張鈺，周澧，張玲，孫秀萍，李祥磊，秦川*

(1. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心，北京 100021；2. 國(guó)家人類疾病動(dòng)物模型資源庫(kù)，北京 100021；3. 國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021；4. 北京市人類重大疾病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型工程技術(shù)研究中心，北京 100021)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦內(nèi)微透析技術(shù)是神經(jīng)系統(tǒng)研究中的一種經(jīng)典的微量化學(xué)采樣與檢測(cè)技術(shù)，用于在體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物特定腦區(qū)的化學(xué)成分分泌情況。 實(shí)驗(yàn)原理是局部微透析半透膜探針采樣。 首先通過腦內(nèi)立體定位手術(shù)向嚙齒類動(dòng)物(大鼠、小鼠)或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的目標(biāo)腦區(qū)植入微透析探針，探針含有半透膜以及流入、流出兩個(gè)方向的管路。 手術(shù)恢復(fù)后，進(jìn)行在體的微透析記錄采樣。 記錄過程中緩慢向探針流入管路泵入人工腦脊液，于探針的半透膜處進(jìn)行物質(zhì)交換(即“微透析”)，目的腦區(qū)特定的化學(xué)成分可以跨越半透膜。 按一定的時(shí)間間隔收集流出端樣品，記錄結(jié)束后再對(duì)樣品進(jìn)行化學(xué)成分的測(cè)定和分析，可以檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)分泌的實(shí)時(shí)變化[1]。 該實(shí)驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)是動(dòng)物無須麻醉，在一定空間范圍內(nèi)進(jìn)行清醒、自由活動(dòng)，可以很好的反應(yīng)動(dòng)物在清醒、自由活動(dòng)的情況下目標(biāo)腦區(qū)的化學(xué)物質(zhì)、神經(jīng)遞質(zhì)分泌情況，同時(shí)也可實(shí)時(shí)結(jié)合動(dòng)物的認(rèn)知或行為任務(wù)，觀測(cè)化學(xué)物質(zhì)合成和分泌規(guī)律，是研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦內(nèi)化學(xué)物質(zhì)分泌的關(guān)鍵技術(shù)方法[2]。

嚙齒動(dòng)物保持微透析收集階段清醒活動(dòng)，不受到外界環(huán)境應(yīng)激和刺激，是穩(wěn)定記錄的重要基礎(chǔ)。為實(shí)現(xiàn)嚙齒動(dòng)物微透析的清醒記錄，本研究自行設(shè)計(jì)制作一種嚙齒動(dòng)物可用的腦內(nèi)微透析清醒活動(dòng)裝置，結(jié)合現(xiàn)有商品化的裝置并改進(jìn)其多種不足[3]。 發(fā)明目的是供嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(大鼠、小鼠)在此裝置內(nèi)進(jìn)行清醒、自由活動(dòng)的同時(shí)，頭部的腦內(nèi)微透析液體管路不纏繞打結(jié)，穩(wěn)定收集腦內(nèi)微透析的流出液樣品。

為了驗(yàn)證該裝置的有效性、科學(xué)性和穩(wěn)定性，進(jìn)行了小鼠黑質(zhì)-紋狀體的多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)微透析記錄實(shí)驗(yàn)。 向小鼠的黑質(zhì)、紋狀體分別手術(shù)植入微透析探針，通過微透析的清醒活動(dòng)記錄收集樣品，進(jìn)行多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)(DA)和代謝產(chǎn)物二羥基苯乙酸(DOPAC)的分析測(cè)定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自行設(shè)計(jì)制作的微透析清醒活動(dòng)裝置可以實(shí)現(xiàn)小鼠的自由活動(dòng)、線路不纏繞打結(jié)，多巴胺和DOPAC 的采樣穩(wěn)定，可以獲得理想實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 設(shè)計(jì)成功后，申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專利和實(shí)用新型專利兩項(xiàng)，并順利獲批授權(quán)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

9 只8 周齡 SPF 級(jí)雄性 C57BL/6 小鼠，體重20～25 g，購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司【SCXK(京)-2020-0004】，飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心南緯路嚙齒動(dòng)物行為學(xué)設(shè)施【SYXK(京)-2018-0019】。 動(dòng)物設(shè)施內(nèi)溫度 24 ～ 26℃，光照 12 h 明亮:12 h 黑暗，小鼠自由飲水飲食。 本實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的使用已經(jīng)過中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)(IACUC)批準(zhǔn)(ILASQC-2017-002)。 實(shí)驗(yàn)中所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作過程嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R 原則和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

1.1.2 主要儀器

(1)微透析清醒活動(dòng)裝置的制作:雙通道不銹鋼轉(zhuǎn)環(huán)(INSTECH，美國(guó))，液體管路、樣品收集管(CMA，瑞典)，鐵架臺(tái)，1 mL 塑料吸頭，小鼠飲水瓶，塑料桶，鐵絲，紙膠帶，塑料板等。

(2)小鼠微透析探針埋置手術(shù):嚙齒動(dòng)物腦立體定位儀(深圳市瑞沃德生命科技有限公司，中國(guó))，嚙齒動(dòng)物呼吸麻醉機(jī)(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)，微透析探針(CMA，瑞典，其中紋狀體探針半透膜長(zhǎng)度2 mm、黑質(zhì)探針長(zhǎng)度1 mm)，異氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)，生理鹽水、醫(yī)用酒精、牙科水泥、醫(yī)用棉簽、手術(shù)器械等。

(3)小鼠的微透析清醒記錄:四通道微量注射泵，微透析液體管路(CMA，瑞典)，自制記錄裝置，嚙齒動(dòng)物腰部塑料固定扎環(huán)，50 μL EP 管，高氯酸，氯化鈉，氯化鉀，氯化鈣，氯化鎂，稀鹽酸等。

1.2 方法

1.2.1 微透析清醒活動(dòng)裝置制作

參考相關(guān)文獻(xiàn)和國(guó)外產(chǎn)品，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和可操作性，自行設(shè)計(jì)制作微透析的嚙齒動(dòng)物清醒活動(dòng)裝置[4-5]。 取適量長(zhǎng)度鐵絲按示意圖結(jié)構(gòu)彎折，將塑料片打孔連接鐵絲，插入1 mL 塑料吸頭并固定，用于記錄過程中放入樣品收集管。 將雙通道轉(zhuǎn)環(huán)、鐵絲、塑料片和紙膠帶按裝置示意圖連接固定，最下端鐵絲為彎鉤形，用于記錄過程中與小鼠塑料圈勾住固定。 鐵架臺(tái)通過直角夾固定橫桿，將裝置的雙通道轉(zhuǎn)環(huán)用直角夾固定在橫桿上。 塑料桶側(cè)壁打孔，將小鼠飲水瓶的瓶口插入固定，放置于鐵架臺(tái)底座上(圖1)。

1.2.2 動(dòng)物分組和微透析探針手術(shù)埋置

C57BL/6 小鼠9 只，分別在右側(cè)黑質(zhì)、右側(cè)紋狀體腦區(qū)進(jìn)行手術(shù)埋置微透析探針。 小鼠使用異氟烷吸入麻醉，固定于小鼠腦立體定位儀上，眼睛涂抹眼藥膏，頂部頭皮備皮，碘伏消毒，頭頂正中切口，鈍性分離組織，暴露顱骨和前囟，黑質(zhì)坐標(biāo)(AP= - 3.2 mm； ML = 1.25 mm； DV = 4.6 mm)，紋狀體坐標(biāo)(AP = 1.0； ML = 1.5； DV = 3.2)，顱骨表面打孔，按目標(biāo)腦區(qū)坐標(biāo)顱骨開窗，旋入顱骨螺絲固定。 緩慢垂直植入微透析探針，用牙科水泥固定。 手術(shù)過程中注意無菌操作規(guī)范，手術(shù)結(jié)束后，小鼠腹腔注射非甾體抗炎藥美洛昔康(2 mg/kg)。術(shù)后恢復(fù)7 d，可進(jìn)行記錄實(shí)驗(yàn)。

注:A:裝置實(shí)物圖；B:裝置整體示意圖；C:裝置局部示意圖，12:鐵架臺(tái)垂直桿，13:鐵架臺(tái)水平桿，28:手工切割的塑料片結(jié)構(gòu)，用于打孔放置兩個(gè)1 mL 塑料吸頭(29)，記錄過程中放置EP 管收集管，34:動(dòng)物飲水瓶。

1.2.3 小鼠微透析清醒記錄

將腦內(nèi)已植入微透析探針的小鼠置于裝置內(nèi)，連接管路，打開微透析泵，以2 μL/min 流速緩慢泵入人工腦脊液(表1)，平衡4.5 h，動(dòng)物在此期間在裝置內(nèi)自由活動(dòng)。 開始正式收集后，先收集30 min空白樣品，隨后每20 min 更換1 次收集管，共記錄200 min，收集樣品10 管。 記錄結(jié)束后將樣品送樣上機(jī)，檢測(cè)其中的神經(jīng)遞質(zhì)DA 和DOPAC 濃度。 本次實(shí)驗(yàn)樣品委托法國(guó)波爾多大學(xué)Erwan Bezard 教授實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行化學(xué)成分檢測(cè)[6]。

表1 微透析用人工腦脊液配方Table 1 Artificial cerebrospinal fluid for microdialysis

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 嚙齒動(dòng)物腦內(nèi)微透析清醒記錄裝置的埋置和記錄

本實(shí)驗(yàn)使用自主設(shè)計(jì)制作的嚙齒動(dòng)物腦內(nèi)微透析清醒記錄裝置，可實(shí)現(xiàn)嚙齒類動(dòng)物小鼠或大鼠兩個(gè)腦區(qū)的同時(shí)記錄。 首先檢測(cè)使用的有效性、科學(xué)性、穩(wěn)定性。 通過立體定位手術(shù)向小鼠紋狀體和黑質(zhì)分別植入微透析探針。 動(dòng)物術(shù)后恢復(fù)7 d 后可在記錄收集階段進(jìn)行小鼠黑質(zhì)和紋狀體的神經(jīng)遞質(zhì)微透析采樣，可以實(shí)現(xiàn)兩個(gè)腦區(qū)同時(shí)的記錄收集(見圖2)。

圖2 微透析記錄清醒活動(dòng)裝置用法示意圖Figure 2 Schematic diagram of usage of the rodent awake activity device for brain microdialysis recording

嚙齒動(dòng)物腦內(nèi)微透析記錄實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物無須麻醉，腰部用塑料環(huán)固定，將動(dòng)物腰部固定環(huán)與裝置下方掛鉤相連，頭部埋置的微透析探針管路末梢與裝置的液體管路相連，動(dòng)物置于塑料桶內(nèi)。 連接注射泵、微量進(jìn)樣針、液體管路、轉(zhuǎn)環(huán)。 在裝置上的2個(gè)1 mL 塑料吸頭中放入樣品收集管，將液體管路的末端插入，并用紙膠帶稍加固定，分別收集小鼠紋狀體、黑質(zhì)的樣品。 記錄過程中，小鼠在塑料桶內(nèi)進(jìn)行清醒活動(dòng)，自由飲水、飲食，液體管路可隨動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)，不易拆繞打結(jié)。 每20 min 更換1 次樣品收集管，取得小鼠腦內(nèi)黑質(zhì)或紋狀體的微透析樣品。 整個(gè)記錄過程中動(dòng)物自由運(yùn)動(dòng)狀態(tài)良好，裝置使用穩(wěn)定，取樣收集便利。

2.2 腦內(nèi)在體微透析測(cè)定小鼠紋狀體、黑質(zhì)的多巴胺遞質(zhì)

以嚙齒動(dòng)物的多巴胺能神經(jīng)通路研究為例，定量驗(yàn)證此裝置的采樣能力。 多巴胺(dopamine，DA)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)含量最豐富的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，在中腦-皮層通路(mesocortical system)、中腦邊緣通路(mesolimbic system)、黑質(zhì)-紋狀體通路(nigro-striatal system) 和結(jié)節(jié)- 漏斗通路(tuberoinfun-dibular system) 發(fā)揮重要的生理功能[7]，其功能異常與成癮、帕金森病、精神分裂癥等神經(jīng)系統(tǒng)疾病息息相關(guān)[8-13]。 瑞典科學(xué)家阿爾維德·卡爾松(Arvid Carlsson)和美國(guó)科學(xué)家保羅·格林加德(Paul Greengard)有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的研究獲得2000 年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)( https:/ /www. nobelprize. org/prizes/medicine/2000/press-release/)[14]。 多巴胺在神經(jīng)元內(nèi)主要通過單胺氧化酶(MAO)的作用轉(zhuǎn)化為二羥基苯乙酸(DOPAC)[15]。 在鼠腦中，多巴胺代謝的最終產(chǎn)物是 DOPAC，而在人或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中，DOPAC 受到細(xì)胞外兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)的作用還可轉(zhuǎn)化為高香草酸(HVA)(圖3)。 實(shí)驗(yàn)研究大多通過嚙齒動(dòng)物多巴胺能神經(jīng)突觸末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)DA 和DOPAC 的化學(xué)含量研究腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)通路功能。 本研究對(duì)小鼠黑質(zhì)和紋狀體分別手術(shù)植入腦內(nèi)微透析探針，進(jìn)行自由活動(dòng)狀態(tài)下的在體微透析收集。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行大腦取材和定位驗(yàn)證，紋狀體和黑質(zhì)的微透析探針末梢定位準(zhǔn)確，均位于目標(biāo)腦區(qū)(圖4)。

圖3 神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺代謝示意圖Figure 3 Schematic diagram of dopamine metabolism in the nervous system

圖4 小鼠腦內(nèi)微透析探針埋置位點(diǎn)Figure 4 Sites of microdialysis probe implantation in mice brain

記錄完成后，對(duì)收集的樣品送樣，檢測(cè)其中神經(jīng)遞質(zhì)DA 和DOPAC 的化學(xué)含量。 對(duì)于小鼠的黑質(zhì)-紋狀體神經(jīng)通路，神經(jīng)元胞體位于黑質(zhì)，在胞體內(nèi)實(shí)現(xiàn)神經(jīng)遞質(zhì)的合成和傳導(dǎo)，神經(jīng)細(xì)胞發(fā)出軸突投射到紋狀體部位，與其他神經(jīng)元形成大量突觸，通過突觸前膜釋放大量神經(jīng)遞質(zhì)成分，通過突觸間隙作用于下游神經(jīng)元。

經(jīng)測(cè)定，DA 在小鼠黑質(zhì)的含量在記錄期間隨時(shí)間變化基本穩(wěn)定，絕對(duì)濃度為(0.11 ± 0.01)nmol/L。 各時(shí)段之間無明顯差異，其中最高為(0.15 ± 0.04) nmol/L，最低為(0.10 ± 0.00)nmol/L。 DA 在小鼠紋狀體的含量在記錄期間隨時(shí)間變化基本穩(wěn)定，絕對(duì)濃度為(0.22 ± 0.05)nmol/L。 各時(shí)段之間無明顯差異，其中最高為(0.32 ± 0.11) nmol/L，最低為(0.22 ± 0.04)nmol/L(圖5)。

圖5 微透析記錄清醒活動(dòng)裝置測(cè)定小鼠黑質(zhì)、紋狀體多巴胺濃度Figure 5 Neurotransmitter dopamine levels in the substantia nigra and striatum of mice measured by the rodent awake activity device for brain microdialysis recording

DOPAC 在小鼠黑質(zhì)的含量在記錄期間隨時(shí)間變化基本穩(wěn)定，絕對(duì)濃度為(3.38 ± 0.59)mol/L。各時(shí)段之間無明顯差異，其中最高為(3.80 ± 0.73)nmol/L，最低為(2.41 ± 0.54)nmol/L。 DOPAC 在小鼠紋狀體的含量為在記錄期間隨時(shí)間變化基本穩(wěn)定，絕對(duì)濃度為(20.35 ± 6.87)nmol/L。 各時(shí)段之間無明顯差異，其中最高為(23.86 ± 7.14)nmol/L，最低為(19.33 ± 6.29)nmol/L(圖 6)。

圖6 微透析記錄清醒活動(dòng)裝置測(cè)定小鼠黑質(zhì)、紋狀體DOPAC 濃度Figure 6 Neurotransmitter DOPAC levels in the substantia nigra and striatum of mice measured by the rodent awake activity device for brain microdialysis recording

3 討論

神經(jīng)遞質(zhì)是神經(jīng)系統(tǒng)重要的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，通過旁分泌的形式在神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞之間實(shí)現(xiàn)調(diào)控作用。 神經(jīng)遞質(zhì)的合成、分泌、攝取和重吸收是神經(jīng)系統(tǒng)的重要生理功能，在疾病狀態(tài)下，神經(jīng)遞質(zhì)的含量、分泌及重吸收障礙是病理學(xué)和病理生理學(xué)改變的化學(xué)基礎(chǔ)。 神經(jīng)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)研究中，模型動(dòng)物的腦內(nèi)化學(xué)物質(zhì)分泌、濃度和受體的變化是疾病機(jī)制研究的幾個(gè)重要層次[16]。 實(shí)現(xiàn)腦內(nèi)化學(xué)遞質(zhì)穩(wěn)定、可靠的記錄是本裝置的制作目標(biāo)。

3.1 裝置的設(shè)計(jì)和使用

國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有部分在售的腦內(nèi)微透析清醒活動(dòng)裝置，最常見的是國(guó)外產(chǎn)品，基本由動(dòng)物活動(dòng)箱(含動(dòng)物水瓶)和微透析轉(zhuǎn)環(huán)裝置兩部分組成。 動(dòng)物活動(dòng)箱大多為立方體的活動(dòng)空間，在裝置的外側(cè)固定有動(dòng)物水瓶。 微透析轉(zhuǎn)環(huán)裝置從側(cè)方固定在動(dòng)物活動(dòng)箱的一個(gè)側(cè)壁上緣，使二者一體化。 以上產(chǎn)品有兩點(diǎn)不足。 第一，動(dòng)物活動(dòng)箱通常為方形，對(duì)動(dòng)物的自由活動(dòng)有所限制，活動(dòng)箱的邊緣和角落不易清洗，容易藏匿污漬、動(dòng)物尿液等，殘留的個(gè)體氣味會(huì)對(duì)隨后動(dòng)物的檢測(cè)產(chǎn)生干擾。 動(dòng)物在不同位置(如長(zhǎng)邊或角落)會(huì)出現(xiàn)生理性的位置偏好，嚙齒類動(dòng)物具有筑巢、避光的習(xí)性，在方形空間中更偏愛在角落中運(yùn)動(dòng)，因此對(duì)動(dòng)物的自由活動(dòng)有一定影響。 第二，微透析轉(zhuǎn)環(huán)裝置(金屬棒和轉(zhuǎn)環(huán)線纜裝置)以側(cè)方的上邊緣處卡扣的形式固定在活動(dòng)箱的一側(cè)，雖然裝置已經(jīng)盡量輕便，但該裝置的重心在一側(cè)，容易造成整體放置不穩(wěn)定，而且微透析轉(zhuǎn)環(huán)裝置結(jié)構(gòu)比較細(xì)，受力較易折斷，易損耗報(bào)廢。 進(jìn)口產(chǎn)品在購(gòu)買和使用過程中存在諸多不便，如進(jìn)度緩慢、價(jià)格較高、維修困難、技術(shù)支持難等，本文裝置設(shè)計(jì)通過自主設(shè)計(jì)改進(jìn)并制作，力求更好實(shí)現(xiàn)嚙齒類動(dòng)物清醒狀態(tài)下的腦內(nèi)微透析記錄。

本裝置的適用范圍是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，常用的如大鼠、小鼠，根據(jù)研究需要也可進(jìn)行金黃地鼠、豚鼠等動(dòng)物的腦內(nèi)微透析采樣，動(dòng)物的自由活動(dòng)可通過更換相應(yīng)尺寸的活動(dòng)圓筒實(shí)現(xiàn)。 在本文的研究中，我們實(shí)驗(yàn)了清醒、自由活動(dòng)小鼠的黑質(zhì)和紋狀體微透析采樣分析，小鼠在裝置內(nèi)清醒、自由活動(dòng)，可順利采樣記錄，裝置圓筒的直徑為:底座17 cm，上緣20 cm。 如使用大鼠開展實(shí)驗(yàn)，為實(shí)現(xiàn)動(dòng)物的清醒、自由活動(dòng)，可將裝置的圓筒更換為較大尺寸，并在鐵架臺(tái)上固定；同時(shí)在預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中觀察采樣管路長(zhǎng)度是否合適，并進(jìn)行微調(diào)，保證大鼠的自由活動(dòng)和穩(wěn)定記錄。 本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的大鼠活動(dòng)裝置的圓筒直徑為30 cm 或45 cm。

3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的化學(xué)物質(zhì)采樣和分析應(yīng)用范圍

在體微透析實(shí)驗(yàn)可用于多種化學(xué)成分的檢測(cè)，除本文的多巴胺和DOPAC 神經(jīng)遞質(zhì)之外，該技術(shù)還可檢測(cè)GABA、谷氨酸、乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)，乳酸、尿酸、丙酮酸、組胺、褪黑素、P 物質(zhì)、緩激肽等代謝產(chǎn)物。 該技術(shù)適用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，除嚙齒動(dòng)物大鼠、小鼠以外，還可用于豚鼠、金黃地鼠、兔、狗、貓、豬、羊、非人靈長(zhǎng)類等動(dòng)物。 檢測(cè)的組織或器官包括腦、脊髓、血液、心臟、肝、腎、脂肪組織和腎上腺等[17-18]。 不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、不同組織的檢測(cè)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選用相應(yīng)的采樣模式，可進(jìn)行清醒或麻醉記錄，利用不同規(guī)格、不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡难b置展開研究。

3.3 神經(jīng)化學(xué)分析新技術(shù)和展望

腦內(nèi)微透析實(shí)驗(yàn)屬于神經(jīng)化學(xué)檢測(cè)方法，通過在體采樣、化學(xué)成分分析獲得化學(xué)物質(zhì)的濃度數(shù)據(jù)。 在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮功能的生理過程中，神經(jīng)遞質(zhì)常表現(xiàn)為低濃度的實(shí)時(shí)變化，因此對(duì)技術(shù)也提出更高的挑戰(zhàn)，如要求采樣過程的穩(wěn)定性、化學(xué)成分檢測(cè)的特異性和靈敏度、更高的時(shí)間和空間分辨率等。 本裝置可為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在體神經(jīng)化學(xué)檢測(cè)提供穩(wěn)定的采樣活動(dòng)裝置。 近年來發(fā)展的一系列神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)方法，如熒光探針、電化學(xué)檢測(cè)等，具有較好的特異性、靈敏度及時(shí)空分辨率，借助微電子、計(jì)算機(jī)技術(shù)的飛速發(fā)展也實(shí)現(xiàn)了神經(jīng)遞質(zhì)化學(xué)檢測(cè)的技術(shù)更新。

本研究基于腦內(nèi)微透析清醒記錄技術(shù)的原理和現(xiàn)狀，自行設(shè)計(jì)制作一種嚙齒類動(dòng)物腦內(nèi)微透析記錄的清醒活動(dòng)裝置，并通過小鼠的黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)通路進(jìn)行該裝置的記錄實(shí)驗(yàn)，取得穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 現(xiàn)已申請(qǐng)并授權(quán)獲批國(guó)家專利兩項(xiàng):發(fā)明專利(202110525342.5)[19]，實(shí)用新型專利(202121027247.4)[20]。