周艷明，袁善奎，單煒力

(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類的潛在影響早已引起人們的關(guān)注。歐盟于2002年發(fā)布了農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的導(dǎo)則[1]，規(guī)定了農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法，并于2009年修訂[2]。美國(guó)環(huán)保署(Environmental Protection Agency，EPA)于1998年發(fā)布了《生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估導(dǎo)則》[3]，概述了農(nóng)藥生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原理，但未提供具體的評(píng)估方法。美國(guó)EPA下設(shè)的農(nóng)藥項(xiàng)目辦公室(Office of Pesticide Program)2004年發(fā)布的《生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估過(guò)程概述》[4]中給出了對(duì)陸生動(dòng)物(鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物)的評(píng)估方法。

我國(guó)目前已建立農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法[5]，但該標(biāo)準(zhǔn)中僅規(guī)定了高級(jí)階段評(píng)估可考慮的部分因素，未詳細(xì)描述具體的試驗(yàn)和評(píng)估方法。根據(jù)《農(nóng)藥登記資料要求》[6]，申請(qǐng)農(nóng)藥登記時(shí)需提供對(duì)鳥(niǎo)類的急性、短期和繁殖毒性試驗(yàn)報(bào)告以及對(duì)鳥(niǎo)類的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告。當(dāng)初級(jí)階段風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估表明對(duì)鳥(niǎo)類的風(fēng)險(xiǎn)不可接受時(shí)，可進(jìn)行高級(jí)階段試驗(yàn)與評(píng)估。本文綜述了農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類的高級(jí)階段風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法，當(dāng)初級(jí)階段風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估表明風(fēng)險(xiǎn)不可接受時(shí)，可從以下方法中選擇1種或多種方法開(kāi)展高級(jí)階段風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

1 測(cè)定鳥(niǎo)類食物中的農(nóng)藥殘留量

在初級(jí)評(píng)估中使用農(nóng)藥的施藥劑量和單位劑量殘留量估算鳥(niǎo)類食物中農(nóng)藥的殘留量，在高級(jí)評(píng)估中，可使用農(nóng)藥在鳥(niǎo)類食物(植物、昆蟲(chóng)等)的實(shí)測(cè)殘留量。如果指示物種以攝食植物為主，可考慮使用農(nóng)藥登記殘留資料中的數(shù)據(jù)。殘留資料中可能有初始?xì)埩袅考皻埩粑锵鈩?dòng)態(tài)方面的信息，但需注意殘留試驗(yàn)中檢測(cè)的植物部分與指示物種的食物是否相符。如果指示物種以攝食昆蟲(chóng)為主，可開(kāi)展試驗(yàn)測(cè)定昆蟲(chóng)的農(nóng)藥殘留水平。收集昆蟲(chóng)的方法包括用網(wǎng)捕捉、用棍子敲打樹(shù)木并收集掉落的昆蟲(chóng)或設(shè)置陷阱等，根據(jù)初級(jí)評(píng)估結(jié)果及鳥(niǎo)類可能攝入的昆蟲(chóng)類型確定。收集的昆蟲(chóng)應(yīng)是鳥(niǎo)類可能攝入的昆蟲(chóng)。用不同方法采集的樣品需分別保存并檢測(cè)。

如果試驗(yàn)中農(nóng)藥按標(biāo)簽中的使用方法多次使用，并在最后一次使用后采樣，則暴露評(píng)估中不使用多次施藥因子。在急性評(píng)估中取初始?xì)埩袅康牡?0百分位，短期評(píng)估中取初始?xì)埩袅康乃銛?shù)平均值，長(zhǎng)期評(píng)估中取時(shí)間加權(quán)平均殘留量。

在設(shè)計(jì)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)考慮以下因素：

(1)施藥方法應(yīng)符合最糟糕情況下的良好農(nóng)業(yè)規(guī)范(GAP)。

(2)試驗(yàn)地點(diǎn)和條件應(yīng)有代表性，通常需在多地點(diǎn)進(jìn)行試驗(yàn)。

(3)應(yīng)根據(jù)初級(jí)評(píng)估結(jié)果確定采樣時(shí)間和采樣次數(shù)。例如，初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估表明對(duì)鳥(niǎo)類存在較高的急性風(fēng)險(xiǎn)，則應(yīng)在施藥后立即采樣；初級(jí)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估表明對(duì)鳥(niǎo)類存在短期或長(zhǎng)期風(fēng)險(xiǎn)，則試驗(yàn)中采樣時(shí)間點(diǎn)的數(shù)量應(yīng)能確定被試物在鳥(niǎo)類食物中的半衰期。

2 優(yōu)化多次施藥因子和時(shí)間加權(quán)平均因子

在初級(jí)評(píng)估中，使用默認(rèn)的半衰期10 d計(jì)算多次施藥因子(MAF)和時(shí)間加權(quán)平均因子(ftwa)，高級(jí)階段評(píng)估時(shí)，可使用消解半衰期數(shù)據(jù)優(yōu)化MAF和ftwa。

Willis和McDowell[7]綜述了81種有效成分在多種植物上的450個(gè)半衰期，總殘留物的半衰期平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差為：有機(jī)氯農(nóng)藥，5.8±6.0d；有機(jī)磷農(nóng)藥，3.3±2.6d；氨基甲酸酯類農(nóng)藥，2.7±1.2d；擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥，5.9±5.0d。可使用殘留資料中施藥后最初幾周的消解動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)計(jì)算農(nóng)藥的半衰期。

對(duì)于昆蟲(chóng)，遷移和繁殖引起的個(gè)體替代將導(dǎo)致種群中殘留物的減少，多次施用對(duì)棲息在葉片的昆蟲(chóng)中不會(huì)出現(xiàn)明顯累積，因此計(jì)算昆蟲(chóng)中殘留量時(shí)可不使用MAF[1]。

在初級(jí)評(píng)估中基于3周時(shí)間、半衰期=10d計(jì)算ftwa。歐盟2002年指南[1]中注明，“沒(méi)有合理的科學(xué)依據(jù)也沒(méi)有普遍接受的規(guī)則來(lái)規(guī)定求平均值的時(shí)間段應(yīng)多長(zhǎng)。大多數(shù)專家不同意簡(jiǎn)單的使用試驗(yàn)時(shí)間。除非有充分的理由縮短或延長(zhǎng)，否則目前將求平均值的時(shí)間段定為3周。”。鳥(niǎo)類繁殖毒性試驗(yàn)中給藥周期至少為20周，通常為22周，可使用鳥(niǎo)類繁殖毒性試驗(yàn)周期優(yōu)化ftwa。但應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

(1)已采取其他優(yōu)化措施時(shí)，不宜再以試驗(yàn)周期優(yōu)化ftwa；

(2)在鳥(niǎo)類繁殖毒性試驗(yàn)中，暴露后很短時(shí)間即觀察到效應(yīng)，或效應(yīng)可歸因于敏感期的短時(shí)間暴露時(shí)，則應(yīng)以該時(shí)間計(jì)算ftwa；

(3)有效成分在環(huán)境中具有持久性時(shí)，不宜以試驗(yàn)周期優(yōu)化ftwa；

(4)有效成分對(duì)鳥(niǎo)類具有內(nèi)分泌干擾作用時(shí)，不宜以試驗(yàn)周期優(yōu)化ftwa。

3 研究鳥(niǎo)類的回避行為

鳥(niǎo)類的回避行為可顯著降低農(nóng)藥的暴露。鳥(niǎo)類的回避行為可能由驅(qū)鳥(niǎo)劑或可引發(fā)厭食的有效成分導(dǎo)致，這種情況下在鳥(niǎo)類飼喂毒性試驗(yàn)中可觀察到拒食現(xiàn)象。對(duì)于顆粒劑和種子處理劑，因助劑、顏色、形狀、質(zhì)地等因素，也能觀察到鳥(niǎo)類的回避行為。

鳥(niǎo)類毒性試驗(yàn)中測(cè)定飼料消耗量的可用于估算回避因子(AV)。例如，處理組的飼料消耗量是正常消耗量的10%，則AV=0.1，并可將其用于暴露量的計(jì)算。但有機(jī)磷、氨基甲酸酯等農(nóng)藥在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)回避行為不明顯，在達(dá)到某個(gè)閾值劑量后才出現(xiàn)顯著的回避行為[2]，在此情況下在暴露評(píng)估中不能簡(jiǎn)單的使用AV計(jì)算暴露量。

可通過(guò)試驗(yàn)明確鳥(niǎo)類的回避行為?；乇艿某潭纫约耙?guī)避風(fēng)險(xiǎn)的有效性與多種因素有關(guān)，而這些因素在實(shí)驗(yàn)室和田間可能有所不同，因此目前尚無(wú)國(guó)際通行的試驗(yàn)準(zhǔn)則，但經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)1996年的鳥(niǎo)類毒性試驗(yàn)研討會(huì)總結(jié)報(bào)告[8]中給出了研究鳥(niǎo)類回避行為的試驗(yàn)原理、篩查方法和試驗(yàn)方法的建議。開(kāi)展試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)選擇最能體現(xiàn)現(xiàn)實(shí)情況的設(shè)計(jì)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)的主要因素包括：

——將農(nóng)藥混入基本食物作為被試物或者以顆粒劑、處理過(guò)的種子為被試物；

——試驗(yàn)區(qū)域的大小：鳥(niǎo)籠、小鳥(niǎo)舍、大鳥(niǎo)舍；

——受試?guó)B單籠飼養(yǎng)或者成組飼養(yǎng)；

——給藥方式：杯子、托盤或撒在地面；

——是否提供替代食物；

——替代食物與被試物是否相似；

——暴露時(shí)間。

4 確定關(guān)鍵物種

關(guān)鍵物種是在使用農(nóng)藥時(shí)出現(xiàn)在作物種植區(qū)域的真實(shí)鳥(niǎo)類物種。使用關(guān)鍵物種的目的是在更接近實(shí)際情況的條件下開(kāi)展風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。每種作物種植區(qū)域可能有多個(gè)關(guān)鍵鳥(niǎo)類物種。

4.1 試驗(yàn)地選擇 選擇的觀測(cè)試驗(yàn)地和作物應(yīng)與農(nóng)藥的使用區(qū)域和作物一致，并應(yīng)在農(nóng)藥的典型使用時(shí)期開(kāi)展試驗(yàn)。調(diào)查的田地至少應(yīng)相隔250m，以避免重復(fù)計(jì)算。在報(bào)告中應(yīng)說(shuō)明試驗(yàn)地的種植情況及周圍棲息地情況。將數(shù)據(jù)外推至其他地點(diǎn)或相近作物時(shí)，應(yīng)證明其合理性。

4.2 調(diào)查方法 主要有兩種調(diào)查方法：樣線法(transect method)和樣點(diǎn)法(point count method)。

4.2.1 樣線法 在種植目標(biāo)作物的農(nóng)田確定1縱向基線，觀察者沿基線步行，記錄基線兩側(cè)一定距離(如兩側(cè)各50m)范圍內(nèi)的所有鳥(niǎo)類。

4.2.2 樣點(diǎn)法 觀察者在單一位置調(diào)查整片農(nóng)田的鳥(niǎo)類，以避免驚擾鳥(niǎo)類。該方法更適合觀測(cè)新耕的農(nóng)田和裸土上的鳥(niǎo)類。

4.3 數(shù)據(jù)分析 以下信息與關(guān)鍵物種最相關(guān)：

4.3.1 農(nóng)田觀測(cè)頻率(frequency of observation in the field,FOfield) 指不考慮觀察到的個(gè)體數(shù)量如何，只記錄特定物種出現(xiàn)的農(nóng)田數(shù)量占總農(nóng)田數(shù)量的百分比。該方法可用于衡量物種出現(xiàn)的空間頻率，或物種所在的農(nóng)田比例。一個(gè)物種的田間觀測(cè)頻率為100%表明在這次觀測(cè)中，在所有的農(nóng)田都觀察到了該物種。

4.3.2 調(diào)查觀測(cè)頻率(frequency of observation per survey,FOsurvey) 指記錄到特定物種出現(xiàn)的調(diào)查頻次占總調(diào)查頻次的百分比。該方法可近似的給出整個(gè)試驗(yàn)期間物種出現(xiàn)的時(shí)間均勻度。一個(gè)物種的調(diào)查觀測(cè)頻率為100%表明在每次調(diào)查時(shí)至少觀測(cè)到了該物種。

4.4 選擇關(guān)鍵物種 優(yōu)先選擇觀測(cè)頻率>20%的物種作為關(guān)鍵物種，但同時(shí)還應(yīng)考慮食性、攝食量、體重等因素以確保能保護(hù)潛在暴露量最高的物種。農(nóng)田觀測(cè)頻率或調(diào)查觀測(cè)頻率最高的物種并不一定就是關(guān)鍵物種。例如，燕子在某段時(shí)間在農(nóng)田中普遍存在、數(shù)量較多，雖然其單位體重食物攝取量高、攝食小型無(wú)脊椎動(dòng)物，但其主要攝食空中的無(wú)脊椎動(dòng)物，其食物中農(nóng)藥的殘留量低，不能外推到保護(hù)其他物種，不宜作為關(guān)鍵物種[2]。Dietzen[9]等歐盟農(nóng)藥鳥(niǎo)類風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中的關(guān)鍵物種，并給出了確定小麥田關(guān)鍵物種的示例。

5 優(yōu)化PT和PD

PT為鳥(niǎo)類在施藥區(qū)域獲得食物的時(shí)間比例，PD為不同食物類型在鳥(niǎo)類飲食中的比例。在初級(jí)評(píng)估中，假定PT和PD均為1(即假定某種鳥(niǎo)類的食物數(shù)量及種類均來(lái)自于有農(nóng)藥暴露的農(nóng)田食物)，但如果有足夠的信息則可以優(yōu)化PT和PD。不同的作物和鳥(niǎo)類物種會(huì)得出不同的PT和PD，在優(yōu)化PT和PD時(shí)，通常將重點(diǎn)放在一種或兩種關(guān)鍵物種上。

5.1 PT 在田間很難直接獲得鳥(niǎo)類在施藥區(qū)域攝食比例的數(shù)據(jù)，因此可以根據(jù)在施藥區(qū)域中消耗的時(shí)間來(lái)估算PT。可以通過(guò)無(wú)線電跟蹤的方式獲得PT數(shù)據(jù)，捕捉野生鳥(niǎo)類并安裝無(wú)線電發(fā)射器或GPS裝置，并記錄其在施藥農(nóng)田中的活動(dòng)時(shí)間。無(wú)線電跟蹤的同時(shí)進(jìn)行人工觀察，則可明確在施藥農(nóng)田中的覓食時(shí)間。

目前尚無(wú)國(guó)際公認(rèn)的試驗(yàn)準(zhǔn)則，但歐盟評(píng)估指南[2]的附錄P中對(duì)該類試驗(yàn)有較詳細(xì)的說(shuō)明，試驗(yàn)計(jì)劃可參考Crocker等[10]研究報(bào)告的附錄1，將無(wú)線電發(fā)射器安裝到小型鳥(niǎo)類尾羽上的方法可參考該報(bào)告的附錄2。

5.1.1 無(wú)線電跟蹤方法 使用無(wú)線電跟蹤技術(shù)的目的一是定位鳥(niǎo)類個(gè)體，以便觀察其行為；二是在一段時(shí)間內(nèi)持續(xù)跟蹤某一鳥(niǎo)類個(gè)體，以明確其在施藥農(nóng)田中活動(dòng)的時(shí)間比例。

在每次觀測(cè)過(guò)程中，應(yīng)持續(xù)跟蹤鳥(niǎo)類個(gè)體。鳥(niǎo)類行為和位置的變化記錄應(yīng)精確至分鐘，應(yīng)定時(shí)更換觀測(cè)人員以保持觀測(cè)人員注意力集中。試驗(yàn)中應(yīng)觀測(cè)鳥(niǎo)類在全天(從日出至日落)的活動(dòng)，而不管鳥(niǎo)類的依從性如何，即不因鳥(niǎo)類離開(kāi)而縮短觀測(cè)時(shí)間、也不因鳥(niǎo)類易于觀測(cè)而延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間。

使用八木天線可以確定被跟蹤鳥(niǎo)類的位置，無(wú)線電信號(hào)強(qiáng)度可估算與鳥(niǎo)類的距離。為盡量準(zhǔn)確描述被跟蹤鳥(niǎo)類的行為并驗(yàn)證其位置，當(dāng)鳥(niǎo)類未被植被隱藏時(shí)，盡量目視或使用望遠(yuǎn)鏡觀察鳥(niǎo)類?？墒褂糜蓄伾哪_環(huán)幫助識(shí)別鳥(niǎo)類個(gè)體。保持適當(dāng)?shù)陌踩嚯x以避免影響鳥(niǎo)類的行為。

鳥(niǎo)類的覓食行為與鳥(niǎo)類生殖周期不同階段的營(yíng)養(yǎng)需求、棲息地環(huán)境和食物供應(yīng)等因素有關(guān)，PT也會(huì)因這些因素的改變而變化。因此應(yīng)在登記作物的典型生長(zhǎng)階段以及具有代表性的棲息環(huán)境開(kāi)展試驗(yàn)。通常至少應(yīng)在給定場(chǎng)景中捕捉20只關(guān)鍵鳥(niǎo)類并觀測(cè)其活動(dòng)。

5.1.2 鳥(niǎo)類個(gè)體PT的計(jì)算 根據(jù)無(wú)線電跟蹤試驗(yàn)觀測(cè)結(jié)果，可將觀測(cè)鳥(niǎo)類的行為分為“可能在覓食”與“不在覓食”兩種情況(表1)。

表1 用于計(jì)算PT的鳥(niǎo)類行為類別

觀測(cè)鳥(niǎo)類個(gè)體的PT=在目標(biāo)作物的覓食時(shí)間/總覓食時(shí)間。鳥(niǎo)類個(gè)體PT的計(jì)算示例(表2)，假設(shè)無(wú)線電跟蹤觀測(cè)結(jié)果表明觀測(cè)鳥(niǎo)類在目標(biāo)作物的覓食時(shí)間為4h，則PT=4h/9h=0.44。

表2 鳥(niǎo)類個(gè)體PT計(jì)算的示例

5.1.3 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估所需PT的計(jì)算 通常無(wú)線電跟蹤試驗(yàn)會(huì)跟蹤觀測(cè)20只鳥(niǎo)，因此可結(jié)算出20個(gè)觀測(cè)鳥(niǎo)類個(gè)體的PT。歐盟評(píng)估指南[2]中并未規(guī)定在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中應(yīng)如何使用，只指出“如果用中位值或平均值代替默認(rèn)的PT=1，則在沒(méi)有其他安全系數(shù)的情況下，將表明風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估僅對(duì)一半目標(biāo)種群具有保護(hù)作用。風(fēng)險(xiǎn)管理人員需確定應(yīng)保護(hù)的種群比例。”。目前歐盟成員國(guó)在評(píng)估中使用個(gè)體PT的第90百分位[11]，計(jì)算方法如下：

第一步：檢查數(shù)據(jù)

①所跟蹤的物種是關(guān)鍵物種；

②作物與GAP相關(guān)；

③季節(jié)與GAP相關(guān)；

④環(huán)境是農(nóng)藥將使用的典型區(qū)域；

⑤跟蹤足夠數(shù)量的鳥(niǎo)類(至少20只)。

第二步：檢查所有觀測(cè)鳥(niǎo)類是否都是覓食鳥(niǎo)，即個(gè)體PT>0，對(duì)于數(shù)據(jù)為0的觀測(cè)鳥(niǎo)類個(gè)體，則排除該鳥(niǎo)的數(shù)據(jù)。對(duì)于跟蹤多于1d的觀測(cè)鳥(niǎo)類個(gè)體，使用每日PT的平均值作為該個(gè)體的PT。

第三步：計(jì)算覓食鳥(niǎo)個(gè)體PT數(shù)據(jù)的第90百分位，即可得出風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中使用的PT。

從風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原理上來(lái)說(shuō)，在長(zhǎng)期風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中使用21d時(shí)間加權(quán)平均PT是合理的，但目前尚無(wú)在農(nóng)藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中使用多個(gè)體、多天的跟蹤數(shù)據(jù)的導(dǎo)則。Ludwigs等[12]提出了利用蒙特·卡羅方法計(jì)算21d平均PT的方法。

5.2 PD 在優(yōu)化PD時(shí)，可以通過(guò)分析鳥(niǎo)類胃內(nèi)容物、糞便和食丸來(lái)確定鳥(niǎo)類的食物來(lái)源。

5.2.1 捕鳥(niǎo)及樣品采集 可使用網(wǎng)或陷阱捕捉觀測(cè)鳥(niǎo)類。試驗(yàn)應(yīng)在合適的季節(jié)進(jìn)行，網(wǎng)或陷阱應(yīng)放置在目標(biāo)作物或至少靠近目標(biāo)作物。試驗(yàn)地點(diǎn)應(yīng)代表農(nóng)藥的使用地點(diǎn)。捕捉觀測(cè)鳥(niǎo)類后，可通過(guò)獲取糞便或胃內(nèi)容物樣品來(lái)獲取鳥(niǎo)類的飲食樣品。通常，糞便樣品會(huì)提供更可靠的結(jié)果。

(1)糞便采樣

可將觀測(cè)鳥(niǎo)類放在干凈的袋子或聚乙烯片上收集糞便。也可以在田間(例如鳥(niǎo)類停留地、棲息地、筑巢地)收集糞便。糞便樣品應(yīng)單獨(dú)存放，可用氯化鈉保存。

(2)胃內(nèi)容物取樣

將涂有凡士林的細(xì)塑料管插入胃中，通過(guò)注射器將溫水泵入胃中，直到食道和胃的內(nèi)容物排空。將獲得的樣品轉(zhuǎn)移到樣品容器中并用酒精保存。

5.2.2 收集參照物 在試驗(yàn)區(qū)域采集鳥(niǎo)類食物(如無(wú)脊椎動(dòng)物、種子或植物)，可幫助估計(jì)鳥(niǎo)類食物的原始尺寸。

5.2.3 樣品檢測(cè) 用顯微鏡研究鳥(niǎo)類的食物樣品。昆蟲(chóng)遺骸至少區(qū)分至科，其他無(wú)脊椎動(dòng)物至少區(qū)分至綱。通過(guò)分析角質(zhì)層的結(jié)構(gòu)，特別是氣孔可以確定食物樣品中的植物種類。通過(guò)分析外殼殘留物來(lái)識(shí)別種子。

無(wú)脊椎動(dòng)物或植物的特征部分(例如節(jié)肢動(dòng)物的幾丁質(zhì)碎片、蚯蚓的剛毛、種子碎片(果皮)、植物(即葉子和莖的面積))的大小可以用測(cè)微目鏡測(cè)定。

為量化不同類型食物的數(shù)量(例如節(jié)肢動(dòng)物的數(shù)量)，應(yīng)對(duì)每個(gè)樣品中發(fā)現(xiàn)的食物碎片計(jì)數(shù)，并計(jì)算出占指定殘骸數(shù)量所需的最小個(gè)體數(shù)據(jù)。例如甲蟲(chóng)的兩個(gè)右下頜骨和一個(gè)左下頜骨可歸因于至少兩個(gè)個(gè)體。果實(shí)和種子的數(shù)量可通過(guò)測(cè)量碎片的面積并將其除以參照果實(shí)或種子的面積來(lái)獲得。

試驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量在很大程度上取決于操作人員識(shí)別遺骸的能力。提前捕捉觀測(cè)鳥(niǎo)類并喂食不同食物有助于量化食物樣品回收率。

5.2.4 數(shù)據(jù)評(píng)估

(1)將樣品中的食物數(shù)量轉(zhuǎn)化為鳥(niǎo)類實(shí)際攝入的食物數(shù)量

使用校正因子將糞便或胃內(nèi)容物樣品中食物數(shù)量轉(zhuǎn)化為鳥(niǎo)類實(shí)際攝入的食物數(shù)量。消化過(guò)程中在某些食物幾乎完整的情況下，另一些食物可能已完全消失，因此每種類型的食物需使用特定的校正因子。蚯蚓或其他土壤無(wú)脊椎動(dòng)物通常被迅速消化，而許多節(jié)肢動(dòng)物的角質(zhì)層部分通常不易消化而容易在糞便中識(shí)別出來(lái)。某些食物類型和鳥(niǎo)類的校正因子可從文獻(xiàn)中得出[13，14]。也可以捕捉鳥(niǎo)類在圈養(yǎng)條件下進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，以確定校正因子。

(2)根據(jù)攝入食物的長(zhǎng)度計(jì)算食物的干重

可使用相關(guān)文獻(xiàn)[15，16]中的回歸方程將估算的食物長(zhǎng)度轉(zhuǎn)換為食物干重。

5.2.5 注意事項(xiàng) 有關(guān)食物組成的數(shù)據(jù)應(yīng)與申請(qǐng)的用途有關(guān)，即與棲息地和施藥時(shí)間都有相關(guān)性。應(yīng)注意，該數(shù)據(jù)可能會(huì)低估蚜蟲(chóng)等易消化食物的比例。

然后使用上述數(shù)據(jù)重新計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)商值。對(duì)于攝入多種食物的情況，應(yīng)計(jì)算每種食物類型的預(yù)測(cè)暴露劑量，并將其相加以獲得總預(yù)測(cè)暴露劑量。

優(yōu)化PD時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

——優(yōu)化PD并不總是導(dǎo)致RQ減??；

——PD值總和應(yīng)為1；

——飲食構(gòu)成的假設(shè)應(yīng)充分合理；

——數(shù)據(jù)應(yīng)先換算為干重，然后再用于估算PD。

——如果施藥區(qū)域和未施藥區(qū)域的飲食組成不同，應(yīng)基于施藥區(qū)域的飲食數(shù)據(jù)估算PD。

6 確定長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)終點(diǎn)的相關(guān)性

環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的目標(biāo)是預(yù)測(cè)對(duì)種群水平的影響，一般認(rèn)為如果不影響個(gè)體的存活率、繁殖率和發(fā)育，則不會(huì)對(duì)種群產(chǎn)生影響。因此，毒性試驗(yàn)中只有與這些關(guān)鍵因素有關(guān)的終點(diǎn)才具有生態(tài)毒理學(xué)意義。無(wú)可觀察作用水平(NOEL[1])基于試驗(yàn)的最敏感端點(diǎn)，在高級(jí)評(píng)估中可以考慮高于NOEL的劑量所見(jiàn)效應(yīng)的生態(tài)相關(guān)性。

6.1 終點(diǎn)類別 鳥(niǎo)類繁殖毒性試驗(yàn)包括成鳥(niǎo)和繁殖的終點(diǎn)。如果NOEL基于繁殖的終點(diǎn)，但暴露時(shí)間是在繁殖季節(jié)以外短暫發(fā)生的，則基于成鳥(niǎo)影響的NOEL更相關(guān)。

6.2 繁殖終點(diǎn) 通常應(yīng)選擇與總體繁殖率相關(guān)的終點(diǎn)來(lái)定義鳥(niǎo)類的長(zhǎng)期NOEL。根據(jù)具體情況和數(shù)據(jù)情況，可能是繁殖率、幼鳥(niǎo)的生存率或生長(zhǎng)率、成鳥(niǎo)或幼鳥(niǎo)的行為參數(shù)。

6.3 毒性效應(yīng)的大小 NOEL是基于統(tǒng)計(jì)顯著性而非生物學(xué)顯著性。在高質(zhì)量的鳥(niǎo)類繁殖試驗(yàn)中，有可能表明5%的孵化重量的偏差具有統(tǒng)計(jì)顯著性，而在普通試驗(yàn)中不具有統(tǒng)計(jì)顯著性。如果第14d幼鳥(niǎo)體重正常，則不將這種效應(yīng)視為生物學(xué)相關(guān)。應(yīng)避免根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判定與對(duì)照相比的20%或其他任何差異為相關(guān)。相反，在質(zhì)量較差的試驗(yàn)中，統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異并不一定意味著沒(méi)有生物學(xué)上的顯著影響。

6.4 效果隨時(shí)間的變化 暴露終止后短時(shí)或可逆的亞致死作用不如連續(xù)或不可逆作用重要。

7 研究鳥(niǎo)類的去殼行為

對(duì)于吃種子的鳥(niǎo)類，去殼行為可降低農(nóng)藥暴露?？捎^察到去殼行為的主要是小型鳥(niǎo)類，但并非所有小型鳥(niǎo)類都有去殼行為，某些物種對(duì)部分特定種子類型存在去殼行為。在野外，去殼行為可能取決于攝食壓力、捕食或競(jìng)爭(zhēng)等脅迫。對(duì)于體重超過(guò)50g的鳥(niǎo)類，應(yīng)假定沒(méi)有去殼行為。

關(guān)于鳥(niǎo)類的去殼行為對(duì)農(nóng)藥暴露的定量研究很少，現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明鳥(niǎo)類攝食去殼種子的數(shù)量及去殼行為對(duì)農(nóng)藥暴露量的減少都與種子結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。由于缺乏可靠數(shù)據(jù)，必須有證據(jù)表明關(guān)鍵物種在田間條件下存在去殼行為。此外，如果一個(gè)或幾個(gè)種子或顆粒劑中含有的農(nóng)藥有效成分已達(dá)到該農(nóng)藥對(duì)鳥(niǎo)類的半致死劑量時(shí)，也不考慮鳥(niǎo)類的去殼行為。

為明確去殼行為對(duì)農(nóng)藥暴露的影響，應(yīng)對(duì)相關(guān)的鳥(niǎo)類關(guān)鍵物種、種子類型和農(nóng)藥開(kāi)展試驗(yàn)，避免外推增加不確定性。如果風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中考慮了鳥(niǎo)類的去殼行為，則同時(shí)應(yīng)評(píng)估沒(méi)有去殼行為的鳥(niǎo)類物種的風(fēng)險(xiǎn)。如果評(píng)估結(jié)果表明沒(méi)有去殼行為的鳥(niǎo)類物種的風(fēng)險(xiǎn)不可接受，則風(fēng)險(xiǎn)仍不可接受。