王月玲，馮 蕙，趙新玉，周燦燦，李 運，邵長春

（1.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院，甘肅 蘭州 730050；2.山東國投鴻基檢測技術(shù)股份有限公司，山東 濟南 250000）

化妝品由于基質(zhì)復(fù)雜、輔料繁多，又與人體皮膚直接接觸，常引起過敏反應(yīng)，其主要過敏原有防腐劑、芳香混合物、重金屬、激素、中藥提取物等[1-2]。為防止過敏反應(yīng)發(fā)生，化妝品中有添加組胺類抗過敏藥物的可能。然而，長期使用抗組胺類藥物會引起多種不良反應(yīng)，如嗜睡、變應(yīng)性接觸性皮炎、心臟毒性等，還會讓皮膚對其產(chǎn)生依賴性，停止使用后過敏癥狀加重，可能引起毛細管擴張、色素沉著、內(nèi)分泌紊亂等不良反應(yīng)[3-5]。我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）明確規(guī)定禁止添加地氯雷他定等15種抗組胺類藥物[6]。目前，關(guān)于抗組胺類藥物的檢測方法主要有液相色譜法和液相色譜－質(zhì)譜法[7-11]，其檢測對象主要為藥物、保健食品，而關(guān)于化妝品中抗組胺類藥物的檢測研究較少[12-14]。而熱解吸-電噴霧-三重四極桿質(zhì)譜（TD-ESI-MS/MS）是目前比較先進的質(zhì)譜技術(shù)之一，與傳統(tǒng)質(zhì)譜方法相比，檢測器相同，但是取樣方法發(fā)生較大變化，傳統(tǒng)方法需要稱樣、提取、凈化、濃縮等前處理步驟，而該方法具有無需樣品前處理，快速、簡便、靈敏等優(yōu)勢,操作時只通過簡單的金屬探針接觸固體表面或液體樣品采集待測物，以高溫加熱的方式完成探針表面吸附物質(zhì)的解吸過程，解吸后的氣相物質(zhì)分子經(jīng)載氣流軌道收束并吹送至電噴霧區(qū)域，完成離子化過程，最終進入三重四極桿質(zhì)譜檢測器分析，適用于不同形態(tài)樣品的檢測[15]。因此，本實驗采用熱解吸-電噴霧-原位質(zhì)譜儀對化妝品中9種抗組胺類藥物（鹽酸曲吡那敏、馬來酸氯苯那敏、鹽酸苯海拉明、阿司咪唑、地氯雷他定、鹽酸異丙嗪、鹽酸賽庚啶、地氯雷他定、鹽酸萘替芬）建立數(shù)據(jù)庫，并對市售17批次祛痘類護膚品、30批次美白祛斑類護膚品中抗組胺類藥物進行篩查，以期為化妝品中違禁使用的抗組胺藥物的分析提供技術(shù)支持。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

三重四極桿Ultivo質(zhì)譜儀（美國Agilent公司），熱解吸－電噴霧離子源，取樣環(huán)線直徑0.6 mm，環(huán)徑2 mm，長5～6 cm（山東國投鴻基檢測技術(shù)股份有限公司）；電子天平XSE205DU（瑞士梅特勒公司）；移液槍（德國艾本德公司）；Milli-Q 超純水儀（美國密理博公司）；超聲波清洗儀（靈芝）；FaVEx-NM與FaVEx-HP固相萃取小柱（山東巨研科技股份有限公司）。

表1 對照品信息

樣品：市場采購的美白祛斑與祛痘類化妝品共47批次，其中祛痘類產(chǎn)品17批次，美白祛斑類產(chǎn)品30批次。具體樣品信息見表2、表3。

表2 祛痘類產(chǎn)品

表3 美白祛斑類產(chǎn)品

1.2 實驗方法和結(jié)果

1.2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱取9種抗組胺類藥物對照品各10 mg，置10 mL量瓶中，分別用50%甲醇溶解并定容，得到濃度分別為1 mg/mL的對照品儲備液，儲存于-18 ℃冰箱中。精密吸取各對照品儲備液0.1 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/mL的對照品溶液。

1.2.2 靈敏度溶液的制備

將各對照品溶液逐級稀釋，直至儀器信噪比顯示為3∶1，此時溶液濃度為儀器檢出限，測得9種抗組胺類藥物的儀器檢出限均為10 ng/mL。

1.2.3 質(zhì)控溶液的配制

精密吸取各對照品溶液適量，置同一容量瓶中，用乙腈稀釋為濃度為100 ng/mL的混合對照品溶液，作為質(zhì)控溶液。

2.3 通氣指標(biāo) 兩組患者PETCO2各個時間點比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。組間比較，B組Ppeak于T2-T5時明顯高于A組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）； 同時間點，B 組 Pplat于 T2、T5時明顯高于 A 組（P＜0.05）。 見表 3。

1.3 儀器條件

1.3.1 熱解吸電噴霧檢測參數(shù)條件

溫控儀溫度280 ℃，注射泵溶劑為0.1%甲酸水溶液-甲醇（1∶1，v/v），流速為150 μL/h。

1.3.2 質(zhì)譜條件

正離子模式，干燥氣流速為3 L/min，干燥氣溫度為280 ℃，霧化器壓力為34.5 kPa(5psi），毛細管電壓為4 000 V。

1.3.3 抗組胺類藥物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫建立

精密移取各對照品溶液3 μL至探針表面取樣環(huán)，進行檢測分析，找到各化合物特征碎片離子。鹽酸西替利嗪在原位質(zhì)譜儀上無響應(yīng)，不適合用該儀器篩查，其他各物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫信息見表4。

表4 9種抗組胺類藥物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫

1.4 樣品分析

1.4.1 供試品溶液的配制

水劑化妝品：原液直接測試；

乳劑和霜劑化妝品：稱取樣品0.2 g，置具塞比色管中，加入甲醇10 mL，手動振蕩30 s，使試樣與溶劑充分混勻，超聲提取3 min，搖勻，即得。

1.4.2 分析測試

量取供試品溶液3 μL，至探針表面取樣環(huán)上，按照1.3 項下的儀器方法，測試17批次祛痘類護膚品、30批次美白祛斑類護膚品，每個樣品平行測定3次，若樣品與對照品溶液具有相同的分子離子峰和碎片離子峰，而且所選擇的碎片離子豐度比與對照品溶液的離子豐度比相一致或在一定偏差范圍內(nèi)，則可判斷樣品中存在這種化合物。

2 方法學(xué)驗證

2.1 專屬性試驗

取化妝品空白基質(zhì)（水、乳、霜各一批），按1.4.1項下的方法制備，然后按1.3項下儀器條件上機測試，結(jié)果顯示空白基質(zhì)均未檢出與對照品溶液具有相同的分子離子峰和碎片離子峰，表明空白基質(zhì)對實驗結(jié)果無干擾，本方法專屬性良好。

2.2 檢出限

由于質(zhì)譜的基線噪聲非常低，以信噪比計算出的檢出限可能與方法的實際檢測值存在差別，采用標(biāo)準(zhǔn)溶液混合基質(zhì)逐級稀釋方法至儀器能檢出的最低含量作為各化合物的檢出限應(yīng)該更合理。因此，精密吸取混合對照品溶液適量，分別加入化妝品空白基質(zhì)中（水、乳、霜各一批），按1.4.1項下方法制備，并逐級稀釋至儀器信號恰好能檢出即得方法檢出限。結(jié)果顯示，化妝品3種基質(zhì)中9種抗組胺類藥物的檢出限中，同一介質(zhì)中9種抗組胺類藥物檢出限基本相同，水劑為15 ng/mL，乳劑和霜劑檢出限是水劑的2倍為30 ng/mL，其原因可能是因為乳劑和霜劑基質(zhì)中含有較多油脂，復(fù)雜的成分會影響待測物的檢測靈敏度。

2.3 重復(fù)性

稱取0.2 g化妝品基質(zhì)（水、乳、霜各一批），精密加入質(zhì)控溶液2 mL，配制成含9種抗組胺類藥物的加標(biāo)樣品，分別按1.4 項下的方法制備并上機測試，每個樣測定6次，結(jié)果表明各化合物響應(yīng)值的RSD值為6.6～12.9，表明方法重復(fù)性良好。

2.4 穩(wěn)定性

將上述重復(fù)性實驗的加標(biāo)樣品溶液分別在1 h、4 h、12 h、24 h、48 h重新測定，每個時間點重復(fù)測定3次，結(jié)果顯示，9種抗組胺類藥物在1～48 h均可檢出，響應(yīng)值穩(wěn)定，說明本方法能夠滿足實驗要求。

3 結(jié)果與結(jié)論

本研究建立了熱解吸－電噴霧－原位質(zhì)譜儀同時篩查化妝品中9種抗組胺類藥物的方法與數(shù)據(jù)庫，該方法適用于水、乳和霜類等多種基質(zhì)樣品分析，可以實現(xiàn)不需要對照品對化妝品中9種抗組胺類藥物的快速篩查，并應(yīng)用該法對市售17批次祛痘類護膚品、30批次美白祛斑類護膚品進行檢測，結(jié)果顯示1批次祛痘類護膚品檢出氯雷他定。

4 討論

4.1 樣品前處理方式考察

實驗考察比較了3種前處理方法，第一種方法無需前處理，通過金屬探針直接接觸進樣；第二種參照文獻《超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中21種抗組胺類藥物》的前處理方法，并在后期實驗中適當(dāng)?shù)剡M行了調(diào)整：稱樣0.2 g，加甲醇10 mL，渦旋震蕩30 s，超聲3 min，過濾，取續(xù)濾液測試；第三種方法為山東巨研科技股份有限公司根據(jù)前期研究基礎(chǔ)推薦的方法：稱樣0.2 g，加入10 mL0.5%甲酸乙腈振搖、離心后，取上清液分別過FaVEx-NM、FaVEx-HP固相萃取小柱凈化，流出液上機測試。結(jié)果顯示，第一種方法簡便易行，可作為水劑化妝品篩查前處理方法，乳劑和霜劑因基質(zhì)復(fù)雜，基質(zhì)效應(yīng)較大，干擾測定；第三種方法中FaVEx-HP固相萃取小柱響應(yīng)較FaVEx-NM柱強，總體呈現(xiàn)基質(zhì)效應(yīng)減小，但比較費時費力，成本也高，不適合快速篩查；第二種方法前處理相對簡單省事可作為乳劑和霜劑化妝品篩查的前處理方法。

4.2 與其他檢測方法比較

參照《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中的方法，采用高效液相色譜－三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀對篩查出氯雷他定的陽性樣品進行進一步的驗證，結(jié)果顯示，熱解吸－電噴霧－原位質(zhì)譜儀與三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀檢測結(jié)果一致，表明該方法操作簡單、定性準(zhǔn)確，可用于美白祛斑類和祛痘類化妝品中非法添加抗組胺類藥物的多組分快速篩查。