周文勤 閆雪波 王木子 趙紅星 王炯

【關(guān)鍵字】 低分化非小細(xì)胞肺癌；TTF-1；CK5/6

肺癌是中國乃至世界最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率均居各種癌癥的首位[1-2]。非小細(xì)胞肺癌(Non small cell lung cancer NSCLC)約占肺癌總數(shù)的80%-85%，主要分為腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌等，不同的亞分類肺癌治療策略不同。高分化腺癌、鱗癌通過特有的細(xì)胞形態(tài)特征鑒別診斷并不困難，中低分化鱗癌、腺癌缺乏特征性鏡下表現(xiàn)。免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)是根據(jù)免疫學(xué)原理，檢測組織、細(xì)胞中抗原性物質(zhì)的一種技術(shù)。這種方法特異性強(qiáng)，敏感性高，尤其是對(duì)疾病的鑒別診斷及輔助診斷起到?jīng)Q定性作用[3-4]。其在對(duì)低分化或未分化腫瘤的鑒別診斷是的準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。可作為低分化非小細(xì)胞肺癌亞分類的主要方式之一。本文旨在探討免疫組化TTF-1、CK7、P63、CK5/6在低分化非小細(xì)胞肺癌亞分類中應(yīng)用價(jià)值。

資料與方法

一、材料與方法

收集2019年1月至2021年1月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院通過肺穿刺或電子支氣管鏡活檢獲得病理組織經(jīng)組織病理學(xué)及進(jìn)一步免疫組織化學(xué)確診的低分化非小細(xì)胞肺癌104例，其中低分化腺癌62例(59.6%)、低分化鱗癌42例(40.4%)，男81例(77.9%)、女23例(16.4%)，年齡54～86歲(平均66.22±9.76歲)，所有納入此項(xiàng)研究的患者均為初次確診低分化非小細(xì)胞肺癌患者。上述研究經(jīng)三所醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào)：LLSC20211268)，所有研究對(duì)象均獲得過患者或家屬知情同意。

二、試劑及方法

將活檢獲得的肺組織標(biāo)本立即置于10%福爾馬林溶液中固定，送至病理科進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、然后切片至4 μm/片、染色，采用免疫組化SP法。將石蠟切片置于40 ℃溫水展開，干燥2h，經(jīng)二甲苯及梯度乙醇脫蠟1h，3%過氧化氫孵育10min，PBS洗滌5min，置于高壓鍋內(nèi)3min進(jìn)行抗原修復(fù)，然后冷卻至室溫，正常非免疫性動(dòng)物血清封閉10min，一抗孵育，二抗孵育，滴入加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵化10min，PBS洗滌、顯色，蘇木素復(fù)染，封片，鏡檢。

三、結(jié)果判讀

最后由兩位病理組織學(xué)專家進(jìn)行閱片，兩位病理學(xué)專家判讀結(jié)果不一致時(shí)由兩位共同商議決定。隨機(jī)選取處理好的切片用高倍鏡視野觀察。 TTF-1和p63陽性表達(dá)于細(xì)胞核，陽性為棕黃色，CK7表達(dá)于細(xì)胞膜，為棕黃色，CK5/6陽性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，陽性表達(dá)為棕黃色.腫瘤細(xì)胞陽性率>10%為陽性，未見腫瘤細(xì)胞為陰性(見圖1)。

注：a為低分化鱗狀細(xì)胞癌HE染色；b為低分化腺癌HE染色；c為免疫組化P63在細(xì)胞核中陽性表達(dá)(SP×400)；d為CK5/6在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中陽性表達(dá)(SP×400)；e為CK7在細(xì)胞膜上陽性表達(dá)(SP×400)；f為TTF-1在細(xì)胞核中陽性(SP×400)

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用受試者工作特征曲線ROC評(píng)價(jià)TTF-1、CK7、CK5/6、P63對(duì)低分化鱗癌腺癌的診斷敏感性及特異性。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、針對(duì)不同年齡、性別、腫瘤病理類型及腫瘤大小層面TTF-1陽性表達(dá)的比較有意義，CK7、CK5/6、P63陽性表達(dá)在性別、及病理類型層面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。余在腫瘤分期、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面TTF-1、CK7、CK5/6、P63陽性表達(dá)的比較差異均無意義(P>0.05)(見表1)。

表1 不同臨床特征低分化非小細(xì)胞肺癌患者TTF-1、CK7、CK5/6、P63的陽性表達(dá)情況

二、TTF-1診斷低分化腺癌的靈敏度為87.88%、特異度為93.10%；CK7診斷低分化腺癌的靈敏度為78.94%、特異度為95.83%，兩者均陽性診斷低分化腺癌的靈敏度為90.91%、特異度為96.55%；CK5/6診斷低分化鱗癌的靈敏度為93.55%、特異度為93.55%；P63診斷低分化鱗癌的靈敏度為83.33%、特異度為96.15%，兩者均陽性診斷低分化鱗癌的敏感性為96.66%、特異度為90.91%(見表2、表3、圖2)。

表2 TTF-1、CK7陽性診斷低分化腺癌的靈敏度、特異度的ROC曲線表

表3 CK5/6、P63陽性診斷低分化鱗癌的靈敏度、特異度的ROC曲線表

圖2 免疫組化檢測對(duì)低分化腺癌及低分化鱗癌診斷敏感度、特異度的ROC曲線表

注：A為TTF-1、CK7單獨(dú)或聯(lián)合診斷低分化腺癌的ROC曲線；B為CK5/6、P63單獨(dú)或聯(lián)合診斷低分化腺癌的ROC曲線

討 論

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)2018 年中國新發(fā)癌4285033例，約占全球概念癌癥發(fā)病的23.7%，而肺癌的發(fā)病率及死亡率均為中國排名前五位腫瘤發(fā)病率及死亡率的首位[5-6]。大部分肺癌首次確診是已處于腫瘤中晚期階段，總生存率僅為5%-15%[7-8]。肺癌病理學(xué)可分為小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌。非小細(xì)胞肺癌約占肺癌的80%，主要包括腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌等。針對(duì)肺癌的治療，早期肺癌(I、II期)主要通過手術(shù)治療，針對(duì)晚期肺癌(III期、IV期)大多已失去手術(shù)機(jī)會(huì)[9]，主要以放療、化療、靶向及免疫治療為主[10-13]。不同的亞分類肺癌治療策略各不相同。分化良好的腺癌與鱗癌因病理學(xué)形態(tài)不同很容易區(qū)分，而分化差的非小細(xì)胞肺癌顯微鏡下很難區(qū)分而影響后續(xù)治療方案的選擇，免疫組化法檢測成為低分化非小細(xì)胞肺癌亞分類的重要鑒別診斷的方法之一[14]。TTF-1、CK7、CK5/6及p63因其細(xì)胞來源不同及表達(dá)部位不同而成為非小細(xì)胞肺癌亞分類的新的診斷標(biāo)記物[15]。

甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-I)主要表達(dá)于甲狀腺上皮及肺、子宮、卵巢、乳腺和結(jié)直腸的腺癌組織中，極少表達(dá)于肺鱗癌及非典型類癌，對(duì)肺腺癌的診斷敏感性較高，因此成為肺腺癌常用的免疫標(biāo)記物[16]。

細(xì)胞角蛋白7(CK7)是移行上皮及腺上皮中的堿性角蛋白，分子量較小，通常在腺癌、卵巢癌、肺癌和乳腺癌上皮癌中常呈陽性表達(dá)，在鱗狀上皮中不表達(dá)，對(duì)肺腺癌的診斷敏感性較高[17]。

細(xì)胞角蛋白5/6(CK5/6)在鱗癌或鱗狀上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中陽性表達(dá)，在腺癌中幾乎不表達(dá)，因此可用于鱗癌與腺癌的鑒別診斷[18]。

P63是P53基因家族成員之一，是重要的細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶，主要表達(dá)與鱗狀上皮細(xì)胞中，少量表達(dá)與腺癌組織中[19]。

國內(nèi)張堃[20]等人的研究中，TTF-1、CK7主要用于診斷肺腺癌，陽性率分別為92.16%、98.04%,本研究中TTF-1、CK7在低分化腺癌中的陽性表達(dá)率分別為91.9%和93.3%，與既往研究結(jié)果基本一致。本研究中CK5/6、P63在低分化腺癌的陽性率分別為11.1%，20.0%，在低分化鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為92.9%和97.1%，與張愛麗等人[21]的研究結(jié)果基本一致。有文獻(xiàn)報(bào)道TTF-1診斷腺癌的敏感性為87.7%、特異性為85.6%，P63診斷鱗癌的靈敏度100%、特異度為96%，本次研究中TTF-1診斷低分化腺癌的靈敏度為87.88%、特異度為93.10%；CK7診斷低分化腺癌的靈敏度為78.94%、特異度為95.83%；CK5/6診斷低分化鱗癌的靈敏度為93.55%、特異度為93.55%；P63診斷低分化鱗癌的靈敏度為83.33%、特異度為96.15%，且TTF-1、CK7陽性兩項(xiàng)聯(lián)合診斷低分化腺癌的敏感性及特異性均高于獨(dú)診斷的敏感性特異性。TTF-1、CK7在低分化腺癌中的表達(dá)高于在低分化鱗癌中的表達(dá)，且TTF-1的表達(dá)受到腫瘤分期的影響。而腫瘤的分期、大小、有無淋巴及轉(zhuǎn)移等特征對(duì)TTF-1、CK7、CK5/6、P63的陽性表達(dá)無明顯影響，與既往研究結(jié)果基本一致[22-23]。

綜上所述，免疫組化分子標(biāo)記物單獨(dú)或聯(lián)合檢測在低分化非小細(xì)胞肺癌鑒別診斷中具有重要意義。