肖晴 潘芯 李崇佼 蔣 亞群 王怡春 文兵 雷 萍 何勇

1 武漢大學(xué)中南醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，武漢 430071；2 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，武漢 430030

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（transferrin receptor，TfR）是一類Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要參與調(diào)控細(xì)胞的鐵代謝及生長、增殖進(jìn)程[1]。相關(guān)研究結(jié)果證實(shí)，在癌前病變及侵襲性腫瘤組織中，TfR 的表達(dá)顯著升高，且其表達(dá)水平同腫瘤的分級密切相關(guān)，如在胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等腫瘤及多種耐藥性腫瘤中，TfR 的表達(dá)明顯上調(diào)[2-5]。TfR 高表達(dá)的腫瘤具有惡性程度高、易產(chǎn)生耐藥和預(yù)后不良等風(fēng)險。因此，對腫瘤TfR 表達(dá)水平的在體監(jiān)測將有助于指導(dǎo)腫瘤患者的臨床管理及預(yù)后評估。

目前，靶向TfR 的分子探針主要包括轉(zhuǎn)鐵蛋白及單克隆抗體，其相對分子質(zhì)量較大，體內(nèi)循環(huán)時間長，易受內(nèi)源性轉(zhuǎn)鐵蛋白競爭的影響，在應(yīng)用中存在一定的局限性[6]。而小分子多肽因具有相對分子質(zhì)量小、易于穿透腫瘤組織、穩(wěn)定性好、血液清除速率快、易于合成及加工修飾、免疫原性低等優(yōu)勢，近年來在腫瘤分子影像學(xué)領(lǐng)域表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景[7]。組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸（His-Arg-Pro-Tyr-Ile-Ala-His，HRPYIAH，簡稱T7）是由噬菌體展示技術(shù)篩選獲得的小分子多肽，能特異性靶向TfR[8-9]。本研究構(gòu)建了新型靶向TfR 的分子探針99Tcm-HRPYIAH（簡稱99Tcm-T7），并對其理化性質(zhì)、靶向特性及顯像效能進(jìn)行了初步研究。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

小分子多肽T7（相對分子質(zhì)量為1 156，化學(xué)純度＞95%）由上海吉爾生化公司合成制備；DMEM高糖完全培養(yǎng)基、胎牛血清、PBS 均購自美國Gibco 公司；青霉素及鏈霉素購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；Alexa-Fluor 647 標(biāo)記的TfR 單克隆抗體（ab187777）購自英國Abcam 公司；高锝酸鈉（Na99TcmO4）由99Mo-99Tcm發(fā)生器制備，購自中國原子高科有限公司；N-三（羥甲基）甲基甘氨酸（Tricine）、乙二胺二乙酸（EDDA）及二水氯化亞錫（SnCl2·2H2O）均購自美國Sigma-Aldrich 公司；Sep-park C18 SPE 柱購自美國Waters 公司。流式細(xì)胞儀（型號：FACSCalibur）購自美國BD 公司；自動γ 計數(shù)儀（型號：2470 WIZARD）購自美國PerkinElmer 公司；小動物micro SPECT/CT 一體機(jī)購自北京永新醫(yī)療設(shè)備有限公司；磷屏掃描儀購自合肥眾成機(jī)電技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動物

人胰腺癌PANC-1 細(xì)胞及人乳腺癌MX-1 細(xì)胞由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院蘭曉莉教授課題組惠贈。無特定病原體級正常健康雌性Balb/c-nu 裸鼠30 只，體重（18±2）g，4～6 周齡，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司[許可證號：SCXK（京）2016-0006]，實(shí)驗(yàn)動物在12 h/12 h晝夜循環(huán)的無特定病原體級環(huán)境中飼養(yǎng)（溫度：20～26℃；濕度：40%～70%），食物（全價營養(yǎng)顆粒飼料）和水（超純凈化水）可以隨時獲得。所有動物實(shí)驗(yàn)均在武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物使用和管理委員會指南的指導(dǎo)下進(jìn)行。本研究經(jīng)武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院動物倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號：IACUC-2534）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

將PANC-1 細(xì)胞及MX-1 細(xì)胞置于DMEM 高糖完全培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、100 μg/ml 青霉素、100 μg/ml 鏈霉素），在37℃、含5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每日觀察腫瘤細(xì)胞的生長情況，取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)

單克隆抗體組：將PANC-1 細(xì)胞及MX-1 細(xì)胞消化離心后（1000 轉(zhuǎn)/min，離心半徑10 cm）用結(jié)合緩沖液（含0.1%胎牛血清白蛋白的PBS）重懸，每管加入100 μl 1∶400 TfR 單克隆抗體。空白對照組：每管加入等體積的結(jié)合緩沖液。4℃避光孵育30 min 后 加 入800 μl 結(jié) 合 緩 沖 液，1000 轉(zhuǎn)/min離心5 min（離心半徑10 cm），重復(fù)上述步驟充分去除未結(jié)合的熒光抗體，加入結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤細(xì)胞表面TfR 的表達(dá)情況。

1.5 99Tcm -T7 的制備、質(zhì)量控制及體外穩(wěn)定性鑒定

99Tcm-T7 的制備采用間接標(biāo)記法，向含有10 μl T7 溶液（1 mg/ml）的離心管內(nèi)依次加入500 μl 乙二胺二乙酸（20 mg/ml，溶于0.1 mol/L NaOH 溶液）、500 μl N-三（羥甲基）甲基甘氨酸（40 mg/ml，溶于PBS）、25 μl 二水氯化亞錫（1 mg/ml，溶于0.01 mol/L稀鹽酸中）及500 μl 新鮮淋洗的Na99TcmO4（370 MBq），95℃反應(yīng)15 min。采用Sep-park C18 SPE 柱分離純化標(biāo)記物，采用快速薄層紙層析法中2 種展開體系各組分的占比計算99Tcm-T7 的標(biāo)記率。取100 μl標(biāo)記物分別與等體積的生理鹽水和新鮮胎牛血清混勻，2 組混合液均置于37℃恒溫箱中孵育，于4 h時取樣，采用高效液相色譜法測定樣品的放射化學(xué)純度（流動相：5%～90%乙腈水溶液、1%三氟乙酸，流速為1 ml/min）。

1.6 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞競爭抑制實(shí)驗(yàn)

體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)：將PANC-1、MX-1 細(xì)胞提前24 h 鋪于24 孔板中培養(yǎng)（2×105個/孔），待細(xì)胞貼壁后棄去舊培養(yǎng)基，每孔加入74 kBq 標(biāo)記探針99Tcm-T7，于37℃恒溫箱中孵育，設(shè)置15、30、60、120、240 min 時間點(diǎn)，分別于上述時間點(diǎn)收集上清及PBS，隨后每孔加入800 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液，待貼壁細(xì)胞完全裂解后，收集細(xì)胞裂解液。

細(xì)胞競爭抑制實(shí)驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)中的孵育時間根據(jù)體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定，使用PANC-1 細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將PANC-1 細(xì)胞提前24 h鋪于24 孔板中培養(yǎng)（2×105個/孔）。PANC-1 實(shí)驗(yàn)組每孔加入74 kBq 標(biāo)記探針99Tcm-T7；PANC-1 阻斷組需提前60 min 加入未標(biāo)記多肽T7 封閉，隨后每孔加入74 kBq 標(biāo)記探針99Tcm-T7。置于37℃恒溫箱中孵育1 h。收集上清、PBS 及800 μl NaOH溶液裂解所得的細(xì)胞液。使用自動γ 計數(shù)儀測定每組細(xì)胞液的放射性計數(shù)，計算細(xì)胞在每個時間點(diǎn)的總結(jié)合率。

1.7 裸鼠皮下移植瘤模型的建立

分別將處于對數(shù)生長期的PANC-1 細(xì)胞及MX-1 細(xì)胞接種于Balb/c-nu 裸鼠上肢皮下[5×106個/（100 μl·只），12 只/組]，常規(guī)飼養(yǎng)并隔日觀察裸鼠狀態(tài)及移植瘤生長情況，待皮下腫瘤體積達(dá)到100～300 mm3時用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.8 荷瘤裸鼠micro SPECT/CT 顯像

PANC-1 細(xì)胞、MX-1 細(xì)胞荷瘤裸鼠模型（4 只/組）分別經(jīng)尾靜脈注射99Tcm-T7 37 MBq（約150 μl），并分別于注射后30、60 min 時行小動物micro SPECT/CT 顯像。

1.9 荷瘤裸鼠的生物學(xué)分布實(shí)驗(yàn)

PANC-1 細(xì)胞、MX-1 細(xì)胞荷瘤裸鼠模型（5 只/組）經(jīng)尾靜脈注射99Tcm-T7 3.7 MBq（約100 μl），于注射后30 min 經(jīng)頸椎脫臼法處死，解剖取得重要器官及腫瘤組織并稱重，用自動γ 計數(shù)儀測量其放射性計數(shù)，衰減校正后計算各臟器及腫瘤的每克組織百分注射劑量率（percentage activity of injection dose per gram of tissue, %ID/g）。

1.10 放射性磷屏自顯影及組織病理學(xué)檢查

將荷瘤裸鼠的腫瘤組織及重要臟器的快速冰凍切片樣品貼于磷屏上，置于暗室內(nèi)曝光15～20 min，隨后固定于磷屏掃描儀滾筒進(jìn)行掃描，使用磷屏掃描儀配套軟件OptiOuant 分析掃描結(jié)果。小動物micro SPECT/CT 顯像實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，即刻用10%多聚甲醛將腫瘤組織固定，隨后經(jīng)組織脫水、石蠟包埋后切片。取腫瘤組織切片，經(jīng)常規(guī)蘇木精-伊紅染色后封片；封閉固定后，用TfR 單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色并封片，于顯微鏡下觀察腫瘤組織切片并記錄。

1.11 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用GraphPad Prism 6.0 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，2 組間數(shù)據(jù)的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（方差齊）。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤細(xì)胞表面TfR 的表達(dá)水平

流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PANC-1 細(xì)胞可與TfR 單克隆抗體特異性結(jié)合，結(jié)合率為（98.9±0.1）%，這說明PANC-1 細(xì)胞表面高表達(dá)TfR；而MX-1 細(xì)胞與TfR 單克隆抗體未見明顯結(jié)合，結(jié)合率為（0.2±0.1）%，這表明MX-1 細(xì)胞表面的TfR 呈相對低表達(dá)（圖1）。

圖1 流式細(xì)胞術(shù)測定人胰腺癌 PANC-1 細(xì)胞（A）和人乳腺癌MX-1 細(xì)胞（B）表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達(dá)水平 APC-A 為藻藍(lán)蛋白；FSC-A 為前向角散射Figure 1 Expression levels of transferrin receptor in human pancreatic cancer PANC-1 cells (A) and human breast cancer MX-1 cells (B) by flow cytometry

2.2 99Tcm-T7 的標(biāo)記率及體外穩(wěn)定性

99Tcm-T7 的標(biāo)記率＞95%。在室溫下，99Tcm-T7分別在與生理鹽水、胎牛血清的混合液中孵育4 h后的放射化學(xué)純度為（95.3±0.3）%和（90.6±0.4）%。

2.3 體外細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞競爭抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果

PANC-1 細(xì)胞與分子探針99Tcm-T7 的結(jié)合率在孵育后60 min 時達(dá)到峰值[（16.12±0.01）%]，顯著高于MX-1 細(xì)胞[（1.20±0.01）%]，且二者間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001，圖2），同流式細(xì)胞術(shù)測定的TfR 表達(dá)水平一致。同時，PANC-1 阻斷組對99Tcm-T7 的 結(jié) 合 率 降 低 至（2.40±0.01）%，低 于PANC-1 實(shí)驗(yàn)組，且二者間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.91，P＜0.001）。

圖2 人胰腺癌PANC-1 細(xì)胞和人乳腺癌MX-1 細(xì)胞與分子探針99Tcm-T7 的結(jié)合率 a 表示在60 min 時，與MX-1 細(xì)胞相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=28.67，P<0.001）。T7 為組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸Figure 2 Binding rate of human pancreatic cancer PANC-1 cells and human breast cancer MX-1 cells to molecular probe 99Tcm-T7

2.4 荷瘤裸鼠的micro SPECT/CT 顯像

在PANC-1 荷瘤裸鼠模型中，99Tcm-T7 可迅速靶向腫瘤部位，注射后30 min 腫瘤輪廓顯影清晰，較短時間即可獲得較高的腫瘤/肌肉比值（2.80±0.22），而MX-1 細(xì)胞對99Tcm-T7 的攝取程度較低，未見明顯顯影。99Tcm-T7 從血液中的清除速率快，主要經(jīng)腎臟排泄，注射后60 min 時除腎臟及膀胱見顯像劑分布外，其余組織較少見顯像劑滯留（圖3）。

圖3 荷人胰腺癌、人乳腺癌裸鼠注射分子探針99Tcm-T7 后不同時間點(diǎn)的micro SPECT/CT 顯像圖 白色虛線內(nèi)為腫瘤組織；右側(cè)彩色條帶中，紅色代表攝取最高值，黑色代表攝取最低值。T7 為組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸；SPECT 為單光子發(fā)射計算機(jī)體層攝影術(shù)；CT 為計算機(jī)體層攝影術(shù)Figure 3 Micro SPECT/CT images of nude mice bearing human pancreatic cancer and human breast cancer after injection of molecular probe 99Tcm-T7

2.5 99Tcm-T7 在荷瘤裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布

由表1 可知，99Tcm-T7 經(jīng)尾靜脈注射進(jìn)入荷瘤裸鼠體內(nèi)后，除腎臟及腫瘤組織外，其余器官及組織本底均較低，PANC-1 細(xì)胞對99Tcm-T7 的攝取在注 射后30 min 即 達(dá) 到（0.55±0.18）%ID/g，高 于MX-1 細(xì)胞 [（0.16±0.11）%ID/g]，且二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。

表1 荷人胰腺癌、人乳腺癌裸鼠注射分子探針99Tcm-T7 后30 min 的體內(nèi)生物學(xué)分布（%ID/g，n=5， ±s）Table 1 Biodistribution of molecular probe 99Tcm-T7 in nude mice bearing human pancreatic cancer and human breast cancer at 30 min post injection (%ID/g, n=5, ±s)

表1 荷人胰腺癌、人乳腺癌裸鼠注射分子探針99Tcm-T7 后30 min 的體內(nèi)生物學(xué)分布（%ID/g，n=5， ±s）Table 1 Biodistribution of molecular probe 99Tcm-T7 in nude mice bearing human pancreatic cancer and human breast cancer at 30 min post injection (%ID/g, n=5, ±s)

注：a 表示與人乳腺癌PANC-1 細(xì)胞比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.42，P=0.003）。T7 為組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸；%ID/g 為每克組織百分注射劑量率

器官或組織 人胰腺癌PANC-1細(xì)胞 人乳腺癌MX-1細(xì)胞血液 0.34±0.06 0.46±0.16腦0.04±0.01 0.04±0.02心0.21±0.01 0.12±0.09肺0.29±0.01 0.67±0.27肝0.34±0.02 1.34±1.70脾0.17±0.04 0.10±0.05腎5.92±0.04 6.25±0.09胃0.36±0.01 0.21±0.09小腸 0.14±0.04 0.14±0.09大腸 0.15±0.03 0.13±0.10肌肉 0.20±0.05 0.10±0.02骨0.10±0.02 0.08±0.66腫瘤 0.55±0.18a 0.16±0.11

2.6 放射性磷屏自顯影及組織病理學(xué)檢查結(jié)果

在注射99Tcm-T7 30 min 后，相較于MX-1 細(xì)胞，PANC-1 細(xì)胞顯著攝取99Tcm-T7；在正常組織臟器中，以腎臟攝取最為顯著，其次為肝臟（圖4）。蘇木精-伊紅染色法及免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果顯示，腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)未見明顯壞死，在PANC-1 細(xì)胞中TfR呈高表達(dá)，而在MX-1 細(xì)胞中TfR 呈低表達(dá)（圖5）。

圖4 荷人胰腺癌（A）、人乳腺癌（B）裸鼠注射分子探針99Tcm-T7 后的腫瘤組織及離體臟器的放射性磷屏自顯影 箭頭所示，相較于人乳腺癌MX-1 細(xì)胞，人胰腺癌PANC-1 細(xì)胞顯著攝取99Tcm-T7。T7 為組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸Figure 4 Radio-autographs of tumor tissues and isolated organs in nude mice bearing human pancreatic cancer and human breast cancer after injection of molecular probe 99Tcm-T7

圖5 荷人胰腺癌、人乳腺癌裸鼠注射分子探針99Tcm-T7 后的腫瘤組織轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的組織病理學(xué)檢查圖（×400） A 為蘇木精-伊紅染色法，鏡下可見腫瘤組織內(nèi)未見明顯壞死；B 為免疫組織化學(xué)染色法，棕黃色表示腫瘤組織轉(zhuǎn)鐵蛋白受體染色，藍(lán)色表示細(xì)胞核染色。T7 為組氨酸-精氨酸-脯氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-丙氨酸-組氨酸Figure 5 Histopathological examination of transferrin receptors in tumor tissues of nude mice bearing human pancreatic cancer and human breast cancer after injection of molecular probe 99Tcm-T7(×400)

3 討論

相關(guān)研究結(jié)果表明，TfR 參與腫瘤細(xì)胞的生長、增殖等一系列的生命活動[10-14]。因腫瘤細(xì)胞增殖活躍，為了滿足其相對旺盛的鐵需求，多種腫瘤細(xì)胞表面的TfR 水平顯著上調(diào)。因此，TfR 成為極具研究價值的腫瘤分子靶點(diǎn)之一。

近年來，多個課題組針對TfR 這一分子靶點(diǎn)展開了一系列的研究。2012 年，Holland 等[10]首次構(gòu)建并利用89Zr-轉(zhuǎn)鐵蛋白對前列腺癌小鼠模型行PET/CT 顯像，實(shí)現(xiàn)了活體監(jiān)測TfR 的動態(tài)變化。Henry 等[11]的研究結(jié)果證實(shí)，89Zr-轉(zhuǎn)鐵蛋白PET顯像可用于監(jiān)測三陰性乳腺癌小鼠對溴結(jié)構(gòu)域蛋白4 抑制劑的療效反應(yīng)。但轉(zhuǎn)鐵蛋白的分子量較大（相對分子質(zhì)量76 000～81 000），在血液中的清除速率慢，肝臟攝取本底高，顯像時間較長。而小分子多肽T7 具有相對分子質(zhì)量小、組織穿透性強(qiáng)、血液清除速率快等優(yōu)勢，有望成為更為理想的靶向腫瘤TfR 的分子探針[12-14]。

本研究設(shè)計并采用間接標(biāo)記法合成了靶向TfR 分子的多肽分子探針99Tcm-T7。相較于直接標(biāo)記法，該標(biāo)記過程更簡易，且對標(biāo)記分子的生物活性影響更小、標(biāo)記產(chǎn)物更為穩(wěn)定[15]。該方法合成的99Tcm-T7 具有標(biāo)記率高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，且micro SPECT/CT 顯像操作簡便、成本較低，使得該探針更加易于推廣應(yīng)用。

為了驗(yàn)證99Tcm-T7 監(jiān)測腫瘤表面TfR表達(dá)的可行性，本實(shí)驗(yàn)針對TfR 表達(dá)量不同的2 種人源性腫瘤PANC-1 和MX-1 細(xì)胞開展了體內(nèi)外的相關(guān)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高表達(dá)TfR 的PANC-1 細(xì)胞對99Tcm-T7 攝取顯著，且過量的未標(biāo)記多肽可阻斷對99Tcm-T7 的攝取，對應(yīng)的荷瘤裸鼠模型顯像清晰；相對低表達(dá)TfR 的MX-1 細(xì)胞在體內(nèi)、體外對99Tcm-T7 的攝取均較低。體外細(xì)胞及活體動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腫瘤表面的TfR 分子介導(dǎo)了99Tcm-T7的特異性攝取，其攝取與腫瘤組織中TfR 的表達(dá)水平相關(guān)。生物學(xué)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，99Tcm-T7 在體內(nèi)主要經(jīng)腎臟排泄，這一特點(diǎn)與多肽的相對分子質(zhì)量小和極性相關(guān)，符合小分子多肽在體內(nèi)代謝的一般特性[16]。本研究仍存在一定的不足之處，在荷瘤裸鼠活體顯像實(shí)驗(yàn)中，以荷瘤裸鼠的皮下移植瘤為主，后續(xù)需要進(jìn)一步探索及研究多肽標(biāo)記探針在監(jiān)測原位瘤模型中TfR 表達(dá)水平的可行性。

綜上所述，本研究成功完成了對靶向腫瘤TfR的小分子多肽T7 的核素標(biāo)記，其制備流程簡易，標(biāo)記率高，穩(wěn)定性好，體內(nèi)清除迅速，腫瘤靶向性佳，顯像效能良好，具備無創(chuàng)、在體實(shí)時監(jiān)測腫瘤表面TfR 表達(dá)的潛能。

利益沖突所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明肖晴負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)的實(shí)施、論文的撰寫；潘芯負(fù)責(zé)協(xié)助實(shí)驗(yàn)及數(shù)據(jù)的采集；李崇佼負(fù)責(zé)動物實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)；蔣亞群負(fù)責(zé)放射性藥物標(biāo)記實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)；王怡春負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的分析、論文的審閱；文兵、雷萍負(fù)責(zé)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)；何勇負(fù)責(zé)課題的提出與設(shè)計、論文的審閱與修訂