宋俊華，段麗芳，夏玉先， 邢立國 ，侯春青， 吳進(jìn)龍*

(1. 沈陽沈化院測試技術(shù)有限公司，遼寧 沈陽 110021；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125；3.重慶聚立信生物工程有限公司，重慶 401120)

按照聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)在2017年聯(lián)合發(fā)布的FAO/WHO微生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)制定要求(https：//www.fao.org/fileadmin/templates/agphome/documents/Pests_Pesticides/Specs/JMPS_Manual_2016/Manual-Revised_Section_9_Final_-_2018_12_05.pdf)，在申請微生物農(nóng)藥產(chǎn)品的國際標(biāo)準(zhǔn)時，如果有效成分和相關(guān)雜質(zhì)的分析方法不是已經(jīng)發(fā)布的國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(CIPAC)或美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)的方法，需要對分析方法進(jìn)行同行驗(yàn)證(peer validated)以證實(shí)其可靠性。但與傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥不同的是，國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(CIPAC)并沒有制定專門針對微生物農(nóng)藥的方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南，考慮到微生物農(nóng)藥和傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥分析方法原理的巨大差異，完全依照CIPAC相關(guān)準(zhǔn)則對微生物農(nóng)藥分析方法進(jìn)行確認(rèn)并不合理。本文比較了中國出入境檢驗(yàn)檢疫總局、美國環(huán)保局(EPA)和AOAC發(fā)布的三個微生物分析方法確認(rèn)準(zhǔn)則，供相關(guān)管理部門及行業(yè)在微生物農(nóng)藥管理及分析方法開發(fā)、確認(rèn)及驗(yàn)證過程中提供參考。

中國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局于2012年發(fā)布了《食品微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)技術(shù)規(guī)范》SN/T 3266-2012，主要使用待確認(rèn)方法與基準(zhǔn)方法進(jìn)行比較的方式，對食品微生物定性、定量分析方法進(jìn)行確認(rèn)，包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)確認(rèn)和實(shí)驗(yàn)室間確認(rèn)兩個階段。AOAC于2012年發(fā)布《AOAC 食品和環(huán)境表面微生物分析方法準(zhǔn)則》(AOAC International Methods Committee Guidelines for Validation of Microbiological Methods for Food and Environmental Surfaces)，主要適用于食品和環(huán)境中微生物分析方法確認(rèn)。美國環(huán)保局于2016年發(fā)布《EPA微生物分析方法驗(yàn)證》的指南(Method Validation of U.S. Environmental Protection Agency (EPA) Microbiological Methods of Analysis)，其范圍涵蓋所有基質(zhì)條件下的微生物分析方法確認(rèn)。AOAC和EPA的確認(rèn)均分為三個階段，分別為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)確認(rèn)、小范圍確認(rèn)(AOAC和EPA分別將其稱為獨(dú)立確認(rèn)(independent validation study)和第二階段確認(rèn))和大范圍確認(rèn)(AOAC和EPA分別將其成為協(xié)同驗(yàn)證(Collaborative Study)和第三階段確認(rèn))。

有關(guān)微生物分析方法確認(rèn)的專用術(shù)語包括：1. LOD50：檢測概率為50%時的分析物濃度。2. 排他性(exclusivity)：未被檢出的非靶標(biāo)菌種，其具有潛在的交叉反應(yīng)可能性。3. 包容性(inclusivity)：能被檢出的靶標(biāo)菌種。4. 檢測概率(POD，Probability of Detection)： 對于某固定基質(zhì)和檢測濃度，定性分析方法所能檢出的陽性結(jié)果比例，與樣品濃度相關(guān)，AOAC準(zhǔn)則中用其作為定性方法確認(rèn)的判定指標(biāo)。5. 部分回收(fractional recovery)：一組相同接種水平的樣品獲得陽性結(jié)果的數(shù)量和陰性結(jié)果的數(shù)量，陽性結(jié)果比例應(yīng)該大約占總樣品數(shù)量的50%，則滿足確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)。

表 中國、美國及AOAC微生物分析方法確認(rèn)準(zhǔn)則比較

續(xù)表

從上表可以看出，美國EPA的方法確認(rèn)準(zhǔn)則與傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥分析方法的確認(rèn)準(zhǔn)則要求最為接近，同時納入了微生物分析驗(yàn)證相關(guān)的特殊要求，如換算成對數(shù)形式統(tǒng)計等，是目前最有針對性的微生物分析方法確認(rèn)準(zhǔn)則。我國于2016年發(fā)布了《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》NY/T 2887～2016，主要針對化學(xué)農(nóng)藥適用，無專門針對微生物 農(nóng)藥的分析方法確認(rèn)指南。為鼓勵我國微生物農(nóng)藥健康發(fā)展，規(guī)范管理，建議開展相關(guān)微生物分析方法確認(rèn)研究，推動相關(guān)準(zhǔn)則制定。