李秀富 ， 唐 嬌

(1.銅仁職業(yè)技術學院 ， 貴州 銅仁 554300 ； 2.貴州銅仁萬山區(qū)高樓坪農業(yè)服務中心 ， 貴州 銅仁 554300)

鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo，DKM)為蘭科多年附生藥食同源性草本植物[1]，具有益胃生津、清熱滋陰、增強免疫、提高胃腸消化酶活性、調節(jié)糖脂代謝、抗疲勞和抗氧化等功效[2-3]，這主要與其所含多糖、石斛堿、酚類、氨基酸和多種微量元素等生物活性成分有關[4]。雞新城疫(Newcastle disease，ND)是危害養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展最為重要的急性、烈性、高傳染性的一類疫病之一[5]，我國防控ND主要以免疫預防為主[6]，但因肉雞飼養(yǎng)周期短，屠宰時?？梢娢赐耆盏囊呙?，對雞肉品質和安全存在隱患。當前，尋找促進肉雞生長、增強肉雞免疫的免疫增強劑逐漸成為研究的焦點。筆者查閱相關資料，罕見DKM在禽類的相關研究報道。中藥細粉化具有成分損失小，利用效率高等優(yōu)點?；诖?，本試驗通過在日糧中添加DKM細粉，觀察DKM對肉仔雞的生長性能、屠宰性能、主要免疫器官指數、新城疫抗體效價(Newcastle disease antibody，ND-Ab)、血清免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)的影響，以期為DKM在禽類健康養(yǎng)殖和作為ND免疫增效劑的開發(fā)使用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 DKM，購自銅仁市中藥材公司，粉碎后過40目篩；ND血凝抑制抗原、陰性血清和陽性血清，均購自哈爾濱國生生物有限公司；LaSota株ND活疫苗，購自和元生物工程有限公司；IgG、IgM檢測試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 主要儀器 Eppendorf移液器(100～1 000 μL，50～100 μL，1～10 mL)及配套耗材，均購自江蘇科學器材有限公司；數顯電子天平，購自康州HZ電子有限公司；MH-2振蕩器，購自Kylin-Bell儀器公司；L-600離心機，購自湖南湘儀儀器廠。

1.3 試驗動物 愛拔益加(AA)肉仔雞，公雞，1日齡，體重(25.23±0.23)g，購自銅仁華鑫禽業(yè)有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗設計及試驗日糧 將250只1日齡健康肉仔雞隨機分成5個組，每組50只，對照組(CG組)飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中分別添加0.5%(0.5%DKM組)、1%(1%DKM組)、2%(2%DKM組)和4%(4%DKM組)的DKM粉。所有肉雞于7日齡(試驗7 d)時按1羽份/只進行滴鼻點眼接種LaSota株ND活疫苗，試驗期35 d。試驗日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis)

1.4.2 飼養(yǎng)管理 整個試驗期采用三層重疊式籠養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境相同，雛雞自由飲水采食，間斷采光，試驗第1～7天控溫30 ℃每日間斷光照18 h，第8～14天控溫28 ℃每日間斷光照16 h，第15～21天控溫25 ℃每日間斷光照14 h，以后控溫25 ℃每日間斷光照12 h，每天定時記錄添加和回收飼料量。

1.4.3 生長性能指標測定 試驗結束(35日齡)時，將肉雞在清晨給料前(禁食12 h)以重復籠為單位稱量其空腹體重和耗料量，統(tǒng)計測算試驗7～35 d肉雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)。ADG(g)=總增重(g)/(試驗天數×只數)；ADFI(g)=總采食量(g)/(試驗天數×只數)；F/G=總采食量(g)/總增重(g)。

1.4.4 屠宰性能和重要器官指數測定 試驗結束(35日齡)時，每組隨機選取6只肉雞，禁食12 h后稱量其活重；完成采血后頸部放血致死，去除羽毛、趾和喙角質層后稱量其屠體重；屠體去除食道、氣管、胃、腸、心、肝、脾、肺、腎、生殖器、腹脂和頭腳后稱量其全凈膛重；沿胸骨脊切開皮膚向背部剝離，切離胸骨脊側面的肌肉及肩胛部肌腱稱量其胸肌重；去除腿骨、皮膚、皮下脂肪后稱量全部腿肌重；解剖摘取主要實質組織器官，剔除脂肪和筋膜雜質，濾紙吸干水分后立即稱量其器官鮮重，參照《家畜生產性能名詞術語和度量統(tǒng)計方法》測定屠宰性能[7]，計算主要免疫器官指數。全凈膛率/%=(全凈膛重/活重)×100%；胸肌率/%=(胸肌重/全凈膛重)×100%；腿肌率/%=(腿肌重/全膛凈重)×100%；器官指數(g/kg)=器官鮮重(g)/體重(kg)。

1.4.5 雞血清ND-Ab抗體效價測定 分別于試驗14、21、28 d和35 d時，隨機從各試驗組選取6只肉雞，采心臟血液5 mL于離心管中，在37 ℃靜置30 min，于室溫下以3 000 r/min離心10 min，吸取上部1.5 mL血清置于指型離心管，保存于-20 ℃冰箱待檢。按照《新城疫診斷技術》規(guī)范(GB/T16550—2008)標準進行雞ND抗體效價測定。

1.4.6 血清免疫功能測定 于試驗14 d和28 d時分別從各組挑選6只體重相近的肉雞，按1.4.5心臟采血分離血清。IgG、IgM含量測定嚴格按照試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 DKM對肉仔雞生長性能的影響 由表2可知，在各試驗組ADFI差異不顯著的情況下(P>0.05)，與CG組比較，1%、2%、4% DKM組肉雞平均末重、ADG顯著提高，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)，說明日糧中添加DKM可有效提高肉雞生長性能(表2)。

表2 DKM對肉仔雞生長性能指標的影響Table 2 Effects of DKM on growth performance of broilers (n=6)

2.2 DKM對肉仔雞屠宰性能的影響 由表3可知，試驗組的胴體重和全凈膛率較CG組顯著增加(P<0.05)；1%、2% DKM組和4% DKM組肉雞的胸肌率以及1% DKM組和2% DKM組的腿肌率顯著高于CG組(P<0.05)。

表3 DKM對肉仔雞屠宰性能指標的影響Table 3 Effects of DKM on slaughter performance of broilers (n=6)

2.3 DKM對肉仔雞免疫器官指數的影響 由表4可知，試驗14 d時，試驗組肉雞胸腺指數(ThI)較CG組增加，但差異不顯著(P>0.05)，2% DKM組和4% DKM組的脾臟指數(SpI)較CG組顯著增加(P<0.05)，試驗組法氏囊指數(BFI)較CG組顯著增加(P<0.05)；試驗28 d時，1%、2% DKM組和4% DKM組ThI較CG組顯著增加(P<0.05)，試驗組SpI較CG組顯著增加(P<0.05)，1%、2% DKM組和4% DKM組的BFI較CG組顯著增加(P<0.05)。

表4 DKM對肉仔雞主要免疫器官指數的影響Table 4 Effects of DKM on major immune organ indexes of broilers (g/kg,n=6)

2.4 DKM對肉仔雞抗體滴度的影響 由表5可知，試驗14 d和28 d時，1%、2% DKM組和4% DKM組的ND-Ab效價較CG組顯著升高(P<0.05)；試驗21 d時，試驗組較CG組均顯著升高(P<0.05)；試驗35 d時，僅2% DKM組較CG組顯著升高(P<0.05)；整個試驗階段均未出現(xiàn)組間差異顯著性升高變化(P>0.05)。

表5 DKM對肉仔雞新城疫抗體滴度的影響Table 5 Effects of DKM on Newcastle disease antibody titer of broilers (log2,n=6)

2.5 DKM對肉仔雞血清免疫球蛋白的影響 由表6可知，試驗14 d時，1%、2% DKM組和4% DKM組IgM較CG組顯著升高(P<0.05)，2% DKM組和4% DKM組IgG較CG組顯著升高(P<0.05)；試驗28 d時，1%、2% DKM組和4% DKM組IgM和IgG較CG組顯著升高(P<0.05)，且IgM含量在14 d時高于28 d；IgG含量在28 d時高于14 d。

表6 DKM對肉仔雞血清IgM、IgG的影響 Table 6 Effects of DKM on serum immunoglobulin M and immunoglobulin G of broilers (mg/mL,n=6)

3 討論

3.1 日糧中添加DKM對肉雞生長性能和屠宰性能的影響 ADG、ADFI和F/G是評估動物生長發(fā)育快慢最直觀的三大生長性能指標。2015版《中華人民共和國藥典》和現(xiàn)代藥理研究表明，DKM具有益胃生津、厚腸胃、提高機體消化酶活性、促胃腸液分泌和排便、調節(jié)胃腸道菌群等多種功效[8-9]。本試驗結果顯示，日糧中添加1%、2%和4% DKM，在ADFI差異不顯著的情況下(P>0.05)，可顯著提高肉仔雞平均末重和ADG，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)，其中以2%DKM組指標增加最明顯，0.5% DKM組生長指標有所提高，但差異不顯著(P>0.05)，說明DKM對提高肉仔雞生長性能有效，其原因可能與DKM選擇性促進腸道益生菌增殖、提高腸道消化酶活性幫助食物消化吸收[10-11]和促進胃腸排空有關[12]。屠宰率、全凈膛率和胸肌率等指標是評估肉雞常用的屠宰性能指標，一般認為全凈膛率60%以上，屠宰率80%以上，肉用性能良好[13]。本試驗結果顯示，試驗組的胴體重、屠宰率和全凈膛率不僅顯著高于CG組(P<0.05)，也高于肉雞肉用性能評判標準，腿肌和胸肌是肉雞的主要可食部分，日糧中添加1%、2%、4% DKM后肉雞的胸肌率和添加1%、2% DKM后肉雞的腿肌率顯著高于CG組(P<0.05)，再次表明日糧中添加DKM對提高肉雞生長性能、產肉性能和屠宰性能具有良好的作用，但日糧中添加0.5%、1%和4% DKM后肉雞的生長性能和屠宰性能指標不如日糧中添加2% DKM的效果好，說明日糧中添加DKM要適量，短時間低濃度添加可能達不到最佳刺激腸胃消化酶活性和促進腸絨毛快速增長的作用，高濃度添加對飼料口感可能會產生影響，導致日均采食量和日均增重不增反降，肉雞屠宰性能相關指標也降低，具體原因有待進一步研究證實。

3.2 日糧中添加DKM對肉仔雞免疫性能的影響 機體的免疫效應主要通過活化巨噬細胞的吞噬作用，提高T細胞、B細胞主要免疫活性細胞和NK細胞等其他相關免疫細胞活性，同時激活機體的補體系統(tǒng)等來完成[14]。法氏囊、胸腺和脾臟是禽類最主要的免疫器官，胸腺和法氏囊分屬于主導細胞免疫和體液免疫的初級免疫器官，脾臟屬于主導體液免疫的次級免疫器官[15]。通常認為健康動物免疫器官的質量增加是T、B淋巴細胞增殖分化、成熟形成、免疫應答所致，其指數越高，機體免疫功能越強[16]。本試驗結果顯示，試驗14 d時，試驗組法氏囊指數和2%、4% DKM組脾臟指數顯著高于CG組(P<0.05)；試驗28 d時，試驗組脾臟指數，1%、2%、4% DKM組胸腺指數和法氏囊指數均顯著高于CG組(P<0.05)，其中以2%DKM組免疫器官指數升高最明顯。說明DKM對促進雛雞的細胞和體液免疫具有重要作用，但必須在日糧中添加適當的劑量。細胞免疫和體液免疫是組成機體特異性免疫的2種重要免疫方式，血清抗體效價是衡量機體體液免疫狀況的主要指標，抗體效價越高，機體體液免疫功能越強[17]。本試驗結果顯示，試驗14～35 d時DKM能快速顯著提高雞ND疫苗免疫功能(P<0.05)，而且能使ND-Ab效價持續(xù)保持較高水平，表明DKM在雛雞ND免疫后，能快速顯著提高其體液免疫功能。由B淋巴細胞主導的體液免疫主要通過IgG、IgM等來發(fā)揮功效，IgM是初次免疫后機體產生最早的抗體，IgG是疫苗免疫機體后監(jiān)測的主要抗體[18]。本試驗結果顯示，試驗組的IgM和IgG均高于CG組，試驗14 d時，1%、2%、4% DKM組IgM和2%、4% DKM組 IgG顯著高于CG組(P<0.05)；試驗28 d時，1%、2%、4%DKM組IgM和IgG均顯著高于CG組(P<0.05)。說明DKM可通過增加B淋巴細胞增殖來增強機體體液免疫功能和提高抗體滴度[3]。從試驗結果指標數據上看，2% DKM組要明顯優(yōu)于0.5%、1%和4% DKM組；4%DKM組較2%DKM組指標下降，表明機體的免疫功能與日糧添加DKM并不形成正相關性，有一定的閾值性。黃曉君[19]、覃輝艷等[20]在小鼠中的研究發(fā)現(xiàn)，DKM粉末能促進小鼠脾淋巴細胞分化增殖，增強腹腔巨噬細胞的吞噬功能，提高血清中免疫球蛋白含量和體液免疫功效，與本試驗結果較為相似。

3.3 本試驗結果證實，在雛雞日糧中添加DKM具有顯著提高雛雞生長性能、屠宰性能、免疫器官指數、ND-Ab效價水平、血清IgM和IgG含量的作用，本試驗條件下以日糧中添加2% DKM的效果最好。