提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月-2021年1月在鄂爾多斯市地區(qū)多家醫(yī)院健康體檢的蒙古族老年人群120名作為研究對象，納入對象均為三代內(nèi)純蒙古族人群，平均年齡為（63.41±6.99）歲，其中男性64名，女性56名。

1.2 主要試劑與儀器

血液基因組DNA提取試劑盒、人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒、羅氏480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器。

1.3 研究方法

納入對象晨起空腹采血于真空紫頭采血管中，于-80℃超低溫保存箱中保存，定期提取血樣DNA后檢測其基因型。

1.3.1 提取血樣DNA

①取200μL血樣于離心管中；②加入20μL蛋白酶K；③加入200μL GB，70℃干式加熱10min；④加入200 μL無水乙醇；⑤液體轉(zhuǎn)入CB3吸附柱里，離心去液；⑥加入500μL GD，離心去液；⑦加入600μL PW，離心去液；⑧重復(fù)操作⑦；⑨離心放置；⑩將CB3吸附柱放入離心管中，滴加100μL TE，放置后離心，所得溶液即為DNA提取液。

1.3.2 PCR 擴(kuò)增

①本試劑盒檢測4個(gè)單核苷酸位點(diǎn)的4種反應(yīng)液，每個(gè)八連管孔中分別加入23μL反應(yīng)液；②樣本準(zhǔn)備：將待測液、質(zhì)控品分別取2μL加入已裝有反應(yīng)液的八連管中；③結(jié)果判定：上機(jī)后根據(jù)熒光信號通道擴(kuò)增曲線判讀基因型。

1.4 數(shù)據(jù)處理

將鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群的SLCO1B1和ApoE基因型分布進(jìn)行遺傳平衡評估，檢測本研究納入的健康體檢人群SLCO1B1和ApoE基因型分布是否滿足Hardy-Weinberg定律。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

（1）鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群的SLCO1B1和ApoE基因型、等位基因的分布，如表1、表2。

表1 SLCO1B1基因型和等位基因分布（n）

表2 ApoE基因型和等位基因分布（n）

（2）將納入人群基因型進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡定律分析，采用χ2檢驗(yàn)可知，本研究納入的鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群樣本SLCO1B1和ApoE基因型分布均滿足Hardy-Weinberg定律，數(shù)據(jù)具有代表性。

（3）在鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群中，SLCO1B1基因型分布頻數(shù)由大到小依次為＊1a/＊1b＞＊1b/＊1b＞＊1b/＊15=＊1a/＊15＞＊1a/＊1a＞＊15/＊15＞＊1a/＊5＞＊5/＊5=＊5/＊15；等位基因＊1b＞＊1a＞＊15＞＊5。ApoE基因型分布頻數(shù)由大到小依次為?3/?3＞?3/?4 ＞?2/?3 ＞?4/?4 ＞?2/?4 ＞?2/?2，等位基因?3＞?4＞?2。

（4）納入人群的SLCO1B1基因多態(tài)性分布評估他汀類藥物致肌病風(fēng)險(xiǎn)。如表3。

表3 SLCO1B1基因多態(tài)性分布特點(diǎn)[n（%）]

SLCO1B1基因多態(tài)性與他汀類藥物致患者橫紋肌溶解和肌病密切相關(guān)[6]，目前根據(jù)他汀類藥物不良反應(yīng)和肌病風(fēng)險(xiǎn)等，可將SLCO1B1基因多態(tài)性分為正常肌病風(fēng)險(xiǎn)型（＊1a/＊1a、＊1a/＊1b、＊1b/＊1b）、中度肌病風(fēng)險(xiǎn)型（＊1a/＊5、＊1a/＊15、＊1b/＊15）和重度肌病風(fēng)險(xiǎn)型（＊5/＊5、＊5/＊15、＊15/＊15）3種表型[7]，根據(jù)鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群SLCO1B1基因多態(tài)性頻數(shù)分布情況，可計(jì)算得到：正常肌病風(fēng)險(xiǎn)型、中度肌病風(fēng)險(xiǎn)型、重度肌病風(fēng)險(xiǎn)型的人群所占比例分別為75.83%、22.50%、1.67%。因此可推測在鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群中，大部分人群服用他汀類降脂藥物為正常肌病風(fēng)險(xiǎn)、少數(shù)人群為中度肌病風(fēng)險(xiǎn)、極少數(shù)人群為重度肌病風(fēng)險(xiǎn)。

（5）納入人群的ApoE基因多態(tài)性分布評估患心腦血管疾病和阿爾茨海默病風(fēng)險(xiǎn)、服用他汀類藥物降脂的療效，如表4。

表4 ApoE 基因多態(tài)性分布特點(diǎn)[n（%）]

ApoE基因多態(tài)性因被分為：降脂療效良好、患心腦血管疾病和阿爾茨海默病低風(fēng)險(xiǎn)型（?2/?2、?2/?3）；降脂療效正常、患心腦血管疾病和阿爾茨海默病中風(fēng)險(xiǎn)型（?2/?4、?3/?3）；降脂療效降、低患心腦血管疾病和阿爾茨海默病高風(fēng)險(xiǎn)（?3/?4、?4/?4）三大類，根據(jù)鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群ApoE基因多態(tài)性頻數(shù)分布情況，可計(jì)算得到：降脂療效良好患病風(fēng)險(xiǎn)低型、降脂療效患病風(fēng)險(xiǎn)正常型、降脂療效差患病風(fēng)險(xiǎn)高型人群所占比例分別為5.00%、80.83%、14.17%。因此可推測鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群大多數(shù)服用他汀類降脂療效患病風(fēng)險(xiǎn)正常型，較少數(shù)人群服用他汀類降脂療效差患病風(fēng)險(xiǎn)高，少數(shù)人群服用他汀類降脂療效良好患病風(fēng)險(xiǎn)低。

3 討論

由于受種族、遺傳背景、地理環(huán)境等多方面差異因素影響，根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)可知，目前關(guān)于SLCO1B1和ApoE基因多態(tài)性分布在不同民族及地區(qū)之間存在差異，王新利等提出在新疆地區(qū)的維吾爾族人群和漢族人群ApoE基因均以ε3/ε3基因型最常見，但維吾爾族人群較常見基因型為ε3/ε4型，漢族人群較常見基因型為ε2/ε3型[8]，郭啟燕等提出，貴州省黔南州毛南族人群ε4等位基因最常見，毛南族人群ε4等位基因頻率明顯高于廣西壯族人群和云南傣族人群[9]，因此研究對象的民族差異會導(dǎo)致結(jié)果有明顯差異，而鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群作為喜食高油脂肉類的少數(shù)民族，其與漢族人群存在顯著民族差異和飲食差異，因此探討鄂爾多斯地區(qū)蒙古族老年人群SLCO1B1和ApoE基因多態(tài)性分布情況[10-13]，為該地區(qū)蒙古族人群基因遺傳學(xué)、心腦血管疾病和阿爾茨海默病的預(yù)防、服用他汀類藥物療效預(yù)估及致肌病風(fēng)險(xiǎn)提供理論依據(jù)。