陳樂(lè)，郭璐娟，康利平，朱蕓蕓，陳昌婕，于金倩，杜鴻志，*，劉大會(huì)*

1.湖北中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源中心，湖北 武漢 430065；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心 道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，北京 100700；3.齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）山東省分析測(cè)試中心，山東 濟(jì)南 250014

中藥化學(xué)成分復(fù)雜多樣，其成分的復(fù)雜性構(gòu)成了功效的多樣性[1]。根據(jù)中藥中各種化學(xué)成分在溶劑中的溶解性質(zhì)選擇合適的提取溶劑，可顯著提高中藥中有效成分的提取率。中藥提取主要遵循“相似相溶”原理，即選擇和溶質(zhì)極性相近的溶劑進(jìn)行提取[2]，這對(duì)中藥配方顆粒的制備、植物化學(xué)成分的分離等具有重要意義。綠原酸類成分是咖啡酸與天然奎寧酸的結(jié)合物，存在于多種高等植物中[3]。近年來(lái)，人們對(duì)綠原酸類化合物的關(guān)注日益增加，原因除了其具有酚酸、黃酮等酚類化合物常見(jiàn)的生物活性（抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎、抗腫瘤作用）及相對(duì)較低的不良反應(yīng)外[4-6]，綠原酸類化合物還被證實(shí)能降低血糖、治療輕度高血壓和降低膽固醇水平等[7-8]。因此，隨著關(guān)于綠原酸類成分研究的逐年增多，有必要對(duì)中藥中綠原酸類成分在不同溶劑中的溶解性、提取過(guò)程中含量變化規(guī)律等展開(kāi)研究，以探尋中藥中各綠原酸類成分的最佳提取條件。

菊科蒿屬植物艾葉Artemisia argyiLevl.et Vant.、菊科菊屬植物菊花Chrysanthemum morifoliumRamat.及忍冬科忍冬屬植物金銀花Lonicera japonicaThunb.均是中國(guó)傳統(tǒng)大宗常用中藥材。近年來(lái)，在醫(yī)療保健、養(yǎng)生美容及動(dòng)物飼料等相關(guān)領(lǐng)域備受青睞，是目前綠原酸類化合物的重要來(lái)源[3,9-10]。本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，艾葉提取過(guò)程中存在“逆溶解度”現(xiàn)象（即中藥材中綠原酸類化合物在某種溶劑中的提取率與其在該溶劑中的溶解性能相反的現(xiàn)象）。例如，艾葉中綠原酸類成分咖啡酸溶解性質(zhì)為微溶于冷水，易溶于乙醇，而艾葉在超聲提取時(shí)咖啡酸在純水中的提取率卻顯著高于乙醇，與自身溶解特性相反。在此基礎(chǔ)上，本研究系統(tǒng)測(cè)定了艾葉、菊花和金銀花3 種中藥材中主要綠原酸類成分在純水、乙醇的溶解度，并利用超聲輔助提取法和加熱回流提取法比較了3 種中藥材中綠原酸類成分在水和乙醇中提取率的差異，揭示了中藥在不同科屬、不同提取條件下的“逆溶解度”現(xiàn)象，同時(shí)探究了各綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律，以期為綠原酸類成分的提取分離、中藥配方顆粒制備工藝的優(yōu)化及深入挖掘應(yīng)用價(jià)值提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1260 型超高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；PS-40 型超聲波清洗器（深圳超藝達(dá)科技有限公司）；ZNHW 型智能恒溫電熱套（天津工興實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司）；EX125DZH 型十萬(wàn)分之一電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；WP-UPGX 型超純水機(jī)（上海研承儀器有限公司）。

1.2 試藥

對(duì)照品新綠原酸（5-CQA，批號(hào)：DSTDX001501）、綠原酸（3-CQA，批號(hào)：DST200822-021）、咖啡酸（CA，批號(hào)：DST191030-013）、隱綠原酸（4-CQA，批號(hào)：DSTDY003501）購(gòu)于德斯特生物科技有限公司；對(duì) 照 品 異 綠 原 酸B（3,4-diCQA，批 號(hào)：Y06911812012）、異綠原酸A（3,5-diCQA，批號(hào)：Y06801911011）和異綠原酸C（4,5-diCQA，批號(hào)：Y07011805016）購(gòu)于成都瑞芬思生物科技有限公司，所有對(duì)照品純度均＞98%；乙腈為色譜純（德國(guó)默克公司）；無(wú)水乙醇、甲酸均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 份金銀花樣品、4 份艾葉樣品和4 份菊花樣品均于2020 年采摘，保存于湖北中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源中心，由湖北中醫(yī)藥大學(xué)劉大會(huì)教授鑒定均為正品。樣品信息見(jiàn)表1。

表1 金銀花、艾葉、菊花樣品信息

2 方法

2.1 超高效液相色譜法（UHPLC）條件

參照文獻(xiàn)[11]的UHPLC 色譜條件對(duì)艾葉、菊花和金銀花樣品中主要綠原酸類成分的含量進(jìn)行測(cè)定，以0.1%甲酸水（A）-0.1%甲酸乙腈（B）進(jìn)行梯度洗脫（0～0.3 min，2%～5%B；0.3～1.0 min，5%B；1.0～7.0 min，5%～20%B；7.0～9.0 min，20%B；9.0～9.5 min，20%～25%B；9.5～12.5 min，25%～28%B；12.5～18.0 min，28%～40%B；18.0～18.3 min，40%～80%B；18.3～21.0 min，80%～98%B；21.0～24.0 min，98%B）；流速為0.5 mL·min-1；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為1 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm。對(duì)該法進(jìn)行儀器精密度、方法重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率方法學(xué)考察。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取7個(gè)對(duì)照品適量，用甲醇溶解、定容，制得5-CQA、3-CQA、CA、4-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA、4,5-diCQA 質(zhì)量濃度分別為7.37、12.71、29.11、3.73、315.56、545.00、358.33 mg·L-1的混合對(duì)照品溶液。

2.3 綠原酸類成分的溶解度測(cè)定

稱取各對(duì)照品適量，分別以純水和乙醇為溶劑，置室溫下充分振搖后超聲60 min，使其達(dá)到溶解平衡狀態(tài)，稀釋一定倍數(shù)后按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定，分別測(cè)定7個(gè)綠原酸類成分在2種溶劑中的溶解濃度。

2.4 不同提取方法下綠原酸類成分在2 種溶劑中提取率的測(cè)定

2.4.1 超聲輔助提取法 將3 種中藥材粉碎，過(guò)一號(hào)篩，精密稱取各樣品粉末0.1 g 于20 mL 量瓶中，分別加入純水、乙醇定容至刻度線，稱定質(zhì)量，放置過(guò)夜，超聲60 min，冷卻至室溫后用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失質(zhì)量，靜置，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)后按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定。

2.4.2 加熱回流提取法 精密稱取各樣品粉末5.0 g 于2000 mL 三頸燒瓶中，分別加入純水、乙醇1000 mL，稱定質(zhì)量，放置過(guò)夜，置電熱套中回流提取60 min，冷卻至室溫后用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失質(zhì)量，靜置，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過(guò)后按2.1 項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定。

2.5 綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律

精密稱取各樣品粉末0.1 g 于20 mL 量瓶中，分別加入不同體積分?jǐn)?shù)乙醇（0、25%、50%、75%、100%）定容至刻度，稱定質(zhì)量，放置過(guò)夜，超聲60 min，冷卻至室溫后用相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，靜置，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)后按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)行測(cè)定。各對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 混合對(duì)照品及樣品在水溶液中超聲提取時(shí)的UHPLC圖

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系考察 精密吸取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，稀釋成系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，分別按2.1 項(xiàng)下條件測(cè)定，以各對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸分析，見(jiàn)表2。

表2 7個(gè)綠原酸類成分的線性關(guān)系

2.6.2 精密度試驗(yàn) 分別取同一份混合對(duì)照品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果5-CQA、3-CQA、CA、4-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA、4,5-diCQA峰面積的RSD分別為1.20%、1.27%、0.83%、1.15%、0.92%、1.05%、1.07%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取同一批粉末樣品，分別按2.4.1 和2.4.2 項(xiàng)下方法制備的樣品，于0、2、4、8、12、16、24、48 h進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算樣品中7 個(gè)對(duì)照品色譜峰峰面積的RSD，超聲輔助提取時(shí)峰面積的RSD 分別為1.2%、1.1%、1.3%、1.2%、1.2%、1.1%、1.4%，加熱回流提取時(shí)峰面積的RSD 分別為1.3%、1.2%、1.4%、1.2%、1.5%、1.3%、1.4%，說(shuō)明樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同一批粉末樣品0.1 g，平行6 份，分別按2.4.1 和2.4.2 項(xiàng)下方法制備樣品后按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算樣品中7個(gè)綠原酸類成分含量的RSD，超聲輔助提取時(shí)含量的RSD 分別為1.4%、2.1%、1.7%、1.5%、1.5%、1.2%、1.3%，加熱回流提取時(shí)含量的RSD 分別為1.6%、1.4%、1.2%、1.5%、1.2%、1.4%、1.2%。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量的同一批粉末樣品0.1 g，平行9份，分別按1.0∶0.8、1∶1、1.0∶1.2 依次精密加入單一對(duì)照品溶液，每個(gè)比例3 份，然后按2.4.1 和2.4.2 項(xiàng)下方法制備樣品后按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算各對(duì)照品的加樣回收率。7個(gè)對(duì)照品溶液的在超聲輔助提取時(shí)加樣回收率分別為96.9%、97.3%、102.5%、100.4%、98.6%、99.2%、101.3%，對(duì)應(yīng)的RSD 分別為1.6%、2.2%、1.8%、0.9%、2.1%、1.1%、1.6%；在加熱回流提取時(shí)加樣回收率分別為98.2%、97.8%、100.3%、101.4%、99.2%、98.6%、98.4%，對(duì)應(yīng)的RSD 分別為1.7%、1.4%、1.8%、1.9%、1.3%、2.0%、1.5%。

2.7 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 2010和SPSS 23.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果采用（）表示。采用t檢驗(yàn)比較兩組間顯著性。運(yùn)用GraphPad 8.0 和Origin 2019 進(jìn)行作圖分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 7個(gè)綠原酸類成分在水和乙醇中的溶解度差異

本研究測(cè)定了7 個(gè)綠原酸類化合物在純水、乙醇2 種常見(jiàn)溶劑中的溶解度（表3）。結(jié)果表明，除4-CQA 在2種溶劑中均有較好的溶解性外（溶解度＞150 mg·mL-1），其余6 個(gè)綠原酸類成分經(jīng)充分振搖并超聲60 min 后，在水中能較快達(dá)到飽和狀態(tài)，在乙醇中溶解度更大。以CA 為例，純水中溶解度僅為0.28 mg·mL-1，而在乙醇中溶解度高達(dá)52.99 mg·mL-1，與ChemSpider 數(shù) 據(jù) 庫(kù)（http://www.chemspider.com/）收載的CA 在乙醇中的溶解度（50 mg·mL-1）基本吻合；3-CQA、3,4-diCQA 和3,5-diCQA在乙醇中即使溶解度接近200 mg·mL-1時(shí)，也并未達(dá)到溶解平衡，但其在乙醇中的溶解度遠(yuǎn)大于純水。7 個(gè)綠原酸類成分在乙醇中溶解度是純水中的數(shù)十倍甚至數(shù)百倍，這和數(shù)據(jù)庫(kù)中列出的溶解性一致，表明乙醇與其自身的極性更為接近。

表3 7個(gè)綠原酸類成分在水和乙醇中的溶解度比較 mg·mL-1

3.2 水和乙醇2 種溶劑超聲提取3 種中藥材中綠原酸類成分含量的比較

以純水和乙醇為提取溶劑，利用現(xiàn)代超聲輔助提取法分別提取艾葉、菊花和金銀花中的主要綠原酸類成分，比較3種中藥材中綠原酸類成分在2種溶劑中提取含量的差異。結(jié)果表明，3種中藥材不同來(lái)源樣品提取含量變化趨勢(shì)一致，但不同植物間各綠原酸類成分在2種提取溶劑中含量變化趨勢(shì)有明顯差異。在菊花、金銀花樣品中均未檢測(cè)到CA（圖2）。艾葉和菊花樣品中各綠原酸類成分均表現(xiàn)為在乙醇中的提取含量低于純水，且2 種植物中5-CQA、3-CQA、CA 和4-CQA 在乙醇中的提取含量接近于0；菊花樣品中3,4-diCQA 在乙醇中的提取含量也接近于0。這與綠原酸類成分對(duì)照品在2 種溶劑中的溶解性完全相反，不符合“相似相溶”原理。與菊科植物不同的是，忍冬科植物金銀花樣品中5-CQA、3-CQA 和4-CQA 在乙醇中的提取含量?jī)H略低于純水，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而3,4-diCQA、綠原酸A、綠原酸C 的提取含量表現(xiàn)為在乙醇中顯著高于純水，說(shuō)明金銀花在超聲提取過(guò)程中僅部分綠原酸類成分存在“逆溶解度”現(xiàn)象。上述結(jié)果表明，中藥材在超聲提取過(guò)程中存在“逆溶解度”現(xiàn)象，而不同植物間“逆溶解度”現(xiàn)象強(qiáng)弱不同，這為今后中藥材中綠原酸類成分的提取提供新的思路。

圖2 純水和純乙醇超聲提取艾葉、菊花、金銀花藥材中綠原酸類成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的差異（, n=3）

3.3 水和乙醇2 種溶劑加熱回流提取3 種中藥材中綠原酸類成分含量的比較

采用加熱回流提取法進(jìn)一步比較了3 種中藥材在純水、乙醇2 種溶劑中的提取含量差異，結(jié)果見(jiàn)圖3。在菊花、金銀花加熱回流提取樣品中也未檢測(cè)到CA，不同來(lái)源樣品提取規(guī)律一致，而菊科植物中各綠原酸類成分在2種溶劑中的提取規(guī)律與金銀花有顯著差異。菊科植物在加熱回流時(shí)中除3,5-diCQA在乙醇中的提取含量顯著（P＜0.05，P＜0.01）高于純水外，其余綠原酸類成分在乙醇中的提取率均顯著低于純水，與超聲輔助提取樣品中提取規(guī)律基本一致，也存在顯著的“逆溶解度”現(xiàn)象。然而，忍冬科植物金銀花在加熱回流提取中，3-CQA、3,5-diCQA和4,5-diCQA 在乙醇中的提取含量表現(xiàn)為顯著高于純水，呈現(xiàn)“逆溶解度”現(xiàn)象的綠原酸類成分包括5-CQA、4-CQA和3,4-diCQA。該結(jié)果表明中藥材在加熱回流提取過(guò)程中也存在“逆溶解度”現(xiàn)象，同樣以艾葉、菊花更為顯著。

圖3 純水和純乙醇加熱回流提取艾葉、菊花、金銀花藥材中綠原酸類成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的差異（, n=3）

3.4 金銀花中綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律比較

對(duì)金銀花中5-CQA、3-CQA、4-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA 及4,5-diCQA 6 個(gè)綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇（0、25%、50%、75%、100%）中的提取含量進(jìn)行分析，結(jié)果見(jiàn)圖4。金銀花樣品中6個(gè)綠原酸類成分都是隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢(shì)，均在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)有最高的提取率。根據(jù)“相似相溶”原理，50%體積分?jǐn)?shù)乙醇的極性與金銀花樣品中6 個(gè)綠原酸類成分的極性相當(dāng)。該結(jié)果與先前的報(bào)道基本一致[12]，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)＞50%后，醇溶性成分溶出增加，影響了酚酸類物質(zhì)的提取。

圖4 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取金銀花樣品中綠原酸類成分的提取規(guī)律（, n=3）

3.5 艾葉中綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律比較

以不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取4份不同產(chǎn)地艾葉樣品中綠原酸類成分，共檢測(cè)到新綠原酸、3-CQA、CA、4-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA、4,5-diCQA 7 個(gè)綠原酸類成分。結(jié)果顯示，不同艾葉樣品中7個(gè)綠原酸類成分含量隨乙醇體積分?jǐn)?shù)變化規(guī)律一致（圖5），即隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，3,4-diCQA、3,5-diCQA和4,5-diCQA的含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)提取含量最高，與金銀花變化趨勢(shì)相同；而5-CQA、3-CQA、CA和4-CQA的含量則是隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高而逐漸減少，在純水中的提取含量最高，呈現(xiàn)顯著的“逆溶解度”現(xiàn)象。結(jié)合金銀花樣品在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律，說(shuō)明綠原酸類成分在不同植物中提取規(guī)律有顯著差異。因此，在中藥材提取過(guò)程中應(yīng)先探索目標(biāo)成分在不同溶劑中的提取率以確保較高的得率。

圖5 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取艾葉樣品中綠原酸類成分的提取規(guī)律（, n=3）

3.6 菊花中綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中的提取規(guī)律比較

在4份不同來(lái)源菊花樣品中檢測(cè)到5-CQA、3-CQA、4-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA、4,5-diCQA 6 個(gè)綠原酸類成分，未檢測(cè)到CA。不同菊花樣品中綠原酸類成分含量在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇中變化規(guī)律保持一致（圖6）。菊花在提取過(guò)程中雖“逆溶解度”現(xiàn)象明顯，但不同于艾葉的是，菊花樣品中隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高含量逐漸降低的是5-CQA、4-CQA和3,4-diCQA，3個(gè)綠原酸類成分在水中含量最高；而含量呈現(xiàn)先增高后降低的成分包括3-CQA、3,5-diCQA、4,5-diCQA，在50%體積分?jǐn)?shù)乙醇下提取含量最高。上述結(jié)果表明，中藥材提取過(guò)程中綠原酸類成分的提取規(guī)律即使在同科不同屬種植物間也呈現(xiàn)顯著差異。

圖6 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇提取菊花樣品中綠原酸類成分的提取規(guī)律（, n=3）

4 討論

中藥材中化學(xué)成分多樣、關(guān)系復(fù)雜，探究其有效成分在不同條件下的提取規(guī)律及相互作用，對(duì)優(yōu)化提取工藝及深入挖掘應(yīng)用價(jià)值具有重要意義[13-14]。本研究基于UHPLC，測(cè)定了7 個(gè)綠原酸類成分在純水、乙醇中的溶解性能，發(fā)現(xiàn)幾種綠原酸類成分在乙醇中的溶解度是純水中的數(shù)倍甚至數(shù)十倍、數(shù)百倍，基本符合其微溶于冷水、易溶于乙醇的性質(zhì)。而在對(duì)菊科植物艾葉、菊花和忍冬科植物金銀花3種常見(jiàn)大宗中藥材進(jìn)行綠原酸類成分提取過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，2 種菊科植物中綠原酸類成分在超聲提取時(shí)乙醇的提取含量顯著低于純水，與各成分單體溶解度完全相反；加熱回流提取時(shí)除3,5-diCQA 外，其余綠原酸類成分呈現(xiàn)相同的現(xiàn)象。忍冬科植物金銀花在提取時(shí)也有部分綠原酸類成分呈現(xiàn)該現(xiàn)象，超聲提取時(shí)5-CQA、3-CQA 和4-CQA 在乙醇中的提取率略低于純水；加熱回流提取時(shí)5-CQA、4-CQA 及3,4-diCQA 在乙醇中含量顯著低于純水。說(shuō)明該現(xiàn)象在中藥材提取過(guò)程中普遍存在，但可能因中藥種類、提取方法而異，如不同溶劑對(duì)不同植物組織細(xì)胞破壞程度不同，進(jìn)而影響成分的提取率。因此，今后在中藥材綠原酸類成分的提取過(guò)程中應(yīng)將“逆溶解度”現(xiàn)象考慮在內(nèi)，從而選擇合適的提取條件及提取溶劑以獲得更高的提取率。

為進(jìn)一步揭示中藥中綠原酸類成分提取中的“逆溶解度”現(xiàn)象，本研究以超聲提取探究了3 種中藥材中綠原酸類成分在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇（0、25%、50%、75%、100%）中提取規(guī)律。結(jié)果顯示，金銀花中檢測(cè)到的6 個(gè)綠原酸類成分的含量隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大先增大后減小，并且均在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)達(dá)到最高值。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)＞50%，各綠原酸類成分提取含量逐漸降低，從而呈現(xiàn)出“逆溶解度”現(xiàn)象，推測(cè)可能是植物中醇溶性雜質(zhì)、色素等親脂性強(qiáng)的成分過(guò)多阻礙了綠原酸類成分的溶出[15]。這與一些鹽類在水等溶劑中的溶解度隨著溫度的升高而增加，當(dāng)溫度超過(guò)某一數(shù)值后，其溶解度隨著溫度的增加反而下降的“逆溶解度”特性相似。然而，在艾葉和菊花中卻表現(xiàn)出更為顯著的“逆溶解度”現(xiàn)象。艾葉中3 個(gè)異綠原酸成分變化趨勢(shì)與金銀花一致，但5-CQA、3-CQA、CA和4-CQA卻在純水中呈現(xiàn)最高的提取率，并隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高而降低。菊花與艾葉略有不同的是，綠原酸含量變化趨勢(shì)與金銀花相同，而3,4-diCQA 在純水中提取的含量最高。

目前，呈現(xiàn)出上述提取規(guī)律公認(rèn)的原因主要是成分溶解率受提取過(guò)程中溶劑對(duì)細(xì)胞的滲透性能、藥材中各組分相互影響與共溶、分子在細(xì)胞內(nèi)存在狀態(tài)等影響。然而，本研究認(rèn)為，植物中不同綠原酸類成分間可能還存在某種特異的結(jié)合方式，且在不同植物間也略有差異。有研究表明，中藥復(fù)方水煎過(guò)程中有效成分可產(chǎn)生相互作用，肉桂酸和黃連素自組裝形成超分子聚合物，從而明顯增強(qiáng)對(duì)臨床多重耐藥金黃色葡萄球菌的抑制作用[16]。由相同或不同種類的單體通過(guò)非共價(jià)鍵自組裝形成的超分子聚合物，基于非共價(jià)鍵的可逆性可區(qū)別于單體，從而顯示出獨(dú)特的特性[17]。利用中藥化學(xué)成分的分子識(shí)別與自組裝特性，總結(jié)出各類成分提取規(guī)律，開(kāi)發(fā)新的提取、分離方法，不僅能兼顧中藥的多成分群，更能提高中藥提取分離的特異性、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性[18]。然而，“逆溶解度”現(xiàn)象中存在的相互作用還需進(jìn)一步深入研究其內(nèi)在機(jī)制才能給出合理的解釋。

綜上所述，本研究揭示了中藥材中綠原酸類成分在不同植物、不同提取方法、不同提取溶劑中存在強(qiáng)弱不一的“逆溶解度”現(xiàn)象，為綠原酸類成分的提取和深入研究提供了新的思路，對(duì)中藥配方顆粒制備工藝優(yōu)化、植物化學(xué)分離條件優(yōu)選及工業(yè)生產(chǎn)有重要的指導(dǎo)意義。