宋亞軍 韋婧 向翠曉 吉忻 伍冠一

【摘 要】 目的：研究桉蛇止癢液的止癢效果。方法：采用動物行為學(xué)研究方法研究不同配比桉蛇止癢液對化合物48/80引起的急性瘙癢的止癢作用。結(jié)果：配比為2∶8、3∶7、4∶6的桉蛇止癢液作用于小鼠0min后對急性瘙癢小鼠的抑制率分別為52.53%、51.09%、61.95%，作用于小鼠15min后對急性瘙癢小鼠的抑制率分別為43.50%、55.24%、48.97%，作用于小鼠30 min后對急性瘙癢小鼠的抑制率分別為38.99%、42.22%、46.22%。桉蛇止癢液不影響小鼠的強(qiáng)迫運(yùn)動能力。結(jié)論：三種配比桉蛇止癢液均對被化合物48/80誘導(dǎo)的急性瘙癢具有抑制作用，配比為4∶6的桉蛇止癢液具有快速止癢作用。

【關(guān)鍵詞】 桉葉油;蛇床子素;止癢

【中圖分類號】?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2022）16-0024-06

Inhibitory Effect of AnShe Antipruritic Liquid on Compound 48/80 Induced Scratching

SONG Yajun1 WEI Jing1 XIANG Cuixiao1 JI Xin1 WU Guanyi2*

1.College of Pharmacology， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530299， China;2.College of Basic Medicine， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530299， China

Abstract：Objective To study the antipruritic effect of AnShe antipruritic liquid.Methods Animal behavior was used to study the antipruritic effect of different proportions of AnShe antipruritic liquid on acute itching caused by compound 48/80.Results The proportions of AnShe antipruritic liquid was 2∶8，3∶7 and 4∶6.The inhibition rates of them on acute itching mice were 52.53%，51.09% and 61.95% pretreated for 0 min， 43.50%， 55.24% and 48.97% pretreated for 15 min，38.99%，42.22% and 46.22% pretreated for 30 min， respectively.An She antipruritic liquid did not affect the forced motor ability of mice.Conclusion different proportions proportions of AnShe antipruritic liquid have an inhibition effect on acute itching induced by 48/80. The proportions of 4∶6 AnShe antipruritic liquid has a rapid antipruritic effect.

Key words：Eucalyptus Oil;Osthole;Antipruritic

瘙癢是一種不愉悅且難以忍受的皮膚感覺，通常會引起強(qiáng)烈的搔抓欲望[1]，是皮膚科疾病的常見癥狀[2]，根據(jù)其持續(xù)時間不同可分為慢性和急性兩種[3]。瘙癢雖不直接威脅患者的生命，卻給患者的生活帶來了巨大困擾。引起瘙癢的原因有內(nèi)因如內(nèi)分泌疾病、神經(jīng)性疾病等，和外因如氣候、蚊蟲叮咬等[4]。對于急性瘙癢，通常采用外用的止癢藥物，如抗組胺藥、激素類、局麻藥等[5]，然而目前開放治療急性瘙癢的中藥研究相對較少。

桉葉油是從桃金娘科植物藍(lán)桉中提取的具有芳香味的揮發(fā)性精油[6]，化學(xué)式為C10H18O，其主要化學(xué)成分是萜類化合物及其含氧衍生物，具有抗菌、抗炎、促滲、驅(qū)蚊止癢等多種功效[7]。有研究[8]發(fā)現(xiàn)桉樹腦可抑制NF-κB的活化，進(jìn)而抑制多種炎癥性皮膚病的發(fā)生。此外，孫國慶等[9-11]還發(fā)現(xiàn)桉葉素是其主要成分，含量可高達(dá) 99.5%，具有很好的透皮促滲作用，與藥物聯(lián)用可以提高藥物吸收率和療效，而且謝遙[6]的動物皮膚毒理實驗顯示40%桉葉油無刺激性、急性毒性、過敏性，安全性高。

蛇床子素（Osthole），又名甲氧基歐芹酚，是天然香豆素類化合物[12]，分子式為C15H16O3，不僅來源于蛇床子成熟果實，在陳皮、前胡、當(dāng)歸等藥用植物中也可提取[13]。有研究表明，蛇床子素藥理活性眾多，表現(xiàn)在抗炎[14]、抗過敏[15]、殺蟲[16]、抗菌止癢[17]等方面。胡雪勤[18]研究發(fā)現(xiàn)蛇床子素對特應(yīng)性皮炎的瘙癢癥狀有緩解作用且可以保護(hù)皮膚屏障，是一種安全有效的藥物。但由于蛇床子素是一種脂溶性化合物，水溶性差，不易經(jīng)皮吸收[19]，而桉葉油的透皮促滲作用恰能彌補(bǔ)蛇床子素的這一不足，研究者選擇乙醇為溶劑，將桉葉油與蛇床子素混合組成桉蛇止癢液，并觀察其作用。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 120只雄性SPF級ICR小鼠，6周齡，體重（35±10）g，購自湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，動物合格證號：SCXK（湘）2019-0004，飼養(yǎng)于廣西中醫(yī)藥大學(xué)SPF級動物實驗中心，飼養(yǎng)室溫為22℃左右，光照時間8∶00～18∶00，自由飲水進(jìn)食。

1.2 實驗試劑 桉葉油購自上海源葉生物科技有限公司;蛇床子素、薄荷醇購自阿拉丁試劑（上海）科技有限公司;化合物 48 /80購自上海sigma公司。

1.3 實驗儀器 攝像機(jī)購自上海索尼電子有限公司，型號：HDR-CX405;電子分析天平購自賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司，型號：SQP;小鼠轉(zhuǎn)棒式疲勞儀購自上海軟隆科技發(fā)展有限公司，型號：BW-ZH600;亞力克透明盒子。

2 實驗方法

2.1 桉蛇止癢液的配制 根據(jù)前期研究，配比為20∶1的桉葉油和蛇床子素的止癢效果最佳，故選擇該比例的桉葉油、蛇床子素混合液作為主藥，再加入80%乙醇配制成2∶8、3∶7、4∶6的桉蛇止癢液，最后再加入止癢液總質(zhì)量2%的薄荷醇即得。

2.2 Rotarod實驗 提前3 d剃掉20只小鼠后頸部1～2 cm2的毛并進(jìn)行標(biāo)記，然后每天同一時間段將小鼠置于六通道轉(zhuǎn)棒式疲勞儀上訓(xùn)練，轉(zhuǎn)速為21 r/min，每天進(jìn)行2次，每次5 min，每次訓(xùn)練結(jié)束后休息5 min繼續(xù)訓(xùn)練，持續(xù)3 d，目的是讓小鼠學(xué)會在轉(zhuǎn)棒式疲勞儀上跑動。正式實驗時，隨機(jī)將訓(xùn)練后的老鼠分為空白組和實驗組，分別給空白組和實驗組背頸部滴加50 μL生理鹽水和50 μL配比為4∶6的桉蛇止癢液，15 min后，將小鼠置于轉(zhuǎn)棒式疲勞儀上測試5 min，記錄小鼠的在棒時間。

2.3 急性瘙癢模型的建立 以ICR雄性小鼠作為實驗對象，通過背頸部皮下注射50 μg/50 μL化合物48/80建立皮膚瘙癢模型[20]。

2.4 瘙癢行為實驗 實驗前1 d剃掉小鼠頸部中央1～2 cm2的毛，實驗前隨機(jī)將實驗小鼠分為空白組與實驗組并將小鼠放在完全相同的亞克力盒子中適應(yīng)30 min，之后將桉蛇止癢液滴于實驗組小鼠頸部中央剃毛處，空白組小鼠滴等量生理鹽水，作用相應(yīng)時間（0 min 、15 min 、30 min）后，在空白組和實驗組小鼠頸部剃毛處皮下注射50 μL的化合物48/80（50 μg/50 μL），在整個實驗過程中采用高清攝像機(jī)對小鼠的瘙癢行為進(jìn)行記錄，然后采用雙盲法觀察并統(tǒng)計小鼠的瘙癢行為即每5 min內(nèi)的搔抓次數(shù)。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 采用GraphPad prism 8統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，所有的結(jié)果均用（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）表示，各組數(shù)據(jù)用配對t檢驗的方法檢驗差異性，P<0.05表明有統(tǒng)計學(xué)意義，并計算不同配比桉蛇止癢液對化合物48/80誘導(dǎo)急性瘙癢的抑制率。

3 實驗結(jié)果

3.1 桉蛇止癢液對化合物48/80 誘導(dǎo)急性瘙癢的直接作用 給予桉蛇止癢液后立刻給予化合物48/80，發(fā)現(xiàn)不同配比的桉蛇止癢液能夠抑制化合物48/80引起的瘙癢。與對照組（257.00±45.74）比較，2∶8的桉蛇止癢液作用后瘙癢次數(shù)降低到（122.00±19.17）次（*P<0.05， N=8）（如圖1 A、B所示）。此外，3∶7的桉蛇止癢液（225.10±29.46 VS 110.10±17.07， **P<0.05， N=8）（如圖1 C、D所示）以及 4∶6的桉蛇止癢液（245.10±16.90 VS 93.25±23.49， **P<0.05， N=8）（如圖1 E、F所示）都能抑制化合物48/80引起瘙癢。三種配比的桉蛇止癢液都能抑制抓撓次數(shù)峰值的出現(xiàn)或者延后抓撓次數(shù)峰值出現(xiàn)的時間（圖1 B、D、F）。三種配比的桉蛇止癢液給予小鼠后對于急性瘙癢的小鼠在短時間內(nèi)均能發(fā)揮很強(qiáng)、很快的止癢效果。配比為2∶8、3∶7、4∶6的桉蛇止癢液作用對急性瘙癢小鼠的抑制率分別為52.53%、51.09%、61.95%（如圖1 G所示）。

3.2 給予桉蛇止癢液15 min對化合物48/80 誘導(dǎo)急性瘙癢的作用

3.2.1 桉蛇止癢液作用于小鼠15 min不能直接引起瘙癢行為 配比為2∶8的桉蛇止癢液作用于小鼠15 min的搔抓次數(shù)為（18.50±5.51）次，與對照組沒有差異（11.38±3.57）（P>0.05，N=8）（如圖2 A所示）。配比為3∶7（8.63±2.86 VS 6.88±3.40，P>0.05，N=8）（如圖2 C所示）。4∶6（11.25±2.96 VS 6.75±3.06，P>0.05，N=8）的桉蛇止癢液作用于小鼠15 min的搔抓次數(shù)與對照組也沒有顯著性差異。說明止癢液作用15 min對小鼠沒有明顯的刺激性。

3.2.2 三種配比的桉蛇止癢液作用于小鼠15 min后對化合物48/80 誘導(dǎo)的急性瘙癢有顯著的抑制作用 給予小鼠桉蛇止癢液15 min后給予化合物48/80，發(fā)現(xiàn)不同配比的桉蛇止癢液均能顯著地抑制化合物48/80 誘導(dǎo)的急性瘙癢。與對照組（185.50±19.96）相比，2∶8的桉蛇止癢液作用于小鼠后瘙癢次數(shù)下降到（104.80±17.44）次（**P<0.05，N=8）（如圖3 A、B所示）。此外，3∶7的桉蛇止癢液（215.90±24.78 VS 96.63±11.47，**P<0.05，N=8）（如圖3 C、D所示）以及4∶6的桉蛇止癢液（228.30±34.85 VS 116.50±30.54，**P<0.05，N=8）（如圖3 E、F）都可顯著抑制化合物48/80誘導(dǎo)的急性瘙癢。三種配比的桉蛇止癢液均可抑制瘙癢次數(shù)峰值的出現(xiàn)或延后峰值出現(xiàn)的時間（如圖B、D、F所示）。上述結(jié)果表明，三種配比的桉蛇止癢液作用于小鼠15 min后對于急性瘙癢的小鼠在30 min內(nèi)均能發(fā)揮很快、較強(qiáng)的止癢效果，配比為2∶8、3∶7、4∶6的桉蛇止癢液對急性瘙癢小鼠的瘙癢抑制率分別為43.50%、55.24%、48.97%（如圖3 G所示）。

3.3 給予桉蛇止癢液30 min對化合物48/80誘導(dǎo)急性瘙癢的作用

3.3.1 桉蛇止癢液作用于小鼠30 min不會引起明顯的瘙癢行為 配比為2∶8的桉蛇止癢液作用于小鼠30 min內(nèi)搔抓（20.50±7.17）次，與其對照組沒有差異（16.50±3.76）（P>0.05，N=8）（如圖4 A、B所示）;配比為3∶7（20.13±3.89 VS 16.00±3.93，P>0.05，N=8）（如圖4 C、D）的桉蛇止癢液作用于小鼠30 min搔抓次數(shù)與對照組也無顯著性差異，說明配比為2∶8、3∶7的止癢液均對小鼠沒有致癢性。配比為4∶6的桉蛇止癢液作用于小鼠30 min內(nèi)搔抓（52.75±9.60）次，與其對照組有顯著性差異（15.00±5.00， **P<0.05，N=8）（如圖4 E所示），說明4∶6的止癢液對小鼠可能有一定的刺激性，但總體的搔抓次數(shù)還是處于較低水平（如圖4 F所示）。

3.3.2 桉蛇止癢液作用于小鼠30 min后對化合物48/80誘導(dǎo)的急性瘙癢有抑制作用 給予桉蛇止癢液30 min后給予化合物48/80，與對照組（166.20±21.85）相比，2∶8的桉蛇止癢液作用于小鼠后瘙癢次數(shù)下降至（101.40±13.54）次（P>0.05，N=5）（如圖5 A、B所示），雖無顯著的差異，但是在一定程度上仍可抑制瘙癢。此外，3∶7的桉蛇止癢液（210.80±22.31 VS 121.80±16.22，*P<0.05，N=8）（如圖5 C、D）以及 4∶6的桉蛇止癢液（219.40±24.37 VS 118.00±19.52， **P<0.05， N=8）（如圖5 E、F所示）都能抑制化合物48/80引起瘙癢。三種配比的桉蛇止癢液都能抑制或者延后化合物48/80的瘙癢時間峰值（如圖5 B、D、F所示）。由結(jié)果可知，三種配比的桉蛇止癢液作用于小鼠30 min后對于急性瘙癢的小鼠在30 min內(nèi)均能發(fā)揮相對較弱，但見效快、持續(xù)時間久的止癢效果。配比為2∶8、3∶7、4∶6的桉蛇止癢液作用對急性瘙癢小鼠的抑制率分別為38.99%、42.22%、46.22%（如圖5 G所示）。

3.3 桉蛇止癢液對小鼠的強(qiáng)迫運(yùn)動能力無影響 rotarod實驗表明，實驗組和空白組小鼠基本都能穩(wěn)定地隨著疲勞轉(zhuǎn)棒儀的轉(zhuǎn)動而跑動，通過對實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，空白組的在棒時間為（300.00±0.01）s，實驗組的在棒時間為（276.70±23.28）s，兩組之間沒有顯著性差異（P>0.05）（如圖6所示），由此可得結(jié)論：桉蛇止癢液對小鼠的強(qiáng)迫運(yùn)動能力無影響。

4 討論

桉葉油來源相當(dāng)廣泛，目前廣泛用于醫(yī)藥、化妝品、食品加工、化學(xué)工業(yè)等領(lǐng)域，然而其作為藥用治療皮膚病的研究很少。蛇床子素常存在于傘形科和蕓香科植物中，在部分的菊科和豆科中也有分布。近年來對其的研究也較多，尤其是其在醫(yī)藥和農(nóng)藥領(lǐng)域。蛇床子素的研究主要針對抗炎、抗菌、抗腫瘤等藥理作用，但在止癢方面的研究相對較少。

研究者將二者聯(lián)用，自擬桉蛇止癢液，研究其止癢效果，結(jié)果顯示其對化合物48/80誘導(dǎo)的急性瘙癢有很好的抑制作用。從作用時間上看，三種配比的桉蛇止癢液對化合物48/80誘導(dǎo)急性瘙癢的小鼠能在給藥后 5 min內(nèi)發(fā)揮較強(qiáng)藥效（瘙癢抑制率均大于50%）且均能至少持續(xù)15 min。給予15 min以及30 min后的小鼠所表現(xiàn)出的整體止癢效果較弱，由此推測桉蛇止癢液的整體效果與其作用時間呈負(fù)相關(guān)，這一系列變化趨勢可能與80%乙醇有關(guān)，隨時間的延長，止癢液揮發(fā)越多，作用效果就越弱。從桉蛇止癢液的不同配比來看，4∶6的桉蛇止癢液作用效果最好（作用0 min、15 min、30 min的平均瘙癢抑制率為52.38%），3∶7的桉蛇止癢液作用效果次之（作用0 min、15 min、30 min的平均瘙癢抑制率為49.52%），2∶8的桉蛇止癢液作用效果最差（作用0 min、15 min、30 min的平均瘙癢抑制率為45.01%），這一變化可能與止癢液中桉葉油與蛇床子素的含量有關(guān)，桉葉油與蛇床子素含量越高，止癢液的止癢效果越好。

有研究發(fā)現(xiàn)，桉葉油主要成分1，8-桉葉素、蛇床子素能夠作用于TRP通道以及其他抑制瘙癢物質(zhì)的釋放，這些作用可能參與桉蛇止癢液止癢機(jī)制。比如，陳凡等[21]研究表明桉葉油中的活性成分1，8-桉葉素能明顯抑制組胺的產(chǎn)生、降低IL-31的量、降低體內(nèi)PAF的含量從而抑制5-HT和組胺的釋放，進(jìn)而發(fā)揮止癢作用;Takaishi[22]認(rèn)為1，8-桉葉素是TRPM8通道的激動劑，激活TRPM8通道可產(chǎn)生涼感覺，涼感覺可抑制癢覺;伍冠一等[23]發(fā)現(xiàn)蛇床子素能抑制肥大細(xì)胞釋放致癢物質(zhì)組胺;Yang等[24]的研究結(jié)果表明蛇床子素的止癢效果與抑制組胺依賴通路H1受體、H4受體下游的離子通道TRPV1有關(guān)。同時，Yang等[25]也發(fā)現(xiàn)蛇床子素能夠微弱激活TRPV1通道并使之脫敏，抑制組胺依賴瘙癢。綜上，桉蛇止癢液的止癢機(jī)制可能與抑制致癢物質(zhì)組胺以及IL-31的釋放，降低體內(nèi)PAF含量和抑制TRPV1和激活TRPM8通道有關(guān)。這一研究成果將為桉蛇止癢液止癢機(jī)制的進(jìn)一步研究和相關(guān)新藥的開發(fā)提供參考。

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（收稿日期：2021-12-29 編輯：陶希睿）

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目（81860740，82060768）;廣西自然科學(xué)基金項目（2020GXNSFAA297244）;廣西大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計劃訓(xùn)練項目（202010600035）。

作者簡介：宋亞軍（1998-），男，苗族，本科生在讀，研究方向為中藥止癢機(jī)制研究。E-mail：1713055327@qq.com

通信作者：伍冠一（1980-），男，漢族，博士，副教授，研究方向為中藥止癢機(jī)制研究。E-mail：w5gy1@126.com