蔣宇航，苗家燕，劉雨涵，韓晨，羅贛，高曉燕

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029）

《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑物質(zhì)基準(zhǔn)的申報(bào)資料要求（征求意見稿）》[1]明確提出，在整個(gè)經(jīng)典名方研究過(guò)程中，應(yīng)以浸出物、含量測(cè)定、指紋圖譜等指標(biāo)，全面考察藥材-飲片-中間體-對(duì)應(yīng)實(shí)物的相關(guān)性，關(guān)注對(duì)應(yīng)實(shí)物制備過(guò)程中關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）的量質(zhì)傳遞?！度擞盟幬镒?cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)委員會(huì)藥物研發(fā)指導(dǎo)原則》（ICHQ8）[2]中提出，藥品CQAs 是在適當(dāng)?shù)南薅?、范圍或分布之?nèi)的物理、化學(xué)、生物或微生物性質(zhì)或特征，用以確保所需的產(chǎn)品質(zhì)量。從藥材-飲片-傳統(tǒng)湯劑-物質(zhì)基準(zhǔn)-復(fù)方制劑，CQAs 貫穿于經(jīng)典名方研究的整個(gè)過(guò)程。為此，進(jìn)行CQAs 傳遞規(guī)律研究，有助于從可量化、可傳遞、可追溯3 個(gè)角度來(lái)構(gòu)建從藥材到飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)、制劑全過(guò)程的質(zhì)量控制體系。

經(jīng)典名方歷經(jīng)數(shù)千年臨床檢驗(yàn)，是中醫(yī)藥寶庫(kù)的精華。為了推動(dòng)經(jīng)典名方的開發(fā)研究，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[3]，當(dāng)歸四逆湯（DSD）被收錄其中。DSD 出自張仲景的《傷寒論·辨厥陰病脈證并治》[4]，原文：“手足厥寒，脈細(xì)微欲絕者，當(dāng)歸四逆湯主之。”全方由當(dāng)歸、桂枝（去皮）、白芍、細(xì)辛、通草、炙甘草、大棗7 味藥物組成，治療血虛寒厥證癥見陽(yáng)虛欲脫、四肢厥逆、冷汗自出和脈微欲絕[5-7]。現(xiàn)代臨床將DSD 加減化裁后用于治療雷諾氏病[8]、痛經(jīng)[9-10]、關(guān)節(jié)炎[11]、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病[12]和糖尿病伴隨周圍神經(jīng)病變[13]等疾病，可見DSD 具有廣泛的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)，開發(fā)價(jià)值極大。本研究制備15 批藥材、飲片、水煎液和對(duì)應(yīng)的DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物，進(jìn)行CQAs 傳遞規(guī)律研究，以構(gòu)建DSD 全過(guò)程質(zhì)量控制體系，為經(jīng)典名方DSD 復(fù)方制劑后續(xù)開發(fā)研究提供科學(xué)理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 Waters 2695 高效液相色譜儀，購(gòu)自美國(guó)Waters 公司；XP-6 型精密天平，購(gòu)自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ5200DA 超聲波清洗器，購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司；Milli-Q 超純水系統(tǒng)，購(gòu)自美國(guó)Millipore 公司；Sorvall ST 8R 高速冷凍離心機(jī)，購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司；LC-E013S電陶爐，購(gòu)自廣東順德忠臣電器有限公司；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，購(gòu)自鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；FD-2A 型真空冷凍干燥機(jī)，購(gòu)自北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 試藥與試劑 對(duì)照品芍藥苷（批號(hào)DST191024-070）、藁本內(nèi)酯（批號(hào)DST200610-007）、細(xì)辛脂素（批號(hào)DST190528-014）、甘草酸銨（批號(hào)DST190702-008）、肉桂酸（批號(hào)DST200614-045）購(gòu)自成都德思特生物技術(shù)有限公司；對(duì)照品桂皮醛（批號(hào)110710-201418）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，上述對(duì)照品純度均＞98%。色譜純乙腈，購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司；分析純甲醇、磷酸，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

DSD 中各藥材產(chǎn)地信息見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID），經(jīng)前期研究確定各藥材的炮制方法，由北京康仁堂藥業(yè)有限公司提供各批次藥材和飲片。方中各味藥材經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)楊瑤珺教授鑒定分別為傘形科植物當(dāng)歸[Angelica sinensis（Oliv.）Diels]的干燥根、樟科植物肉桂（Cinnamomumcassia Presl）的干燥嫩枝、毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall）的干燥根、馬兜鈴科植物北細(xì)辛[Asarum heterotropoidesFr.Schmidtvar.mandshuricum（Maxim.）Kitag]的干燥根和根莖、木通科植物三葉木通[Akebia trifoliata（Thunb.）Koidz]的干燥藤莖、豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch）的干燥根和根莖、鼠李科植物棗（Ziziphus jujuba Mill）的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)CQAs 包括特征圖譜、指標(biāo)性成分含量和干膏率，針對(duì)以上3 個(gè)方面，本研究探索了CQAs 在DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)制備過(guò)程中藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)的傳遞規(guī)律。

2.1 15 批DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)各藥味飲片批次隨機(jī)組合方法 采用隨機(jī)數(shù)字表法對(duì)各藥味飲片批次進(jìn)行隨機(jī)組合及排序，15 批DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)的藥材混批結(jié)果見OSID。

2.2 樣品制備

2.2.1 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物制備 稱取15 批DSD 處方量的當(dāng)歸、白芍、桂枝、細(xì)辛、木通、炙甘草、大棗（破開去核）各飲片，置于3 L 陶瓷鍋內(nèi)，加1 600 mL 去離子水，置電陶爐上武火（8 檔）加熱至煮沸后轉(zhuǎn)文火（5 檔）煎煮60 min，趁熱濾過(guò)，放冷，定容至500 mL，取上述水煎液適量于4 ℃、11 410×g條件下離心20 min，精密移取100 mL 上清液，-20 ℃預(yù)凍后冷凍干燥72 h 即得DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)對(duì)應(yīng)實(shí)物。

2.2.2 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)供試品溶液制備 供試品溶液1：取DSD 凍干粉0.45 g，精密稱定后置于5 mL容量瓶中，加入1 倍量的30%甲醇，超聲10 min 完全溶解后定容，混勻，取適量于1.5 mL 離心管中，16 060×g、4 ℃離心20 min，取上清液用于芍藥苷、甘草酸、桂皮醛、藁本內(nèi)酯和肉桂酸的含量測(cè)定以及特征圖譜研究。

供試品溶液2：取凍干粉0.90 g，精密稱定，去離子水溶解后超聲10 min，定容至10 mL 容量瓶，混勻后倒入50 mL 分液漏斗中，以等量乙酸乙酯萃取2 次，合并2 次萃取后的乙酸乙酯層溶液，80 ℃水浴揮干溶劑，甲醇定容至2 mL，取適量在16 060×g、4 ℃條件下離心20 min，后取上清液用于細(xì)辛脂素的含量測(cè)定。

2.2.3 單味藥樣品及陰性樣品溶液制備 分別稱取處方量的各飲片，按“2.2.1”項(xiàng)方法，分別制備各單味藥樣品溶液和缺各單味藥的陰性樣品溶液，用于特征圖譜研究。

2.3 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)制備過(guò)程中指標(biāo)成分含量傳遞規(guī)律研究

2.3.1 DSD 處方中藥材、飲片、水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中各指標(biāo)成分的含量測(cè)定方法 DSD 水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中各指標(biāo)成分含量測(cè)定的方法前期已完成[14]。

DSD 處方中藥材、飲片中芍藥苷、細(xì)辛脂素、甘草酸銨、桂皮醛的含量測(cè)定方法依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）[15]，但未規(guī)定當(dāng)歸中指標(biāo)性成分藁本內(nèi)酯和桂枝中指標(biāo)性成分肉桂酸的含量測(cè)定方法，故本研究在此建立如下方法。

2.3.1.1 當(dāng)歸藥材及飲片中藁本內(nèi)酯含量測(cè)定方法 供試品溶液制備：分別取15 批當(dāng)歸藥材和飲片粉末（過(guò)3 號(hào)篩）1.0 g，精密稱定，置50 mL 具塞錐形瓶中，精密加入100%甲醇20 mL，密塞，稱定總質(zhì)量，超聲40 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，100%甲醇補(bǔ)質(zhì)量，搖勻，取適量在4 ℃下、16 060×g 條件下離心20 min，取上清液用于藁本內(nèi)酯的含量測(cè)定。

色譜條件：PhenomenexLuna?C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-水（B），梯度洗脫：0～5 min，50%A；5～17 min，50%～100%A；17～20 min，100%A。柱溫30 ℃，體積流量1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)290 nm，進(jìn)樣量5 μL。此色譜條件用于藁本內(nèi)酯含量測(cè)定。

2.3.1.2 桂枝藥材及飲片中肉桂酸含量測(cè)定方法 供試品溶液制備：分別取15 批桂枝藥材粉末（過(guò)4 號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置50 mL 具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定總質(zhì)量，超聲30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用100%甲醇補(bǔ)質(zhì)量，搖勻，0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 mL，100%甲醇定容至25 mL 容量瓶，搖勻后取上清液用于桂皮醛的含量測(cè)定。

色譜條件：ThermoSyncronis C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫：0～10 min，20～29%A；10～30 min，29%A；30～32 min，29%～32%A；32～40 min，32%A；柱溫25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)275 nm，體積流量1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。此色譜條件用于肉桂酸含量測(cè)定。

2.3.2 方法學(xué)考察 因當(dāng)歸中的藁本內(nèi)酯和桂枝中的肉桂酸為新增定量成分，《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）未規(guī)定其檢測(cè)方法，故優(yōu)化前處理方法后進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.3.2.1 線性關(guān)系考察 取藁本內(nèi)酯、肉桂酸對(duì)照品適量，精密稱定，分別加純甲醇定容至5 mL，得到4.90 mg/mL 藁本內(nèi)酯和0.49 mg/mL 肉桂酸母液，稀釋系列濃度梯度進(jìn)樣后以對(duì)照品溶液濃度作為橫坐標(biāo)（X），以不同濃度對(duì)照品進(jìn)樣所得峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各指標(biāo)成分線性回歸方程為：藁本內(nèi)酯，Y=8 024.7X+163 583（r＝0.999 9）；肉桂酸Y=1.348X+6.247 3（r＝0.999 5），結(jié)果表明，兩個(gè)成分依次在153.190～2 451.000、0.984～492.000 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 分別取當(dāng)歸和桂枝藥材，按“2.3.1”項(xiàng)方法制備用于藁本內(nèi)酯和肉桂酸含量測(cè)定的供試品溶液，并按照對(duì)應(yīng)成分的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯和肉桂酸峰面積RSD均小于0.41%，表明儀器精密度良好。

2.3.2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別取當(dāng)歸和桂枝藥材，按“2.3.1”項(xiàng)方法制備用于藁本內(nèi)酯和肉桂酸含量測(cè)定的供試品溶液，并按照對(duì)應(yīng)成分的色譜條件進(jìn)樣，分別于樣品制備后0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯和肉桂酸峰面積RSD 均小于1.14%，表明供試品溶液在48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別取同一批次當(dāng)歸和桂枝藥材6 份，按“2.3.1”項(xiàng)方法制備用于藁本內(nèi)酯和肉桂酸含量測(cè)定的供試品溶液，并按照對(duì)應(yīng)成分的色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯和肉桂酸含量的RSD 均小于2.12%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.2.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 按《中華人民共和國(guó)藥典》（2020 年版）規(guī)定，分別以指標(biāo)成分含量的50%、100%、150%加入藁本內(nèi)酯和肉桂酸對(duì)照品各3 份，按“2.3.1”項(xiàng)方法制備供試品溶液，上述各供試品溶液按照對(duì)應(yīng)成分的色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果顯示藁本內(nèi)酯和肉桂酸的平均加樣回收率分別為97.54%、96.41%，RSD 分別為3.98%、2.75%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.3.3 DSD 處方藥味各指標(biāo)成分在藥材、飲片、水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中的含量測(cè)定結(jié)果 以隨行對(duì)照品溶液為對(duì)照，測(cè)定15 批DSD 中6 個(gè)指標(biāo)成分的含量，結(jié)果見表1 和表2。

表1 15 批DSD 藥材和飲片中指標(biāo)成分的含量 %

表2 15 批DSD 水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)成分的含量

2.3.4 DSD 處方藥味各指標(biāo)成分含量在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)之間的傳遞規(guī)律 計(jì)算藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)成分含量的轉(zhuǎn)移率，考察其傳遞規(guī)律，結(jié)果見表3 和圖1。轉(zhuǎn)移率=（w×m×5）/（W×M）×100%（w：取100 mL 水煎液凍干所得DSD物質(zhì)基準(zhǔn)中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；m：DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)的質(zhì)量；W：飲片中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；M：處方中飲片的質(zhì)量）。

圖1 15 批物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)性成分平均轉(zhuǎn)移率（±s）

表3 藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)中指標(biāo)成分含量的轉(zhuǎn)移率 %

2.4 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜的建立

2.4.1 色譜條件 本研究前期已建立了DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜[14]。色譜條件：Phenomenex Luna?C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0.05%磷酸水溶液（B），洗脫條件：0～8 min，5%～10%A；8～15 min，10%～13%A；15～24 min，13%～15%A；24～30 min，15%～17%A；30～34 min，17%～20%A；34～45 min，20%～30%A；45～50 min，30%～45%A；50～65min，45%～80%A；65～67 min，80%～95%A；67～70 min，95%A。柱溫30 ℃，體積流量1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm 和290 nm，進(jìn)樣量10 μL。特征圖譜見圖2。

圖2 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜

對(duì)DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜進(jìn)行特征峰歸屬分析，共歸屬20 個(gè)特征峰。峰1、2、3、4、10、17 歸屬白芍，峰12、13、14、15、16 歸屬細(xì)辛，峰6 歸屬木通，峰5、7、8、9、11、18 歸屬甘草，峰19 歸屬桂枝，峰20歸屬當(dāng)歸。經(jīng)與對(duì)照品比對(duì)共指認(rèn)6 個(gè)特征成分，分別是4 號(hào)峰芍藥苷、5 號(hào)峰甘草苷、11 號(hào)峰甘草酸銨、14 號(hào)峰細(xì)辛脂素、19 號(hào)峰桂皮醛、20 號(hào)峰藁本內(nèi)酯。大棗在此條件下沒有色譜信息，后續(xù)將進(jìn)行進(jìn)一步研究。

2.4.2 精密度考察 精密度：取同一供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次。以芍藥苷（230 nm）和桂皮醛（290 nm）為參照峰，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD 均小于3.0%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性考察 重復(fù)性：平行制備同一批凍干粉（S3）供試品溶液6 份，按“2.4.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣。以芍藥苷（230 nm）和桂皮醛（290 nm）為參照峰，各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD 均小于3.0%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)色譜條件，分別于制樣后0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣。以

芍藥苷（230 nm）和桂皮醛（290 nm）為參照峰，各特征峰在24 h 內(nèi)相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3.0%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜的測(cè)定 按“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定。將15 批物質(zhì)基準(zhǔn)樣品特征圖譜導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2012 年版），以S1 為參照?qǐng)D譜，時(shí)間窗寬度為0.1，采用中位數(shù)法，進(jìn)行全譜峰匹配，計(jì)算相似度。

15 批DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜疊加圖見OSID。直觀分析15 批基準(zhǔn)樣品特征圖譜，批次間色譜峰的數(shù)量及響應(yīng)值差異較??；15 批物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜R 的相似度均大于0.90。

2.5 DSD 特征圖譜物質(zhì)群量質(zhì)傳遞規(guī)律研究

2.5.1 特征峰個(gè)數(shù)的傳遞規(guī)律研究 分別將15 批當(dāng)歸藥材、桂枝藥材、白芍藥材、細(xì)辛藥材、木通藥材、甘草藥材、大棗藥材、DSD 基準(zhǔn)樣品的特征圖譜擬合出1 張對(duì)照?qǐng)D譜，通過(guò)將單味藥材的對(duì)照?qǐng)D譜與基準(zhǔn)樣品的對(duì)照?qǐng)D譜進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)單味藥的特征峰均可傳遞到全方基準(zhǔn)樣品的對(duì)照譜圖中，見圖3。白芍傳遞了6 個(gè)特征峰，細(xì)辛傳遞了5 個(gè)特征峰，木通傳遞了1 個(gè)特征峰，甘草傳遞了6 個(gè)特征峰，桂枝傳遞了1 個(gè)特征峰，當(dāng)歸傳遞了1 個(gè)特征峰，大棗在此條件下沒有色譜信息。表明從藥材到物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜的傳遞在特征峰個(gè)數(shù)方面是穩(wěn)定的。

2.5.2 特征峰保留時(shí)間的傳遞規(guī)律研究 利用1～20 號(hào)特征峰在單味藥材、飲片、水煎液和基準(zhǔn)樣品特征圖譜中的保留時(shí)間，按公式計(jì)算特征峰在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜傳遞中保留時(shí)間的相對(duì)偏移量，結(jié)果見表4。由結(jié)果可知，保留時(shí)間靠后的特征峰，其相對(duì)偏移量較小，最大偏移量為0.008，在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜傳遞中，20 個(gè)特征峰的保留時(shí)間相對(duì)偏移量平均值較小，表明特征圖譜的傳遞在特征峰的保留時(shí)間方面是穩(wěn)定的。以藥材（Tb）、飲片（Ta）為例，保留時(shí)間的相對(duì)偏移量＝|Ta-Tb|/Tb。

表4 特征峰在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜傳遞中的保留時(shí)間相對(duì)偏移量

2.5.3 特征峰相對(duì)峰面積的傳遞規(guī)律研究 對(duì)15 批DSD 處方中的藥材、飲片、水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中各特征峰進(jìn)行測(cè)定，以每個(gè)特征峰峰面積與該峰所屬藥味特征峰的總面積（指標(biāo)性成分除外）的比值作為每個(gè)特征峰的相對(duì)峰面積。計(jì)算各藥味中特征峰的相對(duì)峰面積在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)的傳遞過(guò)程中的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表5。由結(jié)果可知，特征峰相對(duì)峰面積的傳遞率大部分在平均值±30%波動(dòng)，表明特征圖譜能夠在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)過(guò)程中穩(wěn)定傳遞。其中，20 個(gè)特征峰中4（芍藥苷）、11（甘草酸銨）、14（細(xì)辛脂素）、19（桂皮醛）、20（藁本內(nèi)酯）號(hào)峰為指標(biāo)性成分，已對(duì)其單獨(dú)進(jìn)行了含量的轉(zhuǎn)移率研究。

表5 藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)傳遞中各藥味特征峰的相對(duì)峰面積及轉(zhuǎn)移率

2.6 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)制備過(guò)程中各藥味出膏率傳遞規(guī)律研究 按“2.2”項(xiàng)方法制備15 批物質(zhì)基準(zhǔn)樣品，測(cè)定其干膏率，了解飲片-物質(zhì)基準(zhǔn)傳遞過(guò)程中干膏率的變化規(guī)律，根據(jù)各飲片投藥量在全方投藥量的占比以及各飲片的干膏率計(jì)算全方中各單味藥折算加和后的理論干膏率。理論干膏率（%）=∑單味藥干膏率×單味藥生藥量/全方生藥量×100%。對(duì)比理論干膏率與實(shí)際干膏率，計(jì)算傳遞率：傳遞率（%）=實(shí)際干膏率/理論干膏率×100%。

15 批DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)實(shí)際干膏率為13.37%～16.64%，且各批次干膏率未出現(xiàn)平均值±30%范圍之外的離散值。物質(zhì)基準(zhǔn)的實(shí)際干膏率均低于理論干膏率，可能是各成分間的相互作用導(dǎo)致的，傳遞率平均值為55.16%，RSD 為6.1%，表明各批次物質(zhì)基準(zhǔn)干膏率傳遞穩(wěn)定。見表6、圖4。

圖4 DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)干膏率傳遞規(guī)律分析（±s）

表6 15 批DSD 單味藥飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)的干膏率及傳遞率結(jié)果 %

3 討論

經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)作為后續(xù)復(fù)方制劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制的參照，在研究過(guò)程中具有核心地位[16]，因此對(duì)DSD 從藥材到物質(zhì)基準(zhǔn)的量質(zhì)傳遞過(guò)程進(jìn)行分析，明確其質(zhì)量控制指標(biāo)及范圍具有重要意義。本研究以指標(biāo)性成分含量、特征圖譜和干膏率3 個(gè)方面作為CQAs[17]，考察其在不同工藝單元中的傳遞，從點(diǎn)到面地闡明經(jīng)典名方CQAs 從藥材、飲片炮制到水煎煮再到濃縮凍干的長(zhǎng)流程制備過(guò)程中的傳遞規(guī)律，以實(shí)現(xiàn)對(duì)DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量控制，為構(gòu)建全過(guò)程質(zhì)量控制體系提供數(shù)據(jù)支撐，為其復(fù)方制劑的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

3.1 指標(biāo)性成分含量傳遞規(guī)律分析 在DSD 指標(biāo)性成分傳遞規(guī)律研究中，發(fā)現(xiàn)各成分在“飲片-水煎液”過(guò)程中轉(zhuǎn)移率較低，可能是由于提取方法不同所致，藥材飲片采用《中華人民共和國(guó)藥典》方法，多為醇超聲提取，而水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)為水煎提取，由于溫度過(guò)高、提取溶劑為水，易造成揮發(fā)性成分損失、醇溶性成分提取不完全。芍藥苷含量在藥材、飲片、水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)之間的轉(zhuǎn)移率穩(wěn)定，藥材-飲片有2 個(gè)批次的轉(zhuǎn)移率高于平均值的130%，可能是藥材取樣隨機(jī)性較差，導(dǎo)致藥材中的含量低于飲片中含量。第5、11、14 批桂皮醛在“水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)”傳遞率波動(dòng)較大，可能是桂皮醛本身穩(wěn)定性差，煎煮工藝參數(shù)的微小波動(dòng)導(dǎo)致水煎液中桂皮醛含量發(fā)生了變化。本實(shí)驗(yàn)中甘草指標(biāo)性成分甘草酸在DSD 水煎液和物質(zhì)基準(zhǔn)中含量波動(dòng)較大，而對(duì)比“水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)”轉(zhuǎn)移率均在平均值±30%，調(diào)查文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)[18]，甘草因產(chǎn)地、生長(zhǎng)時(shí)間、采收時(shí)間、取樣部位不同都會(huì)導(dǎo)致成分含量的較大差異，例如根木質(zhì)部的甘草酸含量普遍低于根皮部。因此考慮甘草較為復(fù)雜，不同部位成分差異大，建議在今后進(jìn)行含有甘草方劑物質(zhì)基準(zhǔn)的制備時(shí)將甘草混批投料，并嚴(yán)格將飲片按部位及大小分等，以確保物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量的穩(wěn)定。藁本內(nèi)酯在“藥材-飲片”過(guò)程中含量降低，平均轉(zhuǎn)移率為65.76%，可能與飲片的炮制工藝和飲片貯存有關(guān)，與已有文獻(xiàn)的研究結(jié)果一致[19]，當(dāng)歸飲片中藁本內(nèi)酯含量與同批次藥材相比顯著降低，而新鮮切制的當(dāng)歸飲片中藁本內(nèi)酯的含量與藥材相比變化并不明顯。通過(guò)以上分析可以得出，取樣的隨機(jī)性、原料藥質(zhì)量的均一性以及對(duì)制備工藝參數(shù)的嚴(yán)格控制均是保證指標(biāo)性成分穩(wěn)定傳遞的基礎(chǔ)和保障。

3.2 物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜傳遞規(guī)律分析 對(duì)于無(wú)法進(jìn)行含量測(cè)定的特征峰，以相對(duì)峰面積轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，進(jìn)行了其在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)中特征圖譜傳遞規(guī)律的研究。結(jié)果顯示從藥材到飲片一些特征峰的相對(duì)峰面積轉(zhuǎn)移率較大，推測(cè)為凈制去除了非藥用部位。從飲片到水煎液，9、10 和13 號(hào)特征峰峰面積轉(zhuǎn)移率較大，同時(shí)注意到歸屬到各自藥材的15、16、17 號(hào)特征峰轉(zhuǎn)移率較低，可能是因復(fù)方中多成分間的相互作用促進(jìn)成分在水煎液中溶出或轉(zhuǎn)移；水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)之間各特征峰相對(duì)峰面積的轉(zhuǎn)移率變化浮動(dòng)較小，說(shuō)明凍干工藝對(duì)復(fù)方中各成分影響微小。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)制備了15 批次DSD 凍干粉作為物質(zhì)基準(zhǔn)，從特征圖譜物質(zhì)群量質(zhì)傳遞、指標(biāo)性成分含量轉(zhuǎn)移率和干膏率轉(zhuǎn)移率3 個(gè)方面對(duì)DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)進(jìn)行CQAs 傳遞規(guī)律研究。結(jié)果表明，DSD 物質(zhì)基準(zhǔn)的特征圖譜、指標(biāo)性成分含量和干膏率可在藥材-飲片-水煎液-物質(zhì)基準(zhǔn)中穩(wěn)定傳遞。本研究初步構(gòu)建了DSD 全過(guò)程質(zhì)量控制體系，為DSD 全過(guò)程質(zhì)量控制提供數(shù)據(jù)支撐，為其復(fù)方制劑的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。