劉鼎

摘要：當(dāng)前，有大量微生物存于飲用水當(dāng)中，一些微生物將嚴(yán)重威脅人體健康。若飲用水中存在總大腸菌群，輕則腹瀉，重則危及生命安全，出現(xiàn)中毒現(xiàn)象。為此，必須詳細(xì)、準(zhǔn)確地檢測(cè)飲用水中的總大腸菌群，保證飲用水安全。

關(guān)鍵詞：總大腸菌群;酶底物法;多管發(fā)酵法

一、總大腸菌群的概述

總大腸菌群是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，是指具有某些特性的一組和糞便污染相關(guān)的細(xì)菌，在生化技血清學(xué)等方面此類(lèi)細(xì)菌存有一定差異。通常情況下，總大腸菌群包含大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。目前，在食品衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)定中，大腸菌群是一個(gè)極為關(guān)鍵的指標(biāo)，已在食品衛(wèi)生工作中得到了廣泛應(yīng)用。為此，在飲用水質(zhì)量檢測(cè)中如何準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)出總大腸菌群具有重要意義。

二、水中總大腸菌群主要檢查方法

目前，在飲用水總大腸菌群檢測(cè)中，常用的檢測(cè)方法分為3類(lèi)，即多管發(fā)酵法、酶底物法、濾膜法。具體情況如下：

（一）多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法多用于檢測(cè)地表水、地下水及廢水中的大腸菌群。其試驗(yàn)結(jié)果是用MPN表示。實(shí)際上，多管發(fā)酵法是按照統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體內(nèi)大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的，基于理論來(lái)講，需做大量重復(fù)測(cè)定，但發(fā)現(xiàn)，這種估計(jì)可以存著大于實(shí)際數(shù)字的情況。與此同時(shí)，隨著不斷增加稀釋度試管的重復(fù)數(shù)量，這種差異將慢慢下降，在細(xì)菌含量的估計(jì)值分析當(dāng)中，主要取決于那些同時(shí)顯示陽(yáng)性、陰性的稀釋度。具體實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，可根據(jù)所要求數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度來(lái)確定水樣檢測(cè)所要求重復(fù)的數(shù)目。

（二）酶底物法

按照大腸菌群在選擇性培養(yǎng)基上可生成β-半乳糖苷酶的細(xì)菌群組，此細(xì)菌群組能夠進(jìn)行色原底物分解，并釋放出色原體，改變培養(yǎng)基顏色，并由此檢測(cè)出水中總大腸菌群。酶底物法試驗(yàn)結(jié)果也可采用MPN表示。

（三）濾膜法

基于大腸菌群的特性，通過(guò)孔徑0.45微米的微孔濾膜進(jìn)行水樣過(guò)濾及細(xì)菌截留。在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上粘貼濾膜，在37℃下培養(yǎng)24h，以此生成需氧和兼性慶氧特性的菌落，隨后經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來(lái)進(jìn)行水中總大腸菌群的檢測(cè)。濾膜法試驗(yàn)結(jié)果與上述兩種方法不同，可采用CFU表示。

三、案例分析

在飲用水中總大腸菌群檢測(cè)中，相比多管發(fā)酵法、濾膜法，酶底物法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn)等優(yōu)點(diǎn)。為此，采用酶底物法進(jìn)行水中總大腸菌群實(shí)驗(yàn)檢測(cè)分析。為了驗(yàn)證酶底物法的檢測(cè)效果，決定采用多管發(fā)酵法進(jìn)行對(duì)比分析。多管發(fā)酵法按照現(xiàn)行檢驗(yàn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，本文不再累述。

（一）材料與方法

1.材料與儀器

科立得試劑、97孔定量盤(pán)、DFIP-9080電熱恒溫培養(yǎng)箱、97孔陽(yáng)性比色盤(pán)、程控定量封口機(jī)。實(shí)驗(yàn)室用水是選用Millipore純水系統(tǒng)制備純水，通過(guò)平皿計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，可達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。使用過(guò)程中，可通過(guò)121℃高壓蒸汽進(jìn)行20min滅菌處理，制作無(wú)菌水。

2.樣品來(lái)源

采用本地市區(qū)地下水等。

3.檢測(cè)方法

按照現(xiàn)行檢驗(yàn)方法等標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，采用酶底物法進(jìn)行檢測(cè)。

（二）實(shí)驗(yàn)影響因素

1.培養(yǎng)時(shí)間的影響

采用酶底物法進(jìn)行水中總大腸菌群檢測(cè)，培養(yǎng)時(shí)間不同的情況下，經(jīng)檢測(cè)，培養(yǎng)22～28h之后，檢測(cè)結(jié)果接近標(biāo)準(zhǔn)值。通過(guò)SPSS軟件進(jìn)行分析，與標(biāo)準(zhǔn)要求24h相比，培養(yǎng)15～21h、29～33h之間時(shí)，存在顯著性差異。因此，可決定22～28h為總大腸菌群培養(yǎng)時(shí)間最佳范圍。

2.取樣容器的影響

在微生物檢測(cè)中，常見(jiàn)的取樣容器包括無(wú)菌塑料瓶、玻璃瓶、無(wú)菌采集袋等?；谖⑸锏奶匦?，即吸附性，在保存中容器不同，則對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響程度也有所不同。為了驗(yàn)證及確定水中總大腸菌群適合采用哪一種取樣容器，決定進(jìn)行試驗(yàn)分析。通過(guò)SPSS軟件配對(duì)t檢驗(yàn)分析，P>0.05，3種容器的檢測(cè)結(jié)果不存在顯著差異。由于塑料瓶、采集袋易損壞，因此，在實(shí)驗(yàn)中，硬質(zhì)玻璃瓶取樣為首選。

（三）實(shí)驗(yàn)與分析

飲用水中總大腸菌群采用酶底物法檢測(cè)時(shí)，將會(huì)用到電熱恒溫培養(yǎng)箱、冰箱等實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制硬件，采用溫度記錄儀進(jìn)行溫度測(cè)量，保證控制箱內(nèi)溫度和設(shè)定溫度相同，誤差控制在0.5℃之內(nèi)。同時(shí)，還要采用化學(xué)指示卡等定期對(duì)立式壓力蒸汽滅菌器進(jìn)行檢測(cè)，保證滅菌效果滿(mǎn)足規(guī)定要求。在使用科立得試劑前，需進(jìn)行大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)和無(wú)菌性檢測(cè)。

大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株放置室溫，逐級(jí)稀釋?zhuān)⑷苡跓o(wú)菌水進(jìn)行均勻混合，配比兩種稀釋倍數(shù)作為加標(biāo)樣品。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，用無(wú)菌瓶量取100ml水樣，加入1份酶底物培養(yǎng)基，均勻混合并完全溶解，隨后全部向97孔定量盤(pán)內(nèi)倒入，在去除氣泡之后，通過(guò)程控定量封口機(jī)進(jìn)行封口，隨后放入37℃進(jìn)行24h培養(yǎng)?？梢?jiàn)光下計(jì)數(shù)97孔定量盤(pán)內(nèi)的黃色孔數(shù)。當(dāng)顏色基本類(lèi)似于陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)比色盤(pán)的黃色，或顏色較深時(shí)，則可認(rèn)定為大腸菌群陽(yáng)性。按照MPN表得出數(shù)值，結(jié)果為MPN/100ml報(bào)告。當(dāng)97孔定量盤(pán)酶底物法中的全部孔均沒(méi)有出現(xiàn)黃色，則表明未檢出大腸菌群。在此次檢測(cè)中，同時(shí)做空白和陽(yáng)性對(duì)照，

經(jīng)實(shí)驗(yàn)分析，多管發(fā)酵法15管檢測(cè)范圍為2-1600MPN/100ml;DST-酶底物法97孔定量盤(pán)檢測(cè)范圍為1-2419.6MPN/100ml。為對(duì)比分析兩種不同的檢測(cè)方法，應(yīng)保證檢測(cè)結(jié)果之間具有可比性，因此，樣品陽(yáng)性檢出的同時(shí)，不得高于1600MPN/100ml。按檢測(cè)時(shí)間順序?qū)?組樣品進(jìn)行編號(hào)，檢測(cè)結(jié)果顯示隨時(shí)間變化，樣品未出現(xiàn)明顯變化，較為穩(wěn)定。7組試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

通過(guò)兩組檢測(cè)結(jié)果配對(duì)t檢驗(yàn)，第一組t=0.575，P=0.586;第二組t=2.068，P=0.084，兩組P值>0.05，表明兩種結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過(guò)上述分析，可以了解到，多管發(fā)酵法和酶底物法兩組檢測(cè)數(shù)據(jù)之間差異不明顯，可認(rèn)為兩種方法效果基本一致。但相比之下，酶底物法在操作上更簡(jiǎn)便，檢測(cè)速度更快，能夠有效抑制大量宜陽(yáng)細(xì)菌，且具有較高檢測(cè)精度。

四、結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，水是生命之源，隨著工業(yè)化進(jìn)程的不斷推進(jìn)，水污染問(wèn)題愈加嚴(yán)重?？偞竽c菌群在水中普遍存在，若大腸菌群數(shù)量超標(biāo)，勢(shì)必會(huì)影響人體健康。為此，在飲用水質(zhì)量檢測(cè)中必須重視總大腸菌群的檢測(cè)，選擇合理的檢測(cè)方法，如酶底物法，可有效提高檢測(cè)精度。

參考文獻(xiàn)：

[1]史夢(mèng)雨.生活飲用水中總大腸菌群的兩種方法比較[J].中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生，2017，32（10）：139-140.