蔡穎　楊英捷

摘要 目的：研究異槲皮苷通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬途徑誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。方法：將SiHa細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、異槲皮苷低劑量組、異槲皮苷中劑量組和異槲皮苷高劑量組。異槲皮苷低、中、高劑量組細(xì)胞分別使用終濃度為20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的異槲皮苷培養(yǎng)，對(duì)照組細(xì)胞使用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)。使用CCK-8分別在24 h、48 h和72 h檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;EDU檢測(cè)各組細(xì)胞在72 h時(shí)的增殖情況;熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)mRNA的表達(dá);Western Blotting檢測(cè)各組細(xì)胞蛋白表達(dá)情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：與對(duì)照組細(xì)胞比較，低、中、高劑量異槲皮苷作用后，細(xì)胞OD值均明顯降低;葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 mRNA、CHOP mRNA以及葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78蛋白、C/EBP同源蛋白質(zhì)（CHOP）、胱天蛋白酶12蛋白、Beclin 1蛋白、Bax蛋白、Cl-胱天蛋白酶-3蛋白表達(dá)水平以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均明顯升高;P62蛋白、Bcl-2蛋白、p-JAK2蛋白和p-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3表達(dá)水平均明顯降低;細(xì)胞凋亡率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。且異槲皮苷的作用呈劑量依賴性。結(jié)論：異槲皮苷可通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑和自噬途徑，誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡。

關(guān)鍵詞 異槲皮苷;宮頸癌;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;增殖;自噬;凋亡;JAK/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白信號(hào)通路

Mechanism of Isoquercitrin in Inducing Apoptosis of Cervical Cancer Cells Through

Endoplasmic Reticulum Stress and Autophagy Pathways

CAI Ying，YANG Yingjie

（1 School of Obstetrics and Gynecology，Graduate School of Guizhou Medical University，Guiyang 550000，China;

2 Gynecological Tumor Surgery of Guizhou Cancer Hospital，Guiyang 550000，China）

Abstract Objective：To explore the mechanism of isoquercitrin in the induction of apoptosis in cervical cancer cells through endoplasmic reticulum stress and autophagy pathways.Methods：The SiHa cells were randomly divided into a control group，and low-（20 μmol/L），medium-（40 μmol/L），and high-dose（80 μmol/L） isoquercitrin groups.The cells in the isoquercitrin groups were cultured with corresponding drugs，and those in the control group with normal medium.The cell proliferation was detected at 24 h，48 h，and 72 h using CCK-8 kits.EDU was used to detect the proliferation of cells in each group at 72 h.The expression of endoplasmic reticulum stress-related genes was detected by qRT-PCR.The protein expression in each group was detected by Western blot.Cell apoptosis was detected by flow cytometry.Results：Compared with the control group，the isoquercitrin groups showed reduced OD values in cells，increased expression levels of glucose-regulated protein 78（GRP78） mRNA，CHOP mRNA，GRP78 protein，CHOP protein，Caspase-12 protein，Beclin 1 protein，Bax protein，Cl-caspase-3 protein，and the LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ ratio，decreased expression levels of p62 protein，Bcl-2 protein，p-JAK2 protein，and p-STAT3 protein，and elevated apoptosis rate（P<0.05）.The effect of isoquercitrin was in a dose-dependent manner.Conclusion：Isoquercitrin can induce apoptosis of cervical cancer cells through endoplasmic reticulum stress and autophagy pathways.

Keywords Isoquercitrin; Cervical cancer; Endoplasmic reticulum stress; Proliferation; Autophagy; Apoptosis; JAK/STAT signaling pathway

中圖分類號(hào)：R284;R737.33文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.06.008

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，是威脅女性健康的第二大癌癥，其產(chǎn)生的原因可能與人乳頭瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）感染、性混亂及初次性交年齡過(guò)早等高危因素有關(guān)[1]。盡管宮頸癌的廣泛篩查和疫苗開發(fā)取得了重大進(jìn)展，但宮頸癌在發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率和死亡率仍較高。目前對(duì)晚期或復(fù)發(fā)性宮頸癌還是以放射治療和化療作為主要的治療方法，但放射治療和化療會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)和耐藥性[2]。因此，近年來(lái)對(duì)于天然藥物在腫瘤的治療過(guò)程中的研究越來(lái)越得到關(guān)注，天然藥物具有多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢(shì)，已成為抗癌藥物的重點(diǎn)研發(fā)對(duì)象[3-4]。異槲皮苷屬黃酮類化合物，也被稱為羅麻甲素和槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，異槲皮苷是桑葉、荷葉、黃秋葵、辣木葉等中草藥和天然植物中的重要活性成分[5]。具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血糖、神經(jīng)保護(hù)等生物活性，具有較大的藥用價(jià)值和應(yīng)用前景[6]?，F(xiàn)對(duì)異槲皮苷對(duì)宮頸癌細(xì)胞的作用進(jìn)行研究，并進(jìn)一步探究其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株 人宮頸癌細(xì)胞株SiHa（已查無(wú)污染）購(gòu)于美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)（ATCC）。細(xì)胞解凍后，轉(zhuǎn)入含有10%胎牛血清和1%青霉素/鏈霉素的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中，1 000 r/min，離心半徑10 cm，離心10 min，棄上清，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并接種于培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃，5% CO的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。2 d更換1次培養(yǎng)基，待細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)進(jìn)行傳代。本研究經(jīng)過(guò)貴州醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：貴L200618）。

1.1.2 藥物 異槲皮苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111809-201804）。

1.1.3 試劑與儀器 DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基[賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司，貨號(hào)：iCell-0001];CCK-8 Cell Counting Kit（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，貨號(hào)：A311-02）;Trizol（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：15596-026）;T7高效RNA轉(zhuǎn)錄試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，貨號(hào)：DD4201）;Talent qPCR PreMix（SYBR Green）[天根生化科技（北京）有限公司，貨號(hào)：FP209-02];BCA蛋白定量試劑盒（上海康朗生物科技有限公司，貨號(hào)：KL-X126）;ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒[愛必信（上海）生物科技有限公司，貨號(hào)：abs920];細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（日本同仁化學(xué)公司，貨號(hào)：AD10-3）;DAPI（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：D8200-10）;EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（廣州市銳博生物科技有限公司，貨號(hào)：C10310）;GRP78（貨號(hào)：ab21685）、胱天蛋白酶12（貨號(hào)：ab62484）抗體購(gòu)買于英國(guó)Abcam公司;CHOP（貨號(hào)：2895）、LC3 A/B（貨號(hào)：12741）、Beclin 1（貨號(hào)：3495）、P62（貨號(hào)：88588）、Bcl-2（貨號(hào)：4223）、Bax（貨號(hào)：89477）、Cleaved-caspase-3（貨號(hào)：9579）、Phospho-JAK2（貨號(hào)：3771）、JAK2（貨號(hào)：3230）、Phospho-STAT3（貨號(hào)：9145）、STAT3（貨號(hào)：9139）、GAPDH（貨號(hào)：5174）抗體、HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（貨號(hào)：7074）均購(gòu)買于美國(guó)CST公司。二氧化碳培養(yǎng)箱（Thermo Fisher Scientific公司，美國(guó)，型號(hào)：Forma Steri-Cycle）;全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific公司，美國(guó)，型號(hào)：Multiskan Sky）;PCR儀（Bio-Rad公司，美國(guó)，型號(hào)：T100）;熒光定量PCR儀（諾禾致源，型號(hào)：Q225）;全自動(dòng)電泳凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad公司，美國(guó)，型號(hào)：Gel Doc EZ）;流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特公司，美國(guó)，型號(hào)：CytoFLEX S）;倒置熒光顯微鏡（徠卡公司，德國(guó)，型號(hào)：DMi8）。

1.2 方法

1.2.1 分組 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、異槲皮苷低劑量（20 μmol/L）組、異槲皮苷中劑量（40 μmol/L）組和異槲皮苷高劑量（80 μmol/L）組，每組細(xì)胞均做9次重復(fù)。

1.2.2 干預(yù)方法 異槲皮苷低劑量組、異槲皮苷中劑量組和異槲皮苷高劑量組分別加入終濃度為20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的異槲皮苷進(jìn)行培養(yǎng)[7]，對(duì)照組細(xì)胞加入等量的DMEM正常培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況 制備SiHa細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×10個(gè)/mL，接種于96孔板中，每孔100 μL/孔，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。異槲皮苷低劑量組、異槲皮苷中劑量組和異槲皮苷高劑量組加入濃度為20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的異槲皮苷，對(duì)照組加入等量細(xì)胞培養(yǎng)基，每組設(shè)9個(gè)復(fù)孔，分別在培養(yǎng)24 h、48 h和72 h時(shí)往孔內(nèi)加入CCK-8溶液10 μL，放入培養(yǎng)箱中避光孵育2 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各組細(xì)胞的OD值。

1.2.3.2 EdU檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況 細(xì)胞按照1.2.2方法進(jìn)行分組培養(yǎng)，在培養(yǎng)72 h時(shí)，往細(xì)胞中加入5-乙炔基-2′-脫氧尿苷（5-Ethynyl-2′-deoxyuridine，EdU），并在37 ℃下孵育2 h[8]。然后使用4%多聚甲醛固定30 min，在用Triton X-100透化細(xì)胞[9]。然后加入1×Apollo反應(yīng)混合物培養(yǎng)細(xì)胞30 min。加入4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（4′，6-Diamidino-2-phenylindole Dihydrochloride，DAPI）溶液對(duì)細(xì)胞核染色5 min。在熒光顯微鏡下觀察并拍照，對(duì)EdU陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率。

1.2.3.3 熒光定量PCR檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)mRNA的表達(dá)水平 使用Trizol試劑法提取各組細(xì)胞的RNA，使用超微量紫外分光光度儀檢測(cè)所提取RNA的純度和濃度。使用T7高效RNA轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。按照Talent qPCR PreMix（SYBR Green）說(shuō)明書方法配置熒光定量反應(yīng)體系，使用熒光定量PCR儀進(jìn)行反應(yīng)，使用2-△△Ct法計(jì)算目標(biāo)mRNA的相對(duì)表達(dá)量[10]。

1.2.3.4 Western Blotting檢測(cè)各組細(xì)胞蛋白表達(dá)情況 收集各組細(xì)胞，并用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖溶液（Phosphate-buffered Saline，PBS）清洗3次，加入放射免疫沉淀測(cè)定（Radioimmune Precipitation Assay，RIPA）裂解液和苯甲磺酰氟（Benzylsulfonyl Fluoride，PMSF）蛋白酶抑制劑，冰上靜置30 min使細(xì)胞充分裂解。4 ℃、12 000 r/min，離心15 min，取上清液。使用2，2-聯(lián)喹-啉-4，4-二甲酸二鈉（Bicinchoninic Acid Disodium Salt，BCA）試劑盒檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度，十二烷基硫酸鈉（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，隨后轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（Poly Vinylidene Fluoride，PVDF）膜上，5%脫脂奶粉封閉1 h[11]。加入葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（1∶600）、C/EBP同源蛋白質(zhì)（CHOP）（1∶1 000）、胱天蛋白酶12（1∶800）、LC3 A/B（1∶1 000）、Beclin 1（1∶1 000）、P62（1∶1 000）、Bcl-2（1∶2 000）、Bax（1∶1 000）、Cl-胱天蛋白酶-3（1∶1 000）、p-JAK2（1∶1 000）、JAK2（1∶1 000）、p-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3（STAT3）（1∶1 000）、STAT3（1∶800）、GAPDH（1∶1 000）抗體，4 ℃孵育過(guò)夜。Tris-HCl緩沖鹽溶液+Tween（Tris Buffered Saline with Tween-20，TBST）洗膜后，加入辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（1∶5 000），37 ℃孵育1 h。增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（Enhanced Chemiluminescence，ECL）試劑盒曝光顯影，全自動(dòng)凝膠成像儀拍照分析，根據(jù)灰度值計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。

1.2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況 取各組細(xì)胞，使用胰酶消化，然后PBS漂洗，加入banding buffer重懸細(xì)胞，然后加入Annexin V-FITC和PI，放入培養(yǎng)箱中避光染色5 min，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況[12]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用非參數(shù)檢驗(yàn)。對(duì)于符合正態(tài)性分布的數(shù)據(jù)，多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，2組數(shù)據(jù)比較時(shí)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 異槲皮苷抑制SiHa細(xì)胞增殖 由表1結(jié)果可以看出，在24 h時(shí)異槲皮苷不同劑量組OD值均較對(duì)照組明顯降低（P<0.05）。在48 h時(shí)，異槲皮苷不同劑量組OD值較對(duì)照組明顯降低（P<0.05）;且與異槲皮苷低劑量組比較，異槲皮苷中劑量組和高劑量組OD值明顯降低（P<0.05）。在72 h時(shí)，異槲皮苷不同劑量組OD值均較對(duì)照組明顯降低（P<0.05），且異槲皮苷低、中、高劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），異槲皮苷高劑量組OD值最低。與對(duì)照組比較，異槲皮苷作用后EdU陽(yáng)性細(xì)胞率明顯降低，且異槲皮苷濃度越高，EdU陽(yáng)性細(xì)胞率越低，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖1、表1。

2.2 異槲皮苷體外激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 與對(duì)照組比較，異槲皮苷不同劑量組葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 mRNA、CHOP mRNA以及葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78蛋白、CHOP蛋白、胱天蛋白酶12表達(dá)水平均明顯升高，即異槲皮苷可促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)，且隨著異槲皮苷所用劑量的升高，對(duì)于各項(xiàng)指標(biāo)的促進(jìn)作用增強(qiáng)，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖2、表2。

2.3 異槲皮苷促進(jìn)SiHa細(xì)胞發(fā)生自噬 與對(duì)照組比較，不同劑量異槲皮苷作用后LC3Ⅱ和LC3Ⅰ蛋白表達(dá)比值明顯升高，Beclin 1蛋白表達(dá)水平明顯升高，P62蛋白表達(dá)水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖3、表3。

2.4 異槲皮苷誘導(dǎo)SiHa細(xì)胞凋亡 與對(duì)照組細(xì)胞比較，異槲皮苷作用后細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯升高（P<0.05），且隨著異槲皮苷劑量的升高，細(xì)胞凋亡率也呈明顯增高的趨勢(shì)。在異槲皮苷作用后，Bcl-2蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低，Bax蛋白和Cl-胱天蛋白酶-3蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖4、表4。

2.5 異槲皮苷抑制SiHa細(xì)胞中JAK/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白通路磷酸化水平 各組JAK2蛋白和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3蛋白表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。p-JAK2蛋白和p-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3蛋白在低、中、高劑量異槲皮苷作用后表達(dá)水平與對(duì)照組比較均明顯降低，且p-JAK2蛋白和p-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3水平隨異槲皮苷劑量升高而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖5，表5。

3 討論

宮頸癌是一種臨床較為常見的、發(fā)生于宮頸部位的婦科惡性腫瘤，其臨床表現(xiàn)主要是陰道出血、陰道排液等癥狀，且多發(fā)病于絕經(jīng)初期及圍絕經(jīng)期的女性[13]。宮頸癌的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、消退與細(xì)胞凋亡有著密切聯(lián)系，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡已是腫瘤治療的熱點(diǎn)和新靶點(diǎn)[14]。近年的研究發(fā)現(xiàn)，異槲皮苷可誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡，且可能存在抑制細(xì)胞癌化的作用[15-16]。

研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）發(fā)生于多種形式的癌癥中，可能是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和增殖的重要環(huán)節(jié)[17]。未折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)（Unfolded Protein Reaction，UPR）是介導(dǎo)ERS發(fā)生最重要的信號(hào)機(jī)制。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78是參與UPR的標(biāo)志性蛋白分子，可以用來(lái)提示ERS的發(fā)生。當(dāng)ERS激活時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，可能通過(guò)CHOP和胱天蛋白酶12的過(guò)表達(dá)引發(fā)細(xì)胞凋亡。CHOP可以改變?cè)S多凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，通過(guò)線粒體依賴途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[18]。胱天蛋白酶12凋亡信號(hào)通路是ERS獨(dú)有的凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，有研究發(fā)現(xiàn)，在ERS過(guò)度狀態(tài)下胱天蛋白酶12凋亡信號(hào)通路會(huì)被激活，活化形式的裂解胱天蛋白酶-12（Cl-caspase-12）和裂解胱天蛋白酶-3（Cl-caspase-3）蛋白表達(dá)水平顯著升高，從而介導(dǎo)應(yīng)激細(xì)胞凋亡[19]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異槲皮苷可促進(jìn)葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78、CHOP和胱天蛋白酶12蛋白的表達(dá)，說(shuō)明異槲皮苷可激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑。

研究發(fā)現(xiàn)，適度的ERS可通過(guò)UPR產(chǎn)生細(xì)胞保護(hù)作用，但當(dāng)ERS持續(xù)存在或應(yīng)激過(guò)度則會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡的發(fā)生[20-21]。Kassan等[22]研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素Ⅱ會(huì)誘導(dǎo)高血壓小鼠延髓腹外側(cè)區(qū)頭端區(qū)發(fā)生ERS，p-eIF2α與ATF4-CHOP表達(dá)升高，從而導(dǎo)致自噬發(fā)生。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異槲皮苷作用后可明顯抑制Bcl-2蛋白和P62蛋白的表達(dá)，促進(jìn)Beclin 1蛋白、Bax蛋白和Cl-胱天蛋白酶-3蛋白表達(dá)，LC3Ⅱ和LC3Ⅰ蛋白表達(dá)量的比值明顯升高，推測(cè)異槲皮苷可能通過(guò)激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑，從而促進(jìn)細(xì)胞自噬和凋亡的發(fā)生。Wang等[23]發(fā)現(xiàn)維替泊芬（Verteporfin，VP）能激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑，且VP處理后的宮頸癌細(xì)胞凋亡變化依賴于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑，這與本研究結(jié)果具有一致性。

研究發(fā)現(xiàn)，JAK2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路涉及生長(zhǎng)、發(fā)育、腫瘤生成、炎癥反應(yīng)等生理和生物學(xué)作用過(guò)程[24-25]。在惡性腫瘤中JAK2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號(hào)通路處于持續(xù)活化狀態(tài)，JAK2與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3會(huì)發(fā)生磷酸化，活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3能不斷進(jìn)入細(xì)胞核中使其調(diào)控的下游靶基因表達(dá)失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，并導(dǎo)致其向惡性轉(zhuǎn)化[26-27]。趙林和劉四清[28]研究發(fā)現(xiàn)，JAK2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號(hào)通道可能參與介導(dǎo)調(diào)節(jié)宮頸癌組織中bax、bcl-2的表達(dá)，從而達(dá)到誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異槲皮苷可抑制p-JAK2蛋白和p-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3蛋白表達(dá)，抑制JAK2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號(hào)通路的激活，從而對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡起到調(diào)控作用。

綜上所述，異槲皮苷可通過(guò)激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑，進(jìn)一步激活凋亡信號(hào)通路，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。且異槲皮苷可通過(guò)抑制JAK2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號(hào)通路對(duì)宮頸癌細(xì)胞的增殖和凋亡起到調(diào)控作用。

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（2021-12-31收稿 本文編輯：張雄杰）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81601259）

作者簡(jiǎn)介：蔡穎（1995.09—），女，碩士研究生在讀，研究方向：婦產(chǎn)科學(xué)，E-mail1：559007956@qq.com

通信作者：楊英捷（1964.11—），男，博士，主任醫(yī)師，研究方向：婦產(chǎn)科學(xué)，E-mail1：edusclt@vip.163.com