章宇 梁甜 巨云為 朱海軍 吳天昊 周潔璐

摘要：為了篩選出能有效抑制小粒材小蠹伴生鐮刀菌的殺菌劑，在實驗室條件下，采用菌絲生長速率法，選用25%吡唑醚菌酯懸浮劑、450 g/L咪鮮胺水乳劑、40%百菌清懸浮液、25%氰烯菌酯懸浮劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑、30%丙硫菌唑懸浮劑、42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑對小粒材小蠹3種伴生致病菌腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）、層出鐮刀菌（F. proliferatum）和藤倉鐮刀菌（F. fujikura）進行室內毒力測定。結果表明，7種殺菌劑對3種致病鐮刀菌表現出不同程度的抑制作用，其中450 g/L咪鮮胺對腐皮鐮刀菌和層出鐮刀菌的毒力最強，EC50分別為10.75、11.47 μg/mL;450 g/L咪鮮胺和25%氰烯菌酯對藤倉鐮刀菌的毒力較強，EC50分別為1.63、3.85 μg/mL。綜上所述，450 g/L咪鮮胺的毒力最強，且在濃度為225～450 μg/mL時對3種鐮刀菌的抑制率也最高，表現出較強的抑制作用。

關鍵詞：小粒材小蠹;鐮刀菌;殺菌劑;毒力測定;菌絲生長速率法

中圖分類號： S763.38? 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2022）08-0128-05

小粒材小蠹（Xyleborus saxeseni）主要危害華山松（Pinus armandii Franch.）、楊樹（Populus L.）、蘋果（Malus pumila Mill.）、山核桃（Carya cathayensis Sarg.）等林木，是一種食菌小蠹。食菌小蠹在蛀入樹干后，會將自身攜帶的真菌釋放到坑道內。這些蟲道真菌不僅能供小蠹蟲及其后代取食，還能借助食菌小蠹的危害進行傳播，破壞植物的抗性機制，削弱樹勢，對林木造成嚴重危害[1-3]。因此國內外越來越多的學者開始致力于研究食菌小蠹及其伴生致病真菌。本研究前期從小粒材小蠹上分離出多種伴生菌，其中有3種鐮刀菌分離率高，致病性強，分別為腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）、層出鐮刀菌（F. proliferatum）和藤倉鐮刀菌（F. fujikura）。

鐮刀菌主要通過侵染植株的維管束系統(tǒng)致使植株表現出萎蔫、腐爛、根腐等一系列病癥，危害嚴重時甚至導致寄主植株整株死亡，對作物的產量和品質造成嚴重的威脅，而目前見效快、成本低、使用方便的化學防治法仍是降低鐮刀菌危害的主要防治手段[4-5]。寧楠楠等利用5種殺菌劑對馬鈴薯干腐病菌三線鐮刀菌（F. tricinctum）、尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）和木賊鐮刀菌（F. equiseti）進行毒力測定，結果發(fā)現60 g/L戊唑醇的毒力較強，甚至在稀釋500～1 000倍時對3種病原菌也能表現出較強的抑制作用[6]。張健采用菌絲生長抑制法和孢子萌發(fā)抑制法，分析了5種殺菌劑對受害苗上分離出的尖孢鐮刀菌的毒力效果，發(fā)現異菌脲和咯菌腈這2種藥劑均能很好地抑制尖孢鐮刀菌的菌絲生長和孢子萌發(fā)[7]。

本研究通過前期多次預試驗的藥劑篩選，最后決定采用吡唑醚菌酯、咪鮮胺、百菌清、氰烯菌酯、戊唑醇、丙硫菌唑和唑醚·氟酰胺這7種藥劑對小粒材小蠹的3種伴生鐮刀菌進行室內毒力測定，旨在為高效防治小粒材小蠹及其伴生鐮刀菌提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

于2021年3月4—28日在南京林業(yè)大學昆蟲分子毒理實驗室開展本試驗。

1.2 試驗材料

1.2.1 供試菌株 實驗室前期從小粒材小蠹蟲體上分離出的伴生致病菌腐皮鐮刀菌、層出鐮刀菌和藤倉鐮刀菌。

1.2.2 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基。

1.2.3 供試藥劑 本試驗所用的藥劑種類、生產廠家、農藥濃度見表1。

1.3 試驗方法

1.3.1 制備含藥培養(yǎng)基 將上述7種藥劑母液依次稀釋至一定濃度（表1），在無菌操作臺內分別把500 μL不同濃度的藥劑加入50 mL培養(yǎng)基中，混勻后制成含藥培養(yǎng)基，以加無菌水的PDA平板作對照（CK），每個處理重復3次，并在培養(yǎng)基內加入少量的卡那霉素和氨芐西林以避免細菌污染[8]。

1.3.2 毒力測定 采用菌絲生長抑制率法進行毒力測定[9-10]。用內徑為0.582 cm的打孔器沿試驗菌株邊緣打孔獲得菌餅，將菌餅接種在不同種類的含藥培養(yǎng)基中間。菌絲面朝下置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。當對照組菌落菌絲長到4/5時，即可測量所有培養(yǎng)基的菌落直徑（十字交叉法，用游標卡尺進行測量），計算菌絲生長抑制率，抑菌率計算公式如下：

抑菌率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）×100%。

將7種藥劑5個濃度梯度下菌落生長的抑菌率換算成抑制概率值，作為因變量（y），藥劑濃度的自然對數值作為自變量（x），利用最小二乘法建立“濃度對數-概率值”直線方程[11]。用Excel 2019和DPS 7.05軟件求出相關系數（r）、抑制中濃度（EC50）及毒力回歸方程（y=ax+b），以比較不同藥劑對病原菌的毒力效果。

2 結果與分析

2.1 7種殺菌劑對腐皮鐮刀菌的抑菌效果

由表2可知，對腐皮鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時，抑菌率為45.43%～100%;30%丙硫菌唑濃度為30～30 000 μg/mL時，抑菌率為39.39%～80.82%;430 g/L戊唑醇濃度為43～430 μg/mL時，抑菌率為32.03%～68.44%;25%氰烯菌酯濃度為250～25 000 μg/mL時，抑菌率為2.43%～61.61%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時，抑菌率為27.48%～50.50%;25%吡唑醚菌酯濃度為25 000～250 000 μg/mL時，抑菌率為20.14%～41.65%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為42 400～424 000 μg/mL時，抑菌率為28.19%～49.07%。

2.2 7種殺菌劑對層出鐮刀菌的抑菌效果

由表3可知，對層出鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時，抑菌率為30.29%～97.60%;30%丙硫菌唑濃度為300～300 000 μg/mL時，抑菌率為51.44%～75.56%;430 g/L戊唑醇濃度為43～430 μg/mL時，抑菌率為27.26%～70.42%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時，抑菌率為19.96%～61.56%;25%氰烯菌酯濃度為25～25 000 μg/mL時，抑菌率為1.54%～52.62%;25%吡唑醚菌酯濃度為25 000～250 000 μg/mL 時，抑菌率為5.76%～24.20%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為42 400～424 000 μg/mL時，抑菌率為16.54%～34.09%。

2.3 7種殺菌劑對藤倉鐮刀菌的抑菌效果

由表4可知，對藤倉鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時，抑菌率為91.62%～100%;25%氰烯菌酯濃度為2.5～250 μg/mL時，抑菌率為50.36%～84.95%;430 g/L戊唑醇濃度為4.3～430 μg/mL時，抑菌率為25.15%～80.03%;30%丙硫菌唑濃度為3～3 000 μg/mL時，抑菌率為16.16%～85.52%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時，抑菌率為56.24%～76.59%;25%吡唑醚菌酯濃度為2 500～250 000 μg/mL時，抑菌率為53.84%～65.51%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為424～42 400 μg/mL時，抑菌率為45.55%～60.08%。

2.4 7種殺菌劑對腐皮鐮刀菌的毒力測定

由表5可知，7種殺菌劑對腐皮鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450g/L咪鮮胺（10.75μg/mL）、30%丙硫菌唑（85.12 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（113.27 μg/mL）、25%氰烯菌酯（10 636.57 μg/mL）、40%百菌清（24 543.86 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（454 757.34 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（578 930.14 μg/mL）。因此，450 g/L咪鮮胺對腐皮鐮刀菌室內毒力最強，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.5 7種殺菌劑對層出鐮刀菌的毒力測定

由表6可知，7種殺菌劑對層出鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450 g/L咪鮮胺（11.47 μg/mL）、30%丙硫菌唑（64.58 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（179.32 μg/mL）、40%百菌清（5 410.75 μg/mL）、25%氰烯菌酯（67 112.66 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（1 827 947.33 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（3 678 352.65 μg/mL）。因此，450 g/L咪鮮胺對層出鐮刀菌室內毒力最強，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.6 7種殺菌劑對藤倉鐮刀菌的毒力測定

由表7可知，7種殺菌劑對藤倉鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450 g/L咪鮮胺（1.63 μg/mL）、25%氰烯菌酯（3.85 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（37.00 μg/mL）、30%丙硫菌唑（93.53 μg/mL）、40%百菌清（198.36 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（858.30 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（1 567.21 μg/mL）。因此，對于藤倉鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺、25%氰烯菌酯對其室內毒力最強，430 g/L戊唑醇、30%丙硫菌唑次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

3 討論與結論

本研究選取7種廣譜殺菌劑分別對小粒材小蠹3種伴生鐮刀菌做抑菌試驗和室內毒力測定。研究表明，450 g/L咪鮮胺對3種鐮刀菌的抑菌效果和毒力作用都遠好于其他藥劑，30%丙硫菌唑、40%百菌清、25%氰烯菌酯和430 g/L戊唑醇對3種鐮刀菌的抑菌效果和毒力作用次之，而25%吡唑醚菌酯、42.4%唑醚·氟酰胺對3種鐮刀菌的毒力作用弱，抑菌效果也較差。

本研究中450 g/L咪鮮胺表現最好，咪鮮胺作為一種高效低毒的廣譜殺菌劑，作用機制是抑制麥角甾醇生物合成，同時具有保護、鏟除的雙重作用，這類藥劑還具有內吸、傳導性的特點，常被應用于防治由子囊菌和半知菌引起的多種作物病害[12]。周鑫鈺等選用7種殺菌劑對從藍莓根腐病病樣上分離鑒定出的尖孢鐮刀菌進行室內毒力測定，結果表明，咪鮮胺對其抑制效果顯著，EC50為0.071 59 mg/L[13]。孟珂等在測定咪鮮胺、戊唑醇、咯菌腈等8種殺菌劑對9種薄殼山核桃炭疽菌的室內毒力試驗中，發(fā)現咪鮮胺對9種病原菌菌絲抑制作用最強，平均EC50為0.14 mg/L[14]。此外，咪鮮胺和其他化學藥劑混配在病害防治中也表現出一定的增效作用，馬雪莉等在對咪鮮胺與嘧菌酯及其混劑對禾谷鐮孢菌的毒力測定中發(fā)現，咪鮮胺與嘧菌酯配比為4 ∶2時增效作用最強，EC50僅為0.044 mg/L[15]。

本研究中的室內毒力測定內容僅針對7種單一藥劑進行，關于化學藥劑與其他化學藥劑的復配劑、化學藥劑與植物源藥劑復配劑是否能夠起到增效的作用還需進一步研究。此外，本試驗僅對病原菌在室內離體條件下進行了毒力測定，還需在林間被害株上進一步驗證。

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