劉恒煉 夏敏

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是目前臨床上一種常見的婦科疾病，在育齡期女性中多發(fā)[1]。EMs的主要特征是慢性盆腔疼痛、痛經(jīng)和不孕，其病理改變的特點是在子宮之外的其他位置或盆腔內(nèi)出現(xiàn)了具有正常生理功能的子宮內(nèi)膜腺體及基質(zhì)[2]。EMs患者有 87.7%會出現(xiàn)痛經(jīng)癥狀，疼痛的機(jī)制可能與免疫炎性反應(yīng)、前列腺素升高、激素水平依賴等相關(guān)[3]。關(guān)于該病發(fā)病機(jī)制的研究至今尚未有定論，常見有以下幾種發(fā)病學(xué)說，即經(jīng)血逆流學(xué)說，體腔上皮細(xì)胞化生學(xué)說，靜脈及淋巴運送學(xué)說，炎癥及免疫學(xué)說，遺傳學(xué)說等[4-5]。近年研究發(fā)現(xiàn)[6]，EMs病變組織的形成過程包括反復(fù)受損、出血、炎癥反應(yīng)與機(jī)體抗炎修復(fù)等，與機(jī)體慢性炎癥的免疫反應(yīng)有密切關(guān)系。

隨著近年對人體自身免疫性的疾病及慢性的炎癥反應(yīng)性疾病研究的深入，研究人員發(fā)現(xiàn)了免疫細(xì)胞T細(xì)胞的多種亞群，其中Th17細(xì)胞這一亞群在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用[7-8]。本研究的目的是檢測在EMs痛經(jīng)患者血清中IL-17的表達(dá)水平，并探討其臨床價值。

資料與方法

1.資料：選擇2019年10月至2020年10月在重慶市中醫(yī)院婦科就診的子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)包括(1)經(jīng)腹腔鏡檢查或開腹手術(shù)探查及病理組織活檢確診為子宮內(nèi)膜異位癥的患者；(2)患者伴有痛經(jīng)癥狀；(3)近三月內(nèi)未使用藥物或其他治療的。排除標(biāo)準(zhǔn)包括(1)同時合并有多囊卵巢綜合征、子宮腺肌病、盆腔炎等其他婦科疾??；(2)患有慢性炎癥性的免疫疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性腸炎、銀屑病等；(3)患有代謝性疾病，如糖尿病、高血壓等；(4)患有惡性腫瘤等嚴(yán)重疾病。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，共納入52例患者作為觀察組，另選取同期52名體檢正常的健康女性作為對照組。

2.方法：記錄兩組患者年齡、身高和體重等基本資料信息；對觀察組52名患者進(jìn)行r-AFS分期，Ⅰ期為微小型，7名；Ⅱ期為輕型，15名；Ⅲ期為中型，18名；Ⅳ期為重型，12名。對觀察組52名患者的痛經(jīng)程度進(jìn)行VAS評分，無痛為0分，輕度疼痛為1～3分，中度疼痛為4～6分，7～10分為重度疼痛，其中輕度(<4分)18名，中重度(≥4分)34名。

取兩組人員5～10 mL外周靜脈血，采用ELISA法檢測血清中IL-17、IFN-γ和IL-6水平。具體方法為(1)稀釋血清并配置所需標(biāo)準(zhǔn)液；(2)加樣，每孔分別加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)液或待測血清，37℃水浴箱中孵育40 min；(3)用洗滌液進(jìn)行洗板；(4)每孔分別加入50 μL蒸餾水或一抗，37℃水浴箱中孵育20 min；(5)用洗滌液進(jìn)行洗板；(6)每孔各加入100 μL酶標(biāo)抗體，37℃水浴箱中孵育10 min；(7)用洗滌液進(jìn)行洗板；(8)每孔各加入100 μL底物工作液，37℃水浴箱中孵育15 min；(9)每孔加入100 μL終止液；使用酶標(biāo)儀進(jìn)行OD值檢測(在450 nm處檢測光密度)。

3.統(tǒng)計學(xué)處理：使用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，結(jié)果采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對于計量資料使用獨立樣本t檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.兩組基本資料比較:兩組年齡、身高及體重方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性，見表1。

表1 兩組基本資料比較

2.兩組血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較：觀察組血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 兩組血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較(pg/mL)

3.不同r-AFS分期患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較：觀察組按照r-AFS分期，Ⅰ-Ⅳ期，血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平逐漸升高；Ⅳ期血清中IL-17水平顯著高于Ⅰ期(P=0.046),IL-6水平與Ⅰ期相比無差異(P=0.164)，IFN-γ水平顯著高于Ⅰ期(P=0.002)，見表3。

表3 觀察組不同r-AFS分期患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較(pg/mL)

4.不同VAS評分患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較：觀察組根據(jù)VAS評分，中重度疼痛患者血清中IL-17水平顯著高于輕度疼痛患者(P=0.045)、IFN-γ水平顯著高于輕度疼痛患者(P=0.001)、IL-6水平與輕度患者相比無差異(P=0.176)，見表4。

表4 觀察組不同VAS評分患者血清中IL-17、IL-6及IFN-γ水平比較(pg/mL)

討論

近年研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體內(nèi)慢性炎癥的免疫反應(yīng)是經(jīng)血逆流發(fā)生的病理基礎(chǔ)，EMs的形成與機(jī)體慢性炎癥的免疫反應(yīng)有密切關(guān)系[9-11]。T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫機(jī)制介導(dǎo)了多種炎癥途徑。Th17細(xì)胞[12]對機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生有強(qiáng)烈的促進(jìn)作用，其能夠分泌多種細(xì)胞炎癥因子，最主要的是IL-17。IL-17與相關(guān)受體結(jié)合之后能促進(jìn)IFN-γ、IL-6及趨化因子的表達(dá)，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，對免疫應(yīng)答反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。此外，IL-17還能夠促進(jìn)前列腺素E2和IL-6的分泌，引起其他炎癥因子(如IFN-γ和IL-β等)表達(dá)增多，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。在人體免疫反應(yīng)中，當(dāng)Th17/IL-17這一免疫通路被激活，則內(nèi)皮細(xì)胞及其他多種免疫細(xì)胞會在其促進(jìn)下分泌多種細(xì)胞因子[13-14]，如G-CSF、IL-8、ICAM-1和IL-6等，其他T細(xì)胞的亞群也被激活，TNF-a及IL-6等細(xì)胞因子的分泌會進(jìn)一步增多。同時，IL-23、IL-6及IFN-β等會反饋性地增強(qiáng)Th17細(xì)胞的成熟分化，則IL-17的分泌量也增多[15]。孫文杰等[16]通過回顧性研究發(fā)現(xiàn)CRP、IL-6、IL-17和NLR參與了EMs的發(fā)生和發(fā)展，IL-6分別與IL-17和CRP成正相關(guān)。因此，認(rèn)為CRP、IL-6、IL-17三個指標(biāo)聯(lián)合檢測可提高EMs診斷的靈敏度和特異性。本研究發(fā)現(xiàn)，EMs痛經(jīng)患者血清中IL-17及另外兩種細(xì)胞因子IL-6、IFN-γ的表達(dá)水平明顯高于正常對照組；按照r-AFS分期，EMs癥狀越重的患者，其血清中IL-17等細(xì)胞因子的表達(dá)水平越高；根據(jù)疼痛VAS評分，EMs痛經(jīng)患者中，疼痛程度越重的患者血清中IL-17等細(xì)胞因子的表達(dá)水平也越高。本研究顯示，在子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)患者血清中IL-17水平明顯升高，證實IL-17參與的炎癥免疫反應(yīng)與子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的發(fā)生有密切關(guān)系，可以通過對IL-17的測定來對EMs痛經(jīng)患者進(jìn)行病情嚴(yán)重程度的評估，并為臨床采用調(diào)節(jié)炎癥免疫反應(yīng)的方式治療EMs痛經(jīng)提供了理論支持，在臨床上具有預(yù)測和療效判定的意義。與其他研究需要的多個指標(biāo)聯(lián)合檢測進(jìn)行診斷[16]相對節(jié)約了成本，提高了診斷率，可操作性得到提高。但其具體的調(diào)節(jié)治療方法尚有待進(jìn)一步研究。