張 強(qiáng)，阮 君，尚浩南，劉凱利，肖鐵剛，王 兵＊＊

（1.上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院 上海 200233；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 上海 200082）

代謝綜合征是以肥胖、糖耐量異常、脂代謝異常、高血壓以及高尿酸血癥等聚集發(fā)病、影響機(jī)體健康的一組癥候群，是全身性、多系統(tǒng)的疾病[1]。代謝綜合征的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但國(guó)際上廣泛認(rèn)為其與遺傳因素，中心性肥胖，脂代謝異常，內(nèi)皮功能障礙，慢性低度炎癥，腸道菌群紊亂等相關(guān)[2-4]。最近的研究認(rèn)為，膽汁酸穩(wěn)態(tài)的失調(diào)造成對(duì)糖代謝，脂質(zhì)代謝，能量代謝調(diào)控的紊亂，在代謝綜合征發(fā)病中起到重要作用[5]，因此針對(duì)代謝性疾病的新藥研究就聚焦于調(diào)節(jié)膽汁酸的穩(wěn)態(tài)[6-7]，這與中醫(yī)學(xué)對(duì)代謝綜合征少陽樞機(jī)不利為發(fā)病之本，痰瘀為重要病理基礎(chǔ)的認(rèn)識(shí)相一致。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，代謝綜合征可歸于“脾癉”“消渴”“脘痞”“濕阻”“肥滿”等病證范疇[8]，病位在于脾、肝、腎三臟[9]，臟腑氣血陰陽虛損，產(chǎn)生痰、瘀、熱、濕等病理產(chǎn)物[10]，痰濕和瘀血既是病理產(chǎn)物，又是致病因素，進(jìn)一步阻礙氣血津液的運(yùn)行，最終導(dǎo)致代謝綜合征的發(fā)生。

利膽化痰活血方是王兵教授基于對(duì)代謝綜合征少陽樞機(jī)不利為發(fā)病之本，痰瘀為重要病理基礎(chǔ)的認(rèn)識(shí)，創(chuàng)制的治療代謝綜合征的復(fù)方。利膽化痰活血方由玉米須30 g、虎杖15 g、陳皮9 g、制半夏6 g 和丹參15 g 組成。玉米須具有清肝利膽，利尿消腫作用。玉米須有效成分在減輕體質(zhì)量、降壓、降糖和降脂中具有廣泛的藥理活性，對(duì)于代謝綜合征組分疾病具有良好的防治作用，已廣泛應(yīng)用于代謝綜合征的臨床治療，且無明顯副作用[11-12]。虎杖利濕退黃，清熱解毒，散瘀止痛，止咳化痰，在降血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化，抑制血小板聚集、抗血栓、降血糖方面療效頗佳[13]。半夏燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)；陳皮理氣健脾，燥濕化痰。半夏和陳皮作為化痰法的代表藥物和大量化痰復(fù)方的核心組成，在化痰祛濕中應(yīng)用廣泛。丹參活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰，可改善微循環(huán)、減輕血液黏稠度，具有擴(kuò)張血管、降脂、降壓及降糖作用[14]。5 味中藥配伍使用，共奏清熱利膽，化痰活血功效。

代謝綜合征的發(fā)生發(fā)展涉及多因素的影響，難以通過影響單一靶點(diǎn)產(chǎn)生良好的治療效果，因而許多代謝綜合征患者會(huì)尋求中醫(yī)治療。但傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療代謝綜合征的機(jī)制尚不清楚。并且代謝綜合征發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，單一的理論難以解釋其發(fā)病機(jī)制，而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)“中藥組分－靶點(diǎn)－通路”這一相互作用網(wǎng)絡(luò)出發(fā)，其系統(tǒng)性對(duì)解釋中醫(yī)藥在代謝綜合征中的治療機(jī)制可能有益。本研究受到上海市中醫(yī)藥傳承和科技創(chuàng)新項(xiàng)目（ZYKC2019035），上海市綜合醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合專項(xiàng)（ZHYY-ZXYJHZX-201910），國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81704006）的支持，基于此項(xiàng)目的支持，本課題組建立了代謝綜合征患者健康管理平臺(tái)，明確了基于“少陽樞機(jī)不利”理論組方的中藥復(fù)方對(duì)代謝綜合征患者的改善作用。但利膽化痰活血方對(duì)代謝綜合征的作用機(jī)制尚不明確。本研究從網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫中分別獲取了利膽化痰活血方和代謝綜合征的作用靶點(diǎn)。通過蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein interaction，PPI）分析，基因本體論（Gene Ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）綜合評(píng)價(jià)利膽化痰活血方治療代謝綜合征的有效成分，核心作用靶點(diǎn)及通路。最后用分子對(duì)接技術(shù)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其潛在結(jié)合活性。即探討利膽化痰活血方治療代謝綜合征的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及潛在效應(yīng)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 利膽化痰活血方有效成分與作用靶點(diǎn)的獲取

利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)（TCMSP，http://tcmspw.com/tcmsp.php）[15]分別檢索利膽化痰活血方中各個(gè)組分，以口服生物利用度（OB）≥30%，類藥性（DL）≥18%，半衰期（HL）≥4，Caco-2≥0.2為標(biāo)準(zhǔn)篩選潛在有效成分[16]。在PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中獲取有效成分的2D 結(jié)構(gòu)并保存為sdf 格式，隨后將其導(dǎo)入SwissTargetPrediction（http://www.swisstargetprediction.ch）[17]中預(yù)測(cè)其潛在作用靶點(diǎn)。

1.2 代謝綜合征疾病靶點(diǎn)的獲取

在DisGeNET 數(shù)據(jù)庫（https://www.disgenet.org）[18]中，以“Metabolic syndrome”為檢索詞條，對(duì)代謝綜合征相關(guān)基因進(jìn)行檢索和收集，獲得代謝綜合征相關(guān)基因靶點(diǎn)，隨后利用R×64 3.6.1 軟件進(jìn)行韋恩分析尋求利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征交集作用靶點(diǎn)。

1.3 利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征GO功能分析與KEGG通路富集分析

使用clusterProfiler 軟件包[19]分別對(duì)利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能分析，對(duì)其交集靶點(diǎn)作KEGG 通路分析。探討利膽化痰活血方組分與代謝綜合征作用靶點(diǎn)的基因生物功能，以及交集靶點(diǎn)在相關(guān)信號(hào)通路中的調(diào)控作用。

1.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)和有效成分-核心靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將交集靶點(diǎn)輸入STRING11.0 數(shù)據(jù)庫（http://string-db.org）中，選取置信度≥0.4 的區(qū)間，將輸出的文本數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件中，建立利膽化痰活血方組分與代謝綜合征交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)。進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析得出PPI 網(wǎng)絡(luò)中核心靶點(diǎn)，結(jié)合有效成分的作用靶點(diǎn)匹配得到利膽化痰活血方調(diào)控核心靶點(diǎn)的有效成分。借助Cytoscape3.7.2 軟件構(gòu)建利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。

1.5 分子對(duì)接驗(yàn)證有效成分與核心靶點(diǎn)結(jié)合活性

從TCMSP 數(shù)據(jù)庫中下載有效成分的mol2 結(jié)構(gòu)，利用pymol 軟件將其轉(zhuǎn)換為pdb 格式，導(dǎo)入AutoDockTool1.5.6軟件中進(jìn)行加氫，計(jì)算電荷等處理，導(dǎo)出為pdbqt 格式。從PDB 數(shù)據(jù)庫（https://www1.rcsb.org/）中獲得核心靶點(diǎn)蛋白的pdb 格式文件，導(dǎo)入AutoDockTool1.5.6軟件中進(jìn)行加氫，計(jì)算電荷等處理，導(dǎo)出為pdbqt 格式。以蛋白與原配體結(jié)合的活性口袋坐標(biāo)為活性中心，在AutoDock Vina軟件中進(jìn)行半柔性對(duì)接，尋找配體與蛋白質(zhì)氨基酸殘基之間的相互作用，結(jié)合能越低表明其對(duì)接活性越好。

1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

雄性SD 大鼠18 只，體質(zhì)量150±20 g，6-8 周齡，SPF級(jí)，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-001。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，隨機(jī)分為空白組（C，n=6）和模型組（M，n=6），利膽化痰活血方組（H，n=6），C 組予普通飼料喂養(yǎng)，M 組與H 組予高脂高糖高鹽飼料喂養(yǎng)，共12 周。13 周起，C 組和M 組予生理鹽水灌胃，H 組以5 mL·kg-1的利膽化痰活血方湯劑灌胃6 周。18 周末，禁食不禁水12 h，處死大鼠，取肝臟于-80℃保存待用。

取出大鼠的肝臟樣本，稱取50 mg 肝組織，加入1 mL Trizol。經(jīng)勻漿，分離，沉淀，洗脫，再溶解得到總RNA 并測(cè)定其純度，將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 模板產(chǎn)物。取SYBR10 μL、上下游引物各1 μL（引物列表見表1）、cDNA 2 μL 混合成為20 μL 反應(yīng)體系。反應(yīng)程序設(shè)定為：95℃，10 min，預(yù)變性，擴(kuò)增循環(huán)后，95℃，15 s，隨后60℃，1 min，共40 循環(huán)。最后以2-ΔΔCT 的方式相對(duì)定量分析。

表1 PCR引物的序列

2 結(jié)果

2.1 利膽化痰活血方有效成分的篩選

檢索利膽化痰活血方的所有成分，共取得540 個(gè)成分，包括玉米須97 個(gè)，虎杖62 個(gè)，半夏116 個(gè)，陳皮63 個(gè)，丹參202 個(gè)。根據(jù)OB，DL，HL，Caco-2 的界定值和去重處理，在TCMSP 數(shù)據(jù)庫中共獲取66 個(gè)活性化合物作為其有效成分，包括玉米須9 個(gè)，虎杖4 個(gè)，半夏9 個(gè)，陳皮5 個(gè)。利用SwissTargetPrediction 預(yù)測(cè)并去重后得到273個(gè)利膽化痰活血方作用靶點(diǎn)。

2.2 利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征交集靶點(diǎn)的韋恩分析

從DisGeNET 數(shù)據(jù)庫中獲得的1125個(gè)代謝綜合征作用靶點(diǎn)，與273個(gè)利膽化痰活血方作用靶點(diǎn)取交集，得到95個(gè)交集靶點(diǎn)（圖1）。

2.3 利膽化痰活血方有效成分靶點(diǎn)與代謝綜合征作用靶點(diǎn)的GO功能分析

利用clusterProfiler分別對(duì)利膽化痰活血方有效成分靶點(diǎn)與代謝綜合征作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能分析。GO 功能分析分為生物過程（Biological process，BP），細(xì)胞組件（Cellular component，CC），分子功能（Molecular function，MF）三部分，每部分根據(jù)p.adjust 值大小取top8 建立條形圖（圖2、圖3）。GO 富集分析顯示，利膽化痰活血方和代謝綜合征可以同時(shí)影響類固醇結(jié)合，一元羧酸結(jié)合，核受體活性，轉(zhuǎn)錄因子活性，直接的配體調(diào)節(jié)序列特異性DNA結(jié)合。

圖2 利膽化痰活血方靶點(diǎn)GO功能分析條形圖

圖3 代謝綜合征有效成分及靶點(diǎn)GO功能分析條形圖

2.4 利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

運(yùn)用STRING數(shù)據(jù)庫和Cytoscape軟件共同建立了利膽化痰活血方與代謝綜合征交集靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)（圖4）。對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行NetworkAnalyzer 分析 后，利用Generate Style from Statistics 工具，以Degree 值為依據(jù)，將靶點(diǎn)的面積從大到小，顏色從亮到暗進(jìn)行排序；以combined-score 為依據(jù)，將靶點(diǎn)與靶點(diǎn)聯(lián)線從粗到細(xì)，顏色從亮到暗進(jìn)行排序。該網(wǎng)絡(luò)涉及95 個(gè)蛋白質(zhì)節(jié)點(diǎn)。拓?fù)浞治霰砻鳎摼W(wǎng)絡(luò)中2 倍Degree 值的中位數(shù)為26。PPI 網(wǎng)絡(luò)中Degree 值大于26 的蛋白節(jié)點(diǎn)有14個(gè)（表2）。這些關(guān)鍵蛋白節(jié)點(diǎn)是整個(gè)PPI網(wǎng)絡(luò)的核心，同時(shí)是利膽化痰活血方治療代謝綜合征的核心靶點(diǎn)。

圖4 利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

表2 利膽化痰活血方有效成分治療代謝綜合征的核心靶點(diǎn)

利用clusterProfiler對(duì)這14個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析。共獲得11 條通路，根據(jù)p.adjust 值建立氣泡圖（圖5），氣泡圖取排名前10 的通路。主要涉及包括內(nèi)分泌抵抗，EGFR 酪氨酸激酶抑制劑耐藥，HIF-1 信 號(hào)通路，F(xiàn)oxO 信號(hào) 通 路，Rap1 信號(hào)通路，MAPK 信號(hào)通路，ErbB 信號(hào)通路，鞘脂信號(hào)通路，Ras信號(hào)通路，趨化因子信號(hào)通路。這表明利膽化痰活血方有效成分可以通過調(diào)控這些通路治療代謝綜合征。

圖5 利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征交集靶點(diǎn)KEGG通路富集分析

2.5 利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

從PPI 網(wǎng)絡(luò)中選取Degree 值大于26 的14 個(gè)核心靶點(diǎn)，再與利膽化痰活血方有效成分靶點(diǎn)相匹配，得到38 個(gè)靶向核心靶點(diǎn)的有效成分，在Cytoscape3.7.2軟件中可視化后，構(gòu)建利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)（圖6）。該網(wǎng)絡(luò)含68 個(gè)節(jié)點(diǎn)，204 條連線。其中涉及到利膽化痰活血方與核心靶點(diǎn)的連線組合有129 對(duì)。在網(wǎng)絡(luò)圖中，玉米須、虎杖、半夏、陳皮、丹參均以圓形，玫瑰紅色表示；有效成分以正六邊形，紅色表示；核心成分以倒三角形，深綠色表示；相關(guān)靶點(diǎn)以三角形，淺綠色表示。其中玉米須和陳皮中均含有谷甾醇（Sitosterol），玉米須和半夏中均含有豆甾醇（Stigmasterol），虎杖，半夏中均含有β-谷甾醇（Beta-sitosterol）。

圖6 利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)

從PDB 數(shù)據(jù)庫中分別獲取每個(gè)靶點(diǎn)3D 結(jié)構(gòu)，以pdb 格式保存，分別為AKT1（PDBID:6hhf），MAPK3（PDBID:4qtb），VEGFA（PDBID:3bdy），PTGS2（PDBID:5ikt），EGFR（PDBID:5uwd），ESR1（PDBID:1yin），STAT3（PDBID: 6njs），PPARG（PDBID: 2vv2），AR（PDBID:1t73），MAPK14（PDBID:6sfo），NR3C1（PDBID:3k22），MMP9（PDBID:6esm），F(xiàn)2（PDBID:1dwd），PGR（PDBID:3g8o）。以原配體結(jié)合的坐標(biāo)為活性口袋位置，對(duì)接參數(shù)設(shè)置為size_x=16.00，size_y=16.00，size_z=16.00，energy_range=4，exhaustiveness=9，num_modes=9。利用AutoDock Vina 軟件分析129 對(duì)利膽化痰活血方有效成分與14個(gè)核心靶點(diǎn)的組合的潛在結(jié)合活性。分子對(duì)接結(jié)果表明，有效成分與核心靶點(diǎn)結(jié)合活性較高的有為MMP9 與金圣草黃素（Chryseriol）（最佳結(jié)合能 活 性 為-10.1 kcal·mol-1），MMP9 與 黃 芩 素（Baicalein）（最佳結(jié)合能活性為-9.9kcal·mol-1），AKT1與金圣草黃素（最佳結(jié)合能活性為-8.8kcal·mol-1），PPARG 與豆甾-7-烯-3-醇（Stigmasta-7-en-3-ol）（最佳結(jié)合能活性為-8.5kcal·mol-1）。隨后在pymol 中將其可視化（圖7）。

圖7 分子對(duì)接結(jié)果示意圖

2.6 Real-time PCR 法檢測(cè)大鼠肝臟中AKT1，PPARG，MMP9的mRNA表達(dá)水平

Real-time PCR 法檢測(cè)分子對(duì)接預(yù)測(cè)的核心基因靶點(diǎn) 的mRNA 結(jié) 果 顯示：與C 組相 比，M 組AKT1，PPARG 的mRNA 表達(dá)水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；與M組相比，H組AKT1，PPARG，MMP9 的mRNA 表達(dá)水平顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）（圖8）。這表明高脂高糖高鹽飲食的造模使得大鼠肝臟中AKT1，PPARG 的mRNA 表達(dá)下降，經(jīng)過利膽化痰活血方的治療，AKT1，PPARG的mRNA表達(dá)水平明顯上升。

圖8 利膽化痰活血方對(duì)代謝綜合征大鼠肝臟AKT1，PPARG，MMP9的mRNA表達(dá)水平的影響

3 討論

本研究旨在預(yù)測(cè)利膽化痰活血方治療代謝綜合征藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及潛在效應(yīng)機(jī)制。結(jié)果共篩選出利膽化痰活血方有效成分66個(gè)，包括玉米須9個(gè)，虎杖4個(gè)，半夏9 個(gè)，陳皮5 個(gè)。其中谷甾醇同時(shí)存在于玉米須和陳皮中，豆甾醇同時(shí)存在于玉米須和半夏中，β-谷甾醇同時(shí)存在于虎杖和半夏中。利膽化痰活血方有效成分靶點(diǎn)和代謝綜合征的作用靶點(diǎn)取交集后共獲得95 個(gè)交集靶點(diǎn)。這95 個(gè)交集靶點(diǎn)為潛在的利膽化痰活血方治療代謝綜合征的靶點(diǎn)。GO 富集分析顯示，在生物過程中，利膽化痰活血方主要影響類固醇代謝過程，激素代謝過程，對(duì)類固醇激素的反應(yīng)，對(duì)細(xì)菌起源分子的反應(yīng)，對(duì)脂多糖的反應(yīng)，類二十烷酸代謝過程，有機(jī)陰離子運(yùn)輸，小分子代謝過程的調(diào)控，而代謝綜合征主要影響對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平的反應(yīng)，脂質(zhì)定位，脂質(zhì)代謝過程的調(diào)節(jié)，對(duì)肽激素的反應(yīng)，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，多細(xì)胞生物體內(nèi)平衡，激素轉(zhuǎn)運(yùn)，激素分泌。由此可見，利膽化痰活血方有效成分與代謝綜合征均顯示出對(duì)脂代謝過程的影響。在細(xì)胞組件方面，利膽化痰活血方主要與膜筏，膜微區(qū)，膜區(qū)，突觸前膜的組成部分，突觸前膜的固有成分，RNA 聚合酶II 轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物，神經(jīng)細(xì)胞體ESC/E（Z）絡(luò)合物相關(guān)，代謝綜合征與囊泡腔，細(xì)胞質(zhì)囊泡腔，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，分泌顆粒腔，血漿脂蛋白顆粒，脂蛋白顆粒，蛋白質(zhì)-脂質(zhì)復(fù)合物，膜筏相關(guān)。而膜筏這一細(xì)胞組件同時(shí)與利膽化痰活血方有效成分和代謝綜合征的相關(guān)。關(guān)于分子功能，利膽化痰活血方主要與核受體活性，轉(zhuǎn)錄因子活性，直接的配體調(diào)節(jié)序列特異性DNA 結(jié)合，類固醇激素受體活性，碳酸鹽脫水酶活性，類固醇結(jié)合，一元羧酸結(jié)合，類花生酸受體活性，前列腺素受體活性相關(guān)。代謝綜合征與受體配體活性，細(xì)胞因子受體結(jié)合，激素活性，細(xì)胞因子活性，類固醇結(jié)合，一元羧酸結(jié)合，核受體活性，轉(zhuǎn)錄因子活性，直接的配體調(diào)節(jié)序列特異性DNA結(jié)合。這表明利膽化痰活血方有效成分和代謝綜合征的作用靶點(diǎn)可以同時(shí)影響到類固醇結(jié)合，一元羧酸結(jié)合，核受體活性，轉(zhuǎn)錄因子活性，直接的配體調(diào)節(jié)序列特異性DNA 結(jié)合。隨后構(gòu)建了交集靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)，并從中篩選出14 個(gè)，核心靶點(diǎn)，分別為AKT1，MAPK3，VEGFA，PTGS2，EGFR，ESR1，STAT3，PPARG，AR，MAPK14，NR3C1，MMP9，F(xiàn)2，PGR。KEGG 通路分析顯示其主要與內(nèi)分泌抵抗相關(guān)。結(jié)合核心靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的利膽化痰活血方有效成分，構(gòu)建利膽了化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)表明38 個(gè)活性成分和14 個(gè)靶點(diǎn)組成的129個(gè)有效成分與靶點(diǎn)組合可能是其潛在起效組合。分子對(duì)接結(jié)果預(yù)測(cè)出的最佳組合包括MMP9與金圣草黃素，MMP9 與黃芩素，AKT1 與金圣草黃素，PPARG 與豆甾-7-烯-3-醇，結(jié)合利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)可知，黃芩素為半夏中的有效成分，金圣草黃素和豆甾-7-烯-3-醇為玉米須中的有效成分，這一定程度上反映了玉米須在利膽化痰活血方中起到核心作用。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，利膽化痰活血方可能上調(diào)了大鼠肝臟AKT1 和PPARG 的mRNA 表達(dá)水平，這與大鼠代謝綜合征的改善相關(guān)。在骨骼肌和肝臟中，糖脂代謝的紊亂會(huì)抑制PI3K/AKT 信號(hào)通路，導(dǎo)致胰島素抵抗。反過來胰島素抵抗也會(huì)影響PI3K/AKT 信號(hào)通路。調(diào)控PI3K/AKT在代謝性疾病的治療中有一定的潛力[20]。此外，PPARG 為核受體超家族成員。PPARG 主要表達(dá)在脂肪，肌肉，神經(jīng)系統(tǒng)中，激動(dòng)PPARG與促進(jìn)游離脂肪酸吸收，脂肪細(xì)胞分化，血糖吸收，TG 儲(chǔ)存相關(guān)，并可改善胰島素抵抗和游離脂肪酸水平[21]。

結(jié)合利膽化痰活血方有效成分-核心靶點(diǎn)-通路關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)可知，利膽化痰活血方中的活性成分Chryseriol 可能作用于AKT1 改善代謝綜合征；利膽化痰活血方中的活性成分Stigmasterol，Beta-sitosterol，10, 13-eicosadienoic， Gondoic acid， Naringenin，Sitosterol， 5, 7-dihydroxy-2- (3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one，Poriferast-5-en-3betaol，Poriferasterol，Stigmasta-7-en-3-ol，Schottenol，stigmasta-4,22-diene-3beta,6beta-diol，(3S,6R,8S,9S,10R, 13R, 14S, 17R) -17- [(1R, 4R) -4-ethyl-1, 5-dimethylhexyl]-10,13-dimethyl-2,3,6,7,8,9,11,12,14,15,16, 17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthrene-3,6-diol，Mandenol 可 能 作 用 于PPARG 改 善 代 謝 綜合征。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)治療代謝綜合征的關(guān)鍵成分包括利膽化痰活血方中的Chryseriol，hottenol，stigmasta-4,22-diene-3beta,6beta-diol，(3S,6R,8S,9S,10R, 13R, 14S, 17R) -17- [(1R, 4R) -4-ethyl-1, 5-dimethylhexyl]-10,13-dimethyl-2,3,6,7,8,9,11,12,14,15,16, 17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthrene-3,6-diol，Mandenol。核心靶點(diǎn)可能是AKT1 和PPARG。其作用通路可能與脂代謝過程，類固醇結(jié)合，內(nèi)分泌抵抗相關(guān)。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)，從系統(tǒng)層面對(duì)利膽化痰活血方的多成分，多靶點(diǎn)與代謝綜合征疾病靶點(diǎn)之間的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系進(jìn)行分析，預(yù)測(cè)了潛在的利膽化痰活血方有效成分與作用靶點(diǎn)組合，并從分子生物學(xué)層面探討發(fā)現(xiàn)AKT1 和PPARG 在利膽化痰活血方改善大鼠代謝綜合征中起到重要作用。這些結(jié)果為未來利膽化痰活血方及其有效成分的進(jìn)一步開發(fā)及應(yīng)用提供了重要參考。