近年來(lái)，隨著疾病譜的變化，癌癥已成為人類(lèi)健康的重大威脅和挑戰(zhàn)，給全球公共衛(wèi)生帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。預(yù)計(jì)到2040 年將發(fā)生超過(guò)2840 萬(wàn)例新癌癥病例，比2020年增加47%。癌癥是復(fù)雜的基因組疾病，根據(jù)其位置和細(xì)胞來(lái)源具有多種形式。泛癌研究的意義在于通過(guò)跨腫瘤相似性將診斷和治療應(yīng)用于更多的腫瘤。因此，識(shí)別不同癌癥類(lèi)型之間的關(guān)鍵基因有助于癌癥的診斷和治療。

隨著基礎(chǔ)研究及轉(zhuǎn)化研究的不斷深入，免疫治療的應(yīng)用開(kāi)啟了腫瘤治療的新紀(jì)元，其在肺癌、黑色素瘤、肝癌等多種腫瘤治療中取得令人鼓舞的治療效果，極大程度改善腫瘤患者的預(yù)后。目前的免疫療法，包括程序性死亡1（PD-1）、程序性死亡配體1（PD-L1）和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）抑制劑，但在大部分腫瘤中其臨床療效有限。鑒于制約免疫治療療效的復(fù)雜性，迫切需要可以預(yù)測(cè)免疫治療療效和預(yù)后的標(biāo)志物。在癌癥基因組圖譜（TCGA）的幫助下，學(xué)者們可以通過(guò)進(jìn)行泛癌表達(dá)分析來(lái)尋找新的免疫治療靶點(diǎn)，并研究它們與臨床病理特征、免疫浸潤(rùn)和與癌癥相關(guān)信號(hào)通路的相關(guān)性。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）是長(zhǎng)度大于200核苷酸的調(diào)節(jié)性RNA。越來(lái)越多的證據(jù)表明lncRNAs在轉(zhuǎn)錄、翻譯和表觀遺傳水平上調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)過(guò)程。lncRNA MIR22HG位于17p13.3，這是一個(gè)雜合性缺失或高甲基化染色體區(qū)域。現(xiàn)有研究表明，MIR22HG在胃癌、肝癌、肺癌及直腸癌中發(fā)揮抑癌基因作用進(jìn)而抑制腫瘤發(fā)生和發(fā)展，而在食管癌及膠質(zhì)瘤中則能促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。鑒于MIR22HG在不同腫瘤中的差異表達(dá)及生物學(xué)功能，其可能對(duì)腫瘤的診斷、預(yù)后和治療具有重要的價(jià)值。盡管已有文獻(xiàn)報(bào)道MIR22HG與腫瘤進(jìn)展的關(guān)系，但其在大部分腫瘤中的表達(dá)、功能及其與預(yù)后的關(guān)系尚不清楚；尚未有文獻(xiàn)報(bào)道MIR22HG與腫瘤免疫微環(huán)境的關(guān)系。本研究借助癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)生物信息學(xué)的方法泛癌分析MIR22HG的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系，并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

1 資料和方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 人肝癌細(xì)胞株HCC-LM3 和MHCC-97H購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2 藥品和試劑 DMEM培養(yǎng)基（Gibco）、胎牛血清（Gibco）；MIR22HG慢病毒過(guò)表達(dá)及干擾系統(tǒng)由上海吉?jiǎng)P基因構(gòu)建并包裝；TRIzol（Invitrogen）、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TAKARA）、SYBR熒光定量PCR試劑盒（TAKARA）、CCK-8試劑盒（日本同仁）。

瞳孔定位在視線(xiàn)追蹤、虹膜識(shí)別、醫(yī)療診斷中有著重要的作用。在視線(xiàn)追蹤中，可以根據(jù)瞳孔的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)判斷視線(xiàn)方向或落點(diǎn)，進(jìn)而可以獲知人的心理活動(dòng)；在虹膜識(shí)別中，通過(guò)瞳孔定位來(lái)提取虹膜區(qū)域，進(jìn)而可以進(jìn)行特征提?。辉卺t(yī)療方面，可以通過(guò)監(jiān)測(cè)瞳孔情況判斷一個(gè)人的精神狀況?？偠灾?，瞳孔定位具有很大的研究?jī)r(jià)值[1-2]。

國(guó)外有研究認(rèn)為大腸埃希菌菌株起源與系統(tǒng)發(fā)育群有關(guān)，同一個(gè)系統(tǒng)發(fā)育群的菌株可能存在共同的祖先，不同系統(tǒng)發(fā)育群致病力亦不相同［12,27］。Wang等［5］研究發(fā)現(xiàn)血流感染中大腸埃希菌主要是B2群，其次是D群、B1群和A群。本研究結(jié)果顯示，引起血流感染的大腸埃希菌主要為B2群，而F群菌株數(shù)量?jī)H次于B2群，與Wang等［5］報(bào)道并不一致，原因可能是本研究采用最新的分群方法［16］，更加細(xì)分出F群，目前采用這種新方法進(jìn)行血流感染大腸埃希菌分群的文獻(xiàn)報(bào)道罕見(jiàn)，關(guān)于F群菌株的特征有待進(jìn)一步研究。

圖5A列舉了與免疫浸潤(rùn)相關(guān)性最強(qiáng)的3種癌癥。在BRCA中，MIR22HG表達(dá)水平與B細(xì)胞（R=0.113，＜0.001）、CD4T細(xì)胞（R=0.371，＜0.001）、CD8T細(xì)胞（R=0.344，＜0.001）、樹(shù)突狀細(xì)胞（R=0.383，＜0.001）、巨噬細(xì)胞（R=0.439，＜0.001）和中性粒細(xì)胞（R=0.41，＜0.001）的浸潤(rùn)呈正相關(guān)；在結(jié)腸癌中，MIR22HG表達(dá)水平與B 細(xì)胞（R=0.272，＜0.001）、CD4T 細(xì)胞（R=0.355，＜0.001）、CD8T細(xì)胞（R=0.363，＜0.001）、樹(shù)突狀細(xì)胞（R=0.57，＜0.001）、巨噬細(xì)胞（R=0.32，＜0.001）和中性粒細(xì)胞（R=0.584，＜0.001）的浸潤(rùn)呈正相關(guān)；在KIRP 中，MIR22HG 表達(dá)水平與B 細(xì)胞（R=0.162，＜0.01）、CD4T細(xì)胞（R=0.19，＜0.01）、CD8T細(xì)胞（R=0.229，＜0.001）、樹(shù)突狀細(xì)胞（R=0.349，＜0.001）、巨噬細(xì)胞（R=0.243，＜0.001）和中性粒細(xì)胞（R=0.32，＜0.001）的浸潤(rùn)呈正相關(guān)。而在HNSC中，MIR22HG表達(dá)水平與B細(xì)胞（R=-0.128，＜0.01）和CD8T細(xì)胞（R=-0.155，＜0.001）的浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)；在THYM中，MIR22HG表達(dá)水平與B 細(xì)胞（R=-0.22，=0.017）、CD4T 細(xì)胞（R=-0.356，＜0.001）、CD8T細(xì)胞（R=-0.204，=0.027）和樹(shù)突狀細(xì)胞（R=-0.315，＜0.001）的浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)（圖5B）。

社會(huì)的不斷發(fā)展，新媒體技術(shù)已經(jīng)滲透到各個(gè)行業(yè)，在激烈的競(jìng)爭(zhēng)中脫穎而出，改變了人們的審美以及思維方式，傳統(tǒng)的電視節(jié)目更加注重真實(shí)性，隨著人們審美水平的提高，人們對(duì)電視節(jié)目的要求也在逐漸增加，傳統(tǒng)的節(jié)目效果已經(jīng)不能滿(mǎn)足大眾的需求，十分容易使人產(chǎn)生審美疲勞。因此，在電視行發(fā)展過(guò)程中，應(yīng)該加強(qiáng)后制作。通常來(lái)說(shuō)，后期制作的作用主要包括：（1）后期制作能夠及時(shí)剔除節(jié)目中一些不恰當(dāng)?shù)难哉摚苊猱a(chǎn)生錯(cuò)誤的輿論引導(dǎo)；同時(shí)，后期制作還能刪除一些多余的鏡頭，保留一些恰當(dāng)?shù)溺R頭。（2）后期制作可以對(duì)節(jié)目進(jìn)行適當(dāng)包裝、美化，提高電視節(jié)目的觀賞性，保證良好的收視率。

1.2 方法

1.2.1 數(shù)據(jù)集下載及數(shù)據(jù)處理 從UCSC Xena(https://xena.ucsc.edu/)數(shù)據(jù)庫(kù)下載癌癥基因組圖譜（TCGA），該數(shù)據(jù)庫(kù)包括11069例、共33種不同腫瘤類(lèi)型的表達(dá)譜。從GTEx（https://commonfund.nih.gov/GTEx）網(wǎng)站下載31個(gè)正常組織的基因表達(dá)譜。利用Strawberry Perl（Version 5.32.0,http://strawberryperl.com/）軟件從上述數(shù)據(jù)集中提取MIR22HG的表達(dá)譜，并分析上述腫瘤組織及正常組織中MIR22HG 的表達(dá)情況。對(duì)MIR22HG的表達(dá)水平進(jìn)行l(wèi)og2轉(zhuǎn)化后行統(tǒng)計(jì)分析，＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用R語(yǔ)言包“ggpubr”繪制差異表達(dá)的小提琴圖。UALCAN portal（http://ualcan.path.uab.edu/analysis-prot.html）是一種開(kāi)放資源，可用于分析不同腫瘤基因表達(dá)與臨床特征的關(guān)系，我們使用該網(wǎng)站分析不同腫瘤中MIR22HG表達(dá)與臨床特征的關(guān)系。從GEO（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）及ICGC（https://dcc.icgc.org/projects/LIRI-JP）數(shù)據(jù)庫(kù)下載肝癌及相應(yīng)癌旁組織的基因表達(dá)譜（GSE22058、GSE25097、STORM trial、ICGC-LIRI-JP），分析正常肝組織及癌旁組織中MIR22HG的表達(dá)情況，并分析索拉非尼治療有反應(yīng)及無(wú)反應(yīng)肝癌患者中MIR22HG的表達(dá)情況。

2.結(jié)合學(xué)生現(xiàn)有條件讓其自主選擇探究問(wèn)題。學(xué)生要有自主選擇權(quán)，可以讓學(xué)生先對(duì)選擇的問(wèn)題評(píng)價(jià)和比較，結(jié)合不同的愛(ài)好興趣與特長(zhǎng)，選取適宜自己的問(wèn)題加以研究，有利于發(fā)揮學(xué)生不同的潛能。課堂上不可能對(duì)學(xué)生所有的問(wèn)題全都解決，可針對(duì)性地自主選擇一個(gè)或多個(gè)開(kāi)展分析研究。

因此，由產(chǎn)品供應(yīng)鏈和物流服務(wù)供應(yīng)鏈構(gòu)成的系統(tǒng)內(nèi)各決策主體可根據(jù)自身所處市場(chǎng)的實(shí)際情況以及自身的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)狀況進(jìn)行博弈，確定相應(yīng)的利益分配系數(shù)，對(duì)利潤(rùn)進(jìn)行科學(xué)的分配，使得各自預(yù)期利潤(rùn)增加的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)整個(gè)系統(tǒng)整體利潤(rùn)達(dá)到集中決策下的利潤(rùn)水平。

ESTIMST算法免疫評(píng)分結(jié)果顯示，在包括BRCA、COAD及LIHC在內(nèi)的20中腫瘤中，MIR22HG的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)呈正相關(guān)，而在腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）和THCA中，MIR22HG的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)（＜0.05，圖4）。

1.2.4 微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）分析 MANTIS是用于識(shí)別腫瘤樣本MSI 的常用工具。我們使用MANTIS 從TCGA數(shù)據(jù)分析了33中腫瘤類(lèi)型的MSI，平均距離閾值=0.4用于區(qū)分微衛(wèi)星穩(wěn)定（MSS）和不穩(wěn)定（MSI-H）腫瘤。利用R 語(yǔ)言包“reshape2”和“RColorBrewer”繪制不同腫瘤中MIR22HG表達(dá)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定相關(guān)基因MLH1、MSH2、MSH6、PMS2和EPCAM的相關(guān)性。

1.2.5 MIR22HG表達(dá)與免疫細(xì)胞的相關(guān)性 TIMER是系統(tǒng)分析不同腫瘤類(lèi)型免疫浸潤(rùn)的理想工具。TIMER采用統(tǒng)計(jì)反褶積方法從基因表達(dá)譜中推斷腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的豐度。本研究利用TIMER分析MIR22HG表達(dá)與總共6種免疫浸潤(rùn)細(xì)胞（B細(xì)胞、CD4T細(xì)胞、CD8T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞）豐度之間的關(guān)系。ESTIMATE是一種可以預(yù)測(cè)腫瘤純度及腫瘤組織中浸潤(rùn)的基質(zhì)/免疫細(xì)胞的工具，本研究利用ESTIMATE算法來(lái)推斷不同腫瘤類(lèi)型中每個(gè)腫瘤樣本的免疫評(píng)分。

4.控制零食的攝入量及時(shí)間，且盡量選擇健康的零食。很多零食盲目的追求口感，而忽略了營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，所以要慎重選擇零食種類(lèi)。零食的攝入不應(yīng)該影響到正餐，要把握好攝入量及時(shí)間。

1.2.6 MIR22HG 表達(dá)與化療藥物敏感性的關(guān)系GDSC（https://www.cance rrxgene.org）是公共的腫瘤藥物敏感性基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，從GDSC網(wǎng)站中下載腫瘤藥物敏感性基因組學(xué)數(shù)據(jù)，利用R語(yǔ)言包“PharmacoGx”分析MIR22HG表達(dá)與化療藥物敏感性的關(guān)系。

1.2.7 Kaplan-Meier生存分析 Kaplan-Meier Plotter是用于評(píng)估21種癌癥類(lèi)型中54 000個(gè)基因?qū)ι嬗绊懙木€(xiàn)上工具。本研究利用Kaplan-Meier Plotter工具分析MIR22HG的表達(dá)與索拉非尼治療肝癌患者預(yù)后的關(guān)系，并計(jì)算了log-rank P值和95%置信區(qū)間（CI）的風(fēng)險(xiǎn)比率（HRs）。

1.2.8 熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)MIR22HG的表達(dá)利用TRIzol抽提肝癌細(xì)胞RNA，純化后用紫外分光光度儀檢測(cè)RNA濃度。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。利用染料法（SYBR Green I）將反應(yīng)體系置于熒光定量PCR系統(tǒng)進(jìn)行熒光定量PCR 分析，U6作為內(nèi)參。本實(shí)驗(yàn)所用引物由上海生工公司設(shè)計(jì)并合成（表1）。

1.2.9 細(xì)胞培養(yǎng) 用含10%血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HCC-LM3和MHCC-97H，并置于含5%CO，37 ℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)到85%左右進(jìn)行常規(guī)傳代和后續(xù)實(shí)驗(yàn)，1～2 d/次進(jìn)行換液。

1.2.10 CCK-8法檢測(cè)MHCC-97H和HCC-LM3細(xì)胞的IC值 將相應(yīng)處理后的MHCC-97H和HCC-LM3細(xì)胞分別制成1×10/mL的細(xì)胞混懸液，接種于96孔板中，加入200 μL用無(wú)血清培養(yǎng)基配制的10%CCK-8，培養(yǎng)2 h，用Bio-Rad酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)。每組重復(fù)3個(gè)復(fù)孔，取平均值，根據(jù)［（1-/）×100］計(jì)算細(xì)胞抑制率（%），以抑制50%細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物濃度定義為IC。

雷達(dá)圖顯示MIR22HG的表達(dá)與COAD、OV、肉瘤（SARC）及胸腺瘤（THYM）的腫瘤突變負(fù)荷呈正相關(guān)，而 與BRCA、KIRC、KIRP、LIHC、LUAD、LUSC 和PAAD等的腫瘤突變負(fù)荷呈負(fù)相關(guān)（＜0.05）；在其它腫瘤中未發(fā)現(xiàn)明顯相關(guān)性（圖3A）。MIR22HG的表達(dá)與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBC）、LIHC、LUSC及STAD的微衛(wèi)星不穩(wěn)定呈負(fù)相關(guān)，而與低級(jí)別膠質(zhì)瘤（LGG）的微衛(wèi)星不穩(wěn)定呈正相關(guān)（＜0.05）；而在其它腫瘤中未發(fā)現(xiàn)任何相關(guān)性（圖3B）。同時(shí)，在包括BRCA、LIHC 和KIRP在內(nèi)的25種腫瘤中，MIR22HG的表達(dá)與微衛(wèi)星不穩(wěn)定相關(guān)基因的表達(dá)相關(guān)（＜0.05，圖3C）。

2 結(jié)果

2.1 泛癌中MIR22HG的表達(dá)水平及突變頻率和拷貝數(shù)變化

TCGA數(shù)據(jù)集的泛癌表達(dá)譜分析顯示，與癌旁組織相比，MIR22HG在16種癌癥組織中低表達(dá)（＜0.05），包括膀胱尿路上皮癌（BLCA）、乳腺癌（BRCA）、結(jié)腸癌（COAD）、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSC）、腎嫌色細(xì)胞癌（KICH）、腎透明細(xì)胞癌（KIRP）、腎乳頭狀細(xì)胞癌（KIRP）、低級(jí)別膠質(zhì)瘤（LGG）、肺腺癌（LUAD）、肺鱗癌（LUSC）、胰腺癌（PAAD）、前列腺癌（PRAD）、直腸腺癌（READ）、甲狀腺癌（THCA）及子宮內(nèi)膜癌（UCEC）（圖1A）。因TCGA數(shù)據(jù)集中部分癌癥類(lèi)型無(wú)相應(yīng)的正常組織表達(dá)譜，我們結(jié)合GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)中31種正常組織的表達(dá)譜和TCGA數(shù)據(jù)集表達(dá)譜進(jìn)行綜合分析，結(jié)果顯示，除上述癌癥類(lèi)型外，MIR22HG 在腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）、食管癌（ESCA）、肝細(xì)胞肝癌（LIHC）、卵巢癌（OV）、皮膚黑色素瘤（SKCM）、胃癌（STAD）、睪丸癌（TGCT）和子宮肉瘤（UCS）中的表達(dá)均較正常組織的表達(dá)明顯降低（＜0.05）；而在膠質(zhì)瘤（GBM）和急性髓細(xì)胞樣白血病（LAML）中MIR22HG的表達(dá)較正常組織明顯增高（＜0.05，圖1B）。MIR22HG基因突變和拷貝數(shù)變異分析顯示，在多種腫瘤類(lèi)型中，MIR22HG基因存在不同程度基因突變，包括缺失突變、擴(kuò)增突變及融合突變，其中缺失突變最常見(jiàn)；而STAD中MIR22HG突變頻率最高。缺失突變占拷貝數(shù)變化的0.59%（63/10 953）（圖1C）。生存分析顯示MIR22HG基因突變患者無(wú)病生存及無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間較短（＜0.05，圖1D）。

2.2 MIR22HG表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

在BLCA、BRCA、KIRC、KIRP、LIHC、睪丸癌（TGCT）和THCA中，MIR22HG的表達(dá)隨臨床分期增加而逐漸降低（＜0.05，圖2A）。同時(shí)，在KIRC、KIRP、THCA和LUSC中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤MIR22HG的表達(dá)進(jìn)一步降低（＜0.05，圖2B）。

1.2.2 MIR22HG 拷貝數(shù)變異和突變的泛癌分析cBioPortal癌癥基因組學(xué)門(mén)戶(hù)網(wǎng)站（http://cbioportal.org）是開(kāi)放式資源，可用于分析各種腫瘤樣本的基因組變化，我們應(yīng)用cBioPortal來(lái)識(shí)別MIR22HG拷貝數(shù)變化和突變的頻率，并行生存分析。

2.3 MIR22HG表達(dá)與腫瘤突變負(fù)荷和微衛(wèi)星不穩(wěn)定之間的相關(guān)性

1.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 Wilcoxon檢測(cè)用于評(píng)估正常組織和腫瘤組織間MIR22HG的表達(dá)差異。Kaplan-Meier方法用于計(jì)算總生存期（OS），并使用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)比較生存曲線(xiàn)。Pearson相關(guān)性分析用于評(píng)估MIR22HG表達(dá)水平與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因的相關(guān)性。用R 軟件（3.6.3版本）行統(tǒng)計(jì)分析，＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

云模型是一種能夠?qū)崿F(xiàn)定性與定量間相互轉(zhuǎn)換的數(shù)學(xué)模型，能夠充分體現(xiàn)事物的模糊性以及隨機(jī)性[13]。假設(shè)X是一個(gè)定量論域，C是定量論域相對(duì)應(yīng)的定性概念，其中x為X中的任意一個(gè)值，它也滿(mǎn)足定性概念C對(duì)其的定義，x對(duì)C的確定度為μ(x)∈0,1，是具有穩(wěn)定傾向的隨機(jī)數(shù)，可表示為：

2.4 MIR22HG與免疫評(píng)分的關(guān)系

1.2.3 腫瘤突變負(fù)荷（TMB）估算 使用R 語(yǔ)言包“TCGAbiolinks”下載TCGA中突變注釋文件。每兆堿基組的體細(xì)胞變異數(shù)被定義為腫瘤突變負(fù)荷。

2.5 MIR22HG與免疫浸潤(rùn)的相關(guān)性

1.1.3 肝癌標(biāo)本收集 本研究通過(guò)了南方醫(yī)院倫理委員會(huì)的審批，批準(zhǔn)倫理號(hào)：NFEC-201208-K3。所有標(biāo)本均來(lái)源于就診南方醫(yī)院的肝癌初診患者，患者均未接受過(guò)抗腫瘤治療；標(biāo)本收集前與患者簽署知情同意書(shū)，標(biāo)本離體后，分別取癌組織和癌旁組織（與癌組織的距離＞2 cm）；并立即放入液氮保存。

2.6 MIR22HG表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因的相關(guān)性

MIR22HG表達(dá)在包括BRCA、COAD和LIHC在內(nèi)的28中腫瘤中與大多數(shù)免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因相關(guān)，其中相關(guān)性最強(qiáng)的為COAD、LGG和UVM（＜0.05）；而在ACC、BLCA、CESC、ESCA 和SARC 中，未發(fā)現(xiàn)MIR22HG與免疫檢查點(diǎn)基因相關(guān)（圖6）。

2.7 MIR22HG表達(dá)與化療藥物敏感性的相關(guān)性

相關(guān)性分析顯示MIR22HG的表達(dá)與164種化療藥物IC50呈正相關(guān)（＜0.05），圖7A呈現(xiàn)正相關(guān)且相關(guān)性最強(qiáng)的9種藥物，包括AZD1208（Pim激酶抑制劑，=0.45，＜0.05）、AZD5991（Mcl-1抑制劑，=0.44，＜0.05）、Zoledronate（唑來(lái)膦酸，=0.43，＜0.05）、Entinostat（恩替諾特，=0.44，＜0.05）、JQ1（BET抑制劑，=0.47，＜0.05）、MIRA-1（p53激動(dòng)劑，=0.43，＜0.05）、sorafenib（索拉非尼，=0.43，＜0.05）、Venetoclax（BCL-2抑制劑，=0.45，＜0.05）和Vorinostat（HDAC 抑制劑，=0.52，＜0.05）；而MIR22HG 表達(dá)水平與Dasatinib（達(dá)沙替尼，=-0.24，＜0.05）和Trametinib（曲美替尼，=-0.16，＜0.05）的IC呈負(fù)相關(guān)（圖7B）。

莫里森戲擬了現(xiàn)實(shí)主義文學(xué)的敘事模式，利用人們?cè)诜磸?fù)強(qiáng)化中生成的期待心理，故意反其道而用之，讓讀者的閱讀期待在接受的過(guò)程中不斷生成而又不斷落空，達(dá)到了互動(dòng)式的戲擬效果，而這一戲擬特點(diǎn)本身就是互文特征的具體體現(xiàn)。

2.8 MIR22HG在肝癌中的表達(dá)及其與索拉非尼耐藥的關(guān)系

多數(shù)據(jù)集分析結(jié)果證實(shí)，與癌旁組織相比，MIR22HG在肝癌組織中低表達(dá)（＜0.05，圖8A）。qRTPCR結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)MIR22HG在肝癌中低表達(dá)（＜0.05，圖8B）。MIR22HG的表達(dá)隨著疾病進(jìn)展逐漸降低（＜0.05，圖8C、D）。MIR22HG與臨床特征的相關(guān)性分析顯示MIR22HG 表達(dá)與肝癌TNM 分期相關(guān)（=0.036，表2）。相關(guān)性分析顯示MIR22HG的表達(dá)與索拉非尼IC呈正相關(guān)，因此，本研究探討MIR22HG表達(dá)與索拉非尼治療肝癌患者預(yù)后的關(guān)系，生存分析顯示MIR22HG低表達(dá)的肝癌患者經(jīng)索拉非尼治療后總生存期明顯延長(zhǎng)（HR=2.94，=0.075，圖8E）。相似地，與索拉非尼治療無(wú)效患者相比，索拉非尼治療有效的患者M(jìn)IR22HG的表達(dá)明顯降低（＜0.05，圖8F），MIR22HG低表達(dá)能有效預(yù)測(cè)肝癌患者索拉非尼治療效果（AUC=0.8095，圖8G）。與對(duì)照組相比（HCC-LM3-NC），過(guò)表達(dá)MIR22HG組（HCC-LM3-MIR22HG）細(xì)胞的對(duì)索拉非尼的IC明顯增高（ICIC=7.73115.61，圖8H）；反之，與對(duì)照組相比（MHCC-97H-NC），敲除MIR22HG組細(xì)胞（MHCC-97H-sh-MIR22HG）對(duì)索拉非尼的IC能明顯降低（ICIC=7.9865.085，圖8I）。

3 討論

盡管越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道MIR22HG在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要的作用，尚無(wú)任何從整體角度對(duì)MIR22HG進(jìn)行泛癌分析的研究。因此，本研究基于TCGA 和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)基因表達(dá)、突變頻率和拷貝數(shù)變化等角度對(duì)不同腫瘤中的MIR22HG基因進(jìn)行綜合分析。我們旨在探討MIR22HG在腫瘤組織和正常組織的表達(dá)高低，而TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中某些癌癥組織缺少正常組織及癌旁組織，或者相應(yīng)癌旁組織樣本量較少，比如腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）、食管癌（ESCA）和卵巢癌（OV）等，因此我們將TCGA與含有31個(gè)正常組織表達(dá)譜的GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合分析。我們觀察到MIR22HG在大多數(shù)腫瘤中低表達(dá)，包括BRCA、COAD、LUAD、LUSC、PRAD、READ 和LIHC 等；而在腦膠質(zhì)瘤中MIR22HG的表達(dá)較正常組織明顯增高。我們的分析結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道相一致，MIR22HG在不同腫瘤中的表達(dá)水平及生物學(xué)功能不同。已有報(bào)道MIR22HG在結(jié)直腸癌中顯著低表達(dá)，其作為抑癌基因能通過(guò)調(diào)控TGF-β/SMAD信號(hào)通路增強(qiáng)免疫治療療效。在肺癌中，抑制MIR22HG表達(dá)能激活YBX1/MET/p21信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)肺癌進(jìn)展。而腦膠質(zhì)瘤中，高表達(dá)的MIR22HG能通過(guò)wnt/beta-catenin信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤進(jìn)展。這些爭(zhēng)議的結(jié)果強(qiáng)調(diào)了MIR22HG在不同腫瘤類(lèi)型發(fā)揮特定作用的可能性?；蚪M突變及拷貝數(shù)變異在一定程度上影響基因的表達(dá)水平，我們觀察到MIR22HG在多種腫瘤中均存在不同程度缺失突變，因此，我們推測(cè)基因組缺失突變可能是MIR22HG在不同腫瘤中低表達(dá)的原因之一，而MIR22HG在不同腫瘤中差異表達(dá)的原因仍需進(jìn)一步探討。

異常表達(dá)的lncRNA可以通過(guò)多種途徑調(diào)控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，除了調(diào)控腫瘤細(xì)胞本身的之外，lncRNA還能通過(guò)調(diào)控不同信號(hào)通路影響腫瘤微環(huán)境。腫瘤微環(huán)境由腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞成分以及非細(xì)胞成分組成。免疫細(xì)胞可塑性極強(qiáng)，容易受到腫瘤微環(huán)境的影響，可以被激活并促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展。針對(duì)免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞相互作用的免疫治療已成為近年的研究熱點(diǎn)，并已成功應(yīng)用于臨床。然而，只有在某些特定腫瘤如黑色素瘤中，有限比例的患者對(duì)免疫治療有效。因此，尋找新的免疫治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。越來(lái)越多的研究表明，腫瘤免疫細(xì)胞浸潤(rùn)水平和免疫治療療效及患者預(yù)后密切相關(guān)。為了闡明MIR22HG與免疫浸潤(rùn)的關(guān)系，我們首先利用ESTIMAT算法計(jì)算TCGA隊(duì)列中MIR22HG表達(dá)水平與免疫評(píng)分的關(guān)系，結(jié)果顯示在包括BRCA、COAD及LIHC在內(nèi)的20中腫瘤中，MIR22HG的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)呈正相關(guān)，而在ACC和THCA中，MIR22HG的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)，表明在大多數(shù)腫瘤中，MIR22HG的表達(dá)水平與高免疫細(xì)胞浸潤(rùn)相關(guān)。利用TIMER分析我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于不同腫瘤類(lèi)型，MIR22HG表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞之間的相關(guān)性不同。進(jìn)一步探討了MIR22HG表達(dá)與免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)MIR22HG表達(dá)在包括BRCA、COAD和LIHC在內(nèi)的28中腫瘤中與大多數(shù)免疫檢查點(diǎn)相關(guān)基因相關(guān)；而在ACC、膀BLCA、CESC、ESCA和SARC中，未發(fā)現(xiàn)MIR22HG與免疫檢查點(diǎn)基因相關(guān)。這些結(jié)果提示MIR22HG的表達(dá)水平與腫瘤免疫細(xì)胞浸潤(rùn)及免疫細(xì)胞的功能密切相關(guān)，MIR22HG有可能成為免疫治療的有效靶點(diǎn)。

GDSC是公共的腫瘤藥物敏感性基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，利用該數(shù)據(jù)庫(kù)可分析基因表達(dá)與常用化療藥物敏感性的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)，MIR22HG 的表達(dá)水平與MIR22HG的表達(dá)與包括索拉非尼在內(nèi)的164種化療藥物IC5成正相關(guān)；而與2種化療藥物（達(dá)沙替尼和曲美替尼）的IC呈負(fù)相關(guān)。以上結(jié)果提示盡管MIR22HG在多種腫瘤中顯著低表達(dá)，但是低表達(dá)MIR22HG的腫瘤患者可能對(duì)包括索拉非尼在內(nèi)的化療藥物更敏感。

盡管在TCGA、GTEx和GDSC數(shù)據(jù)庫(kù)中整合了信息，單純生物信息學(xué)分析仍有局限性。為了克服這一問(wèn)題，我們利用基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)對(duì)泛癌分析結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。本課題組長(zhǎng)期致力于肝癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制研究，索拉非尼是晚期肝癌一線(xiàn)治療手段，泛癌分析結(jié)果提示MIR22HG在肝癌顯著低表達(dá)，且尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道其表達(dá)水平與索拉非尼治療的關(guān)系，因此，我們?cè)诟伟┲序?yàn)證MIR22HG的表達(dá)及其與索拉非尼治療的相關(guān)性。我們重新整合GEO（GSE22058、GSE25097和STORM trial）及ICGCLIRI-JP數(shù)據(jù)庫(kù)信息初步驗(yàn)證MIR22HG在肝癌中低表達(dá)，接著，利用qRT-PCR法檢測(cè)12對(duì)新鮮肝癌標(biāo)本及對(duì)應(yīng)癌旁組織中MIR22HG的表達(dá)情況，結(jié)果再次驗(yàn)證MIR22HG在肝癌中低表達(dá)。MIR22HG表達(dá)與藥物敏感性分析提示MIR22HG高表達(dá)與索拉非尼耐藥相關(guān)，提取TCGA數(shù)據(jù)集中經(jīng)索拉非尼治療肝癌患者行生存分析，我們觀察到，MIR22HG低表達(dá)的患者經(jīng)索拉非尼治療后生存期明顯延長(zhǎng)，差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義可能與樣本例數(shù)不足相關(guān)（=29）。利用肝癌索拉非尼治療的經(jīng)驗(yàn)臨床研究（STORM trial）的基因譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，也提示相較于索拉非尼治療無(wú)效的患者，索拉非尼治療有效的患者M(jìn)IR22HG 表達(dá)水平較低，且MIR22HG能有效預(yù)測(cè)索拉非尼治療的有效性。這些結(jié)果初步驗(yàn)證MIR22HG表達(dá)與索拉非尼治療敏感性相關(guān)。利用體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)MIR22HG能降低肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼的敏感性；而敲除MIR22HG的表達(dá)則能增加肝癌細(xì)胞對(duì)索拉非尼的敏感性。綜上所述，MIR22HG在肝癌中低表達(dá)，且其低表達(dá)與肝癌進(jìn)展密切相關(guān)，而MIR22HG低表達(dá)的患者更能從索拉非尼治療中獲益。因此，治療前檢測(cè)MIR22HG的表達(dá)水平有助于篩選索拉非尼治療的潛在獲益人群。

總之，本研究闡明了MIR22HG在多種癌癥類(lèi)型中顯著低表達(dá)，其表達(dá)水平與多種腫瘤的分期、有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤突變負(fù)荷、微衛(wèi)星不穩(wěn)定、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)及化療藥物敏感性相關(guān)，因此，MIR22HG有望成為免疫療法的潛在靶點(diǎn)和篩選化療獲益人群的生物標(biāo)志物。