李鑫月，郭振清，李婧實(shí)，李紅強(qiáng),2*

（1.河北科技師范學(xué)院海洋資源與環(huán)境學(xué)院，河北昌黎 066600；2.河北省特色動物種質(zhì)資源挖掘與創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（籌）,河北昌黎 066600）

脂質(zhì)代謝是一個(gè)非常復(fù)雜的生物學(xué)過程，肌內(nèi)脂肪含量是影響豬肉品質(zhì)如嫩度、風(fēng)味及多汁性的主要因素，受到多種功能基因調(diào)控。因此，篩選和鑒定與脂肪代謝相關(guān)的基因是豬遺傳育種工作者的重要任務(wù)之一。成纖維細(xì)胞生長因子家族（Fibroblast Growth Factors，F(xiàn)GFs）各成員在葡萄糖和脂質(zhì)代謝等多種生物學(xué)過程發(fā)揮重要作用，引起人們的極大關(guān)注。目前發(fā)現(xiàn)該家族有23個(gè)成員和18個(gè)相應(yīng)的受體，F(xiàn)GFs 與其受體相互作用啟動細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，廣泛參與生理和病理多種生物學(xué)過程，如提高胰島素的敏感性、降低空腹血糖水平、減輕體重、減少肝臟脂肪含量等。FGF21 是FGFs 家族成員之一，作為內(nèi)分泌性生長因子在調(diào)節(jié)糖脂代謝方面發(fā)揮重要作用。高脂高糖飼料喂養(yǎng)FGF21 轉(zhuǎn)基因小鼠能夠抵抗體重增加和肥胖發(fā)生。在靈長類糖尿病模型中，使用FGF21 或FGF21類似物可以顯著降低血糖、胰島素水平和體重；在高脂小鼠模型中，給予FGF21 重組藥可明顯降低高脂小鼠的體重，阻止脂肪性肝病發(fā)生，最終使得各組織脂質(zhì)含量和肝葡萄糖的含量降低。同樣，敲除小鼠基因后，體內(nèi)胰島素敏感性下降，由此推測FGF21 可提高ob/ob 小鼠的胰島素敏感性，增加肝糖原含量。據(jù)報(bào)道FGF21 可增加偏瘦小鼠白色脂肪組織和棕色脂肪組織的葡萄糖攝取量，預(yù)示FGF21 生理功能取決于代謝狀態(tài)和不同脂肪組織。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF21 通過激活過氧化物酶增殖物活化受體輔激活因子-1（Peroxlsome Proliferator-Activated Receptor-Coactlvator-1，PGC-1）活性，成為白色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白1（Uncoupling Protein1，UCP1）的有效誘導(dǎo)物，最終促進(jìn)產(chǎn)熱。此外，F(xiàn)GF21 通過腦-脂肪組織軸介導(dǎo)生熱和能量消耗，改變食物攝入和能量消耗。研究表明，F(xiàn)GF21 能有效地誘導(dǎo)脂肪組織褐變，并增加腹股溝白色脂肪組織中骨形成蛋白8B（Bone Morphogenetic Protein-8B，）、碘甲腺原氨酸脫碘酶II（Type II Iodothyroninedeiodinase，）、和過氧化物酶增殖物激活受體（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor，）等生熱基因的表達(dá)。

目前對FGF21 作用機(jī)制的研究多集中于嚙齒類動物和人類，在家畜上的研究報(bào)道不多，尤其以豬為對象研究更鮮有報(bào)道。本課題組對禁食后豬轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，多個(gè)脂質(zhì)代謝的相關(guān)基因如：和誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的DFF45 樣效應(yīng)因子b 蛋白（Cell Death-Inducing DNA Fragmentation Factor-like Effector B，）表達(dá)上調(diào)。為鑒定調(diào)控豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，本研究選擇為研究對象，構(gòu)建基因真核表達(dá)載體并利用RTPCR 探究其在長白豬不同組織中的表達(dá)規(guī)律，為長白豬基因在脂質(zhì)代謝中調(diào)節(jié)機(jī)制的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 6 月齡長白豬經(jīng)過禁食24 h 后屠宰，其選自河北省秦皇島市昌黎縣肉聯(lián)廠。采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、皮下脂肪、膀胱、背長肌、大腸（結(jié)腸）和小腸（空腸）11 種組織，樣品采集后編號并迅速置于液氮中。

1.1.2 載體和菌株 pcDNA3.1+空載體為河北科技師范學(xué)院動物學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。大腸桿菌DH5菌株購自北京索萊寶生物科技有限公司。

1.2 主要試劑 TrQuick Reagent、Methylidyne trichloride、異丙醇均市購，2×Es Taq MasterMix 購自武漢莫納生物科技有限公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自上海翊圣生物科技有限公司，DNA 凝膠回收試劑盒、DL2000 DNA Ladder均購于北京索萊寶生物科技有限公司，qPCR SYBR Green Master Mix 購自上海翊圣生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 引物的設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank 中收錄的豬基因序列，使用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)引物（表1），由北京天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成。

1.3.2 總RNA 提取和cDNA 合成 按照Trizol 法分別提取長白豬11個(gè)組織的總RNA，用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)檢測其RNA 濃度和純度，使RNA 的終濃度為1 000 ng。根據(jù)M-MLV 酶說明書對各組織總RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系為30 μL：RNA 2 μL，T18 3 μL，DEPC 水補(bǔ)至20 μL，在恒溫反轉(zhuǎn)錄儀72℃放置5 min，冰上放置5 min；隨后加入10 μL 反轉(zhuǎn)錄混合液，各物質(zhì)含量為：dNTP Mix 3 μL，5×buffer 6 μL，M-MLV 0.5 μL，RNA 抑制劑0.5 μL；在恒溫反轉(zhuǎn)錄儀中42℃反應(yīng)1 h，80℃滅活15 min，置于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3基因擴(kuò)增 利用表1 中第1 對引物，以cDNA為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，反應(yīng)體系為50 μL：MonAmp2X Taq Mix Pro（+Dye） 25 μL，正、反向引物（0.4 μm/μL）分別為2 μL，80 ng/μL cDNA 4 μL，ddHO 17 μL；擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃ 5 min；94℃ 15 s，56℃ 15 s，72℃ 15 s，35個(gè)循環(huán)；72℃ 5 min；20℃ 5 min。產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測并用膠回收試劑盒回收PCR 目的片段，隨后與pMD18-T 載體連接，再轉(zhuǎn)化至DH5感受態(tài)細(xì)胞，挑取單克隆菌株并進(jìn)行PCR 鑒定。重組載體作為模板用表1 中第2 對引物克隆的CDS 序列并連接到pcDNA3.1空載體上，轉(zhuǎn)化到DH5感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單菌落送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序。

表1 PCR 引物序列信息

1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測在各組織中的表達(dá)量 根據(jù)SYBR Green 熒光染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量。PCR 反應(yīng)總體系為20 μL：qPCR SYBR Mix 10 μL，上下游引物各0.5 μL，cDNA 2 μL，ddHO 7 μL。反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃ 10 min；循環(huán)反應(yīng)，95℃ 10 s，60℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；添加熔解曲線，以每5 s 上升0.5℃的速率從60℃升高到95℃，每個(gè)樣品重復(fù)3 次取平均值。利用為內(nèi)參基因校正個(gè)體差異，按照2算法計(jì)算基因在各個(gè)組織的相對表達(dá)量。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并利用Graphpad Prim 5 軟件將表達(dá)量進(jìn)行單因素方差分析，不同小寫字母表示存在顯著差異（<0.05）。

1.3.5 生物信息學(xué)分析 對長白豬FGF21 序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析：用DNAMAN 將長白豬的FGF21 氨基酸序列與NCBI 已經(jīng)公布的10個(gè)物種進(jìn)行同源性比較。各物種FGF21 蛋白質(zhì)序列如下：人（，登錄號：NP_061986.1）；小家鼠（，登錄號：NP_064397.1）；豬（，登錄號：NP_001 156882.1）；普通牛（，登錄號：XP_005219 543.1）；山羊（，登錄號：XP_02782401 4.1）；斑馬魚（，登錄號：NP_001038789.1）；家貓（，登錄號：XP_003997577.2）；綠海龜（，登錄號：XP_027674904.2）；蜥蜴（，登錄號：XP_034992107.1）；林蛙（，登錄號：XP_040182845.1）。用MEGA6.0 對長白豬與其他物種間的FGF21 氨基酸序列做多序列聯(lián)配，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹；用ProtParam預(yù)測分析長白豬FGF21 的理化性質(zhì)；用SOPMA 和SWISS-MODEL 分別預(yù)測FGF21 蛋白的二級和三級結(jié)構(gòu)；用Protscale、TMHMM、SignalP 對其疏水性、跨膜結(jié)構(gòu)和信號肽進(jìn)行預(yù)測；采用NeTPhos 3.1 Server、NetNGIyc1.0 和NetOGlyc4.0 分別預(yù)測FGF21 蛋白質(zhì)的磷酸化位點(diǎn)、N 端和O 端糖基化位點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 長白豬基因克隆 由圖1 可知，1 號泳道條帶與DNA Ladder Marker 相比單一明亮無雜帶，擴(kuò)增片段大小處于500～750 bp 之間。經(jīng)生工生物工程（上海）股份有限公司測定1 號泳道條帶產(chǎn)物，結(jié)果如圖2 所示，該序列與NCBI 數(shù)據(jù)庫中豬完整CDS 序列（登錄號：NM_001163410.1）完全一致。

圖1 FGF21基因CDS 區(qū)PCR 擴(kuò)增圖

圖2 長白豬FGF21 CDS 區(qū)克隆測序結(jié)果

2.2 生物信息學(xué)分析

2.2.1 長白豬與其他物種系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建 由圖3可知，長白豬FGF21 氨基酸序列與牛、山羊和人的親緣關(guān)系最近，與蜥蜴和林蛙的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。用DNAMAN 9.0 將長白豬與其他物種序列比對分析可知，豬與牛、山羊的同源性最高，均為91.83 %，與斑馬魚、林蛙和蜥蜴的同源性較低，分別為29.10%、31.40%和44.44%。

圖3 豬FGF21 與其他物種氨基酸系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.2.2 長白豬FGF21 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)預(yù)測 經(jīng)克隆得到的FGF21 蛋白質(zhì)分子式是CHNOS，相對分子質(zhì)量為22 447.58 Da，總原子數(shù)為3 162，理論等電點(diǎn)（PI）為5.38，編碼208個(gè)氨基酸（表2），其中，亮氨酸（Leu）個(gè)數(shù)為30，比例最高，為14.4 %，不含吡咯賴氨酸和硒半胱氨酸，消光系數(shù)是20 065，估計(jì)半衰期是30 h，不穩(wěn)定系數(shù)是60.01，為不穩(wěn)定蛋白；脂肪系數(shù)為89.13，總平均親水性為-0.245。

表2 FGF21 編碼的蛋白質(zhì)氨基酸組成

2.2.3 長白豬FGF21 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)預(yù)測 由圖4A 可知，無規(guī)則卷曲占52.4%，延伸鏈占19.23%，-螺旋占18.75%，-轉(zhuǎn)角占9.62%，且-轉(zhuǎn)角分布比較分散。由4B 可知，全面模型評估值（Global Medal Quality Estimation，GMQE） 是0.46，序列相似性為0.35，模型構(gòu)建符合要求，該三級結(jié)構(gòu)顯示其存在多無規(guī)則卷曲。采用STRING 數(shù)據(jù)庫搜索FGF21蛋白質(zhì)的可能相互作用蛋白質(zhì)（圖4C），該結(jié)果提示FGF21 可能和INS、FGFR4、EGF、FGFR3 和TEK 等蛋白質(zhì)存在相互作用。

圖4 長白豬FGF21 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和互作蛋白質(zhì)預(yù)測

2.2.4 長白豬FGF21 蛋白質(zhì)疏水性、信號肽及跨膜區(qū)分析 由圖5A 可知，其整條氨基酸鏈在第21 位氨基酸處有最大疏水值2.833，在第150 位氨基酸處有最小疏水值-2.667，總平均疏水性為-0.233。因?yàn)橛H水性氨基酸殘基多于疏水性氨基酸殘基，可推測該蛋白為親水性蛋白。由圖5B 可知，預(yù)測第27 和28 位氨基酸之間存在信號肽切割位點(diǎn)，根據(jù)信號肽假說推測長白豬FGF21蛋白質(zhì)含有信號肽，屬于分泌蛋白。同時(shí)對該蛋白質(zhì)跨膜蛋白區(qū)域結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測分析可知，長白豬FGF21 蛋白質(zhì)沒有跨膜區(qū)域結(jié)構(gòu)。

圖5 長白豬FGF21 蛋白疏水性和信號肽分析

2.2.5 長白豬FGF21 蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)預(yù)測 磷酸化位點(diǎn)通常在蘇氨酸（Thr）、絲氨酸（Ser）和賴氨酸（Lys）3個(gè)氨基酸殘基上。預(yù)測結(jié)果顯示長白豬FGF21 共有18個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中絲氨酸上有11個(gè)，氨基酸位置分別為34、75、78、112、121、136、151、194、199、203、205；蘇氨酸上有4個(gè)，分別位于50、56、67、97；賴氨酸上有3個(gè)，分別位于131、134、206。利用在線軟件NetNGIyc1.0 分析發(fā)現(xiàn)該蛋白無N 端糖基化位點(diǎn)。在線軟件NetOGlyc4.0 分析發(fā)現(xiàn)有5個(gè)位點(diǎn)O端糖基化位點(diǎn)，分別位于151、190、194、199、203位氨基酸殘基。

2.3 長白豬基因的組織表達(dá)譜分析

2.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 的擴(kuò)增曲線和熔解曲線 如圖6A 所示，基因擴(kuò)增曲線呈現(xiàn)完好的“S”形，曲線平滑未出現(xiàn)特殊趨勢。熔解曲線均呈單峰，峰值較好，無引物二聚體，無雜峰，符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3.2 長白豬基因的組織表達(dá)譜 由圖6B 可知，在長白豬的11個(gè)組織中均有表達(dá)，其中肝臟相對表達(dá)量最高，且顯著高于其他組織中的相對表達(dá)量，其次為心、肺、脂肪、脾和胃，在腎臟中表達(dá)量最低。在心臟中的相對表達(dá)量顯著高于腎臟、大腸、小腸、膀胱組織中的表達(dá)量，在肺臟中的相對表達(dá)量顯著高于腎臟、大腸、小腸和膀胱組織中的相對表達(dá)量。其他器官組織之間相對表達(dá)量差異不顯著。

圖6 長白豬FGF21基因擴(kuò)增曲線與熔解曲線及在不同組織中的表達(dá)量

3 討 論

本研究成功克隆了長白豬基因的CDS 區(qū)全長序列，該序列為627 bp，編碼208個(gè)氨基酸，與GenBank 數(shù)據(jù)庫豬的FGF21 序列一致。FGF21 在多個(gè)物種中均有表達(dá)，其中在人和小鼠中分別由209個(gè)和210個(gè)氨基酸組成。通過氨基酸序列比對和親緣關(guān)系分析可知，長白豬和牛、山羊的同源性較高，親緣關(guān)系近，與林蛙同源性和親緣性低。其中山羊、普通牛和豬屬于偶蹄目，林蛙屬于兩棲類，該結(jié)果提示豬FGF21 蛋白質(zhì)與家畜類之間的親緣關(guān)系最近，進(jìn)化過程中比較保守，此結(jié)果與李倩等在山羊中的研究結(jié)果一致。

脂肪合成和分解代謝的平衡是影響脂肪過度沉積的重要因素，探究參與脂代謝相關(guān)的調(diào)控基因并通過控制能量攝入調(diào)控豬體內(nèi)脂肪沉積是畜牧業(yè)亟待解決的問題之一，目前研究表明在糖脂代謝中起到關(guān)鍵作用。董志昊等人研究發(fā)現(xiàn)小鼠處于持續(xù)高能量進(jìn)食狀態(tài)時(shí)，F(xiàn)GF21 通過激活肝激酶B1（Liver Kinase B1，LKB1）因子調(diào)節(jié)腺苷酸激活蛋白激酶（AMPActivated Protein Kinase，AMPK）磷酸化信號通路進(jìn)而調(diào)節(jié)肝臟脂代謝；Kondeti 等人研究發(fā)現(xiàn)缺失小鼠肝臟代謝異常，表現(xiàn)為肝臟脂質(zhì)大量沉積，轉(zhuǎn)基因小鼠喂養(yǎng)高脂高碳食物后體重并未增加；張健等發(fā)現(xiàn)FGF21 可以促進(jìn)肝細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和脂肪細(xì)胞對葡萄糖的吸收作用。以上研究表明FGF21 確實(shí)在糖脂代謝中發(fā)揮調(diào)控作用，且在動物的多種組織中均有表達(dá)。本研究以為對象，探究其在禁食狀態(tài)下長白豬不同組織中的表達(dá)特性，發(fā)現(xiàn)在長白豬11 種組織中均有不同程度的表達(dá)。其中，基因在肝臟和脂肪組織中表達(dá)量相對較高，腎臟中表達(dá)量最低，這與前人研究結(jié)果一致。楊在清等發(fā)現(xiàn)梅山豬FGF21 主要在肝臟、脂肪組織以及腎臟中高表達(dá)；李倩等研究表明主要在山羊的肝臟組織中表達(dá)較高，腎和背長肌中表達(dá)量最低；黃龍等在草魚中發(fā)現(xiàn)主要在肌肉中高表達(dá)，腎臟和全腦中表達(dá)量較低，以上結(jié)果提示基因在不同物種和飲食狀態(tài)下的表達(dá)量存在有一定的差異。在禁食狀態(tài)下，長白豬基因如何在肝臟和脂肪組織表達(dá)上調(diào)是研究其作用機(jī)制的重要方面。Takeshi 等研究顯示：在禁食狀態(tài)下人或小鼠肝臟中的轉(zhuǎn)錄因子與啟動子識別位點(diǎn)結(jié)合，引起的表達(dá)量升高，進(jìn)而調(diào)節(jié)肝臟的能量代謝，提高肝臟的糖異生作用，另外，不飽和脂肪酸和膽汁酸分別通過激活PPAR和法尼酯X受體（Farnesoid X Receptor，F(xiàn)XR）通路增加肝臟基因的轉(zhuǎn)錄。在白色脂肪組織中FGF21 與UCP1 和PPAR等相互作用誘導(dǎo)白色脂肪組織棕色化，如敲除小鼠可導(dǎo)致PPAR通路受損使胰島素敏感性降低，F(xiàn)GF21 可刺激UCP1的表達(dá)增加機(jī)體能量的產(chǎn)熱。該蛋白也參與調(diào)節(jié)了米色脂肪細(xì)胞的產(chǎn)熱，miR-182-5p 通過抑制5'-UTR核受體亞家族1d 組成員1（Nuclear Receptor Subfamily 1，Group D，Member 1，NR1D1）促進(jìn)脂肪細(xì)胞中FGF21 的表達(dá)和分泌，激活了脂肪細(xì)胞中（如UCP1、PPAR和PGC-1）產(chǎn)熱基因表達(dá)。此外，張艷在豬源細(xì)胞中超表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，參與脂肪合成的關(guān)鍵酶脂肪酸移位酶（Fatty Acid Translocase，F(xiàn)AT/CD36）和脂肪分化相關(guān)蛋白（Adipose Differentiation-Related Protein，ADRP）下調(diào)，進(jìn)而抑制脂肪合成，甘油三酯含量減少，這與禁食狀態(tài)下的代謝類似。以上結(jié)果提示FGF21 在多物種的不同組織中發(fā)揮重要的作用，這可能與其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及受體蛋白相關(guān)。

本研究通過對FGF21 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測可知，該蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要以無規(guī)卷曲為主，與典型的FGFs 結(jié)構(gòu)類似，且與三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果一致；該蛋白質(zhì)為親水性蛋白，不含跨膜結(jié)構(gòu)域，與藏山羊、草魚的FGF21蛋白質(zhì)預(yù)測結(jié)果一致。隨后利用STRING 數(shù)據(jù)庫檢索與其相互作用的蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF21 蛋白質(zhì)可能與FGFR3 和FGFR4 等蛋白存在相互作用。FGFR3 和FGFR4 是FGFR 家族的成員，二者作為成纖維細(xì)胞生長因子的細(xì)胞表面受體，在細(xì)胞增殖、分化中起著重要作用，推測FGF21 在發(fā)揮功能時(shí)需要與膜受體蛋白FGFR 結(jié)合，調(diào)節(jié)糖脂代謝。進(jìn)一步預(yù)測FGF21 蛋白質(zhì)翻譯后修飾發(fā)現(xiàn)其含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，這與其可能存在受體結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)細(xì)胞中內(nèi)源無FGFRs 表達(dá)時(shí)，F(xiàn)GF21 可激活和磷酸化下游的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinases，ERK）。同時(shí)，Yi 等發(fā)現(xiàn)小鼠原代肝細(xì)胞發(fā)現(xiàn)FGFR1 和-klotho 水平上調(diào)可減輕高脂飲食誘導(dǎo)的FGF21 信號通路紊亂，以維持代謝穩(wěn)態(tài)。李倩等發(fā)現(xiàn)FGFR1 或FGFR2 調(diào)控山羊肌內(nèi)脂肪分化。通過對以上不同物種研究發(fā)現(xiàn)，推測FGFR 可作為調(diào)控FGF21 分化的受體。然而長白豬中尚未報(bào)道FGF21 在肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中通過哪個(gè)受體調(diào)控肌內(nèi)脂肪沉積。為此，本課題組擬利用酵母雙雜交技術(shù)篩選FGF21 與受體相互作用情況，以及通過體外細(xì)胞超表達(dá)和敲除FGFR 受體檢測細(xì)胞內(nèi)脂肪代謝的產(chǎn)物及基因的表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為FGF21 在長白豬脂肪組織中結(jié)構(gòu)研究和代謝機(jī)制研究提供了一定的參考依據(jù)。

4 結(jié) 論

本研究成功克隆獲得長白豬基因的CDS 序列627 bp，蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)主要以無規(guī)卷曲為主，為親水性蛋白且保守性強(qiáng)。禁食后，在肝臟中相對表達(dá)量最高，在腎臟中的相對表達(dá)量最低，揭示該基因在能量代謝方面發(fā)揮一定的作用，并為進(jìn)一步探索長白豬肌內(nèi)脂肪代謝的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。