●潘 妍 賈紅亮 林少華 黃廣學 湯久楊（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院 北京 102442）

臭黃荊（Premna hainanensia）為馬鞭草科臭黃荊屬植物[1]，主要分布于四川、重慶、貴州、湖北及江西等地區(qū)[2]。目前關(guān)于臭黃荊的報道較少，主要集中于臭黃荊的黃酮和多酚物質(zhì)，盧秀彬[3]對臭黃荊葉中黃酮和多酚、醇提物抗氧化性、揮發(fā)油成分做了測定分析；黃思雨等[4]對臭黃荊葉水提液的黃酮、多酚含量、抑菌能力、抗氧化能力做了分析測定；徐小青等[5]對2種臭黃荊葉主要揮發(fā)性成分及驅(qū)蟲作用做了研究。關(guān)于臭黃荊中果膠分子量鮮有報道，本研究采用從湖北丹江口移栽至北方（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院）的臭黃荊葉，對臭黃荊果膠提取及理化性質(zhì)進行試驗研究，以期為我國開發(fā)果膠新原料提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

臭黃荊由湖北丹江口移栽至北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學院。三氟乙酸（TFA），甲醇，吡啶，三甲基氯硅烷（TMCS），六甲基二硅氮烷（HMDSZ），氯仿，單糖標品（阿拉伯糖，鼠李糖，甘露糖，葡萄糖，半乳糖和半乳糖醛酸）等。

離心機 （Sigma 公司），DSHZ-300 多用途水浴恒溫振蕩（江蘇太倉市實驗設(shè)備廠），新世紀T6紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司），高效凝膠色譜LC-20AD型泵，CTO-20A型柱溫箱，KW-G預(yù)柱，KW-803色譜柱（Shimadzu公司），DAWN HELEOS-Ⅱ型激光多角度檢測器，Optilab rex 型示差檢測器（美國Wyatt Technology公司產(chǎn)品），分子量分析軟件：ASTRA（版本號5.3.4.13），（GCMS-QP2010 Plus Shimadzu 公司）。

1.2 方法

1.2.1 臭黃荊果膠提取工藝流程臭黃荊鮮葉烘干后粉碎，選取響應(yīng)面優(yōu)化得到最優(yōu)工藝參數(shù)，提取溫度69.92℃，提取時間1.53 h，pH 1.89。提取后離心取上清，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行減壓濃縮，乙醇沉淀洗滌后，經(jīng)冷凍干燥得到果膠。

1.2.2 臭黃荊果膠測定方法臭黃荊果膠測定采用咔唑比色法。將臭黃荊提取液用水稀釋至適量濃度（含半乳糖醛酸10～70 mg/L）。取1 mL稀釋液，加入6 mL濃硫酸混勻。在65℃水浴中加熱15 min，再冷卻至室溫。加入0.15%咔唑試劑1 mL，避光充分混勻，室溫下放置30 min。以試劑空白調(diào)零，在530 nm波長下測定果膠含量。以D-半乳醛酸標準曲線對所得果膠進行定量。

1.2.3 分子量測定使用分子體積排阻色譜串聯(lián)多角度激光散射檢測器進行果膠的分子量和聚合度分析[6]。果膠樣品濃度為2.5 mg/mL；流動相：0.1 mol/L NaNO2；進樣量為200 μL；色譜柱：KW-G（預(yù)柱）與KW-803 （Shimadzu CO. LTD.）串聯(lián)；流速：0.5 mL/min；檢測器：多角度激光散射檢測器（DAWN HELEOS-Ⅱ光散射檢測器）、示差檢測器（Optilab rex）均為Wyatt Technology公司產(chǎn)品，分子量分析軟件：ASTRA（版本號 5.3.4.13）。

1.2.4 果膠單糖測定

1.2.4.1 果膠單糖衍生化按照文獻[7]進行衍生化。稱取10 mg 果膠，置于安培管中；加入2 mL TFA，密封于110℃，水解2 h；加入適量甲醇，減壓蒸干，重復(fù)3次除盡TFA。在5 mg標準品：阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖（Glc）、甘露糖（Man）和半乳糖（Gal）或者上述干燥后的樣品中，加入100 μL吡啶、68 μL HMDS和22 μL TMCS，所得混合溶液70℃水浴30 min。在混合液中加入適量水和氯仿進行液-液萃取。氯仿溶液經(jīng)0.22 μm有機濾膜過濾后供GC-MS分析。

1.2.4.2 色譜柱安捷倫HP-innowax（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載 氣：He；進樣 口溫 度：250℃；分 流 比20∶1；進 樣 量：1 μL；流 速：1 mL/min；升溫程序：初溫80℃，以2℃/min速率升到180℃后保持0 min，繼續(xù)以10℃/min升溫到230℃后保持0 min。離子源溫度：230℃，電離能量EI 70 ev，接口溫度230℃，掃描范圍20～1000 m/z，溶劑延遲3min采集數(shù)據(jù)。根據(jù)總離子流圖分離出的各組分，利用標準質(zhì)譜庫檢索質(zhì)譜圖，查閱質(zhì)譜手冊并與文獻核對鑒定出來的化學物質(zhì)，采用面積歸一化法計算各種組分的相對含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 果膠測定

臭黃荊果膠提取液經(jīng)過脫色、純化后得到白色果膠粉末，測定其半乳糖醛酸含量為85.13%。

2.2 分子量測定

用高效凝膠色譜測定分子量，通過 ASTRA 5.3.4.13軟件分析可得到相關(guān)結(jié)果，見圖1和表1。

圖1 臭黃荊果膠分子量測定色譜圖

表1 臭黃荊果膠分子量測定數(shù)據(jù)表

由表1可知，臭黃荊果膠粗品中含有4種不同分子量的果膠，平均分子量分別為1.966×105，3.992×104，3.797×104，2.965×104Da；平 均 分子半徑為34.4，48.7，59.1，65.3 nm。重均分子量（MW）/數(shù)均分子量（Mn）值分別為2.072，1.030，1.052，1.046，當重均分子量（MW）/數(shù)均分子量（Mn）接近1，說明臭黃荊果膠粗品中分子量分布集中在平均分子量左右。其中重均分子量（MW）表示聚合物中用不同分子量的分子重量平均的統(tǒng)計平均分子量，數(shù)均分子量（Mn）表示聚合物中用不同分子量的分子數(shù)目統(tǒng)計平均分子量。其中峰1和峰2是主要成分，分別占比53.539%和32.547%。

2.3 臭黃荊果膠單糖測定

分別利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析標準單糖衍生物、臭黃荊果膠樣品衍生物，見圖2。

圖2 氣相色譜法測定果膠單糖組成

各種單糖標品衍生物按照出峰的時間依次為阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖（Glc）、甘露糖（Man）和半乳糖（Gal）。從圖2可知，臭黃荊果膠中含有鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等中性糖，其中葡萄糖為主要成分。

3 結(jié)論

在最佳工藝條件下提取臭黃荊果膠，經(jīng)純化后測得半乳糖醛酸含量為85.13%。再通過高效凝膠色譜測定臭黃荊的果膠分子量，可知臭黃荊果膠含有2個主要成分，分別占比53.539%和32.547%，其平均分子量分別為1.966×105，3.992×104Da；平 均 分 子 半 徑 分 別 為34.4，48.7 nm。用氣質(zhì)聯(lián)用測定果膠中單糖成分，得到果膠中含有鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等中性糖，其中葡萄糖為主要成分。

臭黃荊野生資源非常豐富，產(chǎn)量較大，食用和藥用價值較高，本試驗測定了果膠分子量和其他單糖成分，后續(xù)試驗可以對其他性質(zhì)如抑菌性、抗氧化性等進一步分析，為開發(fā)產(chǎn)品提供更多的理論支撐。