李佳，王玉，王萍，金華

(江蘇省淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇淮安 223300)

稚兒靈顆粒是一種中藥復(fù)方制劑，由黨參、太子參、白芍(麩炒)、制何首烏、陳皮等二十四味中藥材組成，方中諸藥合用，全方共奏益氣健脾，補(bǔ)腦強(qiáng)身之功效[1]。稚兒靈顆粒作為兒科臨床常用藥物，現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)[1]“真?zhèn)坞y鑒，優(yōu)劣難辨”，考察指標(biāo)少，未結(jié)合內(nèi)在有效成分進(jìn)行分析，存在一定的局限性[2]。歷年國(guó)家藥品抽驗(yàn)結(jié)果均表明，按現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)合格的樣品，通過(guò)探索性研究，往往會(huì)發(fā)現(xiàn)諸多隱患[3]。目前中成藥質(zhì)量等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)作為藥品質(zhì)量控制和監(jiān)管的新興領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。查閱相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]，已有以牛黃清胃丸、復(fù)方丹參片等品種為模式藥物，研究中成藥質(zhì)量等級(jí)評(píng)價(jià)新模式。筆者嘗試采用中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-0856—1991[1]與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析相結(jié)合的方法，對(duì)收集到的24 批稚兒靈顆粒質(zhì)量等級(jí)進(jìn)行初評(píng)價(jià)，為中成藥生產(chǎn)企業(yè)在原料選擇方面提供技術(shù)參考，也可為廣大人民群眾的用藥療效和安全提供保障。

1 樣品信息

1.1 樣品生產(chǎn)情況

考慮到遵循中成藥質(zhì)量等級(jí)研究的基本原則和要求，所收集樣品應(yīng)覆蓋多個(gè)省、市、縣，涉及企業(yè)、藥店、醫(yī)院等生產(chǎn)、流通、使用環(huán)節(jié)。通過(guò)SFDA藥品注冊(cè)數(shù)據(jù)查詢(xún)系統(tǒng)查詢(xún)，全國(guó)稚兒靈顆粒生產(chǎn)企業(yè)共有7 個(gè)，藥品批準(zhǔn)文號(hào)7 個(gè)。本次收集的樣品涉及4 個(gè)生產(chǎn)企業(yè)，占全國(guó)生產(chǎn)企業(yè)的57.1%。

1.2 樣品區(qū)域分布

24 批次樣品的分布情況：從地域看，涉及全國(guó)8 個(gè)省，其中最多的是廣東省9 批次，四川省4 批次，吉林省2 批次，北京市2 批次，重慶市2 批次，山東省2 批次，江蘇省、河南省、安徽省各1 批次；從環(huán)節(jié)看，生產(chǎn)企業(yè)4 批次、零售藥店16 批次、醫(yī)療機(jī)構(gòu)4 批次；從樣品生產(chǎn)企業(yè)看，稚兒靈顆粒生產(chǎn)廠家較少，目前市場(chǎng)上只收集到4 家，其中A 為廣東省某公司5 批次、B 為廣西省某公司5 批次、C 為貴州省某公司5 批次、D 為吉林省某公司9 批次。

1.3 檢驗(yàn)項(xiàng)目與依據(jù)

根據(jù)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑 第四冊(cè)》，檢驗(yàn)項(xiàng)目為性狀檢查(粒度、水分、溶化性、裝量差異)。

2 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果

本次收集樣品共24 批，依據(jù)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，不合格批數(shù)為0，合格率為100%。

3 創(chuàng)新方法及結(jié)果分析

稚兒靈顆粒藥味多達(dá)24 種，成分復(fù)雜，查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，圍繞潛在問(wèn)題，從藥品有效性和質(zhì)量一致性方面著手，在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了薄層色譜(TCL)法鑒別處方中多種原料藥材、高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定多組分含量、指紋圖譜等項(xiàng)目，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，確立檢測(cè)方法，獲取相應(yīng)數(shù)據(jù)，對(duì)24 批次樣品開(kāi)展探索性創(chuàng)新研究。

3.1 薄層色譜鑒別

薄層色譜是目前控制中成藥內(nèi)在質(zhì)量的重要手段之一[7]，由于該處方藥味眾多，嘗試建立24 味藥材的全處方鑒別方法，由于其中某些藥材投料太少及處方藥味在制劑過(guò)程中化學(xué)成分會(huì)相互影響，所以結(jié)合其制法和工藝，筆者增加了黨參、太子參、制何首烏等五味藥材的TLC 鑒別，并采用專(zhuān)屬性更強(qiáng)的藥材作為對(duì)照，以期增加整體的專(zhuān)屬性。研究結(jié)果顯示，各樣品薄層色譜行為差異較小，色譜行為與對(duì)照藥材基本一致，陰性樣品均無(wú)干擾。提取過(guò)程中各樣品取樣量一致，但是不同廠家制劑的斑點(diǎn)顏色深淺不一，提示不同廠家在藥材選取和投料方面存在一定的差異，也可能與廠家的制劑工藝有關(guān)，而同一廠家各批次樣品的色譜行為及斑點(diǎn)顏色大小幾乎一致，說(shuō)明各廠家在制備工藝上具備一定的穩(wěn)定性。薄層色譜結(jié)果顯示樣品總體情況良好。

3.2 HPLC 指紋圖譜

3.2.1 HPLC 指紋圖譜的生成及相似度

采用HPLC 法測(cè)[8]定稚兒靈顆粒樣品和混合對(duì)照品溶液（沒(méi)食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、橙皮苷質(zhì)量濃度分別為0.0194、0.0194、0.0387、0.0195、0.0344 mg/mL）?；旌蠈?duì)照品溶液色譜圖見(jiàn)圖1，稚兒靈顆粒樣品HPLC 色譜圖見(jiàn)圖2，樣品疊加指紋圖譜見(jiàn)圖3。

圖1 混合對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 稚兒靈顆粒樣品HPLC 色譜圖

圖3 樣品HPLC 疊加指紋圖譜

采用指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件計(jì)算樣品相似度[2]，24 批樣品的相似度為0.851～0.990。其中A 公司樣品的相似度分別為0.965、0.963、0.962、0.964、0.968；B 公司樣品的相似度分別為0.924、0.932、0.942、0.920、0.928；C 公司樣品相似度分別為0.982、0.996、0.988、0.979、0.981；D公司樣品相似度分別為0.943、0.881、0.890、0.886、0.851、0.912、0.940、0.905、0.936。根據(jù)匹配結(jié)果共標(biāo)定了10 個(gè)色譜峰，分別記為X1～X10，其中X1、X3、X4、X5、X9 峰分別為沒(méi)食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、橙皮苷，X4 芍藥苷峰峰面積較大，且分離度和對(duì)稱(chēng)因子均符合要求，故設(shè)為參照峰[8]。

3.2.2 聚類(lèi)分析

采用SPSS22.0 軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析，當(dāng)類(lèi)間距為5 時(shí)，24 批樣品可聚為五類(lèi)，其中S1～S5、S10 為第一類(lèi)；S6～S9 為第二類(lèi)；S16、S23、S24 為第三類(lèi)；S11～S15 為第四類(lèi)；S17～S22 為第五類(lèi)。其中第四類(lèi)均為貴州遠(yuǎn)程制藥有限公司的產(chǎn)品；第五類(lèi)均為吉林省康福藥業(yè)有限公司的產(chǎn)品。由此看出，同一廠家不同批次間的產(chǎn)品質(zhì)量有較高的穩(wěn)定性，不同廠家的產(chǎn)品之間還存在差異。稚兒靈顆粒聚類(lèi)分析結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 稚兒靈顆粒聚類(lèi)分析

3.2.3 主成分分析

首先對(duì)X1～X10 成分的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，再對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析，得到其特征值及貢獻(xiàn)率，結(jié)果見(jiàn)表1。依據(jù)Kaiser 判斷標(biāo)準(zhǔn)，可以用來(lái)做主成分分析。表2 為未旋轉(zhuǎn)因子載荷矩陣。未旋轉(zhuǎn)因子載荷矩陣是反映主成分與相關(guān)變量的相關(guān)系數(shù)[9]，由表2可知，第1主成分與沒(méi)食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、色譜峰X(qián)7、橙皮苷高度相關(guān)(相關(guān)系數(shù)均大于0.89)，第2 主成分與色譜峰X(qián)8相關(guān)，第3 主成分與甘草苷相關(guān)，并且第一主成分的方差貢獻(xiàn)率達(dá)到63.76%，故可認(rèn)為沒(méi)食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、色譜峰X(qián)7、橙皮苷是稚兒靈顆粒的特征成分，對(duì)其質(zhì)量有較大影響[9]。

表1 主成分特征值占總方差的比例

表2 未旋轉(zhuǎn)因子載荷矩陣

計(jì)算24 批稚兒靈顆粒中3 個(gè)主成分的評(píng)價(jià)指標(biāo)得分F1、F2、F3，由各主成分得分和對(duì)應(yīng)權(quán)重相乘求和來(lái)構(gòu)建綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)F。

根據(jù)綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，綜合得分越高，表示質(zhì)量越好[10-11]。24 批樣品中，C 公司質(zhì)量最優(yōu)，A 和D公司質(zhì)量較佳，B 公司次之。24 批稚兒靈顆粒綜合得分結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 24 批稚兒靈顆粒綜合得分結(jié)果

續(xù)表3

3.3 含量測(cè)定

參考文獻(xiàn)[12-16]，采用HPLC 法對(duì)樣品中多指標(biāo)性成分進(jìn)行測(cè)定，對(duì)不同廠家24 批次樣品中各組分的含量進(jìn)行方差分析，結(jié)果列于表4。由表4可知，依據(jù)本方法，各生產(chǎn)廠家稚兒靈顆粒中各組分差異顯著，綜合來(lái)講，以C 廠家產(chǎn)品質(zhì)量較好，各組分含量均高于其它廠家。而A 和B 兩家產(chǎn)品中2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)含量很低，可能與市場(chǎng)上流通的制何首烏質(zhì)量參次不齊有關(guān)，也不排除廠家投料量較低的可能性。同時(shí)，B 廠家和D 廠家在此項(xiàng)檢測(cè)中顯示不同批次之間的差異性較大，說(shuō)明藥材質(zhì)量的不穩(wěn)定性或生產(chǎn)工藝對(duì)其成分的含量影響較大，企業(yè)在生產(chǎn)質(zhì)量管理控制上也存在不穩(wěn)定的情況。而A 廠家和C 廠家生產(chǎn)工藝相對(duì)穩(wěn)定。

表4 稚兒靈顆粒測(cè)定結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)

4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)建立及判定

質(zhì)量等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)反映當(dāng)前中成藥品種質(zhì)量的整體狀況和水平，中成藥的質(zhì)量等級(jí)一般分為2 個(gè)，即一級(jí)和二級(jí)，達(dá)不到二級(jí)的樣品判為級(jí)外，即不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。采用適宜的方法、指標(biāo)和限度，使質(zhì)量等級(jí)的劃分客觀具體，可度量解釋和識(shí)別，便于操作和實(shí)施。鑒別或檢查項(xiàng)不符合規(guī)定的，首先判為級(jí)外，再以指紋圖譜和含量測(cè)定結(jié)果確定一、二級(jí)的劃分。在參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[9]的基礎(chǔ)上，根據(jù)有效成分含量與藥材樣品外觀性狀的相關(guān)性及多元統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果建立稚兒靈顆粒質(zhì)量等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表5)。

參考表5 質(zhì)量等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)相似度計(jì)算結(jié)果和表4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，將4 個(gè)廠家的樣品做了以下評(píng)定：

表5 稚兒靈顆粒質(zhì)量等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)

考察樣品均判為一級(jí)的企業(yè)：C 公司；考察樣品判為一級(jí)或二級(jí)的企業(yè)：A 公司；考察樣品均判為二級(jí)的企業(yè)：B、D 公司。

5 結(jié)語(yǔ)

收集24 批稚兒靈顆粒樣品，建立等級(jí)劃分?jǐn)?shù)學(xué)評(píng)分模型，綜合法定檢驗(yàn)數(shù)據(jù)和創(chuàng)新方法結(jié)果，建立較為全面的稚兒靈顆粒質(zhì)量等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)[17]。能夠甄別“采用優(yōu)質(zhì)原料規(guī)范生產(chǎn)的放心藥”和“應(yīng)付標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)生產(chǎn)的合格藥”，為中藥招標(biāo)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。由于樣本量有限，后期還需要擴(kuò)大樣本試驗(yàn)，充分借鑒最新研究成果，對(duì)藥品生產(chǎn)企業(yè)及藥材經(jīng)銷(xiāo)商進(jìn)行多方面考察，以保證分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)符合我國(guó)中成藥生產(chǎn)的實(shí)際情況。