劉 璐 袁亞宏 岳田利,2

(1. 西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712100；2. 西北大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 西安 710069)

除醫(yī)學(xué)藥物治療外，茶療法因人群飲用廣泛、購(gòu)買(mǎi)便利，是預(yù)防與治療高血壓的一種很好的輔助方法[1]。從茯磚茶中分離出的冠突散囊菌(EurotiumCristatum)，也稱(chēng)“金花菌”，可以與多種發(fā)酵原料相互作用，通過(guò)分泌微生物酶使發(fā)酵基質(zhì)具有獨(dú)特的風(fēng)味和口感[2-3]。在發(fā)酵過(guò)程中茶多酚被轉(zhuǎn)化成兒茶素衍生物、黃酮類(lèi)化合物及其苷類(lèi)、酚酸類(lèi)、生物堿類(lèi)和萜類(lèi)等多種成分，具有抗高血壓、抗氧化、減輕體重、緩解代謝綜合征和調(diào)節(jié)腸道等功效[4]。

綠茶是世界上最受歡迎的飲料之一，含有豐富的生物活性物質(zhì)，長(zhǎng)期飲用綠茶和綠茶產(chǎn)品對(duì)人體健康有益，特別是對(duì)癌癥、心血管疾病和糖尿病人群[5]。研究[6]表明，綠茶對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活性的抑制率比發(fā)酵生產(chǎn)的紅茶和黑茶要高，可能是多酚類(lèi)等物質(zhì)含量和性質(zhì)發(fā)生了變化。目前，葛根提取物已被應(yīng)用于臨床上的冠心病心絞痛、高血壓的治療，其對(duì)高鹽飲食誘導(dǎo)的小鼠有降壓作用[7]，且可改善L-NAME誘導(dǎo)的高血壓大鼠心肌肥大和血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹等癥狀[8]。

研究擬利用冠突散囊菌發(fā)酵綠茶與葛根基質(zhì)，以ACE酶活性的體外抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察基質(zhì)含水量、葛根添加量和冠突散囊菌孢子懸浮液接種量對(duì)ACE抑制活性的影響。同時(shí)闡述葛根降血壓茶在動(dòng)物體內(nèi)的生物利用度，探究將不同劑量的發(fā)酵茶液灌胃自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)后對(duì)其血壓的影響，了解葛根降血壓茶在動(dòng)物體內(nèi)24 h內(nèi)發(fā)揮的作用，為更好分析可能的降壓機(jī)制，從其中提取或開(kāi)發(fā)出降血壓的新型茶類(lèi)產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)材料

葛根、卡托普利：市售；

綠茶：陜西省安康市圣泰生物科技有限責(zé)任公司；

冠突散囊菌：從湖南省益陽(yáng)茶廠伏磚茶中分離，保存于西北農(nóng)林科技大學(xué)健康食品制造與安全實(shí)驗(yàn)室；

兔肺ACE、馬尿酰—組氨?！了?HHL，≥98%)、馬尿酸(Hip，98%)：西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司；

冰乙酸(≥99.9%)、甲醇(≥99.9%)：色譜級(jí)，西安化學(xué)試劑廠；

硼酸、氯化鈉、濃鹽酸(36%)：分析純，西安化學(xué)試劑廠。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

體重220～240 g，11周齡， 30只SPF級(jí)雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)， 6只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠，包括飼料和墊料，飼養(yǎng)于西北農(nóng)林科技大學(xué)健康食品制造與安全實(shí)驗(yàn)室，購(gòu)買(mǎi)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀：LC-2030型，馬來(lái)西亞島津公司；

恒溫恒濕培養(yǎng)箱：MP160B型，上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；

恒溫水浴鍋：HH-ZK2型，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：YRE-501型，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；

高速冷凍離心機(jī)：HC-3018R型，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；

超純水機(jī)：ULPHW-Ⅱ型，四川優(yōu)普超純科技有限公司；

紅外水分測(cè)定儀：MA35M-1CN型，上海賽多利斯貿(mào)易有限公司；

智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)：CODA-MNTR型，北京世聯(lián)博研科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 冠突散囊菌孢子懸浮液的制備

(1) PDA培養(yǎng)基活化冠突散囊菌：稱(chēng)取去皮的馬鈴薯 200 g，瓊脂20 g和葡萄糖20 g，量取1 000 mL蒸餾水。將新鮮購(gòu)買(mǎi)的馬鈴薯去皮清洗干凈，并切成大小均一的塊狀放入合適的鍋中，將量好的蒸餾水倒入鍋中并在一定溫度下煮沸 20 min。涼至室溫后用8層紗布過(guò)濾，在濾液中加入稱(chēng)好的葡萄糖和瓊脂，加熱溶解，并定容至1 000 mL，121 ℃高壓蒸汽滅菌15 min。

(2) 孢子懸浮液制備：將保藏在斜面上的分離純化的菌株接種至PDA培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d，無(wú)菌操作條件下，挑取菌絲轉(zhuǎn)接到新鮮的PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，28 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d。無(wú)菌操作條件下，在PDA培養(yǎng)基上加入5 mL無(wú)菌生理鹽水，涂抹后全部倒入100 mL無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)醚蛴?jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)(0.5～2×105個(gè)/mL)，備用。

1.3.2 不同發(fā)酵程度的葛根茶制備 稱(chēng)取20 g綠茶于滅菌鍋汽蒸，加入3 g葛根粉(葛根打碎，過(guò)60目篩)，采用超純水調(diào)整發(fā)酵基質(zhì)含水量為25%，121 ℃滅菌鍋汽蒸15 min，冷卻后接種3%的冠突散囊菌孢子懸浮液，于28 ℃、78%濕度下分別培養(yǎng)5，7，9，11，13 d，取出后自然干燥5 h后備用。

1.3.3 單因素試驗(yàn)

(1) 葛根添加量：按1.3.2進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間7 d，分別考察葛根添加量(1，2，3，4，5 g)對(duì)發(fā)酵茶ACE活性抑制率的影響。

(2) 基質(zhì)含水量：按1.3.2進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間7 d，分別考察基質(zhì)含水量(15%，20%，25%，30%，35%)對(duì)發(fā)酵茶ACE活性抑制率的影響。

(3) 孢子懸浮液接種量：按1.3.2進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間7 d，分別考察孢子懸浮液接種量(1%，2%，3%，4%，5%)對(duì)發(fā)酵茶ACE活性抑制率的影響。

1.3.4 正交優(yōu)化試驗(yàn) 結(jié)合單因素條件優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果，選取葛根添加量、含水量和孢子懸浮液接種量3個(gè)因素，設(shè)計(jì)L9(34)正交優(yōu)化試驗(yàn)，分析其對(duì)ACE酶活性體外抑制率的影響。

1.3.5 ACE活性抑制率測(cè)定

(1) 樣品提?。簩l(fā)酵茶粉碎，過(guò)60目篩。以無(wú)水乙醇為提取媒介，按料液比1∶10 (g/mL)，常溫超聲(100 W，20 kHz)提取30 min，提取兩次，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液減壓濃縮，得到乙醇浸膏，再將其溶于10 mL SSB(pH 8.3)，即得100 mg/mL的發(fā)酵茶提取物，4 ℃貯藏備用。

(2) 馬尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：取濃度為1.00 mmo/L的馬尿酸標(biāo)樣，用超純水分別稀釋成0.01，0.05，0.10，0.50，1.00 mmo/L系列濃度，在最佳流動(dòng)相和波長(zhǎng)下用HPLC測(cè)定Hip的峰面積，Hip峰面積與濃度的線性關(guān)系為y=1 756.35x+101.56，R2=0.999 5。

(3) ACE活性抑制率測(cè)定：通過(guò)HPLC檢測(cè)馬尿酸峰面積來(lái)計(jì)算抑制ACE活性水平，并按式(1)計(jì)算ACE酶活性的體外抑制率。

R=(CA-CS)/(CA-C0)×100%，

(1)

式中：

R——體外抑制率，%；

CA——對(duì)照組馬尿酸濃度，mmol/L；

CS——樣品組馬尿酸濃度，mmol/L；

C0——空白對(duì)照組馬尿酸濃度，mmol/L。

HPLC檢測(cè)條件：檢測(cè)器SPD-M20A，Hypersil ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相A為0.1%冰乙酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇溶液，流速0.8 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)228 nm。梯度洗脫步驟見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫表Table 1 Gradient elution procedure

1.3.6 試驗(yàn)動(dòng)物分組及劑量設(shè)置 飼養(yǎng)環(huán)境(25±1) ℃，相對(duì)濕度55%～65%，晝夜明暗交替，自主攝食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行灌胃試驗(yàn)。將根據(jù)正交試驗(yàn)優(yōu)化得到的發(fā)酵茶打碎成粉，稱(chēng)取6 g，加入100 mL 100 ℃蒸餾水，沸水浴加熱30 min，過(guò)濾，旋蒸，100 mL蒸餾水復(fù)溶，得到60 g/L的茶液提取物。每組大鼠按1 mL/100 g調(diào)整灌胃量。試驗(yàn)前，隔天測(cè)定大鼠血壓，待穩(wěn)定適應(yīng)后開(kāi)始記錄試驗(yàn)。自發(fā)性高血壓大鼠給藥前血壓在適應(yīng)性喂養(yǎng)后測(cè)量，間隔2 d后再次測(cè)量，重復(fù)3次取平均值為給藥前初始值。試驗(yàn)組分別在給藥后的2，4，6，12，24 h測(cè)定自發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓。

將30只SHR隨機(jī)分為5組(每組6只)：茶高、中、低劑量組、模型對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組；12只WKY大鼠隨機(jī)分為2組(每組6只)：正常對(duì)照組、茶高劑量灌胃組。茶高劑量組(SHR-H)，600 mg/kg葛根降血壓茶液；茶中劑量組(SHR-M)，300 mg/kg葛根降血壓茶液；茶低劑量組(SHR-L)，150 mg/kg葛根降血壓茶液；模型對(duì)照組(SHR-NaCl)，相應(yīng)劑量生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組(SHR-卡托普利)，卡托普利，根據(jù)人日用量通過(guò)體表面積換算得到劑量為1 mg/kg；正常高劑量組(WKY-H)，高劑量葛根降血壓茶液；正常對(duì)照組(WKY)，相應(yīng)劑量生理鹽水。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理 所有試驗(yàn)重復(fù)3次取平均值，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著性檢驗(yàn)為T(mén)檢驗(yàn)(P<0.05)，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，Excel 2016軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)ACE酶活性體外抑制率的影響

由圖1可知，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中，除發(fā)酵第9天的茶樣抑制率顯著降低外，其他發(fā)酵茶的ACE酶活性抑制率均高于未發(fā)酵的綠茶，且發(fā)酵第7天和第13天的抑制率較高，分別為74.68%和76.03%。第7天的發(fā)酵茶被賦予獨(dú)特的“金花菌”香，有豐富醇香的氣味且苦澀程度降低，與龔受基等[9]的結(jié)果類(lèi)似。發(fā)酵同時(shí)還掩蓋了葛根的中藥味道和氣味，與張波等[10]的結(jié)論類(lèi)似。發(fā)酵第13天的發(fā)酵茶存在明顯霉味，感官品質(zhì)上遜色于第7天的回甘茶香，可能是由于綠茶基質(zhì)中酚類(lèi)及氨基酸類(lèi)物質(zhì)被生物轉(zhuǎn)化，且醇類(lèi)化合物是發(fā)酵茶中產(chǎn)生花香和木香氣味的揮發(fā)性物質(zhì)[11]。故選取第7天為發(fā)酵終止時(shí)間。

圖1 發(fā)酵過(guò)程中ACE酶活性的體外抑制率變化Figure 1 Changes in ACE-inhibitory rate during fermentation

2.2 各因素對(duì)葛根降壓茶ACE抑制率的影響

2.2.1 葛根添加量 由圖2可知，當(dāng)葛根添加量為1 g時(shí)，ACE酶活性體外抑制率最高(75.43%)，當(dāng)葛根添加量繼續(xù)增大時(shí)，ACE酶活性抑制率呈下降趨勢(shì)。當(dāng)葛根添加量超過(guò)3 g時(shí)，發(fā)酵茶的ACE酶活性抑制率低于原始綠茶原料(70.11%)。在發(fā)酵基質(zhì)中加入葛根是因?yàn)槠浠钚晕镔|(zhì)，如葛根素可通過(guò)RAAS系統(tǒng)影響自發(fā)性高血壓大鼠的血壓，而ACE是經(jīng)典RAAS過(guò)度激活的途徑之一[12]。發(fā)酵過(guò)程中，冠突散囊菌的代謝和生物轉(zhuǎn)化可使茶多酚類(lèi)物質(zhì)含量有不同程度的下降[9]，也可將葛根中的糖苷型異黃酮轉(zhuǎn)化為苷元型異黃酮[13]。ACE酶活性體外抑制率隨葛根添加量的增大而下降，可能是因?yàn)榘l(fā)酵基質(zhì)中綠茶基質(zhì)比例降低，或具降壓潛力的活性物質(zhì)的成分和含量比例變化，不利于抑制ACE活性。研究[14]表明，葛根降血壓茶中大豆苷和染料木苷的含量與發(fā)酵過(guò)程中冠突散囊菌孢子數(shù)量、微生物酶活(多酚氧化酶等)和ACE抑制率呈反比，即葛根的添加，不利于發(fā)酵茶的降壓功效改善。故選擇葛根添加量為1～3 g。

圖2 葛根添加量對(duì)ACE抑制活性的影響Figure 2 Effects of pueraria addition on ACE- inhibitory rate

2.2.2 基質(zhì)含水量 由圖3可知，從ACE酶活性體外抑制率來(lái)看，基質(zhì)的最適含水量為20%～30%。ACE酶活性體外抑制率隨基質(zhì)含水量的進(jìn)一步增加而下降，且最優(yōu)含水量明顯低于文獻(xiàn)[15]。這可能是因?yàn)槲⑸锞甑暮粑Ｊ郊吧L(zhǎng)代謝促使分泌的降解酶(如蛋白酶)適合的含水量不同[16]，致使代謝產(chǎn)物的生成受到影響，從而影響ACE酶活性抑制率。因此，通過(guò)對(duì)發(fā)酵基質(zhì)含水量的控制，可以獲得較高的ACE酶活性抑制率。

圖3 基質(zhì)含水量對(duì)ACE抑制活性的影響Figure 3 Effects of water content on ACE-inhibitory rate

2.2.3 孢子懸浮液接種量 由圖4可知，冠突散囊菌接種量與ACE酶活性體外抑制率呈正比，當(dāng)孢子懸浮液接種量為5%時(shí)，ACE活性抑制率最高，表明冠突散囊菌決定了發(fā)酵成品中具有抑制ACE酶活的生物活性物質(zhì)生成。有研究表明，在適當(dāng)接種量范圍內(nèi)，冠突散囊菌菌株大量生長(zhǎng)繁殖，微生物降解酶如纖維素酶、多酚氧化酶活性會(huì)明顯增加[2]，釋放多種生物活性代謝物如類(lèi)黃酮、茶多酚衍生物、生物堿等[17]，從而非競(jìng)爭(zhēng)性抑制ACE活性。冠突散囊菌在發(fā)酵過(guò)程中分泌了多種酶，如多酚氧化酶、α-淀粉酶等，使基質(zhì)中活性物質(zhì)(茶多酚、生物堿等)含量發(fā)生變化，最終影響發(fā)酵茶的ACE抑制率[14]，說(shuō)明選擇較大的接種量可以有效縮短發(fā)酵周期，且采用冠突散囊菌固態(tài)發(fā)酵是一種有效的創(chuàng)新工藝思路。故選擇孢子懸浮液接種量為3%～5%。

圖4 孢子懸浮液接種量對(duì)ACE抑制活性的影響Figure 4 Effects of spore suspension volume on ACE-inhibitory rate

2.3 正交優(yōu)化試驗(yàn)

以單因素試驗(yàn)為基礎(chǔ)，對(duì)葛根添加量、基質(zhì)含水量和孢子懸浮液接種量進(jìn)行正交優(yōu)化設(shè)計(jì)以確定制備葛根降壓茶的最優(yōu)發(fā)酵條件。正交試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表2，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 Orthogonal test design

由表3可知，各因素對(duì)ACE酶活性抑制率影響大小依次為A>C>B，即葛根添加量對(duì)抑制ACE酶活性影響最大，孢子懸浮液接種量次之，基質(zhì)含水量對(duì)發(fā)酵茶的ACE抑制率影響最小。發(fā)酵茶的最優(yōu)條件為A2B1C3，即葛根添加量2 g、基質(zhì)含水量20%、孢子懸浮液接種量5%，此條件下測(cè)得ACE酶活性抑制率平均值為76.13%(n=3)，且得到的葛根降壓茶氣味醇香、滋味回甘。發(fā)酵結(jié)束后高效液相色譜定量分析結(jié)果表明，茶多酚、生物堿等活性物質(zhì)含量發(fā)生了不同程度的變化，同時(shí)ACE酶活性抑制率也顯著提高。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 3 Orthogonal test design and results

2.4 給藥對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的影響

由表4可知，給藥4 h后，SHR-卡托普利組相較SHR-NaCl組最高降低了(2.81±0.57) kPa；與給藥前相比，灌胃卡托普利后SHR收縮壓降低了(2.48±0.44) kPa。SHR-H組在灌胃6 h后達(dá)到收縮壓的最低值，與SHR-NaCl組相比降低了(2.42±0.22) kPa，與給藥前相比降低了(2.14±0.56) kPa。與SHR-H組不同的是，SHR-M組在灌胃2 h后出現(xiàn)血壓升高的現(xiàn)象，隨后與SHR-H組相似，在灌胃6 h后達(dá)到最低收縮壓，比對(duì)照組降低了(1.20±0.27) kPa，且在6 h時(shí)相較SHR-M的給藥前降低了(1.28±0.27) kPa。SHR-M組整體降壓效果較SHR-H組弱，灌胃24 h后收縮壓也回升至給藥前的初始血壓。SHR-L組大鼠狀態(tài)較其他灌胃組躁動(dòng)，表現(xiàn)為好斗。SHR-L組的收縮壓在灌胃4 h后開(kāi)始降低明顯，并在12 h達(dá)到最大降壓效果，較SHR-NaCl組降低了(1.17±0.62) kPa，與給藥前相比在灌胃6 h時(shí)降低了(1.24±0.14) kPa，降壓效果與SHR-M組相似。說(shuō)明灌胃卡托普利后降壓作用可維持18～20 h，SHR-H組可維持6～12 h，SHR-M組可維持6 h，而SHR-L組可維持約8 h。隨著葛根降血壓茶灌胃濃度的增加，SHR大鼠的收縮壓降低幅度也隨之變大，說(shuō)明降壓效果與葛根降血壓茶的濃度有一定相關(guān)性，與鄔秀宏等[18]的研究結(jié)果相似。綜上，灌胃葛根降血壓茶對(duì)SHR大鼠具有顯著的降壓作用，且發(fā)酵茶的濃度越高，降壓作用越明顯。

發(fā)酵茶之所以可以對(duì)SHR起到急性降壓作用，是因其活性物質(zhì)經(jīng)微生物酶分解后生成的代謝產(chǎn)物作用于自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)的高血壓發(fā)病機(jī)制。ECG、大豆苷、染料木素、EC和大豆苷元是葛根降血壓茶中抑制ACE酶活性最相關(guān)的物質(zhì)，且添加葛根有利于增加發(fā)酵茶對(duì)ACE酶活性的體外抑制率[14]，這有利于發(fā)酵茶改善腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)(RAAS)調(diào)節(jié)。此外，羅顯揚(yáng)等[19]發(fā)現(xiàn)“高原明殊”綠茶顯著降低了SHR大鼠的血漿Ang Ⅱ含量而發(fā)揮降壓功效。李汝月等[20]發(fā)現(xiàn)霉茶蛋白有一定降壓作用，可改善SHR腎臟組織炎性病灶，并可不同程度地降低TNF-α和TLR4等炎性因子的表達(dá)水平，從而對(duì)SHR不僅起到降壓作用，還對(duì)腎臟有保護(hù)作用。蔣榮華等[21]也發(fā)現(xiàn)廣西甜茶多酚能夠提高SHR血清中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)活性，改善左心室肥厚，最終明顯降低SHR的SBP和舒張壓(DBP)。另外，周堯等[22]檢測(cè)超微綠茶粉在體外消化的活性物質(zhì)釋放量后發(fā)現(xiàn)，減少的黃酮類(lèi)釋放量和增加的兒茶素類(lèi)物質(zhì)釋放有利于促進(jìn)茶在體內(nèi)的生物利用率。值得注意的是，葛根降血壓茶對(duì)SHR 在24 h后的急性降壓作用不再顯著，說(shuō)明需長(zhǎng)期服用。

2.5 給藥對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的影響

由表5可知，與SHR-NaCl組收縮壓相比，SHR-卡托普利組在灌胃12 h時(shí)降低了(1.94±0.15) kPa，SHR-H組在灌胃6 h時(shí)降低了(0.88±0.40) kPa，SHR-M組在灌胃6 h時(shí)降低了(0.66±0.40) kPa，并保持到12 h，SHR-L組的降舒張壓作用較弱，但在灌胃6 h也降低了(0.49±0.63) kPa。與陽(yáng)性對(duì)照組相比，SHR-H組和SHR-L組在灌胃12 h的舒張壓顯著高于SHR-卡托普利組。與給藥前相比，SHR-卡托普利組顯著降低了SHR舒張壓，效果為4組給藥組中最顯著的，SHR-H組在灌胃4 h時(shí)下降顯著，SHR-M組在灌胃6 h時(shí)有明顯降壓作用，而SHR-L組在灌胃24 h時(shí)對(duì)SHR的舒張壓降壓效果不明顯。說(shuō)明葛根降血壓茶對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的舒張壓作用也依賴(lài)于灌胃濃度，濃度越高，舒張壓的下降效果越明顯，而卡托普利對(duì)SHR舒張壓的改善作用優(yōu)于葛根降血壓茶。

由表4、表5可知，與給藥前相比，t檢驗(yàn)分析表明WKY-H在灌胃24 h內(nèi)舒張壓和收縮壓均無(wú)顯著變化，即使是高劑量的灌胃，雖然有波動(dòng)趨勢(shì)但最終基本維持在正常的舒張壓和收縮壓水平，說(shuō)明葛根降血壓茶對(duì)正常大鼠的血壓影響不大。

表4 各試驗(yàn)組對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠尾動(dòng)脈收縮壓的影響?Table 4 Effects on systolic blood pressure of spontaneously hypertensive rats (n=6)

表5 各試驗(yàn)組對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠尾動(dòng)脈舒張壓的影響?Table 5 Effects on diastolic blood pressure of spontaneously hypertensive rats (n=6)

3 結(jié)論

試驗(yàn)表明，在20 g綠茶基質(zhì)的基礎(chǔ)上，添加2 g葛根、控制20%基質(zhì)含水量、接種5%冠突散囊菌，發(fā)酵7 d后得到的最優(yōu)發(fā)酵茶的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制率為76.13%。不同劑量的葛根降血壓茶對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠在灌胃24 h內(nèi)均有降低收縮壓和舒張壓作用，其中300～600 mg/kg的大鼠日用劑量的急性降壓效果最顯著，且發(fā)酵茶對(duì)正常血壓大鼠無(wú)明顯降壓作用，故初步推測(cè)不會(huì)影響正常人群的血壓。為了達(dá)到長(zhǎng)期降壓功效，需長(zhǎng)期飲用發(fā)酵茶。然而，食物來(lái)源的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制性生物活性成分在消化和吸收過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步降低其生物利用率和生物活性。所以以提高血管緊張素轉(zhuǎn)換酶生物利用率為目的或許可以開(kāi)發(fā)出新型降壓產(chǎn)品。