王溪 黃桔秀 王穎 朱海勇 陳燕

1.臺(tái)州市中心醫(yī)院（臺(tái)州學(xué)院附屬醫(yī)院）全科醫(yī)學(xué)科，浙江臺(tái)州 318000；2.臺(tái)州市中心醫(yī)院（臺(tái)州學(xué)院附屬醫(yī)院）急診科，浙江臺(tái)州 318000；3.臨海市第一人民醫(yī)院ICU，浙江臺(tái)州 317000；4.浙江省臺(tái)州醫(yī)院特需病房，浙江臺(tái)州 317000

膿毒癥是一種全身炎癥反應(yīng)綜合征，是嚴(yán)重感染、外科手術(shù)后常見(jiàn)的并發(fā)癥，主要臨床癥狀有呼吸急促、心率加快等，具有患病率高、死亡率高的特點(diǎn)。據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，細(xì)菌、病毒、真菌等病原體感染為其主要危險(xiǎn)因素。降鈣素原（procalcitonin，PCT）是甲狀腺C 細(xì)胞產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，D-乳酸（D-Lactate，D-LA）是腸道細(xì)菌發(fā)酵的產(chǎn)物；內(nèi)毒素（endotoxin，ET）是菌體毒性物質(zhì)的總稱(chēng)，位于細(xì)胞壁最外層。本文研究中對(duì)PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素表達(dá)檢測(cè)，旨在探究PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素在膿毒癥中的表達(dá)以及三者在該病中與腸道細(xì)菌紊亂關(guān)系的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月～2021 年1 月臺(tái)州市中心醫(yī)院收治的膿毒癥患者56 例設(shè)為膿毒癥組，其中輕度膿毒癥患者32 例，重度膿毒癥患者24 例，另選取同期體檢的健康志愿者30 名設(shè)為健康組做對(duì)照。膿毒癥組男29 例，女27 例，平均年齡（45.5±15.6）歲，平均體質(zhì)量指數(shù)（23.1±2.4）kg/m；健康組男17 例，女13 例，平均年齡（47.5±16.4）歲，平均體質(zhì)量指數(shù)（24.5±2.8）kg/m。兩組研究對(duì)象年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)臺(tái)州市中心醫(yī)院批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《2012 國(guó)際嚴(yán)重膿毒癥及膿毒性休克診療指南》 中的關(guān)于膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，確診為膿毒癥腸道細(xì)菌紊亂患者；②所有患者臨床資料齊全，且自愿參與本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期女性；②患有自身免疫類(lèi)疾病者；③患有過(guò)敏性疾病者；④患有動(dòng)脈粥樣硬化者。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 糞便常規(guī)檢查檢測(cè)研究對(duì)象腸道菌群情況采集所有研究對(duì)象1 g 糞便，置于厭氧試管中，加入磷酸緩沖鹽溶液，震蕩均勻，2000 r/min 離心15 min，收集上清液，將該混合液稀釋度標(biāo)記為10-1；厭氧試管中加入150 μl，添加0.9%氯化鈉注射液100 μl，混合均勻，將此標(biāo)本稀釋度標(biāo)記為10-2，繼續(xù)稀釋至10-8。將瓊脂培養(yǎng)基置于沸水中直至溶化，放置于48℃恒溫水中待用，將60 μl 細(xì)菌混懸液于加入平皿上，傾注瓊脂培養(yǎng)基混合混勻，恒溫培養(yǎng)48 h。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平采集所有研究對(duì)象靜脈血5 ml，1000 r/min 離心5 min，-50℃?zhèn)溆?。將待測(cè)血清加入加稀釋液將進(jìn)行稀釋?zhuān)笜?biāo)板置于桌面，每孔加入100 μl，膠紙封住反應(yīng)孔，將其充分混合均勻，37℃靜置50 min，棄反應(yīng)液，每孔注滿(mǎn)洗滌液，浸泡2 min，甩干，洗滌3 次，每孔加入生物素化抗體40 μl，膠紙封住反應(yīng)孔，恒溫孵育40 min，每孔注滿(mǎn)洗滌液，浸泡2 min，甩干洗滌3次，每孔加入加酶標(biāo)抗體40 μl，膠紙封住反應(yīng)孔，恒溫靜置30 min，每孔加入顯色劑40 μl，避光顯色15 min，每孔加入終止液40 μl，待其混合均勻，在全自動(dòng)酶標(biāo)儀450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組腸道菌群失調(diào)比較

與健康組比較，膿毒癥組患者腸道菌群失調(diào)率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者腸道菌群失調(diào)率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組腸道菌群失調(diào)程度比較[n（%）]

2.2 兩組血清PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平比較

與健康組比較，膿毒癥組患者PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組血清PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平比較（）

2.3 膿毒癥組不同程度膿毒癥患者血清PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平比較

與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 膿毒癥組不同程度膿毒癥患者血清PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素水平比較（）

2.4 膿毒癥組患者APACHEⅡ、MAGE 比較

與輕度膿毒癥患者比較，重度膿毒癥患者APACHEⅡ評(píng)分較高，MAGE 水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 膿毒癥組患者APACHEⅡ、MAGE 比較（）

2.5 Logistic 回歸分析膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂與PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素相關(guān)性

膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂作為因變量，PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素為自變量進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素為膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂的發(fā)生因素，與膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂的發(fā)生相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 Logistic 回歸分析膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂與PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素相關(guān)性

2.6 PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素相關(guān)性分析

使用Pearson 對(duì)PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PCT、D-乳酸呈正相關(guān)（r=0.781，P=0.001）；PCT、內(nèi)毒素呈正相關(guān)（r=0.696，P=0.001）；D-乳酸、內(nèi)毒素呈正相關(guān)（r=0.670，P=0.001）。

3 討論

膿毒癥是由病原微生物侵入人體任何部位后感染而引起，是臨床常見(jiàn)的疾病之一。據(jù)國(guó)外流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，膿毒癥的病死率已超過(guò)心肌梗死成為非心臟病死亡主要原因。膿毒癥發(fā)病機(jī)制多樣，可能與立克次體、螺旋體等病原細(xì)菌感染相關(guān)，主要表現(xiàn)為心率加快、白細(xì)胞增加等。近年來(lái)，我國(guó)膿毒癥患病率及病死率逐年上升，已成為研究熱點(diǎn)。

本文研究顯示，膿毒癥患者血清中PCT 水平較高。PCT 是一種單拷貝基因，位于11 號(hào)染色體上，可反應(yīng)出全身炎癥反應(yīng)的活躍度。相關(guān)學(xué)者調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者存在腸道細(xì)菌紊亂情況，可能與患者免疫應(yīng)答紊亂相關(guān)。另?yè)?jù)廖宴等研究顯示，膿毒癥患者的嚴(yán)重程度和預(yù)后可由PCT、CRP 水平及血小板相關(guān)參數(shù)評(píng)估。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCT 在膿毒癥患者血清中水平較高，且隨著病情的加重水平隨之上升，重度膿毒癥患者血清中PCT 水平較高，PCT 水平變化與膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂具有相關(guān)性，可作為膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂的檢測(cè)指標(biāo)，D-乳酸又稱(chēng)D-2-羥基丙酸，是一種化工中間體。有關(guān)研究顯示，急性胃腸損傷分級(jí)、D-乳酸、內(nèi)毒素均是膿毒癥患者的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，三者聯(lián)合可較準(zhǔn)確預(yù)測(cè)膿毒癥患者的預(yù)后。

本文研究顯示，膿毒癥患者血清中內(nèi)毒素水平較高。內(nèi)毒素是革蘭陰性桿菌的細(xì)胞壁的成分之一，覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上，耐熱性較強(qiáng)，可引起機(jī)體微循環(huán)障礙等。相關(guān)調(diào)查結(jié)果顯示，降鈣素原、血乳酸、內(nèi)毒素水平隨著病情的加重水平隨之上升，可作為評(píng)估重癥肺炎合并膿毒癥病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著膿毒癥患者病情的加重患者血清中內(nèi)毒素水平隨之升高，內(nèi)毒素水平在重度膿毒癥患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)，且其水平變化和膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂呈現(xiàn)出相關(guān)性，可用于膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂的診斷。

圖1 PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素相關(guān)性分析圖

綜上所述，本文中對(duì)膿毒癥患者腸道細(xì)菌紊亂與PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素的關(guān)系研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素在膿毒癥腸道細(xì)菌紊亂患者血清中水平異常上升，且隨著病癥的不斷加重，PCT、D-乳酸、內(nèi)毒素的水平隨之升高，有望成為診斷膿毒癥腸道細(xì)菌紊亂患者病情嚴(yán)重程度的臨床指標(biāo)。