王 榮 綜述 陸金春 梁元姣 審校

東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心（江蘇南京 210037）

男性不育通常會出現(xiàn)精子質(zhì)量的異常。全身或生殖系統(tǒng)疾病、環(huán)境因素、生活方式、輻射、微量元素缺乏、藥物等均會導(dǎo)致精子質(zhì)量相關(guān)檢測指標(biāo)的異常。精漿中含有多種成份，如糖類、脂類、酶、免疫球蛋白、多種離子成分及細(xì)胞因子等[1]，這些組分水平的改變對精子質(zhì)量有重要影響。其中，精漿中的細(xì)胞因子水平可以反映男性生殖系統(tǒng)炎性反應(yīng)程度和免疫狀況，其與精子質(zhì)量下降的關(guān)系亦被廣泛研究[2]。精漿中細(xì)胞因子有哪些？其來源如何？目前精漿細(xì)胞因子檢測中存在哪些問題？精漿中細(xì)胞因子導(dǎo)致精子質(zhì)量降低的具體機(jī)制有哪些？闡明這些問題可能有助于男性不育病因的確定、實驗室診斷方法的建立和選擇合適的治療措施。為此，本文對精漿細(xì)胞因子的來源、作用、檢測方法以及導(dǎo)致精子質(zhì)量下降的相關(guān)機(jī)制綜述如下。

一、精漿細(xì)胞因子的種類和來源

目前，在男性生殖系統(tǒng)研究中報道的細(xì)胞因子有：白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1ɑ、1β、1RA（receptor antagonist，受體拮抗劑）、2、4、6、8、10、11、12、17、18、23、35、37、腫瘤壞死因子ɑ（tumor necrosis factorɑ，TNFɑ）、TNFβ、γ干擾素（interferonγ，IFN-γ）、轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factorβ，TGF-β）、內(nèi)皮素1（endothelin 1，ET-1）、肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）等[2]。但在精漿中已檢出的細(xì)胞因子及水平見表1。

表1 精漿中的細(xì)胞因子及其水平

表1 精漿中的細(xì)胞因子及其水平

細(xì)胞因子主要由免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等產(chǎn)生，也可由非免疫細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等經(jīng)刺激后合成并分泌[2]。一般情況下，機(jī)體免疫細(xì)胞會分泌少量細(xì)胞因子，這對維持男性生殖功能是必須的。當(dāng)男性生殖系統(tǒng)受到病原體或其他抗原成分刺激后，機(jī)體免疫細(xì)胞甚至一些非免疫細(xì)胞，會分泌大量細(xì)胞因子，從而介導(dǎo)炎癥和免疫反應(yīng)的發(fā)生[2，17]。

二、精漿細(xì)胞因子的作用

細(xì)胞因子的作用是多效的[2]：相同的細(xì)胞因子對不同的細(xì)胞有不同的作用；不同的細(xì)胞因子可以對特定的細(xì)胞產(chǎn)生相同的影響。此外，細(xì)胞因子中既有促炎細(xì)胞因子，也有抗炎細(xì)胞因子。因而不同的細(xì)胞因子可能具有協(xié)同作用，也可能相互拮抗。

生理情況下，男性生殖系統(tǒng)中的細(xì)胞因子一般為低濃度，其可作為細(xì)胞內(nèi)信號，調(diào)節(jié)生殖道內(nèi)固有免疫和適應(yīng)性免疫，促進(jìn)生殖細(xì)胞的生長和分化成熟，調(diào)節(jié)睪丸正常發(fā)育并維持睪丸內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，以及維持精子的正常功能[2,17-18]。例如，支持細(xì)胞分泌的IL-1α，作為一種有絲分裂原，可調(diào)節(jié)精原細(xì)胞和精母細(xì)胞的DNA復(fù)制，并可作為自分泌和旁分泌因子，刺激乳酸和轉(zhuǎn)鐵蛋白的產(chǎn)生[17]；生精細(xì)胞能產(chǎn)生TNF，TNF可作為信號分子調(diào)節(jié)支持細(xì)胞的功能，以應(yīng)對毒性損傷[17]；IL-10和TGF-β是睪丸內(nèi)維持免疫抑制的關(guān)鍵因子，睪丸特異性抗原正常情況下不會被識別并導(dǎo)致細(xì)胞或體液免疫反應(yīng)的激活，可能與睪丸中的免疫細(xì)胞特別是巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-10和TGF-β有關(guān)[17]；IL-6可促使精子超氧化物歧化酶（SOD）活性升高，從而維持精子頂體完整性[18]；IL-10作為一種抗炎細(xì)胞因子，不僅可抑制單核細(xì)胞和T細(xì)胞中多種炎性細(xì)胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-1和IL-6的表達(dá)和功能，還能增強B淋巴細(xì)胞生成免疫球蛋白及NK細(xì)胞和CD8 T細(xì)胞的細(xì)胞毒性，從而加強免疫防御反應(yīng)[19]。另外，細(xì)胞因子具有免疫信號傳導(dǎo)作用，但在睪丸中各信號通路的復(fù)雜性使得細(xì)胞因子與睪丸生理學(xué)的具體相關(guān)性還值得更多研究。

當(dāng)男性存在生殖道感染（如支原體、衣原體、細(xì)菌、病毒等的感染）或炎癥、精索靜脈曲張、射精管梗阻、肥胖等時，白細(xì)胞數(shù)量或活性氧（ROS）增加[20]，巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞等會分泌較多的促炎細(xì)胞因子如IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、IL-12、IL-17和IL-23等[2]。這些細(xì)胞因子的增加會加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)，并導(dǎo)致精子細(xì)胞的損傷。Saxena等[13]研究認(rèn)為，IL-8作為一種促炎性趨化因子，可吸引更多的白細(xì)胞進(jìn)入精漿，并激活嗜中性粒細(xì)胞以吞噬細(xì)菌而清除感染，同時，這些過氧化物酶陽性的白細(xì)胞則生成更多的ROS，造成精子活力下降和形態(tài)異常。因而精漿IL-8水平被認(rèn)為可用于男性生殖道感染的診斷指標(biāo)[13,21]。另有研究顯示[3]，IL-6、IL-8可以被認(rèn)為是診斷和隨訪男性附屬性腺感染特別是無癥狀感染時最有價值的炎癥標(biāo)志物。

三、精漿細(xì)胞因子的檢測現(xiàn)狀

正如表1所示，精漿中已有十多種細(xì)胞因子被檢測出，并且發(fā)現(xiàn)，實驗組的IL-6、IL-8、IL-10、IL-2、IL-1、TNF-α、IFN-γ、ET-1、TGF-β等水平均顯著高于對照組，提示，這些細(xì)胞因子可能在反映男性生殖道感染或某些特定精子異常上有一定診斷作用。然而，表1也提示，目前檢測精漿細(xì)胞因子的方法絕大多數(shù)為ELISA法，由于該法定量檢測性能有限，影響因素多，結(jié)果的準(zhǔn)確性值得商榷。不同研究團(tuán)隊報道的結(jié)果差異很大，幾乎每個細(xì)胞因子的差異均在數(shù)十倍甚至數(shù)百倍以上，進(jìn)一步提示目前精漿細(xì)胞因子的檢測方法需要改進(jìn)。如果沒有標(biāo)準(zhǔn)的、準(zhǔn)確的精漿細(xì)胞因子檢測方法，結(jié)果的準(zhǔn)確性難以保證，相關(guān)的研究結(jié)論就會有失偏頗。因此，目前對精漿細(xì)胞因子的研究，急需建立標(biāo)準(zhǔn)的、檢測結(jié)果可靠的細(xì)胞因子檢測方法。

目前用于檢測精漿細(xì)胞因子的ELISA法簡單快速，但在操作過程中干擾因素多，重復(fù)性差，靈敏度較低；RIA法有同位素?fù)p害，目前已應(yīng)用很少。最近幾年，用于血清細(xì)胞因子的流式細(xì)胞術(shù)已被建立，其利用包被針對某細(xì)胞因子的高特異性單克隆抗體微球，與樣本中可溶性細(xì)胞因子結(jié)合，再加入待測物的熒光抗體，通過流式細(xì)胞分析儀檢測其熒光強度可得到相應(yīng)細(xì)胞因子水平[22]。該法所需樣本量少，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，重復(fù)性好，易于質(zhì)量控制，且可同時檢測同一標(biāo)本中的多種細(xì)胞因子[23]。表1中的xMAP技術(shù)，就是以熒光編碼微球為核心，集流式原理、激光分析、高速數(shù)字信號處理等多種技術(shù)于一體的檢測系統(tǒng)[12]。因此，流式細(xì)胞術(shù)可能是未來檢測精漿細(xì)胞因子的最佳方法，但需大樣本、多中心臨床驗證。

四、細(xì)胞因子導(dǎo)致精子質(zhì)量降低的機(jī)制

（一）ROS與細(xì)胞因子的相互作用

在不育患者精漿中，細(xì)胞因子水平常增高[2]，其影響精子質(zhì)量研究最多的機(jī)制為活性氧（reactive oxygen species，ROS）學(xué)說。在男性生殖系統(tǒng)中，ROS主要由精子和白細(xì)胞產(chǎn)生。適量的ROS水平對維持正常的精子功能是必需的，但當(dāng)ROS水平超過精漿抗氧化防御能力時，即ROS和抗氧化防御系統(tǒng)之間的穩(wěn)態(tài)平衡被破壞，就會導(dǎo)致過氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生[20]。研究顯示[3,13]，過高的ROS可以刺激IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNFα、IFN-γ等多種細(xì)胞因子的過度表達(dá)，從而造成精子活力和正常形態(tài)精子百分率下降。最近一項研究顯示[24]，精漿ROS的增加可以激活白細(xì)胞TLR4/NF-κB信號通路，進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥因子如TNF-α和IL-6的表達(dá)和釋放，導(dǎo)致生殖道局部炎癥反應(yīng)的發(fā)生。而促炎細(xì)胞因子水平的增加，又可促進(jìn)氧化應(yīng)激，最終形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)不斷加重[20]。這種ROS和細(xì)胞因子之間復(fù)雜的相互作用，進(jìn)一步通過介導(dǎo)精子凋亡而損傷精子DNA、降低精子活力和代謝能力、導(dǎo)致精子結(jié)構(gòu)完整性降低，最終顯著降低精子質(zhì)量[25]。另外，TNF-α在激發(fā)ROS產(chǎn)生的同時，可顯著降低精漿和精子SOD活性，減弱其清除氧自由基的能力，進(jìn)一步加重氧化應(yīng)激損傷效應(yīng)，導(dǎo)致精子活力下降[26]。

精索靜脈曲張（varicoele，VC）導(dǎo)致精子質(zhì)量下降亦與活性氧和細(xì)胞因子增加有關(guān)[27]。VC導(dǎo)致氧化損傷和細(xì)胞凋亡的同時，也會引起相關(guān)促炎細(xì)胞因子的增加，進(jìn)而對生殖細(xì)胞造成損害。已有研究顯示[16,28]，相比于正常生育男性，VC患者精漿中IL-1、IL-6、IL-8、IL-18、IL-37、IFN-γ和TNF-α均有不同程度的升高。但也有研究顯示[12]，VC患者的精漿IFN-γ、IL-6和TNF-α濃度是降低的，而抗炎細(xì)胞因子IL-10水平是增加的。這些不同結(jié)論的研究提示，不同細(xì)胞因子之間的相互調(diào)控可能影響VC與精子質(zhì)量之間的關(guān)系，但仍需大樣本、多中心研究的證實。

同樣，在肥胖、吸煙、飲酒、接觸輻射等的不育男性中，氧化應(yīng)激水平和促炎因子如TNF-α、IL-6等水平增加亦被報道[2,29]。這些研究均證實了ROS和細(xì)胞因子之間存在一定相互作用，但這些作用的具體機(jī)制以及如何選擇合適的靶點進(jìn)行干預(yù)，可能是未來研究需要關(guān)注的重點。

（二）細(xì)胞因子可促進(jìn)一氧化氮的增加

一氧化氮（NO）是一種活性氮，在男性生殖系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)中具有十分重要的作用，適量的NO可以調(diào)節(jié)睪丸精子的發(fā)生、提高精子活力并在受精過程中起一定作用。當(dāng)機(jī)體在某些病理情況下如感染性疾病時，炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的NO，NO對入侵的微生物及其周圍細(xì)胞和組織具有細(xì)胞毒性和抑制作用，同時，高濃度的N0可導(dǎo)致精子活力和存活率下降，影響精子膜完整性及精子獲能[30]。另有研究顯示[31]，生殖道感染的男性患者精液NO濃度與IL-17和IL-18濃度呈正相關(guān)，推測可能是在感染刺激下，IL-17和IL-18等炎癥因子濃度升高，促進(jìn)了誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的表達(dá)，從而產(chǎn)生大量NO。Lampiao等[32]也證實，生殖道炎癥時高濃度TNF-α和IL-6也可過度激活精子中iNOS的活性，使精液中NO含量顯著增加，進(jìn)而影響精子活力和存活率。

（三）細(xì)胞因子可介導(dǎo)線粒體損傷

線粒體可通過氧化磷酸化合成ATP，為精子運動提供能量。同時，線粒體能產(chǎn)生少量ROS，維持精子內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、頂體酶活性及染色質(zhì)完整性等，從而維持男性生育力[33]。感染、精索精脈曲張、環(huán)境污染、藥物、高溫、吸煙、肥胖、心理應(yīng)激等因素均可能引起精子線粒體功能障礙甚至凋亡，其中，除了升高的ROS通過誘導(dǎo)線粒體嵴的重構(gòu)和脂質(zhì)過氧化而促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放從而引起精子凋亡外[34]，細(xì)胞因子的作用亦不可少。研究顯示[35]，促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α等可能通過改變線粒體能量代謝、加重氧化應(yīng)激反應(yīng)和蛋白質(zhì)羥基化等機(jī)制導(dǎo)致線粒體功能障礙。另外，TNF-α可通過與其受體TNFR1結(jié)合形成三聚體樣調(diào)節(jié)蛋白，激活半胱氨酸蛋白酶8（Caspase-8），活化的Caspase-8可以裂解Bcl-2家族的Bid蛋白并形成一個活性片段，從而增加線粒體通透性并釋放細(xì)胞色素C，引起精子凋亡[34]。

（四）細(xì)胞因子可抑制睪酮生成

睪酮對精子發(fā)生和精子功能的維持必不可少。當(dāng)機(jī)體處于感染、精索靜脈曲張、高溫、肥胖等病理條件下時，除了男性生殖道局部細(xì)胞因子水平升高外，患者血清促炎細(xì)胞因子水平亦會增加。研究顯示[36]，男性高睪酮狀態(tài)下，常有血清抗炎因子IL-10的升高和促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β的降低。用TNF-α體外處理Leydig細(xì)胞1～2小時后，以及對成年小鼠給予TNF-α6小時后，培養(yǎng)液和小鼠血清睪酮水平均明顯降低[37]。進(jìn)一步研究顯示[37]，TNF-α可通過激活核因子kappa B（NF-kB），進(jìn)而抑制孤核受體的反式激活，抑制類固醇激素的合成，或者通過JNK/ERK的MAP激酶途徑激活核受體家族成員DAX-1發(fā)揮抑制類固醇激素合成的作用。睪酮缺乏與炎癥細(xì)胞因子水平升高有關(guān)，而補充睪酮可降低炎癥細(xì)胞因子水平，故循環(huán)細(xì)胞因子對男性生育的影響可能與抑制睪酮生成有關(guān)。

（五）細(xì)胞因子對睪丸免疫耐受的影響

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）介導(dǎo)對自身抗原的耐受性，維持免疫穩(wěn)態(tài)；抑制性細(xì)胞因子包括IL-10、IL-35和TGF-β在維持睪丸對自身抗原的耐受性，避免自身免疫性疾病發(fā)生中發(fā)揮重要作用。當(dāng)睪丸發(fā)生感染、創(chuàng)傷或炎癥時，一些促炎細(xì)胞因子如TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-23和Fas配體可破壞睪丸免疫抑制環(huán)境，活化自身反應(yīng)性T細(xì)胞，從而破壞睪丸免疫耐受機(jī)制，引起自身免疫性睪丸炎，導(dǎo)致精子活力降低和血-睪屏障通透性增加[38]。另外，VC患者抗精子抗體（ASA）的發(fā)生與睪丸組織促炎細(xì)胞因子如IL-1和TNF-α水平的異常增加有關(guān)，提示睪丸免疫微環(huán)境障礙可導(dǎo)致不可逆的睪丸損害[39]。

五、結(jié)語

細(xì)胞因子在生殖系統(tǒng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，且這種作用是相互的。各種細(xì)胞因子之間存在拮抗或協(xié)同作用，因而單看一種細(xì)胞因子并不能反映某一疾病的整體情況，多種細(xì)胞因子聯(lián)合檢測可以更好地反映疾病狀態(tài)。然而，目前精漿細(xì)胞因子的檢測方法仍有待改善，方法的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制有待建立。正常生育男性精漿中各細(xì)胞因子水平如何？以及不同細(xì)胞因子對男科疾病或特定精子異常的診斷價值如何？仍需在標(biāo)準(zhǔn)化檢測方法建立的基礎(chǔ)上進(jìn)行大樣本、多中心的臨床研究。細(xì)胞因子可以通過促進(jìn)ROS和一氧化氮的增加，而降低精子質(zhì)量，ROS的增加又可反過來促進(jìn)細(xì)胞因子的進(jìn)一步增加，而加重精子損傷；細(xì)胞因子亦可通過特定的作用機(jī)制介導(dǎo)精子線粒體損傷和抑制睪酮合成。另外，細(xì)胞因子在維持睪丸的免疫耐受中亦起作用。由此可知，細(xì)胞因子可以通過多個途徑影響精子質(zhì)量，但每一個細(xì)胞因子的特定作用及影響精子質(zhì)量的機(jī)制如何？以及不同細(xì)胞因子間如何相互作用的？這都有待未來進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞細(xì)胞因子； 精液； 精子質(zhì)量； 不育，男性

doi:10.3969/j.issn.1008-0848.2022.02.018

中圖分類號R321.1； R698.2