楊柳 許瑞清 崔小芳 劉建春

摘 要：目的：建立接近零值時測量不確定度的評定方法案例，為禁用物質(zhì)提供一種評定方法。方法：依據(jù)GB 23200.92—2016和JJF 1059.1—2012，以豬肉樣品為例，分析樣品測量過程中引入的不確定度，利用GUM法加以評定。結(jié)果：本次評定的測量不確定度結(jié)果報告為0.197[0，0.491] μg/kg，k=2。結(jié)論：測量不確定度的主要來源為工作曲線變動。

關(guān)鍵詞：禁用獸藥;零值;測量不確定度;五氯酚酸鈉;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法

Evaluation of Uncertainty in the Determination of Banned Veterinary Drug Sodium Pentachlorophenolate in Pork by Liquid Chromatography-mass Spectrometry

YANG Liu1， XU Ruiqing2， CUI Xiaofang2， LIU Jianchun1

（1.Shanxi Inspection and Testing Center， Taiyuan 030032， China; 2.Shanxi Jinshuo Biological Medicine Technology Co.， Ltd.， Jinzhong 030600， China）

Abstract： Objective： An evaluation method case of measurement uncertainty close to zero is established to provide an evaluation method for prohibited substances. Method： According to GB 23200.92—2016 and JJF 1059.1—2012， taking pork samples as an example， the uncertainty introduced in the measurement process of samples was analyzed and evaluated by gum method. Result： The measurement uncertainty of this evaluation was reported as 0.197[0，0.491] μg/kg ， k=2. Conclusion： The main source of measurement uncertainty is the variation of working curve.

Keywords： banned veterinary drugs; zero value; measurement uncertainty; sodium pentachlorophenolate; liquid chromatography mass spectrometry

五氯酚酸鈉即五氯酚鈉，可用作落葉樹休眠期噴射劑，以防治褐腐病，也用作除草或殺蟲劑[1]。中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第250號公告將五氯酚酸鈉列入食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Thermo U3000-AB seicx 4500Qtrap液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，賽默飛世爾科技有限公司;P-SAX固相萃取柱（60 mg/3 mL），月旭科技（上海）股份有限公司;UW620H電子天平，日本島津公司。

五氯酚酸鈉標準溶液（1 000 μg/mL，由壇墨質(zhì)檢標準物質(zhì)中心提供）;乙腈、甲醇均為質(zhì)譜級。

采用GB 23200.92—2016[2]進行測量。由同一檢驗員在相近的時間內(nèi)，對同一份豬肉樣品測定10次，對測量結(jié)果評定測量不確定度。

1.2 檢測方法

稱取均質(zhì)試樣2 g，置于10 mL聚丙烯離心管中，加入6 mL 5%三乙胺的乙腈-水溶液，均質(zhì)提取2 min。3 000 r/min離心5 min，收集上清液于離心管中。重復(fù)上述提取步驟1次，合并上清液，混勻。將提取溶液轉(zhuǎn)入經(jīng)過預(yù)處理的MAX固相萃取柱中，1滴/s流速使樣液全部通過固相萃取柱，棄去流出液。依次用5 mL 5%氨水溶液、5 mL甲醇、5 mL 2%甲酸的甲醇-水溶液淋洗，棄去流出液，抽干固相萃取柱5 min以上。以4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脫，洗脫液收集于10 mL具刻度試管，40 ℃水浴下氮吹至1 mL，用水定容至2 mL，混勻。過0.22 μm濾膜，供測定。

1.3 標準溶液配制

采用吸取標準溶液0.1 mL定容至10 mL容量瓶中的方法，2級稀釋配制成10 ng/mL的五氯酚酸鈉中間使用液，依次吸取相應(yīng)體積置于10 mL容量瓶中，用基質(zhì)液定容，配成0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL和5.0 ng/mL的標準工作系列。

1.4 儀器條件

（1）色譜條件。SHISEIDO CAPCELL PAK MG III C18（150 mm×2.0 mm，5μm）色譜柱;流動相：甲醇+5 mmol/L乙酸銨溶液（60+40），等度洗脫;流速：300 μL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：1 μL。

（2）質(zhì)譜條件。離子化模式：電噴霧電離負離子模式（ESI-）;質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）;定量離子對：262.7>262.7，定性離子對：264.7>264.7、266.7>266.7、268.7>268.7。

1.5 測量過程

用液相色譜質(zhì)譜儀測定工作標準系列溶液的峰面積，制作標準工作曲線。待測樣液注入儀器測定，用標準工作曲線定量，得出樣液濃度。

2 測量結(jié)果分析

2.1 建立測量數(shù)學模型

根據(jù)測量過程建立測量數(shù)學模型：

（1）

式中：xi為試樣中待測物含量，μg/kg;ci為樣液中待測物的濃度，ng/mL;V為試樣經(jīng)處理后定容體積，mL;m1為試樣的質(zhì)量，g。

2.2 重復(fù)性測量結(jié)果

在相近的時間內(nèi)，由同一操作人員對樣品測量，10次測定結(jié)果分別為0.210 μg/kg、0.188 μg/kg、0.186 μg/kg、0.200 μg/kg、0.203 μg/kg、0.199 μg/kg、0.190 μg/kg、0.208 μg/kg、0.203 μg/kg和0.184 μg/kg，平均值X=0.197 μg/kg，標準偏差s=0.009 39。

3 測量不確定度評定

3.1 測量重復(fù)性引入的測量不確定分量

由2.2重復(fù)性測量結(jié)果計算可得標準不確定度，相對標準不確定度。

3.2 工作曲線變動性的不確定度分量

標準工作系列溶液分別進行3次重復(fù)測定，數(shù)據(jù)處理見表1。

根據(jù)表1中的測試數(shù)據(jù)，用最小二乘法擬合線性回歸方程，標準工作曲線方程：y=356 880x+

44 868，b=356 880，a=44 868，R=0.998 5。由工作曲線變動性引起被測量溶液濃度標準不確定度為：

（2）

（3）

式中：n為標準工作曲線測量次數(shù)，n=18;P為樣品溶液測量次數(shù)，P=10;c為工作曲線各校準濃度的平均值，c=1.45 ng/mL。

被測樣品平均含量為0.197 μg/kg，根據(jù)標準工作曲線待測物濃度為c=0.197 ng/mL，（c-c）=（0.197-1.45）=1.57，，SR=6.846×105。則標準不確定度為u（c）1=0.961，相對標準不確定度為。

3.3 標準儲備液濃度的不確定度分量

五氯酚酸鈉標準儲備液標準物質(zhì)證書（編號91098b，唯一標識21090491）給出相對擴展不確定度為U=kurel（c）=0.02（k=2），因此urel（c）2=0.01。

3.4 定容體積引起的不確定度分量

10 mL離心管定容至2 mL，依據(jù)JJG 10—2005[3]其允許誤差為±0.2 mL，其允差不確定度按均勻分布計算為。不考慮過程中由溫差引起的不確定度。其標準不確定度為u（V）=0.115，相對標準不確定度為。

3.5 取樣量引入的不確定度分量

電子天平的允差不確定度按矩形分布計算為，取樣所用萬分之一天平稱取2 g樣品，?=0.001 g。其標準不確定度為;相對標準不確定度為。

3.6 合成不確定度

上述各分量互不相關(guān)，按照不確定度傳播率公式計算相對合成不確定度：urel（x）=

標準合成不確定度為u（x） =0.197×0.665=

0.131 μg/kg。

3.7 擴展不確定度

取95%置信概率，包含因子k=2，擴展不確定度u=ku=2×0.147=0.262 μg/kg。

4 測量不確定度報告

用液相質(zhì)譜法測定豬肉試樣中五氯酚酸鈉測量不確定度報告為X=0.197[-0.065，0.459] μg/kg，

k=2。采用經(jīng)典方法調(diào)整，用液相質(zhì)譜法測定豬肉試樣中五氯酚酸鈉測量不確定度報告為X=

0.197[0，0.491] μg/kg，k=2。

5 結(jié)論與討論

禁用藥物是常見食品檢測項目，其測量值低，接近于零，即使為負數(shù)也是合理的，可以按照GUM法對測量不確定度進行評定，報告時對報告值加以修正，本研究采用經(jīng)典方法加以修正[3-4]。

5.1 經(jīng)典方法確定擴展不確定度區(qū)間

經(jīng)典方法直接將擴展不確定度區(qū)間從零開始調(diào)整，這樣測量不確定度則為不對稱區(qū)間，如圖1中（d）[5]。測量值低于0時，將測量值與測量區(qū)間同時調(diào)整，如圖1中（b）（c）。圖1中（a）則調(diào)整為0[0，0]，k=2。

5.2 各分量測量不確定度分析

評定中各相對標準不確定度分量說明：A類評定為測量重復(fù)性、工作曲線變動性;B類評定為標準儲備液、定容體積和取樣量。本研究所建立的測量評定方法，工作曲線變動性引入測量不確定度貢獻最大，貢獻率為88.88%。

參考文獻

[1]阮鑫，陸春波，屈健.畜禽產(chǎn)品中五氯酚酸鈉殘留危害與分析[J].中國畜禽種業(yè)，2022，18（1）：54-56.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標準 動物源性食品中五氯酚殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜法：GB 23200.92—2016[S].北京：中國標準出版社，2017.

[3]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.專用玻璃量器：JJG 10—2005[S].北京：中國計量出版社，2005.

[4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示：JJF 1059.1—2012[S].北京：中國標準出版社，2012.

[5]中國合格評定國家認可委員會.化學分析中不確定度的評估指南：CNAS：GL006—2019[EB/OL].（2019-04-09）[2022-03-09].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2019/04/896487.shtml.