黎妍妍　彭五星　張婷　孫玉曉　李錫宏

摘要：【目的】探索在大田試驗條件下萬壽菊秸稈堆肥對煙草連作根際土壤理化性狀、微生物群落及煙草青枯病發(fā)生的影響，為利用萬壽菊秸稈堆肥緩解煙草連作障礙提供依據(jù)?！痉椒ā吭囼炗?018—2020年進行，設2個處理：即施用1500 kg/ha萬壽菊秸稈堆肥處理（FMC）和不施用萬壽菊秸稈堆肥對照（CK）。施用萬壽菊秸稈堆肥第3年（2020年），于煙葉移栽后50和100 d時采集煙株根際土壤，測定分析土壤理化指標和土壤細菌、真菌群落結構，并調查煙草青枯病發(fā)生情況?！窘Y果】與CK相比，F(xiàn)MC處理的土壤pH和有機質含量顯著提高（P<0.05，下同），而土壤堿解氮、有效磷和速效鉀含量無顯著變化（P>0.05）;FMC處理也可顯著提高土壤細菌群落Sobs和Chao1指數(shù)，而對土壤真菌群落多樣性的影響較小。施用萬壽菊秸稈堆肥可改善土壤微生物群落結構，提升被孢霉屬（Mortierella）、毛殼菌屬（Chaetomium）等拮抗菌的相對豐度，而降低勞爾氏菌屬（Ralstonia）和鐮刀菌屬（Fusarium）等病原菌的相對豐度。施用萬壽菊秸稈堆肥3年可顯著降低煙草青枯病的發(fā)病率和病情指數(shù)，對煙草青枯病的相對防效為47.72%?！窘Y論】萬壽菊秸稈堆肥可改善煙株根際土壤理化性狀和微生物群落結構，降低煙草青枯病發(fā)病情況，在緩解煙草連作障礙方面具有積極作用。

關鍵詞： 萬壽菊;堆肥;煙草連作;理化性狀;微生物群落

中圖分類號： S572;S141.4? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2022）02-0451-09

Effects of marigold straw compost on alleviating continuous cropping obstacles of tobacco

LI Yan-yan PENG Wu-xing ZHANG Ting SUN Yu-xiao LI Xi-hong

（1Tobacco Research Institute of Hubei Province，Wuhan? 430030， China; 2Xuanen Branch Company of Enshi Tobacco Corporation， Enshi， Hubei? 445504， China; 3Hubei Tobacco Quality Supervision & Test Centre，

Wuhan? 430030，China）

Abstract：【Objective】In order to alleviate the continuous cropping obstacles of tobacco， the effects of applying marigold straw compost on the physicochemical properties， rhizospheric microbial community and the occurrence of tobacco bacterial wilt were explored in field experiments. 【Method】The experiment was conducted from 2018 to 2020. Marigold straw compost was added each year either at 1500 kg/ha （FMC） or with 0 kg/ha as a control （CK）. In the third year of applying marigold straw compost （2020）， the samples of rhizosphere soil were collected at 50 and 100 days after tobacco transplanting. The soil physicochemical indexes， soil bacterial and fungal community structures and the occurrence of tobacco bacterial wilt were investigated. 【Result】Compared with CK， the application of FMC significantly increased soil pH and organic matter content （P<0.05，the same below）， while the contents of alkali-hydrolyzable nitrogen， available phosphorus and rapidly available potassium had no significant changes （P>0.05）. The application of? FMC could also significantly increase the Sobs and Chao1 indices of the soil bacterial community， but little effects on the diversity of the fungal community had been shown. The application of FMC also improved the microbial community structure and increased the relative abundance of some antagonistic fungi （such as Mortierella， Chaetomium）， while decreasing the relative abundance of some soil-borne pathogens （such as Ralstonia， Fusarium）. The application of FMC for three years significantly reduced the incidence and disease index of tobacco bacterial wilt， and the relative control effect on tobacco bacterial wilt was 47.72%. 【Conclusion】The application of FMC could improve the physicochemical properties and rhizospheric microbial community structure in the soil during tobacco cultivation， with a reduction in the incidence of tobacco bacterial wilt. The use of FMC effectively alleviates the obstacles to the continuous cropping of tobacco.

Key words： marigold; compost; continuous cropping of tobacco; physicochemical properties; microbial community

Foundation items：Major Programs of China National Tobacco Corporation[110201901042（LS-05）， 110202101047 （LS-07）]; Science and Technique Project of Hubei Tobacco Company， China National Tobacco Corporation （027Y2020-002）

0 引言

【研究意義】連作是一年內或連年在同一塊田地上連續(xù)種植同一種作物的種植方式（侯慧等，2016）。由于耕地面積有限，連作在我國許多作物種植中較常見。煙草生產(chǎn)中也普遍存在連作現(xiàn)象（Chen et al.，2018;Bai et al.，2019;Li et al.，2020）。長期連作形成的連作障礙成為抑制煙草生長發(fā)育、降低煙草產(chǎn)質量、病害頻發(fā)的主要因素（李世金等，2018）。在長期連作中，土壤生態(tài)環(huán)境和理化性狀發(fā)生明顯改變;反過來，土壤環(huán)境的惡化又會進一步加劇連作障礙（Chen et al.，2018;朱金峰等，2019;滕凱等，2020;Wang et al.，2020）。研究表明，作物秸稈堆肥在緩解連作障礙方面具有顯著作用。因此，探討秸稈堆肥在抑制煙草病害發(fā)生、減輕土壤環(huán)境惡化程度中的作用，對于緩解煙草連作障礙進而促進煙草產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M展】常見的適用于進行堆肥的作物秸稈主要有玉米稈、小麥稈、水稻稈等。施用玉米秸稈堆肥不僅可降低鹽堿土的pH，顯著提高土壤有機質、堿解氮、有效磷和速效鉀含量（趙英等，2012;王夢柯，2020）;還可增加根際土壤放線菌數(shù)量（黃繼川等，2010），在激活玉米種植區(qū)域土壤酶活性、促進玉米根系發(fā)育方面具有重要作用（周楊等，2020）。施用麥稈和牲畜糞便發(fā)酵堆肥也可提高蘋果連作土壤酶活性，增加土壤微生物數(shù)量，提高細菌和真菌的比值，使土壤微生物菌落結構向“細菌型”轉化（張國棟等，2015）。豬糞—水稻秸稈堆肥提取液對番茄根系中線蟲蟲卵的抑制率達33.7%～87.9%，對土壤中線蟲密度的抑制率達31.3%～51.4%（徐大兵，2011）。萬壽菊作為一種具有抗菌性能的多用途作物（Gómez-Rodr??guez et al.， 2003），其秸稈中含有豐富的綜纖維素（49.67%）和木質素（33.77%）（秦沖，2015）。因此，近年來萬壽菊秸稈也逐漸被用于緩解作物連作障礙的研究中。萬壽菊植物粉末作為生物熏蒸材料時，可顯著提高土壤中養(yǎng)分含量及脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和過氧化氫酶活性，降低土壤中主要酚酸類化感物質含量，減輕其對根系的傷害（王曉芳等，2018，2019a）。在蘋果連作土壤中添加萬壽菊秸稈粉后，土壤細菌數(shù)量增加，土壤中尖孢鐮孢菌基因拷貝數(shù)較不添加萬壽菊秸稈粉的土壤降低18.6%～40.4%（王曉芳等，2019b）。在煙草上，黎妍妍等（2021）將萬壽菊秸稈用作生物熏蒸材料施用于煙田后，土壤原核微生物群落多樣性增加，土壤中拮抗菌、降解菌、功能菌和根際促生菌的相對豐度提升。【本研究切入點】目前，萬壽菊的花是工業(yè)上提取分離葉黃素的理想原料。因此，關于萬壽菊的應用多集中在花上，其秸稈常被隨意拋棄或焚燒，造成資源浪費和環(huán)境污染。盡管萬壽菊秸稈中含有豐富的綜纖維素和木質素，是制作堆肥的較好來源，但目前關于萬壽菊秸稈堆肥的研究鮮有報道，其在緩解作物連作障礙中的作用也未知?！緮M解決的關鍵問題】探索在煙草連作條件下，萬壽菊秸稈發(fā)酵堆肥對煙株根際土壤理化性狀、微生物群落及煙草青枯病發(fā)生的影響，以期明確其在調理植煙土壤環(huán)境中的作用，旨在為緩解煙草連作障礙提供依據(jù)，并為合理利用萬壽菊秸稈提供理論支撐。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

試驗用萬壽菊秸稈來自于上年度在煙田周圍播撒的試材。將萬壽菊秸稈切碎或粉碎為3 cm左右的小段，均勻撒上秸桿腐熟劑和尿素的混合物，用薄膜封嚴，發(fā)酵100 d，制成萬壽菊秸稈堆肥。所用秸桿腐熟劑由對秸桿具有迅速分解腐熟作用的放線菌、絲狀真菌、酵母菌等菌株及相關酶類組成。堆肥中含有C 34.78%、N 0.50%、P 1.13%、K 0.35%。

試驗種植煙草品種為云煙87。

1. 2 試驗方法

試驗于2018—2020年在湖北省恩施州宣恩縣水井坳村進行。試驗地煙草連作15年，土壤基礎理化性狀：pH 5.50、有機質2.42%、堿解氮141.32 mg/kg、有效磷56.80 mg/kg、速效鉀460.52 mg/kg。試驗設2個處理，即萬壽菊秸稈堆肥處理（Fermentation of Marigold Compost，F(xiàn)MC）和常規(guī)對照（不施用萬壽菊秸稈堆肥，CK），每處理3次重復，共6個小區(qū)，每小區(qū)種植100株，同一處理的3個重復交叉排列。根據(jù)前期研究（黎妍妍等，2021），確定FMC處理中萬壽菊秸稈堆肥用量為1500 kg/ha。在FMC處理中，于基肥施用前2個月，均勻撒施1500 kg/ha萬壽菊秸稈堆肥（施用前置于高溫中滅菌）后，用旋耕機將秸稈堆肥與0～30 cm土層土壤進行均勻攪拌。煙草株距和行距分別為0.55 m和1.20 m，4月25日左右進行煙葉移栽，其他措施按當?shù)責熑~生產(chǎn)技術規(guī)范進行栽培管理。

1. 3 煙草青枯病發(fā)生情況調查

煙葉移栽后50和100 d時，以株為單位，按照國家標準GB/T 23222—2008《煙草病蟲害分級及調查方法》記載各小區(qū)每株煙株青枯病發(fā)病嚴重度，計算發(fā)病率、病情指數(shù)和相對防效。

發(fā)病率（%）=（發(fā)病株數(shù)/總株數(shù)）×100

病情指數(shù)=100×[Σ（各級病株數(shù)×各級代表值）/調查總株數(shù)×最高級代表值]

相對防效（%）=（CK病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/CK病情指數(shù)×100

1. 4 土壤樣品采集

施用萬壽菊秸稈堆肥第3年（2020年），采用五點取樣法分別于煙葉移栽后50 和100 d采集各小區(qū)煙株根際土壤樣品，分別記作FMC50和FMC100、CK50和CK100。共計12個土樣。

每個土樣混勻后，剔除石粒和植物殘茬等雜物。一部分樣品在室溫下風干，研磨并分別過篩，用于測定土壤理化性狀;另一部分樣品裝入50 mL滅菌離心管中置于-80 ℃條件下保存，用于土壤DNA提取。

1. 5 土壤理化性狀測定

土壤pH采用酸堿度玻璃電極法測定;土壤有機質、堿解氮、有效磷和速效鉀含量分別采用重鉻酸鉀—外加熱法、堿解擴散法、碳酸氫鈉—鉬銻抗比色法和乙酸銨浸提—火焰光度計法測定。

1. 6 土壤微生物群落擴增子測序

土壤樣品送至北京諾禾致源生物信息科技有限公司進行DNA提取和擴增子測序。利用UPARSE對所有樣品的Effective Tags進行聚類，以97%的一致性將序列聚類成為OTUs。應用Mothur方法與SILVA的SSU rRNA數(shù)據(jù)庫進行細菌物種注釋分析，應用QIIME的Blast方法與Unit數(shù)據(jù)庫進行真菌物種注釋分析。

1. 7 統(tǒng)計分析

使用QIIME進行α多樣性分析，計算Sobs、Chao1豐富度指數(shù)和Shannon多樣性指數(shù)。用Students t-test分析土壤理化性狀、微生物群落α多樣性指數(shù)、不同分類水平上物種的相對豐度及煙草青枯病發(fā)生情況在FMC和CK間的差異。 前35個優(yōu)勢細菌屬和真菌屬的MetaStat分析由R軟件生成。

2 結果與分析

2. 1 土壤理化性狀分析

由表1可知，煙葉移栽后50和100 d，F(xiàn)MC處理的土壤pH和有機質含量均顯著高于CK（P<0.05，下同）;其中，F(xiàn)MC50和FMC100的pH分別較對應CK提高0.38和0.28，有機質含量分別較對應CK提高11.44%和15.02%。而土壤堿解氮、有效磷和速效鉀含量在處理間均無顯著差異（P>0.05，下同）。

2. 2 土壤微生物群落多樣性分析

2. 2. 1 土壤細菌群落α多樣性分析 由土壤細菌群落α多樣性的差異分析結果（表2）可知，煙葉移栽后50 d，F(xiàn)MC50處理的土壤細菌Sobs、Shannon和Chao 1指數(shù)分別較CK50提高19.37%、5.21%和24.31%，其中Sobs和Chao 1指數(shù)在處理間存在顯著差異。煙葉移栽后100 d，F(xiàn)MC100處理的土壤細菌Sobs、Shannon和Chao 1指數(shù)較CK100分別提高41.87%、14.94%和83.74%，其中Sobs和Chao 1指數(shù)在處理間存在顯著差異。以上結果表明施用萬壽菊秸稈堆肥對土壤細菌群落的多樣性和豐富度具有一定影響。

2. 2. 2 土壤真菌群落α多樣性分析 由土壤真菌群落α多樣性的差異分析結果（表2）可知，土壤真菌群落Sobs、Shannon和Chao 1指數(shù)在FMC50與CK50間、FMC100與CK100間均不存在顯著差異，表明萬壽菊秸稈堆肥對土壤真菌群落多樣性影響較小。

2. 3 土壤微生物群落結構分析

2. 3. 1 土壤微生物群落門水平的組成分析 細菌16S rDNA高通量測序序列經(jīng)物種注釋后共獲得87個門、149個綱、 300 個目、429個科和713個屬類細菌。由圖1-A可看出，在各處理根際土壤中，變形菌門（Proteobacteria，37.30%～54.66%）、unidentified_Bacteria（16.91%～24.26%）、酸桿菌門（Acidobacteriota，5.10%～9.63%）、綠彎菌門（Chloroflexi，2.68%～4.69%）、擬桿菌門（Bacteroidota，1.88%～3.26%）、芽單胞菌門（Gemmatimonadetes，1.62%～3.06%）、放線菌門（Actinobacteriota，1.45%～3.21%）、Myxococcota（1.27%～2.51%）、泉古菌門（Crenarchaeota，1.05%～1.65%）、藍菌門（Cyanobacteria，0.05%～1.24%）為排名前10位的細菌門，共占84.22%～91.07%。在這些細菌門中，變形菌門、unidentified_Bacteria、酸桿菌門的相對豐度在各組中均高于5%，共占69.45%～77.82%。差異分析結果表明，CK50中變形菌門的相對豐度顯著高于FMC50，unidentified_Bacteria的相對豐度顯著低于FMC50;CK100中變形菌門的相對豐度顯著高于FMC100，unidentified_Bacteria、Myxococcota的相對豐度顯著低于FMC100。

ITS高通量測序序列經(jīng)物種注釋后共獲得17個門、62個綱、 136個目、291個科和496個屬類真菌。由圖1-B可看出，在各處理根際土壤中，子囊菌門（Ascomycota，35.62%～61.15%）、擔子菌門（Basidiomycota，2.15%～15.44%）、被孢霉門（Mortierellomycota，2.90%～14.30%）、壺菌門（Chytridiomycota，1.57%～10.05%）、羅茲菌門（Rozellomycota，0.05%～2.05%）、球囊菌門（Glomeromycota，0.10%～1.26%）、油壺菌門（Olpidiomycota，0.04%～1.12%）、毛霉菌門（Mucoromycota，0.10%～0.27%）、梳霉門（Kickxellomycota，0.01%～0.08%）、Aphelidiomycota（0.02%～0.04%）為排名前10位的真菌門，共占58.02%～81.29%。在這些真菌門中，子囊菌門、擔子菌門、被孢霉門、壺菌門的相對豐度在各組中均高于1%，共占55.33%～78.37%。差異分析結果表明，10個真菌門的相對豐度在CK50與FMC50間無顯著差異;子囊菌門在CK100中的相對豐度顯著高于FMC100。

2. 3. 2 土壤微生物群落屬水平的組成分析

2. 3. 2. 1 土壤細菌群落屬水平的組成分析 在屬水平上，F(xiàn)MC50、CK50、FMC100、CK100中相對豐度>1%的細菌屬分別有10、11、9、12個，其中Chujaibacter、鞘鞍醇單胞菌屬（Sphingomonas）、羅思河小桿菌屬（Rhodanobacter）、unidentified_Gemmatimonadaceae、芽單胞菌屬（Gemmatimonas）、Ellin6067和MND1的相對豐度在4組土壤中均>1%（圖2-A）。

對排名前35位的細菌屬進行MetaStat分析（圖2-A）。煙葉移栽50 d時，F(xiàn)MC50中Candidatus_ Solibacter等4個菌屬的相對豐度較高;CK50中鞘鞍醇單胞菌屬等10個菌屬的相對豐度較高。煙葉移栽100 d時，F(xiàn)MC100中Ellin6067等8個菌屬的相對豐度較高;CK100中Candidatus_Nitrosotalea、勞爾氏菌屬（Ralstonia）等13個菌屬的相對豐度較高?？傮w來看，F(xiàn)MC50和FMC100屬水平上的細菌群落結構較相似，聚為一類;CK50、CK100分別單獨為一類。

差異分析結果表明（圖2-A，表3和表4），F(xiàn)MC50中顆粒鏈菌屬（Granulicella）的相對豐度顯著高于CK50，是CK50的2.07倍;CK50中勞爾氏菌屬、MND1和Escherichia-Shigella的相對豐度顯著高于FMC50，分別是FMC50的1.88、2.01和4.60倍。FMC100中unidentified_Chloroplast和赭黃嗜鹽囊菌屬（Haliangium）的相對豐度顯著高于CK100，分別是CK100的6.00和1.79倍;CK100中勞爾氏菌屬和Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia的相對豐度顯著高于FMC100，分別是FMC100的5.71和2.01倍。

2. 3. 2. 2 土壤真菌群落屬水平的組成分析 在屬水平上，F(xiàn)MC50、CK50、FMC100、CK100中相對豐度>1%的真菌屬分別有7、9、14、15個，其中微桿菌屬（Microidium）、被孢霉屬（Mortierella）、鐮刀菌屬（Fusa-rium）、Setophoma的相對豐度在4組土壤中均>1%。

對排名前35位的真菌屬進行MetaStat分析（圖2-B）。煙葉移栽50 d時，F(xiàn)MC50中微桿菌屬、毛殼菌屬（Chaetomium）等11個菌屬的相對豐度較高;CK50中曲霉屬（Aspergillus）等7個菌屬的相對豐度較高。煙葉移栽100 d時，F(xiàn)MC100中Sagenomella等7個菌屬的相對豐度較高;CK100中鐮刀菌屬等10個菌屬的相對豐度較高?？傮w來看，F(xiàn)MC100和CK50屬水平上的真菌群落結構較相似，聚為一類;CK100、FMC50分別單獨為一類。

差異分析結果表明（圖2-B、表3和表4），在前35位真菌屬中，F(xiàn)MC50中毛殼菌屬的相對豐度顯著高于CK50，是CK50的2.56倍;CK50中鐮刀菌屬的相對豐度顯著高于FMC50，是FMC50的1.75倍。FMC100中油壺菌屬（Olpidium）、毛殼菌屬、被孢霉屬、Fusicolla的相對豐度顯著高于CK100，分別是CK100的2.75、2.02、2.53和3.67倍;CK100中鐮刀菌屬和Rhizophydium的相對豐度顯著高于FMC100，分別是FMC100的2.77和7.31倍。

2. 4 煙草青枯病發(fā)生情況

對煙草青枯病發(fā)生情況進行調查，結果（表5）顯示，2018年煙草青枯病發(fā)病率和病情指數(shù)在FMC與CK間無顯著差異。2019年，煙葉移栽后100 d，F(xiàn)MC處理煙草青枯病病情指數(shù)顯著低于CK。2020年，F(xiàn)MC處理煙草青枯病發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著低于CK;至移栽后100 d時，F(xiàn)MC處理的相對防效為47.72%。由此可見，萬壽菊秸稈堆肥對煙草青枯病的發(fā)生具有一定的防控作用。

3 討論

土壤酸化和養(yǎng)分失衡是連作土壤退化的原因之一（滕凱等，2020;翁佩瑩和鄭紅艷，2020）。有研究表明，發(fā)生連作障礙煙田的土壤pH和有機質含量均顯著低于正常煙田的土壤（滕凱等，2020）。本研究結果顯示，施用萬壽菊秸稈堆肥可顯著提高植煙土壤pH和有機質含量，與李增亮等（2019）、王曉芳等（2019a）利用萬壽菊秸稈改良土壤環(huán)境的研究結果一致。萬壽菊秸稈中含有豐富的綜纖維素和木質素（秦沖，2015），施用堆肥后這些物質的分解礦化有利于提高土壤有機質含量，進而提高作物根系活力，促進作物生長（Wienhold et al.，2004）。同時，添加作物秸稈在提高土壤有機質含量的過程中也可降低土壤交換性酸和交換性Al3+，有效緩解土壤的酸化程度（蘭麗麗等，2016）。

長期連作一般伴隨著土壤微生物群落功能多樣性的降低（王燦等，2017;肖蓉等，2020）。在土壤細菌、真菌等微生物群落中，細菌群落多樣性通常被認為是維持生態(tài)系統(tǒng)平衡和恢復生態(tài)功能的重要因子（Avidano et al.，2005）。王桂君（2018）研究表明，在土壤中添加改良劑可增加土壤細菌群落的多樣性。本研究中，萬壽菊秸稈堆肥處理顯著提高了土壤細菌群落Sobs和Chao1指數(shù)，而對土壤真菌群落多樣性的影響較小，與上述研究結果基本一致，表明施用萬壽菊秸稈堆肥有助于土壤微生物菌落結構向“細菌型”轉化（張國棟等，2015）。

研究表明，連作不僅抑制土壤中有益微生物的生長，導致拮抗菌減少，還會造成病原微生物大量增加（Mendes et al.，2013;Gao et al.，2019;Liu et al.，2019;Liu et al.，2020;肖蓉等，2020）;而外源物的添加可改善土壤微生物群落結構（田小平等，2017;Yao et al.，2017a，2017b）。本研究中，萬壽菊秸稈堆肥處理顯著降低了土壤中變形菌門和子囊菌門的相對豐度。屬水平上，萬壽菊秸稈堆肥的土壤中被孢霉屬、毛殼菌屬的相對豐度是未施用堆肥土壤處理的2倍以上。據(jù)報道，被孢霉屬具有降解芳烴等化感自毒物質的作用（Liu et al.，2019;Liu et al.，2020），毛殼菌屬則可抑制多種土傳病原菌的活性（孟慶果，2009），表明萬壽菊秸稈堆肥可提升土壤中有益微生物和拮抗微生物的相對豐度。此外，萬壽菊秸稈堆肥也可顯著降低土壤中勞爾氏菌屬和鐮刀菌屬等病原菌的相對豐度，這與王曉芳等（2018）采用萬壽菊進行生物熏蒸降低土壤中病原菌的研究結果一致。

本課題組前期研究表明，1500 kg/ha萬壽菊秸稈熏蒸煙田，對于緩解煙草連作障礙具有良好作用（黎妍妍等，2021）。本研究表明同等用量條件下萬壽菊秸稈堆肥在改善土壤理化性狀和微生物群落結構方面也具有明顯作用。堆肥施用后，煙草青枯病的發(fā)生逐年減輕也是土壤理化性狀改善、微生物群落結構平衡的正向反映。本研究不僅明確了萬壽菊秸稈在緩解煙草連作障礙中的作用，而且為萬壽菊的綜合利用提供了思路，但關于萬壽菊秸稈堆肥的優(yōu)化及用量還有待于進一步研究。

4 結論

施用萬壽菊秸稈堆肥可改善煙株根際土壤理化性狀和土壤微生物群落，提高土壤pH和有機質含量，顯著提升土壤細菌群落多樣性和豐富度，增加拮抗菌的相對豐度而降低病原菌的相對豐度，進而抑制煙草青枯病的發(fā)生。萬壽菊秸稈堆肥在改善連作煙田根際土壤環(huán)境和防控煙草青枯病發(fā)生方面具有積極作用。

參考文獻：

侯慧，董坤，楊智仙，董艷，湯利，鄭毅. 2016. 連作障礙發(fā)生機理研究進展[J]. 土壤，48（6）：1068-1076. [Hou H，Dong K，Yang Z X，Dong Y，Tang L，Zheng Y. 2016. Advance in mechanism of continuous cropping obstacle[J]. Soils，48（6）：1068-1076.] doi：10.13758/j.cnki.tr.2016.06.002.

黃繼川，彭智平，于俊紅，林志軍，楊林香. 2010. 施用玉米秸稈堆肥對盆栽芥菜土壤酶活性和微生物的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學報，16（2）：348-353. [Huang J C，Peng Z P，Yu J H，Lin Z J，Yang L X. 2010. Impacts of app-lying corn-straw compost on microorganisms and enzyme activities in pot soil cultivated with mustard[J]. Journal of Plant Nutrition and Fertilizers，16（2）：348-353.] doi：10. 11674/zwyf.2010.0213.

蘭麗麗，李東海，王繼紅，孫越，李玲，李芳明. 2016. 添加作物秸稈對土壤酸度變化的影響[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學學報，38（1）：74-79. [Lan L L，Li D H，Wang J H，Sun Y，Li L，Li F M. 2016. Effects of crop straw on amelioration of soil acidity[J]. Journal of Jilin Agricultural University，38（1）：74-79.] doi：10.13327/j. jjlau. 2015.2632.

黎妍妍，李錫宏，王林，馮吉，張英，尹忠春. 2021. 萬壽菊秸稈熏蒸對煙株根際土壤原核微生物群落的影響[J]. 煙草科技，54（4）：15-22. [Li Y Y，Li X H，Wang L，F(xiàn)eng J，Zhang Y，Yin Z C. 2021. Effect of biofumigation with marigold stalks on prokaryotic microbial community in tobacco rhizosphere soil[J]. Tobacco Science & Techno-logy，54（4）：15-22.] doi：10.16135/j.issn1002-0861.2020. 0258.

李世金，朱啟法，裴洲洋，陳必華，莊舜堯. 2018. 煙草種植連作障礙產(chǎn)生的原因及防治對策[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，（4）：54-56. [Li S J，Zhu Q F，Pei Z Y，Chen B H，Zhuang S Y. 2018. Reasons and countermeasures of tobacco successive cropping obstacle[J]. Modern Agricultural Science and Technology，（4）：54-56.] doi：10.3969/j.issn.1007-5739. 2018.04.036.

李增亮，任晶，梁鑫宇，張國輝，潘凱. 2019. 七種植物秸稈對連作番茄苗生長及土壤酶活性的影響[J]. 北方園藝，（20）：17-24. [Li Z L，Ren J，Liang X Y，Zhang G H，Pan K. 2019. Effect of seven plant straws on the growth of continuous cropping tomato and the activity of soil enzyme[J]. Northern Horticulture，（20）：17-24.] doi：10.11937/bfyy.20190798.

孟慶果. 2009. 內生菌球毛殼ND35在寄主植物中的侵染過程及其定殖后對植物的影響與分子檢測[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學. [Meng Q G. 2009. Infection process and the influence of endophytic Chaetomium globosum ND35 on host plant and its molecular detection[D]. Taian：Shandong University.] doi：10.7666/d.y1539040.

秦沖. 2015. 萬壽菊秸稈制備活性炭及其應用的初步研究[D]. 北京：北京林業(yè)大學. [Qin C. 2015. Preparation and applied research of activated carbon from marigold straw[D]. Beijing：Beijing Forestry University.]

滕凱，陳前鋒，周志成，向青松，張敏，尹華群，劉勇軍. 2020. 煙草連作障礙與土壤理化性質及微生物多樣性特征的關聯(lián)[J]. 微生物學通報，47（9）：2848-2856. [Teng K，Chen Q F，Zhou Z C，Xiang Q S，Zhang M，Yin H Q，Liu Y J. 2020. Effect of soil physical and chemical properties and microbial community on continuous cropping obstacles in tobacco field[J]. Microbiology China，47（9）：2848-2856.] doi：10.13344/j.microbiol.china.200331.

田小平，王磊，王菡，侯亞紅，樂毅全，付小花. 2017. 秸稈與秸稈生物炭還田對土壤微生物群落結構的影響[J]. 工業(yè)微生物，47（6）：1-6. [Tian X P，Wang L，Wang H，Hou Y H，Le Y Q，F(xiàn)u X H. 2017. Effects of straw and its derived biochar on soil microbial community structure in soil[J]. Industrial Microbiology，47（6）：1-6.] doi：10.3969/ j.issn.1001-6678.2017.06.001.

王燦，李志剛，楊建峰，祖超，鄭維全，鄔華松，魚歡. 2017. 胡椒連作對土壤微生物群落功能多樣性與群落結構的影響[J]. 熱帶作物學報，38（7）：1235-1242. [Wang C，Li Z G，Yang J F，Zu C，Zheng W Q，Wu H S，Yu H. 2017. Effects of consecutive monoculture of Piper nigrum L. on soil microbial functional diversity and community structure[J]. Chinese Journal of Tropical Crops，38（7）：1235-1242.] doi：10.3969/j.issn.1000-2561.2017.07.010.

王桂君. 2018. 生物炭和有機肥對松嫩平原沙化土壤的改良效應及其機制研究[D]. 長春：東北師范大學. [Wang G J. 2018. Improvement effect and mechanism of biochar and organic fertilizer on sandy soil in Songnen plain[D]. Changchun：Northeast Normal University.]

王夢柯. 2020. 秸稈堆肥及其對鹽堿土壤特性及植物生長的影響[D]. 長春：東北師范大學. [Wang M K. 2020. Eva-luation of straw compost and its effect on soil properties and plant growth under saline-sodic conditions[D]. Chang-chun：Northeast Normal University.]

王曉芳，相昆，王艷芳，李前進，姜偉濤，盛月凡，王海燕，陳學森，尹承苗，毛志泉. 2019a. 萬壽菊植株粉末熏蒸對蘋果連作土壤環(huán)境及平邑甜茶生理特性的影響[J]. 園藝學報，46 （12）：2383-2396. [Wang X F，Xiang K，Wang Y F，Li Q J，Jiang W T，Sheng Y F，Wang H Y，Chen X S，Yin C M，Mao Z Q. 2019a. Effects of Tagetes erecta biofumigation on apple replanted soil environment and phy-siological characteristics of Malus hupehensis seedlings[J]. Acta Horticulturae Sinica，46（12）：2383-2396.] doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0851.

王曉芳，徐少卓，王玫，段亞楠，王海燕，盛月凡，毛志泉. 2018. 萬壽菊生物熏蒸對連作蘋果幼苗和土壤微生物的影響[J]. 土壤學報，55（1）：213-224. [Wang X F，Xu S Z，Wang M，Duan Y N，Wang H Y，Sheng Y F，Mao Z Q. 2018. Effects of soil biofumigation using Tateges erecta powder on growth of Malus hupehensis Rehd. seedlings and soil microorganisms in old apple orchard soil[J]. Acta Pedologica Sinica，55（1）：213-224.]doi：10.11766/trxb20 1708220186.

王曉芳，趙玉文，王玫，王海燕，盛月凡，尹承苗，陳學森，毛志泉. 2019b. 萬壽菊秸稈用于蘋果連作土壤生物修復材料的潛力[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學報，25（6）：933-942. [Wang X F，Zhao Y W，Wang M，Wang H Y，Sheng Y F，Yin C M，Chen X S，Mao Z Q. 2019b. Potential of marigold straws used for biological disinfestation to continuous cropped apple orchard[J]. Journal of Plant Nutrition and? Fertilizers，25（6）：933-942.] doi：10.11674/zwyf.18222.

翁佩瑩，鄭紅艷. 2020. 作物連作障礙的成因與機制及其消減策略[J]. 亞熱帶植物科學，49（2）：157-162. [Weng P Y，Zheng H Y. 2020. Causes and mechanism on crop conti-nuous monoculture problems and its control strategy[J]. Su-btropical Plant Science，49（2）：157-162.] doi：10.3969/j.issn.1009-7791.2020.02.014

肖蓉，張春芬，鄧舒. 2020. 基于高通量測序重茬草莓土壤細菌和真菌多樣性分析[J]. 果樹資源學報，2（1）：28-33. [Xiao R，Zhang C F，Deng S. 2020. Analysis of soil bacterial and fungal diversity in continuous cropping strawberry by high-throughput sequencing[J]. Journal of Fruit Resources，2（1）：28-33.] doi：10.16010/j.cnki.14-1127/s. 2021.01.007.

徐大兵. 2011. 豬糞—秸稈堆肥提取液促進植物生長和抑制土傳病原菌效果及其作用機制[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學. [Xu D B. 2011. Plant growth promotion and inhibition of soilborne pathogens by pig manure-straw compost extracts and their mechanism of action[D]. Nanjing：Nanjing Agriculture University.] doi：10.7666/d.Y2359899.

張國棟，展星，李園園，沈向，陳學森，吳樹敬，毛志泉. 2015. 有機物料發(fā)酵流體和堆肥對蘋果連作土壤環(huán)境及平邑甜茶幼苗生物量的影響[J]. 生態(tài)學報，35（11）：3663-3673. [Zhang G D，Zhan X，Li Y Y，Shen X，Chen X S，Wu S J，Mao Z Q. 2015. Effects of anaerobic and aerobic fermentation of organic materials on continuous cropping soil environment and Malus hupehensis seedling biomass[J]. Acta Ecologica Sinica，35（11）：3663-3673.] doi：10.5846/stxb201308082045.

趙英，王秀全，張益銘，許偉民，楊喆茗. 2012. 施用秸稈堆肥對老參地土壤理化性狀的影響[J]. 特產(chǎn)研究，34（3）：29-32. [Zhao Y，Wang X Q，Zhang Y M，Xu W M，Yang Z M. 2012. Effect of applying straw compost on soil physical and chemical properties of cultivated ginseng soil[J]. Special Wild Economic Animal and Plant Research，34（3）：29-32.] doi：10.3969/j.issn.1001-4721.2012.03.008.

周楊，陳文晶，劉虹，朱曉慧，王志剛. 2020. 秸稈堆肥還田對土壤酶活性及玉米幼苗生長的影響[J]. 黑龍江大學工程學報，11（3）：78-84. [Zhou Y，Chen W J，Liu H，Zhu X H，Wang Z G. 2020. Effects of straw compost retur-ning on soil enzyme activity and growth of maize seedlings[J]. Journal of Engineering of Heilongjiang University，11（3）：78-84.] doi：10.13524/j.2095-008x.2020.03. 042.

朱金峰，樊祖清，陳啟龍，王潔瓊，陳沖，蘆阿虔，李紅麗，王巖. 2019. 不同連作年限對煙草根際土壤微生物區(qū)系的影響[J]. 北方農(nóng)業(yè)學報，47（1）：42-48. [Zhu J F，F(xiàn)an Z Q，Chen Q L，Wang J Q，Chen C，Lu A Q，Li H L，Wang Y. 2019. Effects of continuous cropping years on soil microbial flora in the tobacco rhizosphere[J]. Journal of Northern Agriculture，47（1）：42-48.] doi：10.3969/j.issn. 2096-1197.2019.01.08.

Avidano L，Gamalero E，Cossa G P，Carraro E. 2005. Characterization of soil health in an Italian polluted site by using microorganisms as bioindicators[J]. Applied Soil Ecology，30（1）：21-33. doi：10.1016/j.apsoil.2005.01.003.

Bai Y X，Wang G，Cheng Y D，Shi P Y，Yang C C，Yang H W，Xu Z L. 2019. Soil acidification in continuously cropped tobacco alters bacterial community structure and diversity via the accumulation of phenolic acids[J]. Scientific Reports，9：12499. doi：10.1038/s41598-019-48611-5.

Chen S，Qi G F，Luo T，Zhang H C，Jiang Q K，Wang R，Zhao X Y. 2018. Continuous-cropping tobacco caused variance of chemical properties and structure of bacterial network in soils[J]. Land Degradation & Development，29：4106-4120. doi：10.1002/ldr.3167.

Gao Z Y，Han M K，Hu Y Y，Li Z Q，Liu C F，Wang X，Tian Q，Jiao W J，Hu J M，Liu L F，Guan Z J，Ma Z M. 2019. Effects of continuous cropping of sweet potato on the fungal community structure in rhizospheric soil[J]. Frontiers in Microbiology，10：2269. doi：10.3389/fmicb.2019. 02269.

Gómez-Rodr??guez O，Zavaleta-Mej??a E，González-Hernández V A，Livera-Mu?oz M，Cárdenas-Soriano E. 2003. Allelopathy and microclimatic modification of intercropping with marigold on tomato early blight disease development[J]. Field Crops Research，83（1）：27-34. doi：10.1016/S0378-4290（03）00053-4.

Li Y Y，F(xiàn)eng J，Zheng L，Huang J B，Yang Y，Li X H. 2020. Intercropping with marigold promotes soil health and microbial structure to assist in mitigating tobacco bacterial wilt[J]. Journal of Plant Pathology，102：731-742. doi：10. 1007/s42161-020-00490-w.

Liu J J，Yao Q，Li Y S，Zhang W，Mi G，Chen X L，Yu Z H，Wang G H. 2019. Continuous cropping of soybean alters the bulk and rhizospheric soil fungal communities in a Mollisol of Northeast PR China[J]. Land Degradation & Development，30（14）：1725-1738. doi：10.1002/ldr.3378.

Liu Z X，Liu J J，Yu Z H，Yao Q，Li Y S，Liang A Z，Zhang W，Mi G，Jin J，Liu X B，Wang G H. 2020. Long-term continuous cropping of soybean is comparable to crop rotation in mediating microbial abundance，diversity and community composition[J]. Soil & Tillage Research，197：104503. doi：10.1016/j.still.2019.104503.

Mendes R，Garbeva P，Raaijmakers J M. 2013. The rhizosphere microbiome：Significance of plant beneficial，plant pathogenic，and human pathogenic microorganisms[J]. FEMS Microbiology Reviews，37（5）：634-663. doi：10. 1111/1574-6976.12028.

Wang S N，Cheng J K，Li T，Liao Y C. 2020. Response of soil fungal communities to continuous cropping of flue-cured tobacco[J]. Scientific Reports，10：19911. doi：10. 1038/s41598-020-77044-8.

Wienhold B J，Andrews S S，Karlen D L. 2004. Soil quality：A review of the science and experiences in the USA[J]. Environmental Geochemistry and Health，26（2）：89-95. doi：10.1023/B：EGAH.0000039571.59640.3c.

Yao Q，Liu J J，Yu Z H，Li Y S，Jin J，Liu X B，Wang G H. 2017a. Three years of biochar amendment alters soil physiochemical properties and fungal community composition in a black soil of northeast China[J]. Soil Biology and Biochemistry，110：56-67. doi：10.1016/j.soilbio.2017. 03.005.

Yao Q，Liu J J，Yu Z H，Li Y S，Jin J，Liu X B，Wang G H. 2017b. Changes of bacterial community compositions after three years of biochar application in a black soil of northeast China[J]. Applied Soil Ecology，113：11-21. doi：10.1016/j.apsoil.2017.01.007.

（責任編輯 王 暉）