龍一飛， 孟少偉， 劉健平， 張宏遠， 林冬玲

（廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院 廣東省中醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510006）

腦脊液、漿膜腔積液、關節(jié)腔積液等是臨床較常見的體液標本，這些標本的常規(guī)檢測，尤其是白細胞計數(shù)和紅細胞計數(shù)，有非常重要的臨床價值。目前，很多全自動血液分析儀已實現(xiàn)搭載體液標本的細胞計數(shù)和分類檢測模式，不但提高了檢測速度和準確度、精密度，而且易于標準化，臨床應用越來越廣泛。

深圳邁瑞公司BC-6000PLUS全自動血液分析儀（簡稱BC-6000PLUS）帶有體液檢測模式，但廠商未提供體液細胞計數(shù)的檢測下限，無法確保低值體液標本（尤其是腦脊液）檢測結果的穩(wěn)定性與準確性。我國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 662—2020《臨床體液檢驗技術》[1]（簡稱WS/T 662—2020）附錄A中明確要求每個實驗室都應建立所用體液模式檢測系統(tǒng)的有核細胞計數(shù)和紅細胞計數(shù)的檢測下限。據(jù)此，本研究以我國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 514—2017《臨床檢驗方法檢出能力的確立與驗證》[2]（簡稱WS/T 514—2017）文件內容為指導，建立并評價BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBC-BF細胞計數(shù)的空白限（limit of blank，LoB）和檢出限（limit of detection，LoD）[3]，以更好地指導臨床檢測工作。

1 材料和方法

1.1 標本制備

1.1.1 空白樣本 以BC-6000PLUS配套稀釋液（DC稀釋液）為空白樣本。

1.1.2 系列低濃度樣本 根據(jù)WBC-BF與RBCBF的LoB值，各配制6個WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本（根據(jù)WS/T 514—2017要求，系列低濃度樣本配制濃度最好為LoB～4倍LoB）。本研究系列低濃度樣本配制采用臨床新鮮腦脊液標本，其WBC-BF與RBC-BF檢測濃度分別約0.01×109/L和0.01×1012/L，用0.9%氯化鈉溶液進行梯度稀釋，配制成10%、20%、40%、60%、80%、100%濃度比例稀釋樣本，稀釋后WBCBF系列理論濃度分別為0.001×109/L、0.002×109/L、0.004×109/L、0.006×109/L、0.008×109/L、0.010×109/L；RBC-BF系列理論濃度分別為0.001×1012/L、0.002×1012/L、0.004×1012/L、0.006×1012/L、0.008×1012/L、0.010×1012/L。

1.2 方法

參考WS/T 514—2017要求，通過統(tǒng)計學方法建立WBC-BF與RBC-BF LoB值和LoD值。所有實驗操作程序均嚴格按照儀器說明書和科室標準操作規(guī)程文件要求進行。

1.2.1 LoB值 采用BC-6000PLUS配套DC稀釋液作為空白樣本，每天在BC-6000PLUS體液模式下重復檢測10次，連續(xù)6 d，得到60個統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

1.2.2 LoD值 根據(jù)LoB值濃度范圍，人工配制一系列低濃度水平體液樣本。鑒于體液樣本穩(wěn)定性較差，不易保存，配制的6個WBC-BF與RBC-BF低濃度水平樣本在1 d內的不同時間段重復檢測10次，WBC-BF與RBC-BF項目各得到60個統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析。若數(shù)據(jù)呈方差齊性，則采用參數(shù)統(tǒng)計方法計算；若實驗數(shù)據(jù)呈非方差齊性，則采用非參數(shù)統(tǒng)計方法計算。

2 結果

2.1 LoB值

BC-6000PLUS體液模式WBC-BF和RBCBF所有空白檢測值均為0。檢測結果符合正態(tài)分布，按公式LoB=μB+1.645σB計算LoB值，式中μB和σB為空白檢測結果均值和標準差。BC-6000PLUS體液模式WBC-BF LoB值為0×109/L，RBC-BF LoB值為0×1012/L。

2.2 LoD值

數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用非參數(shù)分析方法建立WBC-BF和RBC-BF LoD值，按公式LoD=LoB+Dsβ計算LoD值，式中Dsβ為檢測結果中位數(shù)（M）與第5百分位數(shù)間距，結果見表1、表2。

表1 系列低濃度WBC-BF樣本檢測結果 ×109/L

表2 系列低濃度RBC-BF樣本檢測結果 ×1012/L

2.2.1 WBC-BF LoD值 在60個低濃度水平樣本數(shù)據(jù)分布中，中位數(shù)（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號數(shù)值=0.005×109/L，第5百分位數(shù)=60×0.05+0.5=第3.5秩號數(shù)值=0.001×109/L，Dsβ=0.005×109/L-0.001×109/L=0.004×109/L。WBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×109/L+0.004×109/L=0.004×109/L。

2.2.2 RBC-BF LoD值 在60個低濃度水平樣本數(shù)據(jù)分布中，中位數(shù)（M）=60×0.5+0.5=第30.5秩號數(shù)值=0.006×1012/L，第5百分位數(shù)=60×0.05+0.5=第3.5秩號數(shù)值=0.002×1012/L，Dsβ=0.006×1012/L-0.002×1012/L=0.004×1012/L。RBC-BF LoD=LoB+Dsβ=0×1012/L+0.004×1012/L=0.004×1012/L。

3 討論

目前，傳統(tǒng)人工鏡檢方法已不能滿足臨床需要，腦脊液、漿膜腔積液、關節(jié)腔積液等體液標本自動化檢測將日益普及[4-5]?！禖NAS-CL02醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》[7]，即ISO15189：2012要求醫(yī)學實驗室需對所選檢驗程序進行性能驗證或確認，證實其達到制造商判定標準，才可用于患者標本檢測。因此，全自動血液分析儀體液檢測模式性能驗證非常重要，包括細胞計數(shù)的檢出下限。

2020年10月1日，由國家衛(wèi)生健康委員會頒布的衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 662—2020已正式實施。該標準附錄A明確規(guī)定每個實驗室應建立所用檢測系統(tǒng)有核細胞計數(shù)和紅細胞計數(shù)的檢測下限，且檢測下限不能低于儀器最低檢出限（LoD）。因為當?shù)椭刁w液標本細胞數(shù)量低于檢測下限值時，儀器檢測結果的準確性無法得到保證，此時仍需人工鏡檢計數(shù)復核確認，尤其是腦脊液標本。所以體液細胞計數(shù)的檢出下限是最為關鍵的性能驗證參數(shù)之一，儀器制造商如提供儀器的有核細胞計數(shù)和紅細胞計數(shù)的檢測下限，此時實驗室僅需按計劃實施檢測下限值的驗證，驗證通過則可直接采用儀器制造商聲明的檢測下限值，但制造商并未提供BC-6000PLUS體液模式計數(shù)LoB值和LoD值性能說明，因此，本實驗室需依據(jù)相關指南或標準文件要求[1-2，6-7]自建。

根據(jù)定義，LoB是空白樣品能被觀察到的最大測量值；LoD是樣品中檢出最低分析物濃度[8]。本研究結果表明，BC-6000PLUS WBC-BF、RBCBF的LoB值分別為0×109/L、0×1012/L，LoD值分別為0.004×109/L、0.004×1012/L。當標本白細胞計數(shù)為0.004×109/L或紅細胞計數(shù)為0.004×1012/L時，95%概率能與空白樣本進行區(qū)分。根據(jù)WS/T 662—2020關于“檢測下限不能低于儀器的最低檢出限”的要求，本實驗室設定BC-6000 PLUS的WBC-BF檢測下限值為0.004×109/L；RBC-BF檢測下限值為0.004×1012/L。當WBC-BF與RBC-BF檢測結果低于檢測下限時，表明儀器無法保證檢測結果準確，需用人工鏡檢計數(shù)“金標準”方法來復檢。

綜上所述，本研究依據(jù)WS/T 514—2017標準要求，建立并評價了BC-6000PLUS體液模式的LoB和LoD。因WBC-BF與RBC-BF細胞計數(shù)檢出下限值較低，能滿足腦脊液等臨床體液標本自動化檢測的需求。