楊海雁，于喆源，班小軍

（張掖市質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，甘肅張掖 734000）

當(dāng)歸又名干歸、山蘄、白蘄和文無(wú)，為傘形科多年生草本植物。根圓柱狀，黃棕色，有濃郁香氣，綠白色或帶紫色[1]。當(dāng)歸以根入藥，藥性甘、辛、溫，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)燥滑腸等功效[2]。在我國(guó)現(xiàn)存最早的藥學(xué)著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有關(guān)于當(dāng)歸的記載，至今仍在臨床廣泛應(yīng)用，尤其在婦科用藥中有“十方九歸”之說(shuō)，被稱為“婦科之圣藥”[3]。當(dāng)歸中含有內(nèi)酯類、生物堿類、有機(jī)酸類或酚類、氨基酸、微量元素、維生素以及中性揮發(fā)油等多種成分。當(dāng)歸揮發(fā)油是當(dāng)歸的主要有效成分之一，其中的化學(xué)成分按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類主要為苯酞類，其中藁本內(nèi)酯占此類化合物總量的60%以上[4-5]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

當(dāng)歸，采于甘肅岷縣；當(dāng)歸揮發(fā)油，自制；藁本內(nèi)酯，98.5%，濟(jì)寧天之藍(lán)生物科技有限公司；胰蛋白胨大豆肉湯、伊紅美藍(lán)瓊脂、BP瓊脂基礎(chǔ)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、孟加拉紅培養(yǎng)基，青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

大腸桿菌（ATCC25922）、阪崎腸桿菌（ATCC51329）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、黑曲霉（CMCC98003）、釀酒酵母（ATCC9080），廣東省微生物菌種保藏中心，

KMD-1000揮發(fā)油裝置，北京科偉永興儀器有限公司；LDZX-50KBS高壓滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；ZSP-SB78生化培養(yǎng)箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；ZSP-SB057電子天平（百分之一），上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；BSL-1500ⅡA2-X生物安全柜，濟(jì)南鑫貝西生物科技有限公司；10 μL接種環(huán)，上海晶安生物科技有限公司；DW-86L158冰箱，浙江捷盛低溫設(shè)備有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 水蒸氣蒸餾法提取當(dāng)歸揮發(fā)油

按照《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的揮發(fā)油提取方法：精密稱取當(dāng)歸100 g，粉碎后過(guò)2號(hào)篩，加入蒸餾水約500 mL，靜置浸泡1 h；連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸5 h，至測(cè)定器中油量不再增加。得到淡黃色的揮發(fā)油，揮發(fā)油的含量為0.51%[4]。

1.2.2 抑菌性能試驗(yàn)

溶液配制：當(dāng)歸精油、藁本內(nèi)酯分別用純化水配制成濃度為0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL和5.0 mg/mL的溶液。菌種復(fù)活：將實(shí)驗(yàn)室-80 ℃冷凍保存的2代磁珠菌株劃胰蛋白胨瓊脂斜面，37 ℃培養(yǎng)24 h。菌懸液制備：用一次性接種環(huán)從斜面刮取適量菌落，放入生理鹽水中制成1×102～1×103CFU/mL菌懸液。

將0.45 μm的無(wú)菌濾膜浸泡在上述體積分?jǐn)?shù)的當(dāng)歸精油、藁本內(nèi)酯溶液中6 h；將伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、BP瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂按產(chǎn)品要求配制好，與當(dāng)歸精油、藁本內(nèi)酯溶液一起置于高壓滅菌鍋，121 ℃滅菌15 min；滅菌結(jié)束后，將上述培養(yǎng)基的溫度降至45 ℃左右，傾倒無(wú)菌平皿。

分別吸取6種菌懸液0.5 mL于選擇性培養(yǎng)基中，每種菌做兩個(gè)平行，用涂布棒涂開。將浸泡好的無(wú)菌濾膜取出，用無(wú)菌鑷子覆蓋在涂好菌液的培養(yǎng)基表面。將細(xì)菌放置在37 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，將真菌放置在28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小[6-7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 當(dāng)歸精油的抑菌能力

如表1所示，當(dāng)歸精油對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度（MIC）為0.5 mg/mL，抑菌圈直徑分別為5.0 mm和4.1 mm；當(dāng)濃度為2.0 mg/mL時(shí)，抑菌圈達(dá)到最大，直徑分別為13.5 mm和13.0 mm。對(duì)大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為6.4 mm、6.1 mm、5.5 mm和6.0 mm；當(dāng)濃度為4.0 mg/mL時(shí)抑菌圈達(dá)到最大，直徑分別為12.3 mm、11.8 mm、10.9 mm和11.5 mm。

表1 當(dāng)歸精油抑菌圈大小（單位：mm）

2.2 藁本內(nèi)酯的抑菌能力

如表2所示，藁本內(nèi)酯對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為4.7 mm和3.9 mm；當(dāng)濃度為2.0 mg/mL時(shí)抑菌圈達(dá)到最大，直徑分別為12.4 mm和11.8 mm。對(duì)大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為6.0 mm、5.8 mm、4.8 mm和5.7 mm；當(dāng)濃度為4.0 mg/mL時(shí)抑菌圈達(dá)到最大，直徑分別為11.2 mm、10.8 mm、10.1 mm和10.5 mm。

表2 藁本內(nèi)酯抑菌圈大?。▎挝唬簃m）

3 結(jié)論

當(dāng)歸精油和藁本內(nèi)酯對(duì)細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和阪崎腸桿菌）的抑制作用優(yōu)于對(duì)真菌（黑曲霉和釀酒酵母）的抑制作用，這可能是因?yàn)榧?xì)菌細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖（由氨基酸和糖類聚合而成），而真菌細(xì)胞壁的主要成分是幾丁質(zhì)（一種多糖聚合物），肽聚糖的分子量小于幾丁質(zhì)，當(dāng)歸精油和藁本內(nèi)酯更容易滲透，通過(guò)破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)引起菌種死亡[8-11]。

當(dāng)歸精油和藁本內(nèi)酯對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的抑制效果要優(yōu)于革蘭氏陰性菌（大腸桿菌、阪崎腸桿菌），可能是因?yàn)楦锾m氏陰性菌的細(xì)胞壁外有一層膜，限制了疏水性物質(zhì)在細(xì)胞壁脂多糖中的擴(kuò)散，使得當(dāng)歸精油和藁本內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞壁的破壞程度小于革蘭氏陽(yáng)性菌[12-14]。

當(dāng)歸精油和藁本內(nèi)酯的對(duì)細(xì)菌和真菌的抑菌效果基本一致，由此可以推斷出藁本內(nèi)酯在當(dāng)歸精油抑菌性能中起重要作用。